Laboratorio. Objetivos I N T R O D U C C I Ó N. Al finalizar este laboratorio el estudiante podrá:

Transcripción

1 Laboratorio 8 Respiración celular Objetivos Al finalizar este laboratorio el estudiante podrá: 1. Entender qué es la respiración celular, su importancia y los pasos principales de la misma. 2. Diferenciar entre la respiración aeróbica y la anaeróbica. 3. Diferenciar entre la fermentación láctica y alcohólica, y conocer sus aplicaciones. 4. Entender cómo ocurre la fermentación alcohólica a partir de distintos carbohidratos. 5. Medir la tasa de respiración aeróbica en varios organismos. 6. Conocer cómo se lleva a cabo una titulación. I N T R O D U C C I Ó N L as células llevan a cabo diversos procesos para mantener su funcionamiento normal, muchos de los cuales requieren energía. La respiración celular es una serie de reacciones mediante las cuales la célula degrada moléculas orgánicas y produce energía. Todas las células vivas llevan a cabo respiración celular para obtener la energía necesaria para sus funciones. Usualmente se usa glucosa como materia prima, la cual se metaboliza a bióxido de carbono y agua, produciéndose energía que se almacena como ATP (trifosfato de adenosina). C 6 H 12 O 6 CO 2 + H 2 O + Energía (ATP) glucosa bióxido agua de carbono La molécula de ATP está formada por adenina, ribosa y tres grupos fosfatos con enlaces ricos en energía. Cuando la molécula se hidroliza, el fosfato terminal se separa para formar ADP (difosfato de adenosina) y se libera energía. El ATP es la fuente de energía que se usa como combustible para llevar a cabo el metabolismo celular. 1

2 La respiración celular se divide en pasos y sigue distintas rutas en presencia o ausencia de oxígeno. En presencia de oxígeno sucede respiración aeróbica y en ausencia de oxígeno sucede respiración anaeróbica. Ambos procesos comienzan con la glucólisis. G L U C Ó L I S I S Glucólisis es el primer paso de la respiración celular y consiste de una serie de reacciones que ocurren en el citoplasma de la célula y por las cuales, a partir de una molécula de glucosa, se producen dos moléculas de ácido pirúvico (piruvato). Todos los organismos llevan a cabo la glucólisis. La glucólisis se divide en dos partes; en la primera la molécula de glucosa se divide en dos moléculas de gliceraldehido- 3-fosfato y en la segunda estas dos moléculas se convierten en dos moléculas de ácido pirúvico (piruvato). Durante la glucólisis se producen dos moléculas de ATP. Glucólisis: glucosa + 2Pi + 2ADP + 2NAD + 2 Ácidos pirúvicos + 2ATP + 2NADH + 2H + En ausencia de oxígeno, luego de la glucólisis se lleva a cabo fermentación (respiración celular anaeróbica). Algunas bacterias sólo llevan a cabo fermentación, mientras que la gran mayoría de los organismos (incluidos los humanos) pueden llevar a cabo respiración celular aeróbica y anaeróbica. R E S P I R A C I Ó N C E L U L A R A E R Ó B I C A La respiración celular aeróbica es el conjunto de reacciones en las cuales el ácido pirúvico producido por la glucólisis se transforma en CO 2 y H 2 O, y en el proceso, se producen 36 moléculas de ATP. En las células eucariotas este proceso ocurre en el mitocondrio en dos etapas llamadas el Ciclo de Krebs (o ciclo de ácido cítrico) y la cadena de transporte de electrones 1. Reacción de transición: 2 ácidos pirúvicos + 2 NAD+ + 2 CoA 2 Acetyl CoA + 2 NADH + 2 CO 2 Ciclo de Krebs: Oxaloacetato + acetyl CoA Citrato + CoA En el ciclo de Krebs se producen: 4CO 2, 6NADH, 2 FADH 2 y 2 ATP por cada molécula inicial de glucosa 1 La reacción de transición es la reacción que conecta la glucólisis con el Ciclo de Krebs. 2

3 C A D E N A D E T R A N S P O R T E D E E L E C T R O N E S En la cadena de transporte de electrones, los electrones producidos en glucólisis y en el ciclo de Krebs pasan a niveles más bajos de energía y se libera energía para formar ATP. Durante este transporte de electrones las moléculas transportadoras se oxidan y se reducen. El último aceptador de electrones de la cadena es el oxígeno. En la cadena se producen 34 moléculas de ATP a partir de una molécula inicial de glucosa. R E S P I R A C I Ó N C E L U L A R A N A E R Ó B I C A La respiración celular anaeróbica ocurre en ausencia de oxígeno. Este mecanismo no es tan eficiente como la respiración aeróbica, ya que sólo produce 2 moléculas de ATP, pero al menos permite obtener alguna energía a partir del piruvato que se produjo en la glucólisis. Hay dos tipos de respiración celular anaeróbica: fermentación láctica y fermentación alcohólica. Fermentación láctica: Ácido pirúvico + NADH + H+ ácido láctico + NAD+ La fermentación láctica ocurre en algunas bacterias y gracias a este proceso obtenemos productos de origen lácteo tales como yogurt, crema agria y quesos. Este proceso sucede también en el músculo esqueletal humano cuando hay deficiencia de oxígeno, como por ejemplo, durante el ejercicio fuerte y continuo. La acumulación del ácido láctico causa el dolor característico cuando ejercitamos los músculos excesivamente. Fermentación alcohólica: En la fermentación alcohólica suceden dos reacciones consecutivas: Ácido pirúvico acetaldehído + CO 2 acetaldehído + NADH + H+ etanol + NAD+ Este tipo de fermentación ocurre en levaduras, ciertos hongos y algunas bacterias, produciéndose CO 2 y alcohol etílico (etanol); ambos productos se usan en la producción de pan, cerveza y vino. 3

4 D I F E R E N C I A S E N T R E R E S P I R A C I Ó N C E L U L A R A E R Ó B I C A Y A N A E R Ó B I C A La diferencia básica entre la respiración celular aeróbica y la anaeróbica (a parte de suceder en presencia o ausencia de oxígeno) es la cantidad de moléculas de ATP que se producen. En la respiración celular anaeróbica, los hidrógenos (electrones) pasan al piruvato para formar el ácido láctico o el etanol, mientras que en la respiración celular aeróbica los hidrógenos pasan a la cadena de transporte de electrones para formar ATP. En la respiración celular aeróbica, el piruvato que pasa por el ciclo de Krebs produce hidrógenos adicionales que también pasan a la cadena de transporte de electrones para formar ATP. Por esta razón, en la respiración celular aeróbica se producen 36 moléculas de ATP a partir de una molécula de glucosa, mientras que en la ruta anaeróbica sólo se extraen 2 moléculas de ATP a partir de una molécula de glucosa. E J E R C I C I O 8. 1 R E S P I R A C I Ó N C E L U L A R A N A E R Ó B I C A A. Fermentación alcohólica en levaduras En este ejercicio se estudiará el proceso de fermentación alcohólica que llevan a cabo las levaduras. Estos organismos llevan a cabo respiración aeróbica en presencia de oxígeno y respiración anaeróbica en ausencia de éste. La levadura que se usará es Saccharomyces cerevisiae, la misma que se utiliza para la producción de pan, cerveza y vino. En la fermentación alcohólica se produce bióxido de carbono y alcohol etílico (etanol). El bióxido de carbono crea la efervescencia en la cerveza y hace que el pan suba dentro del horno. El etanol que se produce es el alcohol presente en la cerveza y los vinos. Se usarán varias soluciones de carbohidratos para determinar cuáles pueden metabolizarse mediante la fermentación. M A T E R I A L E S Gradilla para tubos de ensayo Cuatro tubos de ensayo medianos Cuatro pipetas graduadas de 1 ml Cuatro pipetas Pasteur desechables Lápiz de cera Un sobre de levadura Azúcar o melaza Vaso (beaker) de 200 ml Papel de parafina (Parafilm) Soluciones de sacarosa, galactosa, maltosa y lactosa P R O C E D I M I E N T O 1. Prepare una suspensión de levadura por laboratorio mezclando: Un paquete de levadura 2 g de sacarosa o melaza 100 ml de agua tibia 2. Rotule cuatro tubos del 1 al 4. Añada y mezcle bien lo siguiente: 4

5 Tubo 1: 2 ml de solución de sacarosa y 2 ml de suspensión de levadura Tubo 2: 2 ml de solución de galactosa y 2 ml de suspensión de levadura Tubo 3: 2 ml de solución de maltosa y 2 ml de suspensión de levadura Tubo 4: 2 ml de solución de lactosa y 2 ml de suspensión de levadura 3. Para cada tubo: a. Llene una pipeta graduada con la solución del tubo (Fig. 8.1a). b. Tape el extremo con el dedo mientras sella el lado opuesto con papel de parafina (Fig. 8.1b). c. Utilizando la pipeta Pasteur, continue llenando la pipeta graduada con la solución hasta que se desborde. d. Invierta la pipeta, colocándola en el tubo de ensayo (Fig. 8.1c). (a) (b) (c) Pipeta Papel de parafina Tubo con pipeta F i g u r a 8. 1 Pasos para el experimento de fermentación. 4. Durante la fermentación, el CO 2 subirá y se acumulará en el extremo superior de la pipeta. Anote la producción de CO 2 en cada pipeta a intervalos de 5 minutos durante 20 minutos y anótelo en la siguiente tabla: Tabla 8.1 Producción de CO 2 durante la fermentación Tiempo Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 (en minutos)

6 5. Cuál fue la producción final de CO 2 (ml/20 min) para cada tubo? 6. Qué tipo de fermentación ocurrió? 7. Puede la levadura usar diferentes carbohidratos para la fermentación? 8. Qué sucedería si no sella con parafina el extremo superior de la pipeta? E J E R C I C I O 8. 2 R E S P I R A C I Ó N C E L U L A R A E R Ó B I C A A. Respiración celular en plantas y animales En el siguiente ejercicio se comparará el proceso de respiración celular en varios organismos que viven en agua dulce. El CO 2 que producen estos organismos durante la respiración celular se convierte en un ácido (ácido carbónico), cuya concentración se medirá por medio de una titulación 2 usando un indicador de ph (fenolftaleína). Con este indicador se observará el punto de cambio en ph, donde se obtiene el equilibrio entre ph ácido y básico. Este cambio en ph sucede al añadirle una solución básica de NaOH a la muestra ácida, y se observa por un cambio en color; de esta forma se podrá calcular la producción de CO 2 para cada organismo. Se estudiará una planta acuática para determinar si lleva a cabo respiración celular en la oscuridad y en presencia de luz. M A T E R I A L E S Por mesa: Cinco vasos de precipitación (beakers) de 150 ml Cinco vasos de precipitación (beakers) de 100 ml Por laboratorio: Papel de aluminio Fenolftaleína 2 Titulación: El proceso por el cual una solución se le añade a otra solución de manera que reaccione bajo unas condiciones específicas para que el volumen añadido pueda ser medido con precisión. La titulación se asocia comúnmente con reacciones de ácido-base, pero se puede usar en otros tipos de reacciones. 6

7 Solución de NaOH 0.25 M (para diluir 1:100) Bureta para titular Pipetas graduadas de 5 y 10 ml Pipeteador para pipetas pequeñas Peces o camarones de agua dulce Caracoles Elodea fresca Anticloro Lámpara P R O C E D I M I E N T O 1. Determine el volúmen que se añadió al producirse ácido carbónico en el agua para cada organismo a utilizarse (pez o camarón, caracol, Elodea) y anote la información en la Tabla 8.2. Para determinar el volumen siga estos pasos: a. Añada el organismo a un vaso (beaker) pequeño con 50 ml de agua b. Haga una marca donde queda el menisco. c. Remueva el organismo. d. Con una pipeta llena añada agua hasta llegar a la marca. e. La diferencia de lectura en la pipeta indicará el volumen del organismo. f. Repita para cada organismo. 2. Rotule cinco vasos (150 ml) del 1 al 5 y añádale a cada uno: 1: 100 ml de agua + 1 pez o camarón 2: 25 ml de agua + un caracol grande (o dos caracoles pequeños) 3: 100 ml de agua + 5 cm de Elodea fresca 4: 100 ml de agua + 5 cm de Elodea fresca 5: 100 ml de agua R E C U E R D E Hay que tratar el agua con anticloro antes de añadir los animales. Siga las indicaciones del producto. NO deje morir los peces y los caracoles después del experimento; devuélvalos a la pecera. 3. Tape la boca de los vasos con papel de aluminio, excepto el vaso 4 que se cubrirá por completo para mantener la Elodea en oscuridad. 4. Coloque el vaso 3 cerca de una bombilla. 5. Después de 30 minutos, remueva los organismos y devuélvalos a los recipientes correspondientes en la mesa del instructor. 6. Transfiera 25 ml de la solución del vaso 1 a un vaso pequeño. 7. Añada cuatro gotas de fenolftaleína y mezcle. 8. Llene la bureta de titulación con la solución de M de NaOH. 9. Mueva el vaso en círculos y añada gotas de la solución de NaOH hasta obtener un color rosado persistente. 7

8 10. Anote en la Tabla 8.2 la cantidad de NaOH que utilizó para la titulación. 11. Repita el proceso con los demás vasos. 12. Calcule la producción de CO 2 para cada vaso mediante esta ecuación: Producción [ml NaOH (experimental) ml NaOH (control*)] x 2.5 ml NaOH de = CO 2 Volumen del organismo (ml) *Se obtiene al titular el agua del vaso Coloque los resultados en la Tabla 8.2. Tabla 8.2 Respiración celular aeróbica en plantas y animales Vaso de precipitación Organismo NaOH (ml) Volumen del organismo (ml) 1 Pez o camarón Cantidad de CO 2 (ml) 2 Caracol 3 Elodea (en luz) 4 Elodea (en oscuridad) 5 Agua (control) 14. Qué organismo tiene el metabolismo más alto? Por qué? 15. Qué organismo tiene el metabolismo más bajo? Por qué? 16. Por qué la planta lleva a cabo fotosíntesis y también respiración celular? 17. Compare los resultados de Elodea en la oscuridad y en la luz. Cuál tiene una mayor tasa de respiración celular? Por qué? 18. Identifique lo siguiente para este experimento: hipótesis, variables dependiente e independiente, réplicas, control. 8

9 INFORMACIÓN ADICIONAL Recursos del tema se pueden encontrar en: Denniston, Topping and Caret (2004). General, Organic, and Biochemistry, 4 ta Ed. Mc Graw Hill. New York. USA Boyer, B (1999). Concepts in Biochemistry, Brooks/Cole Publishing. Solomon, Berg & Martin (2004). Biology, 7 th Ed. Brooks Cole Publ. Respiration.html 9

10 LABORATORIO 8: RESPIRACIÓN CELULAR P L A N D E E N S E Ñ A N Z A P A R A L O S I N S T R U C T O R E S Destrezas que el estudiante adquirirá a partir de este laboratorio: 1. Aplicaciones químicas en la biología. 2. Trabajo individual y grupal. 3. Técnicas de laboratorio, como la titulación, que envuelve conceptos químicos. 4. Destrezas de comunicación escrita. 5. Se reforzarán los conceptos de investigación científica. 6. Discusión oral. Manejo del laboratorio: Debe prepararse la suspensión de levaduras antes del laboratorio: o 1 paquete de levadura o 2 gramos de sacarosa o melaza o 100 ml de agua tibia Ejercicio 8.1: Respiración celular anaeróbica o Este ejercicio se hará por mesa. Ejercicio 8.2: Respiración o Antes de realizar el experimento, diluya la solución de NaOH a M (1:100). o Dependiendo de cuántos peces y caracoles se tengan disponibles, se dividirá el laboratorio en 2 a 4 grupos. Manejo del tiempo: 1. Recoger asignación (Ejercicio 7.2 c) y discutir... 5 minutos 2. Introducción minutos 3. Ejercicio 8.1: Respiración celular anaeróbica A. Fermentación alcohólica en levaduras minutos 4. Ejercicio 8.2: Respiración celular aeróbica A. Respiración celular en plantas y animales minutos 5. Discusión y prueba corta minutos 6. Ir al invernadero para recoger datos del experimento de habichuelas (o frijoles) minutos 7. Recoger el laboratorio... 5 minutos 10