Introducción a la Histología

Transcripción

1 Introducción a la Histología Professor: Verónica Pantoja. Lic. MSP. Kinesiologia Objetivos: Comprender el concepto de histología. Reconocer los instrumentos y técnicas que utiliza la histología para el estudio de tejidos y de la célula como unidad morfológica y funcional del organismo.

2 Que es la Histología? Del griego Histo Logos Tejido Tratado Ciencia que estudia los tejidos orgánicos: su estructura microscópica, su desarrollo y sus funciones Marcello Malpighi es reconocido como el fundador de la Histología

3 Técnica Histológica Serie de pasos que han de darse para obtener un preparado observable con el microscopio óptico Métodos de examen Inmediato (in vivo) Mediato (post mortem) Toma de muestra Fijación Deshidratación Preparación para la inclusión Inclusión Modelado del bloque catalogación Sección con el micrótomo extendido de los cortes pegado Coloraciones: de rutina o especiales

4 1-Muestreo El muestreo debe realizarse antes de: Autólisis y/o Putrefacción Los tejidos y órganos se han de extraer considerando las siguientes prioridades: Las glándulas exocrinas y endocrinas lo más rápidamente posible. El páncreas y el riñón deben extraerse no más de 10 a 15 min. Otros órganos tales como intestino delgado y/o grueso, estómago, hígado, se deben extraer no más allá de los 30 min. Los músculos esqueléticos, huesos, piel, encéfalo, médula, ganglios nerviosos no deben extraerse más allá de 60 min.

5 2-Fijación Es una operación destinada a provocar la MUERTE de las células, conservándolas, cuanto sea posible en el estado en que están durante la vida. Una buen a fijación debe: 1. Actuar con rapidez, matando y fijando a las células antes de que aparezcan los fenómenos agónicos o post-mortem (autólisis, desintegración, etc.) 2. Poseer alto poder de penetración para asegurar la fijación correcta hasta en las capas profundas de la pieza a fijar 3. Conservar, en lo posible, los detalles estructurales que presentaban in vivo 4. Permitir o favorecer el empleo de los procedimientos necesarios para su observación ulterior (ejecución de cortes, coloración, etc.) 5. Impedir la desaparición de los elementos solubles durante la fijación o después de ella 6. No provocar o impedir la producción de estructuras artificiales 7. No retraer excesivamente los tejidos ni volverlos friables o quebradizos

6 Químicos SIMPLES Formol al 10% Alcohol etílico absoluto o de 96% Alcohol metílico Ácido ósmico al 1 ó 2% Bicromato de potasio al 3-5% COMPUESTOS Líquido de Fleming, mezcla cromo-osmio-acética. Líquido de Zenker, mezcla bicromato-sublimadoacética. Líquido de Helly, mezcla Zenker-formol. Líquido de Bouin, mezcla picro-formos-acética. Liquido de Duboscq-Brasil, o Bouin alcohólico FÍSICOS Desecación, Calor seco, Calor húmedo, Frío y Congelación y desecación

7 3-DESHIDRATACIÓN Deshidratación Los tejidos contienen grandes cantidades de agua, tanto intracelular como extracelular, que debe ser eliminada y reemplazada por parafina Lavado en agua o alcohol Una lámina en un caja de deshidratación La deshidratación se hace en forma progresiva con sucesivos baños de alcohol, cada vez menos hidratados Tiempos de permanencia en cada líquido: Alcohol 70: las piezas pueden permanecer varios días. Alcohol 96: 2 baños en un lapso de 24 h. Alcohol 100: 3 baños de una hora c/u.

8 4-INCLUSIÓN EN PARAFINA Aclaración Impregnación por un disolvente de la parafina Las piezas perfectamente deshidratadas se sumergen en el disolvente (xilol o toluol) Penetración de la Parafina Se sumergen las piezas en parafina (56-58º de punto de fusión), mantenida líquida en la estufa a no más de 62ºC. Después de 1 a 2 horas se renueva la parafina Inclusión Definitiva o Formación del Bloque En moldes de papel o de metal ad-hoc (barras de Leuckart) se vierte la parafina fundida, del mismo punto de fusión de la que ha servido para la penetración. Se colocan las piezas orientándolas y luego se pone el molde en heladera minutos

9 5-CORTES El objeto de la inclusión es hacer posible la reducción del tejido a cortes lo suficientemente delgados como para permitir el paso de la luz para examinarlo al microscopio. Los cortes más corrientes son los de 4-6 micrones. Micrótomo de deslizamiento Micrótomo Tipo Minot Micrótomo de Congelación y el Crióstato o Criótomo Micrótomo tipo Minot

10 6-Coloración Proceso mediante el cual un cuerpo es teñido por una sustancia colorante, sin perder el color cuando es lavado con el disolvente Colorante Sustancias que pueden conferir color a otros cuerpos Clasificación COLORANTES NATURALES: Animales (carmín) Vegetales (hematoxilina, orceína, azafrán) COLORANTES ARTIFICIALES O SINTÉTICOS (COLORES DE ANILINA) Ácidos, Básicos, Neutros e Indiferentes

11 Van Gieson

12 GOMORI (Sales de Plata)

13 PAS (Glucógeno)

14 Azul de Prusia (Hierro)

15 Von Kossa (Calcio)

16 Orceína (Fibras elásticas)

17 INMUNOFLURECESCIA Rodamina GFAP

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