Columnas BioHPLC Agilent IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS Y DETERMINACIÓN DEL PERFIL DE IMPUREZAS MEDIANTE HPLC/UHPLC DE FASE REVERSA

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1 Columnas BioHPLC Agilent IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS Y DETERMINACIÓN DEL PERFIL DE IMPUREZAS MEDIANTE HPLC/UHPLC DE FASE REVERSA

2 HPLC/UHPLC DE FASE REVERSA Agilent puede potenciar su precisión y productividad La fase reversa se utiliza para confirmar la identidad de las proteínas, deterar el perfil de impurezas y cuantificar las modificaciones postranslacionales. La técnica separa los elementos basándose en las diferencias en hidrofobicidad y utiliza condiciones de desnaturalización. De esta forma, se consigue información sobre la secuencia de aoácidos primarios de la molécula, así como las variaciones y modificaciones de la secuencia. Agilent ofrece la gama más completa de columnas BioHPLC de fase reversa de poro ancho (tamaños de 3 Å, Å y más grandes), respaldadas por un equipo experto de servicio técnico y químicos de aplicaciones de todo el mundo. La gama incluye partículas totalmente porosas de,8, 3, y µm para presiones de a bares, partículas Poroshell (superficialmente porosas) para separaciones de UHPLC a presiones bajas, y columnas poliméricas para análisis bajo las condiciones más extremas.

3 Columnas Agilent RP-mAb: estas columnas, basadas en la tecnología Poroshell y con un exclusivo diseño del tamaño de poro y de la fase ligada, ofrecen una resolución mayor y unos tiempos de análisis más cortos que permiten obtener resultados precisos y reproducibles a la hora de analizar anticuerpos monoclonales (mab) intactos y fragmentos de dichos anticuerpos. Columnas de mapeo de péptidos Agilent : le permiten resolver e identificar rápidamente las modificaciones de aoácidos en estructuras primarias. Con sus partículas de,7 μm y la funcionalidad C8, las columnas de mapeo de péptidos proporcionan niveles excelentes de retención, resolución y forma de pico para péptidos hidrofóbicos básicos. Columnas Agilent Poroshell 3: las primeras columnas de partículas pequeñas superficialmente porosas de la industria para separaciones rápidas de polipéptidos y proteínas. Columnas Agilent ZORBAX RRHD 3Å de,8 µm: ofrecen el rendimiento UHPLC para separaciones de fase reversa de proteínas intactas y fragmentos de proteínas, y realizan asimilaciones con una estabilidad de bares. Columnas Agilent ZORBAX 3Å de 3, y µm: materiales completamente porosos para separaciones preparativas y HPLC; muchas de las fases ligadas escalables a partir de partícula de,8 µm. Columnas Agilent PLRP-S: las partículas de polímero macroporosas ofrecen separaciones HPLC en el rango de ph más amplio. Con 8 tamaños de partícula y 3 tamaños de ancho de poro, las columnas PLRP-S proporcionan soluciones óptimas para separaciones analíticas preparativas de péptidos, proteínas y complejos de proteínas. ÍNDICE Columnas RP-mAb Para anticuerpos monoclonales (mab) intactos y fragmentos de estos Página Columnas de mapeo de péptidos Para péptidos hidrofóbicos básicos Página 7 Columnas Agilent Poroshell 3 Para separaciones de proteínas intactas Página Columnas ZORBAX RRHD Para digestión de péptidos y proteínas intactas Página Columnas Agilent ZORBAX StableBond de 3 A Para separaciones de ph bajo Página 7 Columnas PLRP-S Para estabilidad en condiciones extremas Página 8 Guía de selección de columnas/ Información para pedidos Página Para obtener más información sobre la realización de separaciones de proteínas de alta resolución con las columnas de fase reversa Agilent, visite agilent.com/chem/ 3

4 HPLC DE FASE REVERSA Qué columna LC rápida es la más adecuada para su separación de fase reversa? Agilent ofrece la gama más amplia de columnas de poro ancho rápidas de HPLC/UHPLC. Estas columnas le proporcionan la flexibilidad necesaria para crear métodos con una resolución máxima, tanto si dispone de un instrumento de, 6 o. bares. Las columnas de poro ancho (3 Å) son necesarias para conseguir una separación eficaz de proteínas y péptidos, porque permiten que estos analitos entren por completo en la fase ligada. Selección de columnas de fase reversa Aplicación Columnas Agilent Notas Anticuerpos monoclonales (mab) intactos y fragmentos de estos Proteínas intactas, anticuerpos monoclonales (mab), fragmentos de mab y polipéptidos Proteínas intactas de gran tamaño y anticuerpos monoclonales Péptidos RP-mAb de Å y 3, μm SB-C8 C Difenil ZORBAX 3Å,,8 μm RRHD 3SB-C8 RRHD 3SB-C8 RRHD 3SB-C3 RRHD 3-Difenil ZORBAX 3Å 3, y µm 3SB-C8 3SB-C8 3SB-C3 3SB-CN ZORBAX 3Å Extend-C8 Poroshell 3 3SB-C8 3SB-C8 3SB-C3 3Extend-C8 Mapeo de péptidos Para conseguir una separación eficiente de biomoléculas grandes como anticuerpos monoclonales (mab) intactos se requieren diámetros de poro grandes, ya que permiten que los analitos accedan íntegramente a la fase ligada. El uso de la tecnología Poroshell, que ofrece unas distancias de difusión menores, mejora aún más la eficiencia. Las fases C resultan idóneas para las separaciones de mab, ya que aportan estabilidad a bajo ph y compatibilidad con los métodos que exigen utilizar columnas USP L6. Las columnas StableBond con fase C8 ofrecen ventajas como la escalabilidad y la transferencia de métodos. La fase difenílica, única de Agilent, ofrece selectividad alternativa. Los procesos de envasado optimizados garantizan la estabilidad hasta bares para uso con el LC Agilent 9 Infinity. Las columnas de resolución rápida y alta definición de,8 μm están disponibles en longitudes de y mm que consiguen separaciones rápidas o de alta resolución (excelente definición) de las muestras más complejas. Las columnas StableBond con fase C8 son idóneas para la separación de proteínas complejas y asimilaciones de proteínas. Idóneas para su uso con sistemas HPLC. Las columnas StableBond-C3 y StableBond-CN resultan útiles para la separación de compuestos de gran tamaño y carácter marcadamente hidrofóbico. Incorporan un exclusivo silano bidentado combinado con un proceso de desactivación doble que protege la sílice frente a la disolución a ph alto (hasta valores de,). Las columnas Poroshell contienen unas exclusivas partículas compuestas por un núcleo sólido de sílice y una capa de sílice porosa. Esto reduce la distancia de difusión de las proteínas y posibilita conseguir separaciones HPLC prácticas y rápidas de péptidos y proteínas. Tamaño de poro de Å, idóneo para identificar péptidos de un amplio rango de pesos moleculares. Probadas con mezclas complejas de péptidos para garantizar el rendimiento. La exclusiva tecnología Agilent Poroshell posibilita mayores velocidades de flujo y mejora la resolución de la secuencia completa de péptidos. Péptidos hasta ADN PLRP-S Las partículas poseen un carácter hidrofóbico inherente a ellas que hace que no se requiera una fase ligada con ligando alquílico para las separaciones de fase reversa. Esto hace que sea un Å material altamente reproducible de Å que no contiene silanoles ni iones metálicos pesados. 3Å Å Å Moléculas pequeñas PLRP-S Å y síntesis Péptidos y proteínas PLRP-S 3Å recombinantes Proteínas grandes PLRP-S Å ADN y separaciones a alta PLRP-S Å velocidad Aoácidos ZORBAX para análisis de aoácidos (AAA) Capacidad contrastada de análisis de aoácidos utilizando fases de derivación de precolumnas OPA y FMOC. Existen versiones para HPLC y UHPLC. Parte de la Familia Parte de la Familia Parte de la Familia Parte de la Familia

5 LAS COLUMNAS ADVANCEBIO RP-mAb MEJORAN Y AGILIZAN EL ANÁLISIS DE ANTICUERPOS MONOCLONALES (mab) Las columnas Agilent RP-mAb ofrecen una resolución mayor y unos tiempos de análisis más cortos que permiten obtener resultados precisos y reproducibles a la hora de analizar anticuerpos monoclonales (mab) en aplicaciones biofarmacéuticas de exploración, desarrollo y control y garantía de calidad (QA/QC). La exclusiva tecnología Agilent Poroshell que incorporan todas las columnas RP-mAb le ofrece las siguientes ventajas: Mejora de la precisión: Partículas superficialmente porosas (3, μm) con poros anchos ( Å) que aumentan la resolución de mab y mantienen la compatibilidad con todos los instrumentos LC. Velocidad: Tiempos de análisis más cortos en comparación con las columnas rellenas con partículas completamente porosas del mismo tamaño (Figura ). Menores costes: El robusto lecho compacto Poroshell y la frita de entrada de μm prolongan la vida útil de la columna ya que contribuyen a impedir la obstrucción de la entrada. Desarrollo de métodos flexible: Variedad de fases (SB-C8, C y difenil). Picos estrechos y detallados con análisis cortos: caracterización en menos de utos 8 6 RP-mAb C ,3,,,6,7,8,9,,,3,,,6,7,8,9,, Parámetros del método Dimensiones de la columna:, x mm, 3, µm Fase móvil A: TFA al, % en agua e IPA (98-) Fase móvil B: IPA, ACN y fase móvil A (7::) Velocidad de flujo:, ml/ Gradiente: -8 % B durante, lavado durante con 9 % B y reequilibrado durante con % B Muestra: Inyección de μl de un anticuerpo IgG recombinante humanizado (Herceptin) intacto de Creative Biolabs ( mg/ml) Temperatura: 8 C Detección: UV a nm Figura. En este ejemplo, una columna RP-mAb C consiguió una forma de pico excelente y una resolución detallada de un anticuerpo IgG recombinante humanizado (Herceptin) intacto en menos de utos. Agilent frente a la competencia: prestaciones superiores a las de otras columnas de análisis de proteínas RP-mAb C -,3,,,6,7,8,9,, Columna de otro fabricante: C, Å y 3, µm -,3,,,6,7,8,9,, Columna de otro fabricante: C, Å y 3,6 µm -,3,,,6,7,8,9,, Columna de otro fabricante: C, 3 Å y,6 µm -,3,,,6,7,8,9,, Parámetros del método Dimensiones de la columna:, x mm, 3, µm Fase móvil A: TFA al, % en agua e IPA (98-) Fase móvil B: IPA, ACN y fase móvil A (7::) Velocidad de flujo:, ml/ Gradiente: -8 % B durante, lavado durante con 9 % B y reequilibrado durante con % B Muestra: Inyección de μl de un anticuerpo IgG recombinante humanizado (Herceptin) intacto de Creative Biolabs ( mg/ml) Temperatura: 8 C Detección: UV a nm Figura. Las columnas RP-mAb, diseñadas específicamente para la separación de anticuerpos monoclonales (mab), ofrecen una forma de pico y una resolución mejores que las de otras columnas utilizadas para la separación de proteínas intactas. Para obtener más información sobre la realización de separaciones de proteínas de alta resolución con las columnas de fase reversa Agilent, visite agilent.com/chem/

6 Velocidad y confianza excepcionales para la separación de anticuerpos monoclonales (mab) Al igual que sucede con todas las columnas fabricadas por Agilent, las columnas RP-mAb se someten a rigurosos ensayos de control de calidad (QC) para garantizar la reproducibilidad y las prestaciones. En el ejemplo de la Figura 3, se caracterizó un anticuerpo IgG recombinante humanizado (Herceptin) intacto con una columna RP-mAb Difenil. La exclusiva fase de difenil permite conseguir un análisis con un nivel de detalle aún mayor. En la Figura se demuestra cómo la tecnología de poro ancho Poroshell de la columna RP-mAb ofrece una eficiencia elevada, un tiempo de análisis corto y una presión baja a temperaturas inferiores a 8 C (las habituales en muchos métodos de fase reversa). Fase selectiva de difenil: análisis con un nivel de detalle aún mayor RP-mAb Difenil,7,8,9,,,3,, Parámetros del método Dimensiones de la columna:, x mm, 3, µm Fase móvil A: TFA al, % en agua e IPA (98-) Fase móvil B: IPA, ACN y fase móvil A (7::) Velocidad de flujo:, ml/ Gradiente: -8 % B durante, lavado durante con 9 % B y reequilibrado durante con % B Muestra: Inyección de μl de un anticuerpo IgG recombinante humanizado (Herceptin) intacto de Creative Biolabs ( mg/ml) Temperatura: 8 C Detección: UV a nm Figura 3. La exclusiva selectividad de la columna RP-mAb Difenil permite realizar análisis con un nivel de detalle aún mayor. Ventajas de la tecnología Poroshell: mayor precisión y baja retropresión 3 3 RP-mAb SB-C8 Presión: bares,,,7 3 3, 3, 3,7, Parámetros del método Dimensiones de la columna:, x mm, 3, µm Fase móvil A:, % TFA en agua Fase móvil B: n-propanol, ACN y fase móvil A (8::) Velocidad de flujo:,8 ml/ Gradiente: - % B durante, lavado durante con 9 % B y reequilibrado durante con % B Muestra: Inyección de μl de un anticuerpo IgG recombinante humanizado (Herceptin) digerido en papaína de Creative Biolabs ( mg/ml) Temperatura: 6 C Detección: UV a nm Figura. Las columnas RP-mAb ofrecen unas excelentes prestaciones a temperaturas inferiores a 8 C. 6

7 COLUMNAS DE MAPEO DE PÉPTIDOS ADVANCEBIO Reduzca el tiempo de mapeo de péptidos sin perder resolución Las columnas de mapeo de péptidos Agilent le permiten resolver e identificar rápidamente las modificaciones de aoácidos en estructuras primarias, al contrario que las columnas completamente porosas que pueden tardar 6 utos. Estas biocolumnas avanzadas cuentan con un tamaño de poro de Å con partículas superficialmente porosas de,7 μm y se han diseñado para ofrecer: Mayor fiabilidad analítica: Cada uno de los lotes de medio de mapeo de péptidos se somete a pruebas con una mezcla compleja de péptidos para garantizar su conformidad y reproducibilidad, así como para identificar los péptidos clave en mapeos de péptidos complejos. Ahorro de tiempo: Realice separaciones en alta resolución de a 3 veces más rápidamente que con las columnas HPLC completamente porosas. Todos los instrumentos trabajan más duro: Las columnas de,6, 3, y, mm de DI son estables a 6 bares, lo que le permite aprovechar al máximo sus instrumentos UHPLC. Asimismo, pueden ofrecer un rendimiento excelente para sus instrumentos tradicionales de bares. Más flexibilidad: Aumente la sensibilidad MS con fases móviles de ácido fórmico en cualquier HPLC. Prueba de garantía de calidad con una mezcla de péptidos Columna: Mapeo de péptidos,, x mm,,7 µm, ref Velocidad de flujo:, ml/ Inyección: µl Temp.: ºC Detección: nm Gradiente: A, agua (, % TFA), B, ACN (,8 % TFA), -, -6 % B; -6, 6-9 % B Muestra: Mezcla de estándares de mapeo de péptidos de Agilent (,-, μg/μl por péptido), ref Mapeo de péptidos de una EPO biosimilar Columna: Mapeo de péptidos,, x mm,,7 µm, ref Velocidad de flujo:, ml/ 3 Inyección: µl (, mg/ml) Temp.: ºC Detección: nm Gradiente: A, w n, 6-9% B, 7,, 7, N.º pico PM Componente 77 Fragmento de bradiquinina -7.6 Bradiquinina 3.6 Angiotensina II.673 Neurotensina.9 Angiotensina I 6.6 Fragmento ACTH Renina 8.8 Melitina PEPTIDE MAPPING STANDARDS Now Available p/n 9-83 Figura. Mezcla de prueba utilizada para todos los lotes de medio de mapeo de péptidos. La mezcla contiene 8 péptidos hidrofílicos, hidrofóbicos y básicos, con un peso molecular que va desde los 77 Da a los 8 Da. Todas las columnas también se han probado con una sonda de moléculas pequeñas para garantizar su eficacia. 3 Figura 6. La columna de mapeo de péptidos permite confirmar fácilmente la identidad de las proteínas e identificar todas las modificaciones postranslacionales. x 6 Cpd :.: +ESI ECC Scan Frag=7.V EPOdigestd.d Cpd : Counts vs. Acquisition Time () Figura 6a. Digesto de EPO, LC/MS TOF 9 % de cobertura de secuencia conseguida con el software MassHunter Workstation Para obtener más información sobre la realización de separaciones de proteínas de alta resolución con las columnas de fase reversa Agilent, visite agilent.com/chem/ 7

8 Excelente reproducibilidad Los principios científicos de las columnas lo ayudan a aumentar la precisión y la productividad para conseguir eficacia y análisis biofarmacéuticos más rápidos. Además, las columnas se someten a pruebas rigurosas en las instalaciones de Agilent para garantizarle su reproducibilidad y ofrecerle resultados de confianza. La Figura 7 demuestra la excelente reproducibilidad entre lotes y entre análisis que puede conseguirse utilizando las columnas de mapeo de péptidos. Reproducibilidad entre lotes después de inyecciones Norm. Lote de sílice PEP79 Iny. (39 bares) Iny. (388 bares) 3 Inyección TR () TR3 () TR () TR () 3,39,36,9,9 3,,8,7, Inyección PW PW3 PW PW,,,,,,,9, Norm. Iny. (397 bares) Norm. Lote de sílice B69 3 Iny. (397 bares) Iny. ( bares) Inyección TR () TR3 () TR () TR () 3,36,9,,8 3,,8,,7 Inyección PW PW3 PW PW,9,,9,,9,,9, Columna: Mapeo de péptidos,, x mm,,7 µm, ref Velocidad de flujo:, ml/. Inyección: µl Temp.: C Detección: nm Gradiente: A, agua (.% TFA), B, ACN (.8% TFA), -8, -6% B; 8.-9, mantener 9% B Muestra: Estándares de péptidos Sigma HPLC: -Gli-Tir, -Val-Tir-Val, 3-Met Enk, - Angio II, - Leu Enk Figura 7. Se utilizó una columna de mapeo de péptidos de, x mm para obtener la máxima resolución. 8

9 Ideal para separaciones de péptidos rápidas y de alta resolución Las columnas de mapeo de péptidos Agilent están fabricadas con sílice superficialmente porosa de,7 μm y pureza ultraelevada (>99,99 % SiO ), que se liga densamente con C8 para ofrecer la alta selectividad necesaria para las separaciones de péptidos. Este tipo de partícula ofrece una alta eficacia a bajas presiones cuando se compara con las partículas pequeñas y completamente porosas. En la Figura 8 puede ver de qué forma las columnas de mapeo de péptidos garantizan la reproducibilidad, las alturas de pico y los tiempos de retención para conseguir una identificación de péptidos objetivo más precisa. Reproducibilidad LC/MS x 7,,9,9,8,8,7,7,6,6,,,,,3,3,,,,,,,, 3 3,,, 6 6, 7 7, 8 8, 9 9,,,, 3 3,,, 6 6, 7 7, 8 8, 9 9, Columna: Mapeo de péptidos, 3, x mm,,7 µm, ref Parámetros de LC/MS (Agilent 6 Q-TOF) Gas seco: l/, Vcap: V, Fragmentador: V Velocidad de flujo:,3 ml/ Inyección: µl Temp.: C Gradiente: A, agua (.% FA), B, ACN (.% FA), -3, % B; 3-3, -% B; 3-, -6% B;.-7., mantener 9% B Muestra: Digestión tríptica interna Stratagene mab Figura 8. Este mapeo completo de péptidos trípticos de IgG se completó en tan solo utos (n=). Para obtener más información sobre la realización de separaciones de proteínas de alta resolución con las columnas de fase reversa Agilent, visite agilent.com/chem/ 9

10 COLUMNAS AGILENT POROSHELL 3 Separación rápida y fiable de proteínas intactas y fragmentos de proteínas Las columnas Agilent Poroshell son la elección perfecta para separar y caracterizar biomoléculas complejas, incluidos proteínas intactas y fragmentos de proteínas a presiones de hasta bares. Para conseguir análisis rápidos de proteínas intactas, recomendamos las columnas Agilent Poroshell 3. La partícula superficialmente porosa Poroshell 3 es un material cromatográfico revolucionario que produce separaciones de RP-HPLC en alta resolución muy rápidas para proteínas y otras macromoléculas. Las columnas Poroshell funcionan muy bien para separaciones rápidas de macromoléculas gracias a su transferencia de masa rápida dentro y fuera de la célula porosa delgada de 3 Å, proporcionando picos más estrechos para una mayor resolución, mayor precisión de la deteración del perfil de impurezas y modificaciones postranslacionales. Reducción del tiempo de análisis y mayor resolución con presiones inferiores de columna Función Armazón poroso de, µm, 3 Å en partícula sólida Partícula de μm Química StableBond Ventaja Distancias de difusión más cortas para tiempos de análisis reducidos Presión operativa más baja Larga vida útil de la columna gracias a la reducción de retención de muestra Resolución y eficacia de UHPLC a presiones más bajas para conseguir unas separaciones más rápidas Estabilidad demostrada en valores de ph bajos Larga vida útil de la columna con TFA y ácido fórmico, μm, μm Poroshell 3, μm Parte de la Familia Utilice las columnas Agilent Poroshell 3 para analizar proteínas intactas y grandes fragmentos de péptidos.

11 Velocidades de flujo altas con, mm de DI Las columnas Poroshell 3, con su tamaño de poro superior (3 Å) y fino armazón, son una opción fiable para lograr separaciones rápidas de proteínas intactas. La separación mostrada en la Figura 9 se completó en menos de, utos. Gracias a su rápida transferencia de masa de las partículas superficialmente porosas, las columnas Poroshell 3 son la mejor opción para lograr alta eficacia a velocidades de flujo elevadas para separaciones rápidas de proteínas. Separación de péptidos y proteínas 3 Muestra:. Angiotensina II. Neurotensina 3. RNasa. Insulina. Lisozima 6. Mioglobina 7. Anhidrasa carbónica 8. Ovalbúa,, Tiempo () Figura 9. Separación de 8 péptidos y proteínas en tan solo, utos: buena capacidad de picos para separar rápidamente muestras complejas Columna: Poroshell 3SB-C8,, x 7 mm, µm Fase móvil: A:, % TFA B:,7 % TFA en ACN Velocidad de flujo: 3, ml/ Temperatura: 7 C Detección: UV nm Gradiente: a % B en, Presión: bares Separación de cadenas pesadas y ligeras de anticuerpos monoclonales Cadenas pesadas Cadenas ligeras 8 IgG tratada con: DTT 6 8 Glucosilado No glucosilado 8 IgG tratada con: DTT Péptido-N-glicosidasa F 6 8 IgG tratada con: 8 DTT Péptido-N-glicosidasa F Carboxipeptidasa-B 6 8 Figura. Comparación cromatográfica del anticuerpo lgg después de reducción y división enzimática. Gradiente: Tiempo () % de disolvente B,,,, Columna: Poroshell 3SB-C8,, x 7 mm, µm Fase móvil: A: H O-ACN (9:) B: H O-ACN (:9) A y B contienen, % TFA y 3 ml/l de PEG 3 Velocidad de flujo:, ml/ Temperatura: 7 C Detección: UV nm Para obtener más información sobre la realización de separaciones de proteínas de alta resolución con las columnas de fase reversa Agilent, visite agilent.com/chem/

12 Ventaja de la separación ultrarrápida Las columnas Agilent Poroshell 3 de µm pueden ofrecer ventajas de separación rápida muy atractivas en comparación con la columna superficialmente porosa de la competencia de 3,7 µm, mm (flujo bajo). En la Figura, la columna Poroshell 3 mantuvo una resolución crítica a velocidades de separación ultrarrápidas con gradientes balísticos, al tiempo que mantuvo las caídas de presión para HPLC por debajo de los bares. La columna Agilent Poroshell 3 resuelve las 8 proteínas veces más rápido que la columna superficialmente porosa de la competencia. Agilent Poroshell 3 comparada con la competencia Columna de la competencia 6 Muestra: 6 6. Ribonucleasa A 3 3. Lisozima 3. Citocromo c 3. Insulina * 7 8 * Columna: Columna de la competencia: C8,, x mm, 3,7 µm Muestra: Mezcla de proteínas estándar (3 kda - 66 kda) Fase móvil: A: agua (, % 8TFA) B: ACN (,8 % TFA) 8 Temperatura: C DAD: UV nm Gradiente: -9 % B, 6,,3 ml/ * 7 7. Transferrina 6. Mioglobina 7. B-amilasa 8. Tiroglobulina La columna Agilent es veces más rápida 3 3 3,86 3,86 3 * * Columna: Poroshell 3SB-C8,, x 7 mm, µm * La columna Agilent Poroshell 3 Fase móvil: A: agua (, % TFA) B: ACN (,8 % TFA) ofrece una mejor forma de pico Temperatura: C para aumentar la precisión en el DAD: UV nm análisis del pico, transferrina. Gradiente: -9 % B,,, ml/ 8 Figura. Ventaja de separación ultrarrápida con las columnas Poroshell 3 SB-C8 en comparación con la competencia.

13 Las opciones de fase ligada ofrecen más potencia de resolución y una mejor recuperación Las columnas Poroshell 3 HPLC están disponibles en cuatro fases ligadas: 3SB-C8, C8, C3 y 3Extend-C8. La reducción de la cadena de la fase ligada también reduce la hidrofobicidad de las fases ligadas de 3SB-C8 y 3SB-C3. Por ejemplo, la insulina y el citocromo c se resuelven hasta la línea base en la columna Poroshell 3SB-C3, mientras estos mismos analitos coeluyen en la columna Agilent Poroshell 3SB-C8 en las condiciones descritas en la Figura. 7 Para algunas muestras complejas, la recuperación de proteínas puede ser un problema. Se ha demostrado que la utilización de las columnas menos hidrofóbicas Poroshell 3SB-C8 y C3 pueden mejorar la recuperación. La Figura 3 muestra las trazas que resultan de inyectar μl de caldo de fermentación en una columna Poroshell 3SB-C3, seguido de la traza limpia inmediatamente después de la inyección de blanco con μl de agua. La recuperación de la muestra mejorada y la resolución de los pares críticos de picos mejoran la precisión de los análisis de proteínas. Poroshell 3SB-C8, ,,, 7 Columnas: Poroshell 3SB-C8,, x 7 mm, µm Poroshell 3SB-C3,, x 7 mm, µm Fase móvil: A:, % TFA/H O B:,7 % TFA/ACN Velocidad de flujo:, ml/ Temperatura: 7 C Gradiente: a % B en 3, Detección: UV nm Poroshell 3SB-C3 3,,, Figura. Poroshell 3SB-C3 resuelve los picos y 6, insulina y citocromo c, que coeluyen con la fase C8 más hidrofóbica Muestra:. Angiotensina II. Neurotensina 3. RNasa A. Cadena B de insulina. Insulina 6. Citocromo c 7. Lisozima 8. Mioglobina 9. Anhidrasa carbónica A () 3 3 µ de caldo de fermentación Mejora de la precisión en los análisis Columna: Poroshell 3SB-C3,, x 7 mm, µm Fase móvil: A:, % TFA/H O B:,7 % TFA/ACN Velocidad de flujo:, ml/ Temperatura: C Gradiente: a 6 % B en,, hasta % B en. Inyección de agua (blanco) seguida inmediatamente de una inyección de µl de caldo de fermentación clarificado Detección: UV nm µl de blanco de agua 6 8 TR () Figura 3. Sin efecto memoria cuando se utiliza la columna Agilent Poroshell 3SB-C3. Para obtener más información sobre la realización de separaciones de proteínas de alta resolución con las columnas de fase reversa Agilent, visite agilent.com/chem/ 3

14 Consiga una selectividad única con ph -, La Figura muestra que las diferencias de selectividad, junto con la alta potencia de resolución de las columnas Poroshell 3, pueden ayudarle a conseguir mejoras muy favorables en sus separaciones. Las columnas Poroshell 3Extend-C8 combinan silano bidentado con un proceso de desactivación doble que protege la sílice de la disolución en valores de ph altos, para aumentar la vida útil de la columna y mejorar la línea base a valores de ph más altos. La Figura ilustra la separación rápida de pequeñas proteínas y polipéptidos en menos de un uto, utilizando la fase más hidrofóbica, C8. SB-C8 3,,,7,,,7, 3 3 Ampliar C8,,,7,,,7, SB-C3,,,7,,,7, SB-C8 3,,,7,,,7, Columna: Poroshell 3,, x 7 mm, µm Muestra: Insulina degradada Fase móvil: A: agua (, % TFA) B: ACN (,8 % TFA) Velocidad de flujo:,7 ml/ Temperatura: C Gradiente: % B mantener,3, -6 % B,,7. Figura. El cambio de la fase ligada mejora la resolución del par crítico de picos para mejorar la precisión del análisis. 3 -,,,3 Muestra:. gli-tir, mg/ml. Val-tir-val, mg/ml 3. Met-encefalina, mg/ml. Leu-encefalina, mg/ml. Angiotensina II, mg/ml,,,6,7 Tiempo () Figura. Separación rápida de pequeñas proteínas y polipéptidos en menos de un uto RNasa A mg/ml 7. Citocromo c mg/ml 8. Holotransferrina mg/ml 9. Apomioglobina mg/mll Columna: Poroshell 3SB-C8,, x 7 mm, μm Muestra: péptidos/proteínas,, μl Mezclador derivado con ref. G3-673; Programa de derivación de loop Fase móvil: A:, % TFA, HO B:,7 % TFA, ACN Velocidad de flujo: 3 ml/ Gradiente: - % B en,33 Temperatura: 7 C Detector: DAD /6 nm, ref. = 3/ nm

15 COLUMNAS ZORBAX RRHD Las partículas de 3 Å,8 µm garantizan estabilidad a bares Las columnas ZORBAX RRHD 3SB-C8, C8, C3 y 3-Difenil de,8 μm de poro ancho ofrecen el rendimiento de UHPLC para separaciones de proteínas intactas y asimilaciones de péptidos. Junto con los instrumentos UHPLC, como el LC Agilent 9 Infinity, estas columnas versátiles proporcionan una caracterización de orden más alto y tiempos de análisis reducidos. Reproducibilidad y recuperación de anticuerpos monoclonales Para proteínas más grandes, incluidos los anticuerpos monoclonales, se utiliza una funcionalidad C8 más corta y menos hidrofóbica. Este método mejora la resolución y la alta recuperación. La fase de difenil aporta una selectividad única y, además, la tecnología ZORBAX StableBond (C8, C8 y C3) le ofrece las ventajas siguientes: Baja estabilidad de ph, que le permite realizar con total seguridad separaciones de proteínas y péptidos con valores de hasta ph utilizando ácido trifluoroacético (TFA) y eluyentes de ácido fórmico. La estabilidad térmica de hasta 8 C le permite analizar separaciones a temperaturas más altas sin comprometer la vida útil de la columna. De esta forma, puede mejorar la eficacia y reducir la viscosidad del eluyente. Columna: ZORBAX RRHD 3SB-C8,, x mm,,8 µm Muestra: mab Fase móvil: A: H O:IPA (98:),, % TFA B: IPA:ACN:H O (7::),, % TFA Velocidad de flujo:, ml/ Temperatura: 8 C Detección: 9 Infinity LC a nm ma 3. ª inyección.ª inyección Gradiente: Tiempo () % B, 3, 3, 9, Aumento del tamaño de proteínas y la hidrofobicidad C8 C8 C3 Difenil Con cuatro tipos distintos de ligandos, cadenas alquílicas C8, C8 y C3 y difenil para selectividad adicional a partir de aoácidos aromáticos pi-pi, Agilent tiene la gama más amplia de columnas de fase reversa para separaciones UHPLC de proteínas y péptidos. ma 7 3,,, 3 UV Superposición de análisis de blanco de columna antes y después de inyecciones presión Parte de la Familia 3 Figura 6. Este ejemplo demuestra la reproducibilidad y la vida útil de una columna Agilent ZORBAX RRHD 3SB-C8 durante inyecciones, sin derivas del tiempo de retención ni anomalías en la forma de pico. El cromatograma inferior muestra los análisis de blanco antes y después de inyecciones y curvas de presión de gradiente, lo que demuestra que no se produjeron picos fantasma ni aumentos de presión después de inyecciones. Por lo tanto, se demuestra que no existen fallos de columna ni pérdidas de muestra que mejorarán la precisión de la cuantificación. Para obtener más información sobre la realización de separaciones de proteínas de alta resolución con las columnas de fase reversa Agilent, visite agilent.com/chem/

16 Más rapidez, mayor resolución La fase difenílica única solo estaba disponible previamente en las columnas Å Pursuit XRs y Å Pursuit de poro más pequeño. Ahora, aplicando esta química de enlace probada a las columnas ZORBAX 3 Å de,8 μm, esta selectividad exclusiva puede usarse para separaciones de proteínas más grandes. Las columnas RRHD de,8 µm pueden ofrecer separaciones rápidas más competitivas que las columnas de 3,7 µm de la competencia (modelo de flujo bajo). Ofrecen ventajas considerables en velocidad de análisis y mantienen una resolución comparable. En la Figura 8, las columnas de,8 µm mantuvieron (y sobrepasaron) la resolución crítica a velocidades de separación ultrarrápidas con gradientes balísticos: toda una ventaja UHPLC demostrable. ZORBAX RRHD en comparación con la columna de la competencia Columna de la competencia: C8,, x mm 6 bares Separación rápida de anticuerpos monoclonales reducidos ,,,69,79,99,9,766 Cadena ligera Cadena pesada,93 3 Cadena ligera 3, 3,897 Cadena pesada,9,99 Cadena pesada C3 Difenil Cadena pesada Columnas: ZORBAX RRHD 3SB-C3 y 3-Difenil,, x mm,,8 µm Muestra: Anticuerpo monoclonal reducido (IgG) (, mg/ml) Inyección de la muestra: µl Fase móvil: A:, % TFA en agua B: 8 % de n-alcohol propílico, % ACN, 9,9 % agua y, % TFA Gradiente: - % B, - % B, - % B Velocidad de flujo:, ml/ Temperatura: 7 C Detección: UV Figura 7. Comparación de separación rápida de anticuerpos monoclonales reducidos utilizando ZORBAX RRHD 3SB-C3 y 3-Difenil,, x mm,,8 µm: se obtiene una mejor resolución de las dos cadenas pesadas con la columna difenílica. ZORBAX RRHD 3SB-C8,, x mm,,8 µm 39 bares Parte de la Familia Muestra: Fase móvil: Gradiente: Velocidad de flujo: Temperatura: C DAD: nm Insulina degradada A: agua (, % TFA) B: ACN (,8 % TFA) 3 % B mantener 3,, 3-6 % B,.,3 ml/ Figura 8. Separación de insulina degradada. Las columnas Agilent 3Å,8 µm de resolución rápida y alta definición consiguen anchos de banda y formas de pico superiores a los de la competencia (resolución mejorada de productos de degradación). 6

17 COLUMNAS ZORBAX 3 Å 3, Y μm Estabilidad química y térmica extraordinaria en el rango ph -6 Las columnas Agilent ZORBAX 3StableBond son ideales para la separación reproducible de proteínas y péptidos por dos motivos: Las columnas 3 Å de poro ancho permiten que las proteínas, los péptidos y otras moléculas grandes entren por completo a la fase ligada. Las columnas ZORBAX 3StableBond tienen una durabilidad incomparable con las fases móviles de ph bajo (incluido TFA), que suelen utilizarse para separaciones de proteínas y péptidos. Para separaciones LC/MS con ph bajo, las columnas ZORBAX 3StableBond también pueden usarse con modificadores de fase móvil de ácido fórmico y ácido acético. Estas columnas están disponibles en cuatro fases ligadas distintas: StableBond C8, C8, C3 y Extend-C8 para selectividad y recuperación optimizada de proteínas y polipéptidos. Para aumentar todavía más la recuperación de muestras y mejorar la eficacia para proteínas complejas, las columnas 3StableBond pueden usarse hasta a 8-9 C. La columna ZORBAX 3SB-C3 de cadena corta es estable con valores de ph bajos y alta temperatura para separaciones reproducibles y el aumento de la vida útil de la columna % k Fenilteptano restante ZORBAX3SB-C3 Competencia C Columna: ZORBAX 3SB-C3,,6 x mm, μm Fase móvil: Gradientes - % B en 8 A:, % TFA en agua B:, % TFA en acetonitrilo Condiciones de prueba de retención isocrática: -fenileptano % A, % B Velocidad de flujo:, ml/ Temperatura: 6 C Volumen de fase móvil (ml) Figura 9. Las fases móviles típicas para separaciones de proteínas y péptidos combinan un ph muy bajo con TFA (u otros ácidos) con alta temperatura para desnaturalizar y solubilizar las proteínas. Las columnas Agilent StableBond tienen una vida útil muy larga en estas condiciones. Para obtener más información sobre la realización de separaciones de proteínas de alta resolución con las columnas de fase reversa Agilent, visite agilent.com/chem/ 7

18 COLUMNAS PLRP-S HPLC Separaciones reproducibles en condiciones extremas La serie de columnas PLRP-S de Agilent incluye distintos tamaños de poro y partícula con composiciones químicas idénticas y características cromatográficas fundamentales. Estos productos incluyen: Las partículas de polímero duraderas y flexibles ofrecen resultados reproducibles para ampliar la vida útil de la columna. Estabilidad térmica y química para separaciones a temperaturas altas y valores de ph extremos. Tamaños de poro de a Å que proporcionan separaciones de alta eficacia en toda la gama de tamaños de proteínas y péptidos. Las partículas PLRP-S son inherentemente hidrofóbicas, por lo que no se necesita fase ligada ni ligando de alquilo. Esto garantiza un material altamente reproducible que está exento de silanoles e iones metálicos pesados. Además, PLRP-S proporciona escalabilidad desde separaciones analíticas hasta purificación, columnas preparativas y medios a granel. Al purificar proteínas, puede que sea necesario esterilizar la columna con el material PLRP-S. Se pueden utilizar detergentes muy agresivos, como M NaOH, como se demuestra en la Figura. El medio puede limpiarse en una columna empaquetada (CIP) o a granel, utilizando una serie de agentes de solubilización como el hidróxido sódico, para garantizar una vida útil insuperable de la columna/ medio. Grandes proteínas fibrosas. Colágeno (. PM). Fibrinógeno (3. PM) Explotación de la estabilidad química: concentración de NaOH Antes Después volúmenes de columna de M NaOH 3 3. Oxitocina. Angiotensina II 3. Angiotensina I. Insulina PLRP-S 3Å 8 PLRP-S Å Columna: Fase móvil: PLRP-S 3Å,6 x mm, - μm A:,% TFA en agua B:, % TFA en ACN Gradiente: - % B en utos Velocidad de flujo:, ml/ Detector: UV nm Columna: Columna: PLRP-S 3Å,6 x mm, 8 μm PLRP-S Å,6 x mm, 8 μm Fase móvil: A:, % TFA en agua B:, % TFA en % de agua: 9 % ACN Velocidad de flujo:, ml/ Gradiente: -6 % B en Detector: UV, nm Figura. El medio Agilent PLRP-S es químicamente resistente y puede soportar protocolos de limpieza/esterilización muy agresivos para proporcionar tiempos de vida útil de la columna/ medio inigualables. Figura. Los materiales Agilent PLRP-S 3Å y PLRP-S Å separan grandes proteínas fibrosas, como se muestra aquí. Sin embargo, la forma de pico mejorada y la altura de pico aumentada se obtuvieron con la columna PLRP-S Å de poro más grande. 8

19 INSTRUMENTOS PARA IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS Y DETERMINACIÓN DEL PERFIL DE IMPUREZAS Sistema LC cuaternario bioinerte Agilent 6 Infinity: la mejor elección para separaciones de proteínas Sistema LC binario Agilent 9 Infinity: el sistema UHPLC más adaptativo con la gama de aplicaciones más amplia Uso para identificación de proteínas: usar con Poroshell 3 para obtener los mejores resultados El único UHPLC que proporciona una ruta de paso de muestras exenta de metal. Otras ventajas: % bioinerte Sin acero inoxidable: la muestra no toca las superficies metálicas. ph a ph 3 (ph durante breve tiempo). Maneja M de sal y 8 M de urea. Nueva tecnología capilar. Características de UHPLC: 6 bares Robusto y fácil de usar con baja actividad de superficie, resistencia a la corrosión, lavado activo de sellos y mezcla de tampón cuaternaria. Uso para la deteración del perfil de impurezas, mapeo de péptidos o gradientes ultrarrápidos: usar con ZORBAX RRHD 3Å,8 µm para obtener los mejores resultados Rendimiento líder en su clase en téros de resolución por tiempo, dispersión, sensibilidad y precisión en LC/UV y LC/MS. Combina una innovadora amortiguación activa, mezcla microfluídica y tecnología de detección de guía de ondas optofluídica: Rango de potencia de UHPLC con hasta bares y ml/. La transferencia de métodos más rápida y sencilla empleando ISET, la tecnología inteligente de simulación de sistemas de Agilent. Productividad de UHPLC, coste de explotación similar a HPLC. Sistema LC binario Agilent 6 Infinity: mejora del HPLC analítico con el detector de alta velocidad de 8 Hz, 6 bares y una sensibilidad hasta veces superior % compatible con HPLC, características de UHPLC: Rendimiento de UHPLC, coste de utilización similar a HPLC. Sistema LC cuaternario Agilent 9 Infinity: combinación de rendimiento y flexibilidad El único sistema UHPLC cuaternario con niveles de precisión similares a los de sistemas binarios. Las otras ventajas incluyen: Rango de potencia de UHPLC con hasta bares y ml/. BlendAssist, la herramienta más sencilla para una combinación precisa de tampón y aditivo Uso adecuado para cualquier tipo de aplicación UHPLC estándar Admite aplicaciones LC y LC/MS, con cualquier columna analítica de diámetro estrecho y estándar (DI de, a,6 mm). Precisión de gradiente superior mediante mezcla en alta presión. Uso adecuado para desarrollo de métodos o sistemas automatizados con una mezcla de tampón precisa Productividad de UHPLC, coste de explotación similar a HPLC. Para obtener más información sobre la realización de separaciones de proteínas de alta resolución con las columnas de fase reversa Agilent, visite agilent.com/chem/ 9

20 Especificaciones e información para pedidos Columnas RP-mAb Fase ligada Tamaño de poro Límites de temp. Rango de ph Desactivado C Å 9 C, a 8, Sí SB-C8 Å 9 C, a 8, No Difenil Å 9 C, a 8, Sí Parte de la Familia Descripción Tamaño (mm) Tamaño de partícula (μm) Referencia C, x 3, C, x 7 3, C, x 3, C, x 3, C,6 x 3, C,6 x 3, C,6 x 3, SB-C8, x 3, SB-C8, x 7 3, SB-C8, x 3, SB-C8, x 3, SB-C8,6 x 3, SB-C8,6 x 3, SB-C8,6 x 3, Difenil, x 3, Difenil, x 7 3, Difenil, x 3, Difenil, x 3, Difenil,6 x 3, Difenil,6 x 3, Difenil,6 x 3, Columnas Poroshell 3 para análisis de proteínas Fase ligada Tamaño de poro Límites de temp. Rango de ph Desactivado 3SB-C8, C8, C3 3 Å 9 C, a 8, No 3Extend-C8 3 Å C por encima de un ph de 8, 6 C por debajo de ph 8, a, Sí Parte de la Familia Descripción Tamaño (mm) 3SB-C8 USP L 3SB-C8 USP L7 Capilar, x Capilar, x SB-C3 3Extend-C8 USP L Microbore, x Columna de diámetro estrecho, x Precolumna, /paq., x, Kit de piezas de la precolumna Precolumna MicroBore, 3/paq., x

21 Columnas ZORBAX 3Å para separaciones de proteínas HPLC y UHPLC Fase ligada Tamaño de poro Límites de temp. Rango de ph Desactivado 3SB-C8 3 Å 9 C, a 8, No 3SB-C8 3 Å 8 C, a 8, No 3SB-C3 3 Å 8 C, a 8, No 3SB-CN 3 Å 8 C, a 8, No 3Extend-C8 3 Å 6 C, a, Doble 3-Difenil 3 Å 8 C, a 8, Sí Descripción Tamaño (mm) Tamaño de partícula (μm) 3SB-C8 USP L 3SB-C8 USP L7 3SB-CN USP L 3SB-C3 USP L6 3Extend-C8 USP L 3-Difenil USP L Microbore, x MicroBore RR, x 3, MicroBore RR, x 3, Columna de diámetro estrecho, x Columna de diámetro estrecho, x Columna de diámetro estrecho, x, Columna de diámetro estrecho, x, Columna de diámetro estrecho RR, x 3, Columna de diámetro estrecho RR, x 3, Columna de diámetro estrecho RR, x 3, Disolvente Saver Plus 3, x 3, Disolvente Saver Plus 3, x 3, Analítica,6 x Analítica,6 x Analítica,6 x Resolución rápida,6 x 3, Resolución rápida,6 x 3, Resolución rápida,6 x 3, Semipreparativa 9, x Precolumna MicroBore, 3/paq., x Precolumna, /paq.,6 x, Precolumna, /paq., x, Cartucho PrepHT, x Cartucho PrepHT, x Cartucho PrepHT, x Cartucho PrepHT, x Cartucho PrepHT, x Terales de conexión PrepHT, /paq. Precolumna PrepHT, /paq. 7 x 7, Piezas de precolumna Parte de la Familia Para obtener más información sobre la realización de separaciones de proteínas de alta resolución con las columnas de fase reversa Agilent, visite agilent.com/chem/

22 Columnas PLRP-S HPLC para el rango de ph más amplio Descripción Tamaño (mm) Tamaño de partícula (μm) PLRP-S Å USP L PLRP-S 3Å USP L PLRP-S Å USP L PLRP-S Å USP L Microbore, x 3 PL3-3 PL3-3 Microbore, x PL3- PL3- Microbore, x 3 PL3-33 Analítica,6 x 8 PL-8 PL-8 PL-83 Analítica,6 x PL- PL- Analítica,6 x PL-3 PL-3 Analítica,6 x PL- PL- PL- PL-3 Analítica,6 x 3 PL-33 PL-33 Analítica,6 x 3 PL-3 PL-3 Analítica, x 8 PL9-8 Analítica, x 8 PL9-38 PL9-38 PL9-383 Analítica, x 8 PL9-8 PL9-8 PL9-83 Analítica, x PL9- PL9- Analítica, x PL9-3 PL9-3 Analítica, x PL9- PL9- PL9- PL9-3 Analítica, x 3 PL9-33 PL9-33 Analítica, x 3 PL9-3 PL9-3 Desarrollo de métodos,6 x 3 PL-7 PL Desarrollo de métodos,6 x - PL- PL- Desarrollo de métodos,6 x - PL- PL- Desarrollo de métodos,6 x PL- PL- PL- PL-3 Desarrollo de métodos,6 x 8 PL-8 PL-8 PL-8 Desarrollo de métodos,6 x 3 PL-37 PL-373 Desarrollo de métodos,6 x - PL-3 PL-3 Desarrollo de métodos,6 x - PL-3 Desarrollo de métodos,6 x PL-3 PL-3 PL-3 PL-33 Desarrollo de métodos,6 x 8 PL-38 PL-38 PL-38 PL-383 Preparativa a proceso x 3 3 PL8-3 PL8-33 Preparativa a proceso x 3 - PL8-6 PL Preparativa a proceso x 3 - PL8-6 PL Preparativa a proceso x 3 PL8-6 PL Preparativa a proceso x 3 8 PL8-68 PL Preparativa a proceso x 3 8 PL7-68 PL Preparativa a proceso x 3 PL7-37 PL7-373 Preparativa a proceso x - PL7-3 PL Preparativa a proceso x - PL7-3 PL Preparativa a proceso x PL7-3 PL7-3 PL7-3 PL7-33 Preparativa a proceso x 8 PL7-38 PL Preparativa a proceso x 3 - PL-6 PL Preparativa a proceso x 3 - PL-6 PL Preparativa a proceso x 3 PL-6 PL Preparativa a proceso x 3 8 PL-68 PL Preparativa a proceso x 3 PL-37 PL-373 Preparativa a proceso x PL-3 PL-3 PL7-3 PL7-33 Preparativa a proceso x 8 PL-38 PL Preparativa a proceso x PL- PL-3 Precolumnas PLRP-S para x 3 mm, /paq. PL6-8 PL6-8 PL6-8 PL6-8 Soporte para precolumna para cartuchos de 3, x, mm PL3-6 PL3-6 PL3-6 PL3-6

23 PLRP-S HPLC a granel Tamaño de partícula (μm) Unidad PLRP-S Å USP L PLRP-S 3Å USP L PLRP-S Å USP L PLRP-S Å USP L kg PL-6K PL-6K PL-6K g PL-K PL-K PL-K 3 kg PL-67 PL-673 g PL-7 PL-73 - kg PL-6 PL g PL- PL- - kg PL-6 PL-6 g PL- PL- kg PL-6 PL-6 PL-6 PL-63 g PL- PL- PL- PL-3 8 kg PL-68 PL-68 Para cantidades mayores, póngase en contacto con su oficina de ventas local de Agilent. Columnas de mapeo de péptidos Presión operativa máxima Descripción Referencia,6 x mm,,7 μm , x mm,,7 μm 639-3, x mm,,7 μm 67-9, x mm,,7 μm 637-9, x mm,,7 μm 67-9 Precolumna rápida de,6 mm* 87-9 Precolumna rápida de 3, mm* Precolumna rápida de, mm* 87-9 Parte de la Familia bares 6 bares. bares Columnas RP-mAb Columnas ZORBAX RRHD 3Å,8 μm Columnas Poroshell 3 Columnas ZORBAX 3Å 3, y µm Columnas PLRP-S 3 y µm Columnas,7 µm * Las precolumnas rápidas prolongan la vida útil de las columnas sin retardar la separación ni afectar a la resolución. Columnas Agilent : Para análisis biofarmacéuticos más rápidos y uniformes Agilent es una gama de biocolumnas de última generación que se han diseñado para proporcionar un rendimiento excepcional y uniforme para la separación y caracterización de péptidos y proteínas. Los preceptos científicos sobre los que se asientan las columnas ayudan a aumentar la precisión, conseguir mayor productividad y eliar las interferencias que pueden impedir progresar. Las columnas se han sometido a pruebas exhaustivas en las instalaciones de Agilent para garantizar resultados excelentes. Estas columnas están respaldadas por la garantía de completa satisfacción de 6 días exclusiva de Agilent. Para obtener más información sobre la realización de separaciones de proteínas de alta resolución con las columnas de fase reversa Agilent, visite agilent.com/chem/ 3

24 Biocolumnas Agilent: Resultados en los que puede confiar para BioHPLC de fase reversa rápida y precisa Calidad superior y mayor flexibilidad para análisis de biomoléculas de fase reversa LC rápida de vanguardia con avances tales como las columnas RP-mAb, basadas en la tecnología Poroshell, que permiten realizar análisis más rápidos y ofrecen una alta resolución en cualquier HPLC o UHPLC Perfeccionamiento del método UHPLC con columnas ZORBAX RRHD,8 µm (estables a bares). Rendimiento, reproducibilidad y valor añadido demostrados en millones de inyecciones Análisis biofarmacéuticos rápidos y uniformes: las columnas de mapeo de péptidos BioHPLC le permiten resolver e identificar rápidamente las modificaciones de aoácidos en estructuras primarias. Más información Para obtener más información sobre las columnas de fase reversa de Agilent, visite agilent.com/chem/ Encuentre un centro de atención al cliente de Agilent en su país: agilent.com/chem/contactus Rendimiento excepcional de forma de pico mediante tecnologías innovadoras de sílice y enlace, que se combinan para ofrecer precisión en la confirmación de la identidad de proteínas y análisis de impurezas Amplio rango de selectividades para proporcionar alta resolución y recuperación para péptidos y proteínas También tiene acceso a la extensa biblioteca de aplicaciones de Agilent para conseguir un desarrollo de métodos más rápido, además de asistencia técnica en todo el mundo, resolución rápida de problemas y nuestra infraestructura y red de suistros mundial. Piezas de columna de carga y sellado para purificación Agilent ofrece estaciones de empaquetado y piezas de carga y sellado para columnas preparativas y de proceso para purificación a partir de cantidades de varios gramos a kilogramos de producto. El medio PLRP-S está disponible en lotes de tamaños más grandes para empaquetar estas columnas. Necesita preparación de muestras para sus análisis de proteínas? Los filtros de unión de bajo nivel de proteínas de Agilent son la mejor elección para la filtración de muestras relacionadas con péptidos/proteínas, con un consistente nivel bajo de unión de proteínas durante la filtración. Estados Unidos y Canadá: agilent_inquiries@agilent.com Europa: info_agilent@agilent.com Asia Pacífico: inquiry_lsca@agilent.com Esta información está sujeta a cambios sin previo aviso. Agilent Technologies, Inc.. Impreso en los Estados unidos, 9 de noviembre de. 99-6ES