Resultados microbiológicos en el cultivo larvario de Litopenaeus vannamei.

Transcripción

1 Resultados microbiológicos en el cultivo larvario de Litopenaeus vannamei. Pablo Intriago, Jorge Espinoza, Andrés L. Medina, Xavier Enriquez, Jose Sanchez, Laura Altamirano,Yenny Mejillón, Hernan Merejildo. Semacua/ABA - Empagran. S.A

2 Especies bacterianas reportadas causantes de enfermedades en larvicultura de camarones - Vibrios: Vibrio campbelli, V. Harveyi, V. parahaemolyticus, V. Alginolitycus, V. spp. (Luminiscencia, Bolitas, Síndrome de zoea 2 y Vibriosis en la actualidad) - Pseudomona sp. (Eventual en Ecuador, mayor frequencia en Panama y Colombia) - Leucotrix sp.

3 Empagran Hectareas Cantidad en Millones (Pisc.) Larva/Mes Nauplios/Día Ecuador Colombia Panamá

4 Ecuador Colombia Panamá

5 Ecuador

6 Colombia

7 Panamá

8 Corrientes en costas ecuatorianas

9 Métodos para controlar enfermedades en Acuacultura -Manejo sanitario (limpieza, desinfección, evitar sobre alimentación, densidad de siembra, etc.). -Evitar el movimiento de especies infectadas. -Uso de especies resistentes. -Uso de inmuno estimulantes en las dietas. Adicional al uso de vacunas, probióticos, prebióticos, plantas medicinales y sus extractos. -Desinfección del agua (Cloro, ozono, etc.).

10 Estrategias (Empagran) 1. Re-ingeniería de las instalaciones. 2. Manipulación del Ambiente. 3. Uso de probióticos.

11 1. Re-ingenieria de las instalaciones (menos es más) - Simplificar sistema de tuberías de aire y agua. - Inclinación de tuberías (1%) para evacuación total de agua después del uso, eliminación de puntos muertos. - Diámetro de tuberías y capacidad de equipos de acuerdo a las necesidades, etc.

12

13

14 2. Manipulación del ambiente - Maduración de agua en Reservorios. - Recirculación en Maduración (Sistema Semi-Cerrado). - Recambio de agua <10% de agua en Larvicultura.

15

16 Diagrama de sistema de Recirculación (Semi-Cerrado)

17 Nauplios por hembra promedio mensual con y sin recirculación Millares CON SIN (Flujo Continuo)

18 Supervivencia (%) en Larvicultura con diferentes tasas de recambio Taza de Recambio > 10% < 10% Ecuador Colombia Panamá Honduras Venezuela 25 65

19 3. Uso de Probióticos El probiótico es un suplemento microbiano vivo que beneficia a su huésped mejorando el balance microbiano. º

20 Lo que no se define no se puede medir. Lo que no se mide, no se puede mejorar. Lo que no se mejora, se degrada siempre. William Thomson, Primer barón de Kelvin Lo que no se mide, no se puede mejorar. Peter Drucker Padre del Management

21 La mayoría de los productos comerciales NO han sido creados para uso en acuicultura. Preguntas? Como evaluar que bacteria (s) puede ser usado o no como probiótico?. Que probiótico usar?? casero vs comercial. Se puede mantener las características de un probiótico??.

22 Microrganismos disponibles comercialmente usados como Probióticos Aeróbicos: Formadores de esporas del genero Bacillus. Anaeróbicos: Formadores de esporas del genero Clostridium. Bacterias de acido láctico no formadores de esporas del genero Lactobacillus., Bifidobacterium, Enterococcus, Streptococcus, Lactococcus, Pediococcus, Bacterioides, Propionibacterium. Levaduras y Hongos: Saccharomyces y Aspergillus.

23 Beneficios del uso de esporas de Bacillus. Bacterias del genero Bacillus están presente en todos los ambientes (acuáticos y terrestres). Naturalmente producen una variedad de enzimas. Especialistas en competición exclusiva, pueden inactivar el quórum sensing de otras bacterias entre ellas patógenos. Generalmente no están involucradas en transferencia horizontal con bacterias Gram negativas como Vibrio y Aeromonas. Resisten altas temperaturas o C.

24 Muestra con 9 ml de agua en tubo esteril Diagrama para cuantificacion de esporas usando placas de agar. Diluciones 1 ml 1 ml 1 ml incubar a 45 o C por 60 minutos Calentamiento a 70 o C por 15 minutos. Enfriamiento con agua helada 1 ml Tubos con 9 ml de agua de mar estéril + 1 ml Solución de Tween 80 estéril (88 ml de agua de mar, 1 g de TSB, 1 g de glucosa y 10 ml de Tween 80) ml ml ml ml Agar TSA modificado (20 g de TSA, 1 g de glucosa y 17.5 g de Agar Agar en un litro de agua de mar, ph 7.5). 30 o C por 24 horas

25 Reproducibilidad y Control Las esporas son fácil de guardar y usar!, su población puede ser monitoreada y diferenciada del resto de la flora usando el método correcto!.

26 Diferentes determinaciones - La concentración de bacterias totales TSA cultivable, bacterias formadoras de esporas, presumibles Vibrios (TCBS y Chromagar). - TSA modificado (50% TSA mas Agar y glucosa), para disminuir el porcentaje de colonias que se derraman Swarming. - También se determinaron los niveles de Nutrientes y DBO.

27

28 El efecto de la adición de esporas en el sistema de recirculación de maduración.

29 Descripción - Mini recirculación Biofiltros y pozo (sump) con grava y sin grava. Adición diaria de esporas por 5 días

30

31 Descripción - Recirculación en Maduración (Sistema Semi-Cerrado). Adición de esporas (7 dias consecutivos) 24 horas despues de comenzar la toma de datos, duracion total 11 dias.

32

33 Índices de Producción y Maduración (Con - Sin Espora). PAÍS ECUADOR COLOMBIA PANAMÁ ESPORA Huevos/ Hembra Nauplios/ Hembra Eclosión % Copula % Mortalidad/ Día SIN % 14% 0,95% CON % 18% 0,30% SIN % 13% 1% CON % 15% 0,45% SIN % 10% 3% CON % 15% 0,30%

34 El efecto de la adición de esporas y su evolución durante el ciclo de Larvicultura.

35 Carga bacteriana en tanques de larvas con adición de Esporas. Semacua Sept Barra +-3 DS. 1,0E+08 1,0E+07 1,0E+06 1,0E+05 1,0E+04 1,0E+03 1,0E+02 1,0E+01 1,0E TCBS TSA CHROMAGAR Formadores de esporas Carga bacteriana en tanques de larvas sin adición de esporas. Semacua Sept Barra +-3 DS. 1,0E+08 1,0E+07 1,0E+06 1,0E+05 1,0E+04 1,0E+03 1,0E+02 1,0E+01 1,0E TCBS TSA CHROMAGAR Formadores de esporas

36 1,0E+08 Carga bacteriana en tanques de larvas Esporas vs controles. Semacua Sept Barra +-3 DS. 1,0E+07 1,0E+06 1,0E+05 1,0E+04 1,0E+03 1,0E+02 1,0E+01 1,0E TCBS + esporas Formadores de esporas TCBS sin esporas TSA - esporas

37 Desarrollo branquial larvas PL5 con y sin esporas. Semacua % 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% + Esporas Sin esporas Lámelas un par de lóbulos branquiales Lámelas con cuatro pares de lóbulos branquiales (brotes) Lámelas con tres pares de lóbulos branquiales (brotes) Lámelas cinco pares de lóbulos branquiales Desarroolo de espinas en rostro, larvas PL5 con y sin esporas. Semacua % 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% + Esporas Sin esporas 2 espinas 3 espinas 4 espinas

38 mm PL5, longuitud total (mm). Semacua, Esporas Sin esporas Relación 6 to segmento PL5 (M:I). Semacua Esporas Sin esporas

39 El efecto de la adición de esporas durante la eclosión de Artemia.

40 UFC/nauplio 650 Concentración de bacterias en nauplios (UFC/nauplio) de artemia eclosionados con y sin esporas. Semacua Sept Control Espora terceros TSA Espora TCBS

41 El efecto de la adición de esporas en el cultivo de algas.

42 Celulas/mL UFC/mL Crecimiento de Thallasiosira sp con y sin adición de esporas y la concentración de esporas. Semacua Sept Barra +-2 DS y = x R² = y = x R² = esporas diatomea + esporas diatomea control

43 El efecto de la adición de esporas en balanceado 10^7 esporas/g balanceado.

44 UFC/g Concentración de bacterias/g en animales alimentados (4 dias) con y sin esporas. Semacua Sept Barra +-2DS. 1,0E+07 1,0E+06 1,0E+05 1,0E+04 1,0E+03 1,0E+02 1,0E+01 1,0E+00 Control Esporas TSA TCBS V.parahaemolyticus Chromagar

45 UFC/mL Concentracion de bacterias en agua UFC/mL en animales alimentados con y sin esporas. Semacua ,0E+08 1,0E+07 1,0E+06 1,0E+05 1,0E+04 1,0E+03 1,0E+02 1,0E+01 1,0E+00 Control 0 Control 4 Esporas 0 Esporas 4 TSA TCBS V.parahaemolyticus Chormagar

46 Vibrio parahaemolyticus en Chromagar

47 Efecto de la salinidad frente a cepa de Vibrio Parahemolyticus y Espora 1,81E+08 1,61E+08 1,41E+08 1,21E+08 1,01E+08 8,10E+07 Vibrio Parahemolyticus 6,10E+07 ESPORA 4,10E+07 2,10E+07 1,00E TSA

48 Conclusiones El método tradicional de cultivo en los laboratorios trae cambios radicales en la flora microbiana, estimula las especies con estrategia R de alto crecimiento oportunistas y potenciales patógenos. Por otro lado la maduración o envejecimiento del agua utilizada, recirculación y un correcto manejo del agua estimula las poblaciones K, poblaciones estables altamente competitivas y naturalmente con capacidades de probióticos.

49 La aplicación de probióticos y en especial de esporas no afecta el balance microbiológico en la recirculación y mas bien mejora la degradación de materia orgánica, nitrificación y potencialmente inhibe poblaciones oportunistas copando su nicho y/o inhibiendo su crecimiento. El concepto de probióticos esta basado en la competencia por exclusión e involucra el uso de bacterias vivas aplicadas a la dieta y o agua.

50 Set de herramientas a perfeccionar para control de enfermedades. 1. Manejo sanitario. 2. Evitar la introducción y uso de animales infectados. 3. Uso correcto de: AGUA- BALANCEADO-ALIMENTACION. 4. Controles constantes, análisis reproducibles, compromiso de la gente y un continua búsqueda por mejorar.

51 Soluciones integradas Microbiología Biología Molecular Ensayos Calidad de Agua Epifluorescencia

52 Gracias por la atención