PSA FREE ELISA. Inmunoensayo enzimático para la determinación cuantitativa del PSA libre en muestras de plasma o suero humanos.

Transcripción

1 Instrucciones de Uso Instructions for Use PSA FREE ELISA Inmunoensayo enzimático para la determinación cuantitativa del PSA libre en muestras de plasma o suero humanos. RE C DRG Instruments GmbH Frauenbergstr. 18, D Marburg 0197 Distributed by: I B L I N T E R N A T I O N A L G M B Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0) IBL@IBL-International.com D Hamburg, Germany Fax: +49 (0) H

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3 1 USO PREVISTO El PSA FREE ELISA se utiliza para la determinación cuantitativa del antígeno prostático específico libre (f-psa) en muestras de plasma o suero humanos. La determinación de los niveles del f-psa se utiliza generalmente junto con una medición del PSA total (t-psa) para determinar la relación entre el f-psa y el t-psa. Esta relación ayuda a calcular el riesgo de padecer cáncer de próstata y discriminar entre los niveles elevados del t-psa causados por enfermedades cancerosas y no cancerosas. Las determinaciones del f-psa se recomiendan especialmente para hombres con niveles de t-psa elevados y con resultados negativos en el tacto rectal a fin de decidir si procede realizar una segunda biopsia de próstata. 2 INTRODUCCIÓN El cáncer de próstata es el tipo de cáncer más frecuente entre los hombres y es la segunda causa de mortalidad por cáncer en hombres. Hasta hace poco, el taco rectal se utilizaba con frecuencia como la única modalidad diagnóstica para la detección del cáncer de próstata en estadios precoces. En los últimos años, la determinación de los niveles séricos del PSA se ha convertido en el método más aceptado para mejorar la especificidad diagnóstica del tacto rectal. Aunque el PSA es una proteína específica del tejido prostático y no solamente del tumor, se ha convertido en el marcador más importante del cáncer de próstata ya que muestra una mejor especificidad que otros marcadores bioquímicos utilizados en este contexto (fosfatasa ácida prostática, fosfatasa alcalina total, antígeno carcinoembrionario, etc.). En 1979, Wang y colaboradores aislaron un antígeno específico del tejido prostático normal y lo denominaron proteína PSA. El PSA es una proteasa tipo serina con un peso molecular de 33 kda. En los estudios inmunohistológicos se ha demostrado que el PSA se localiza en el citoplasma de las células acinares y en el epitelio ductal de la próstata, en la secreción luminar ductal, y está presente en tejidos prostáticos normales, hiperplásicos benignos y malignos, además de en el cáncer de próstata metastásico y el plasma seminal. Si la integridad estructural de la próstata se ve afectada o si la glándula aumenta su tamaño, aumentarán los niveles del PSA en el plasma sanguíneo. En plasma sanguíneo, la mayor parte del PSA forma complejos con diferentes inhibidores de la proteinasa. Solo una pequeña parte del PSA circula como PSA libre inactivo. Se pueden distinguir básicamente tres formas de PSA y solo dos de ellas son inmunorreactivas. La forma predominante del PSA es un complejo unido a la α1-antiquimotripsina (ACT-PSA). El PSA libre inactivo (f-psa) representa entre el 10 y el 40 % del PSA detectable de forma inmunológica. La cantidad total del PSA inmunorreactivo se conoce como el PSA total (t-psa). El PSA acomplejado con la α2-macroglobulina no puede detectarse mediante ensayos inmunológicos y con frecuencia se denomina el PSA oculto (o-psa). En los métodos actuales para el cribado de hombres con cáncer de próstata se utiliza la detección del t-psa. Los niveles de 4,0 ng/ml o superiores son un claro indicador de la posibilidad de padecer cáncer de próstata y son una indicación para realizar exámenes de seguimiento del paciente. No obstante, los niveles elevados del PSA en suero también se atribuyen con frecuencia a la hiperplasia de próstata benigna, lo que conlleva un mayor porcentaje de resultados de pruebas de cribado con falsos positivos. Una posible solución a este problema es la determinación de los niveles del PSA libre. En los estudios se indica que el porcentaje del PSA libre es inferior en pacientes con cáncer de próstata que los pacientes con hiperplasia prostática benigna. Por lo tanto, la determinación del PSA libre en suero junto con la PSA total puede mejorar la especificidad del cribado del cáncer de próstata en hombres con niveles elevados del PSA total en suero, lo que en consecuencia reduciría las biopsias de próstata innecesarias con mínimos efectos en las tasas de detección del cáncer. 3 PRINCIPIO DE LA PRUEBA El PSA FREE ELISA es un ensayo de inmunoabsorción enzimática (ELISA) de fase sólida. Las placas multipocillo están recubiertas con un anticuerpo monoclonal anti-psa libre, dirigido hacia un epítopo de una molécula del antígeno. Una parte alícuota del suero del paciente se incuba en el pocillo recubierto con el segundo anticuerpo del conjugado enzimático (E-Ab), dirigido hacia una región diferente de la molécula del antígeno. Después de la incubación, el E-Ab no ligado se elimina con un lavado. La cantidad de E-Ab ligado es proporcional a la concentración del antígeno presente en la muestra. Después de añadir la solución de sustrato, la intensidad del color es proporcional a la concentración del antígeno presente en la muestra. Las densidades ópticas (DO) de los estándares medidos se utilizan para elaborar una curva de calibración con la que se calculan las muestras desconocidas. Version 10.0; 2017/05 1 / 9

4 4 MATERIALES SUMINISTRADOS CON EL KIT Cada kit contiene reactivos suficientes para realizar 96 determinaciones. 1. MTP Microtiterwells (Placas multipocillo), 12 x 8 tiras (separables), 96 pocillos. Pocillos recubiertos con anticuerpo (monoclonal) anti-psa libre. 2. CAL 0 Zero Standard/Sample Diluent (Estándar cero/solución para dilución de la muestra), 1 vial, 10,0 ml, listo para su uso. Contiene conservante que no son de mercurio. 3. CAL 1-5 Standard (Standard 1-5) (Estándar (Estándares 1-5)), 5 viales, 0,5 ml, listo para su uso; Concentraciones: 0,75 1,5 3,0 6,0 12,0 ng/ml Los estándares se calibran en comparación con el estándar 96/668 de la OMS; Contiene conservante que no son de mercurio. 4. CONTROL LOW CONTROL HIGH Control Low & High (Control bajo y alto), 2 viales, 0,5 ml, listo para su uso; Para los intervalos y los valores de control, consultar la etiqueta del vial o la hoja de datos de control de calidad. Contiene conservante que no son de mercurio. 5. ASSAY Assay Reagent (Reactivo del ensayo), 1 vial, 6 ml, listo para su uso; Contiene conservante que no son de mercurio. 6. ENZCONJ Enzyme Conjugate (Conjugado enzimático), 1 vial, 6 ml, listo para su uso, Anticuerpo anti-psa conjugado a peroxidasa de rábano; Contiene conservante que no son de mercurio. 7. TMB SUBS Substrate Solution (Solución de sustrato), 1 vial, 12 ml, lista para su uso, Tetrametilbencidina (TMB). 8. STOP Stop Solution (Solución de parada), 1 vial, 14 ml, lista para su uso, contiene 0,5 M H2SO4, Evitar el contacto con la solución de parada. Puede causar irritación cutánea y quemaduras. 9. WASHBUF CONC Wash Solution (Solución de lavado), 1 vial, 25 ml (40x concentrado), Diluir con agua destilada antes de su uso. Consultar Preparación del reactivo. 5 MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Micropipetas de precisión (volumen: 25 µl y 100 µl) con puntas desechables Agua destilada Fotómetro para ELISA con filtros de 450 nm y 630 nm Cronómetro con un intervalo de 60 minutos o más Lavadora de microplacas (opcional) Vórtex o herramientas de mezclado similares Contenedor para la manipulación correcta de los desechos y las muestras después de su uso 6 CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD Conservar el kit y los componentes entre 2 C y 8 C. Llevar a temperatura ambiente (entre 18 C y 25 C) al menos 30 minutos antes de utilizarlo. Después de su uso, poner de nuevo en el frigorífico. Evitar largos periodos de conservación a temperatura ambiente. No utilizar el kit ni los componentes después de la fecha de caducidad. Consultar la etiqueta del kit para comprobar la fecha de caducidad del kit original. Cerrar los frascos inmediatamente después de su uso. Conservar la placa con el desecante en la bolsa de cierre hermético. Los módulos que no se utilicen deberán conservarse siempre en estas condiciones. Cerciorarse de que los componentes del kit no se han congelado. Los kits abiertos conservan su efectividad durante 8 semanas si se conservan como se ha descrito anteriormente. Version 10.0; 2017/05 2 / 9

5 7 PRECAUCIONES Los kits ELISA son solamente de diagnóstico in vitro para uso profesional. Las muestras de suero y plasma deben tratarse como materiales potencialmente infecciosos. Llevar guantes y ropa de laboratorio cuando se manipulen las muestras. No comer, beber ni fumar en zonas donde se manipulen muestras o reactivos del kit. No pipetear con la boca. En caso de contacto con la piel, lavarse con un jabón germicida y abundante agua. En caso necesario, solicitar atención médica. Los estándares y controles del PSA son de origen humano. Se han analizado y se ha confirmado que los resultados son negativos para VIH, HBsAg y VHC. No obstante, todos los estándares deben manipularse como si supusiesen un riesgo biológico. Dado el carácter potencialmente infeccioso de las muestras y los componentes del kit, todos los materiales que entren en contacto con ellos deben esterilizarse y desecharse según las normativas locales, incluidos los residuos líquidos. Los reactivos del ensayo contienen conservantes, TMB, H2O2 o ácido sulfúrico y pueden ser nocivos si se ingieren. Debe evitarse el contacto directo con la piel o las mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar bien con agua y solicitar atención médica, si necesario. La solución de parada contiene H2SO4. Como esta solución, que se utiliza para detener la reacción del color, es corrosiva, el instrumental que se utilice para dispensarla debe limpiarse a fondo después de su uso. No intercambiar reactivos de diferentes lotes o proveedores. Evitar el efecto de arrastre de la muestra o del reactivo utilizando puntas de pipetas nuevas para las soluciones y muestras. No utilizar la prueba si la bolsa de cierre hermético o los frascos están dañados. 8 DIRECTRICES PARA LA RECOGIDA, PREPARACIÓN Y CONSERVACIÓN DE LAS MUESTRAS 8.1 Recogida de muestras Las muestras de sangre se recogen mediante venopunción. Determinados factores pueden influir en el nivel del PSA en la sangre, por ello, los médicos deben cerciorarse de que los pacientes han evitado las siguientes situaciones antes de recoger la muestra de sangre. Las siguientes condiciones pueden causar una elevación de los niveles del PSA: Hacer ciclismo Mantener relaciones sexuales (con eyaculación) Manipulación de la próstata durante exámenes médicos como tacto rectal, ecografía transrectal de la próstata, etc.; Hay que tener en cuenta que en particular el tacto rectal puede elevar solo el nivel de f-psa y los carcinomas pueden pasar desapercibidos. Prostatitis Insuficiencia hepática Las siguientes condiciones pueden causar una disminución de los niveles del PSA: Ingesta de inhibidores de la 5-alfa reductasa, antiandrógenos o análogos de la hormona liberadora de gonadotropina (GnRH) 8.2 Preparación de la muestra La preparación de las muestras de suero o plasma se realiza según las técnicas estándar. El suero o plasma deben prepararse lo antes posible para evitar la formación de hemólisis y para mejorar la estabilidad del PSA. 8.3 Conservación de las muestras Para el ensayo pueden utilizarse muestras de plasma o suero reciente. El f-psa no es tan estable como el t-psa. En las publicaciones (Thomas, 2008) se recomienda analizar las muestras en un plazo de 24 horas. En caso de que vayan a conservarse durante más tiempo, congelar las muestras a -20 C. Debe evitarse la congelación y descongelación de las muestras de forma repetida. Nota Las muestras con alto contenido lipémico o hemolíticas pueden dar resultados analíticos incorrectos. Las muestras no deben tener contaminación microbiana. Las muestras que contengan valores altos del factor reumatoide y anticuerpos humanos antimurinos pueden dar resultados erróneos. Version 10.0; 2017/05 3 / 9

6 9 PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO 9.1 Preparación de los reactivos Antes de empezar el ensayo debe diluirse el tampón de lavado a la concentración correcta. Se necesitan aproximadamente 2 ml de tampón diluido por pocillo. Calcular el volumen de tampón necesario para la prueba. Tomar una proporción de 1/40 del volumen del concentrado del tampón de lavado y diluirlo con una proporción de 39/40 del volumen de agua destilada. 9.2 Procedimiento de la prueba Nota: es muy recomendable realizar todas las determinaciones por duplicado. En cada serie de determinaciones debe realizarse una curva estándar independiente. Para obtener mejores resultados es importante añadir las soluciones a los pocillos siempre en el mismo orden para reducir al mínimo las variaciones en los tiempos de incubación. 1. Antes utilizar los reactivos, estándares, controles y muestras, estos deben estar a temperatura ambiente (entre 18 C y 25 C). 2. Comprobar que los componentes no estén caducados y que los frascos y placas (incluida la bolsa) no estén dañados. 3. Organizar los pocillos de las microplacas teniendo en cuenta que todas las determinaciones deben realizarse por duplicado. Documentar la posición de los pocillos y sus correspondientes muestras, estándares y controles para poder realizar posteriormente la identificación. Volver a guardar los módulos de los micropocillos no utilizados en la bolsa de cierre hermético con el desecante, precintar la bolsa y conservarla a entre 2 C y 8 C. 4. Pipetear 25 µl de estándar, control o muestra en cada pocillo. Las muestras con un valor previsto de f-psa superior a 12 ng/ml deben diluirse con solución para dilución de la muestra. 5. Añadir 50 µl de reactivo de ensayo en cada pocillo y mezclar moviendo la placa sobre la mesa (10 segundos). 6. Incubar durante 1 hora a temperatura ambiente (entre 18 C y 25 C). 7. Añadir 50 µl de conjugado en cada pocillo y mezclar moviendo la placa sobre la mesa (10 segundos). 8. Incubar durante 1 hora a temperatura ambiente (entre 18 C y 25 C). 9. Retirar la solución de los pocillos aspirando el líquido o decantándolo. Si se decanta, golpear la placa sobre el papel absorbente para quitar el líquido residual. 10. Para el lavado llenar la placa con tampón de lavado diluido y esperar 10 segundos antes de retirarlo. Repetir el lavado 5 veces (con un total de 6 veces). Se recomienda seguir el siguiente procedimiento: lavar los pocillos 6 veces con µl de tampón de lavado diluido por pocillo. Utilizar preferiblemente un procedimiento de lavado automatizado. Si se realiza un lavado manual, dejar que el tampón de lavado permanezca durante el mismo tiempo en cada pocillo. Esto es necesario para obtener los valores de CV más bajos. 11. Pipetear 100 µl de solución de sustrato TMB en cada pocillo. 12. Incubar durante 15 minutos a temperatura ambiente (entre 18 C y 25 C). 13. Añadir 100 µl de solución de parada por pocillo (en el mismo orden que la solución de sustrato). 14. Leer la absorbancia (DO) con un filtro a 450 nm (blanco a 630 nm). 9.3 Cálculo de los resultados 1. Calcular los valores medios de la absorbancia para cada conjunto de estándares de referencia, controles y muestras del paciente. 2. Con papel cuadriculado para representación logarítmica o lineal elaborar una curva estándar trazando la absorbancia media obtenida de cada estándar frente a su concentración, con los valores de absorbancia en el eje vertical (Y) y las concentraciones en el eje horizontal (X). 3. Utilizar los valores medios de absorbancia de cada muestra para determinar la concentración correspondiente a partir de la curva estándar. 4. Método automatizado: Los resultados de las instrucciones de uso se han calculado automáticamente con un ajuste de curvas de 4 parámetros. (Los métodos preferidos son 4 parámetros Rodbard o 4 parámetros Marquardt). Otras funciones de reducción de datos pueden dar resultados ligeramente diferentes. 5. La concentración de las muestras puede leerse directamente en esta curva estándar. Las muestras con concentraciones superiores al estándar más alto deben diluirse de forma adicional o notificarse como > 12 ng/ml. Este factor de dilución debe tenerse en cuenta para el cálculo de las concentraciones. Version 10.0; 2017/05 4 / 9

7 10 VALIDEZ DEL ENSAYO 1. La DO con un filtro de 450 nm en el pocillo blanco es inferior a 0,150. Si los valores son superiores, indican que el sustrato/cromógeno están contaminados. En este caso, repetir el ensayo comprobando con cuidado el reactivo. 2. La DO con un filtro de 450 nm del estándar más alto (12 ng/ml) debe superior a 0,9. Si los valores son inferiores, indican deterioro del control o el kit. En este caso, comprobar la fecha de caducidad del kit antes de repetir el ensayo. 3. Si el análisis se realiza por duplicado, el control facilitado no debe diferir en más de un 15 % de la concentración indicada en la etiqueta del vial. 4. Hoja de trabajo y curva estándar de un ensayo típico: no debe utilizarse para el cálculo de los resultados de la prueba real. Ejemplo Pocillos Identidad A 450 nm Conc. ng/ml 1-2 Est. 0,00 ng/ml 0, Est. 0,75 ng/ml 0,109 0, Est. 1,5 ng/ml 0,185 0, Est. 3,0 ng/ml 0,393 0, Est. 6,0 ng/ml 0,871 0, Est. 12,0 ng/ml 1,901 1, control 0,218 0,231 2,05 fpsa 2 A 450 nm 1,5 1 0, Conc (ng/ml) Debe tenerse en cuenta que los valores de la DO absolutos para los estándares pueden variar por influencia de la temperatura o por la antigüedad del conjugado. Los resultados de las muestras de PSA desconocidas serán válidos siempre que los valores de la DO formen una curva estándar y se encuentren dentro de las especificaciones, y que los controles muestren el valor esperado. 11 CONTROL DE CALIDAD Se recomienda realizar controles internos en cada ensayo. Los resultados de los controles deben encontrase dentro de los intervalos establecidos y deben representar preferiblemente concentraciones bajas, medias y altas. Version 10.0; 2017/05 5 / 9

8 12 VALORES PREVISTOS DE LAS LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Si los valores del PSA total están entre 4 y 10 ng/ml, la relación entre el f-psa y el t-psa debe utilizarse para aumentar la especificidad diagnóstica de la prueba del PSA. Por lo general, la probabilidad de diagnosticar un cáncer aumenta cuanto más baja es la fracción del f-psa. Una relación entre el f-psa y el t-psa del 25 % suele indicar una alta probabilidad de hiperplasia prostática benigna. Los valores bajos del f-psa indican que es probable que exista cáncer de próstata. La mayoría de los hombres con cáncer de próstata tienen un valor del f- PSA por debajo del 15 %. Si el PSA libre se encuentra por debajo del 7 % lo más probable es que el diagnóstico sea cáncer de próstata. Según la Sociedad americana del cáncer y el Instituto nacional de cáncer, los hombres con un f-psa por debajo del 7 % deben someterse a una biopsia. Debe tenerse en cuenta que una concentración aislada del f-psa no tiene valor diagnóstico. Para ver un análisis detallado de las probabilidades de padecer cáncer de próstata y el porcentaje del PSA libre, consultar Gion y colaboradores (1998). Los valores anteriores solo sirven de orientación para los usuarios. Si es posible, se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores específicos teniendo en cuenta la población autóctona del área en la que se encuentra el laboratorio. Nota: los valores del PSA y la relación de f-psa con t-psa solo pueden utilizarse para estimar el riesgo de padecer cáncer. Siempre deben interpretarse junto con otros resultados clínicos y no deben utilizarse como la única base para el diagnóstico del cáncer de próstata. 13 CARACTERÍSTICAS DEL RENDIMIENTO 13.1 Límite de detección El límite de detección para este kit es de 0,1 ng/ml 13.2 Precisión Las precisiones intraensayo e interensayo se establecieron mediante el análisis del suero con diferentes concentraciones de PSA de tres pacientes. Los resultados se resumen en las Tablas 1 y 2. Tabla 1) Pacientes Precisión intra-ensayo Número de repeticiones Media ng/ml SD ng/ml CV % ,31 0,024 7, ,75 0,107 6, ,63 0,623 6,5 Tabla 2) Pacientes Precisión inter-ensayo Número de repeticiones Media ng/ml SD ng/ml CV % ,86 0,17 6, ,75 0,06 7, ,1 0,16 7,8 Version 10.0; 2017/05 6 / 9

9 13.3 Recuperación Se prepararon muestras de suero sobrecargadas añadiendo partes alícuotas de muestras con niveles elevados de PSA libre a muestras de suero de varones normales. La recuperación del antígeno fue de entre el 91,8 y el 116 % con una media del 102 %. Tabla 3) Recuperación Muestra Valor esperado (ng/ml) Valor observado (ng/ml) Recuperación % 1 5,48 5,47 99,8 2,74 3, ,48 5,03 91,8 2 2,78 2, ,57 5, Efecto gancho 2,74 2, No se ha observado efecto gancho con muestras hasta un máximo de 5000 ng/ml Correlación El PSA FREE ELISA se comparó con la prueba comercializada y con marcado CE de dos pasos Free PSA ELISA: Y = 0,8922x + 0,11; R 2 = 0,8977 En un segundo estudio la prueba PSA FREE ELISA se comparó con una segunda prueba de referencia de f-psa ELISA: Y = 1,0708 x; R 2 = 0, Calibración El PSA FREE ELISA se ha calibrado en comparación con el estándar 96/668 de la OMS Especificidad El ensayo es altamente específico para el PSA libre, con una reactividad cruzada relativamente baja respecto a otras proteínas y polipéptidos, lípidos o tratamientos quimioterapéuticos que pueden estar presentes en las muestras de los pacientes. Tabla 4) Especificidad Antígenos Cantidad añadida Reacción cruzada Proteínas AFP 10 µg/ml No CEA 10 µg/ml No HCG 10 µg/ml No Lactoalbúmina 10 µg/ml No PAP 1 µg/ml No Sustancias con capacidad interferente Bilirrubina 0,2 mg/ml No Triglicéridos 15 mg/ml No Hemoglobina* 0,1 mg/ml No Tratamientos quimioterapéuticos Ciclofosfamida 800 µg/ml No Doxorrubicina* HCl 20 µg/ml No Dietilestibestrol 2 µg/ml No Flutamida 10 µg/ml No Metotrexato 50 µg/ml No * a una concentración mayor la hemoglobina causa valores de DO demasiado altos, por lo que las muestras hemolíticas deben evitarse. Version 10.0; 2017/05 7 / 9 No

10 14 ASPECTOS LEGALES 14.1 Fiabilidad de los Resultados El ensayo debe realizarse exactamente de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Mas aún, el usuario debe ajustarse estrictamente a las reglas BPL (Buenas Prácticas de Laboratorio) o a otros estándares y/o leyes nacionales aplicables. Esto es especialmente relevante para el uso de reactivos control. Es importante incluir siempre, dentro del procedimiento de ensayo, un número suficiente de controles para validar la exactitud y la precisión del ensayo. Los resultados del ensayo son válidos sólo si todos los controles se encuentran dentro de los rangos especificados y si todos los otros parámetros del ensayo se encuentran dentro de las especificaciones dadas para el ensayo. En cado de alguna duda o inquietud, por favor, contactar con DRG Consecuencias Terapéuticas Las consecuencias terapéuticas nunca deben basarse sólo en los resultados de laboratorio incluso si todos los resultados del ensayo están de acuerdo con los asuntos fijados en el punto Cualquier resultado de laboratorio es solamente una parte del cuadro clínico de un paciente. Solamente en los casos donde los resultados de laboratorio están en acuerdo con todo el cuadro clínico de un paciente, se pueden derivar consecuencias terapéuticas. Nunca deben derivarse consecuencias terapéuticas a partir de solamente el resultado obtenido en el ensayo 14.3 Responsabilidad Cualquier modificación del kit y/o cambio o mezcla de cualquier componente procedentes de kits de lotes diferentes puede afectar negativamente a los resultados esperados y en la validez de todo el test. Esas modificaciones y/o cambios invalidad cualquier reclamación de reposición. Las reclamaciones emitidas debidas a una mala interpretación de los resultados de laboratorio por parte del comprador referidos al punto 14.2 son también inválidas. A pesar de todo, en el caso de cualquier reclamación, la responsabilidad del fabricante no excede el valor del kit. Cualquier daño provocado al kit durante su transporte no está sujeto a la responsabilidad del fabricante. 15 BIBLIOGRAFIA 1. Fritsche HA und RJ. Babalan Clin Chem (1993) Vol: 39: Analytical performance goals for measuring prostate-specific antigen: 2. Arbeitsgemeinschaft der Wissenschaftlichen Medizinischen Fachgesellschaft (AWMF): Leitlinien der Deutschen Urologen: PSA-Bestimmung in der Prostatakarzinomdiagnostik (2003) (Stand Juli 2003) 3. Hammerer P. and Huland H., Der Onkologe (1996), Vol 2: Früherkennung des Prostatakarzinoms. Onkologe 4. Milford Ward A. et al., Ann Clin Biochem (2001), Vol 38: Prostate specific antigen: biology, biochemistry and available commercial assays. 5. Price C. P. et al., Ann Clin Biochem (2001), Vol 38: Pre-and post-analytical factors that may influence use of serum prostrate specific antigen and its isoforms in a screening programme for prostate cancer. 6. Lange P et al., J Urol (1989) Vol 141:873 The value of serum prostate-specific antigen determinations before and after radical prostatectomy, 7. Akdas et al. British J Uro (1997) Vol 79: The role of free prostate specific antigen in the diagnosis of prostate cancer 8. Thomas L (2008) Labor und Diagnose, TH-Books Verlagsgesellschaft Gion M et al. (1998) Clin Chem 44: Percent fee prostate specific antigen in assessing the probability of prostate cancer under optimal analytical conditions Version 10.0; 2017/05 8 / 9

11 SYMBOLS USED Symbol English Deutsch Italiano Español Français European Conformity Consult instructions for use * In vitro diagnostic medical device * CE-Konformitätskennzeichnung Gebrauchsanweisung beachten * Conformità europea Consultare le istruzioni per l uso Conformidad europea Consulte las instrucciones de uso Conformité normes européennes Consulter les instructions d utilisation In-vitro-Diagnostikum * Diagnostica in vitro Diagnóstico in vitro Diagnostic in vitro Catalogue number * Artikelnummer * No. di Cat. No de catálogo Référence Batch code * Chargencode * Lotto no Número de lote No. de lot Contains sufficient for <n> tests * Ausreichend für <n> Prüfungen * Contenuto sufficiente per n saggi Contenido suficiente para <n> ensayos Contenu suffisant pour n tests Temperature limit * Temperaturbegrenzung * Temperatura di conservazione Temperatura de conservacion Température de conservation Use-by date * Verwendbar bis * Data di scadenza Fecha de caducidad Date limite d utilisation Manufacturer * Hersteller * Fabbricante Fabricante Fabricant Caution * Achtung * RUO For research use only Nur für Forschungszwecke Solo a scopo di ricerca Sólo para uso en investigación Distributed by Distributed by Vertreiber Distributore Distribuidor Distributeur Seulement dans le cadre de recherches Content Content Inhalt Contenuto Contenido Conditionnement Volume/No. Volume / No. Volumen / Anzahl Volume / Quantità Volumen / Número Volume / Quantité Microtiterwells Microtiterwells Mikrotiterwells Micropozzetti Placas multipocillo Antiserum Antiserum Antiserum Antisiero Antisuero Antisérum Enzyme Conjugate Enzyme Conjugate Enzymkonjugat Tracciante enzimatico Conjugado enzimático Conjugué enzymatique Enzyme Complex Enzyme Complex Enzymkomplex Complesso enzimatico Complejo enzimático Complexe enzymatique Substrate Solution Substrate Solution Substratlösung Soluzione di substrato Solución de sustrato Solution substrat Stop Solution Stop Solution Stopplösung Soluzione d arresto Solución de parada Solution d arrêt Zero Standard Zero Standard Nullstandard Standard zero Estándar cero Zero Standard Standard Standard Standard Standard Estándar Standard Control Control Kontrolle Controllo Control Contrôle Assay Buffer Assay Buffer Assaypuffer Tampone del test Tampón de ensayo Tampon d essai Wash Solution Wash Solution Waschlösung Soluzione di lavaggio Solución de lavado Solution de lavage 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH (idrossido di sodio 1N) 1N NaOH 1N NaOH 1 N HCl 1 N HCl 1 N HCl 1 N HCl 1N HCl Sample Diluent Sample Diluent Conjugate Diluent Conjugate Diluent Plaques de microtitration Probenverdünnungsmedium Konjugatverdünnungsmedium Diluente dei campioni Diluente del tracciante Solución para dilución de la muestra Solución para dilución del conjugado Solution pour dilution de l échantillon Solution pour dilution du conjugué Version 10.0; 2017/05 9 / 9

12 Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύμβολα REF LOT CONC LYO IVD Cat.-No.: / Kat.-Nr.: / No.- Cat.: / Cat.-No.: / N.º Cat.: / N. Cat.: / Αριθμός-Κατ.: Lot-No.: / Chargen-Bez.: / No. Lot: / Lot-No.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθμός -Παραγωγή: Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / Χρησιμοποιείται από: No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / Αριθμός εξετάσεων: Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συμπύκνωμα Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασμένο In Vitro Diagnostic Medical Device. / In-vitro-Diagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για In-Vitro ιάγνωση. Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni prima dell uso. / ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / Garder à l abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να φυλάσσεται μακριά από θερμότητα και άμεση επαφή με το φως του ηλίου. Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση στους: Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. Για τα σύμβολα των συστατικών του κιτ συμβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. COMPLAINTS: Complaints may be submitted initially written or vocal. Subsequently they need to be filed including the test performance and results in writing in case of analytical reasons. WARRANTY: The product is warranted to be free from material defects within the specific shelf life and to comply with product specifications delivered with the product. The product must be used according to the Intended use, all instructions given in the instructions for use and within the product specific shelf life. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These cases invalidate any claim for replacement. LIMITATION OF LIABILITY: IN ALL CIRCUMSTANCES THE EXTENT OF MANUFACTURER S LIABILITY IS LIMITED TO THE PURCHASE PRICE OF THE KIT(S) IN QUESTION. IN NO EVENT SHALL MANUFACTURER BE LIABLE FOR ANY INCIDENTAL OR CONSEQUENTIAL DAMAGES, INCLUDING DAMAGES FOR LOST PROFITS, LOST SALES, INJURY TO PERSON OR PROPERTY OR ANY OTHER INCIDENTAL OR CONSEQUENTIAL LOSS. IBL International GmbH Flughafenstr. 52A, Hamburg, Germany Tel.: + 49 (0) Fax: IBL@IBL-International.com WEB: Symbols Version 4.5 /