ENFERMEDADES DIAGNÓSTICO Y TERAPIAS, CONCEPTOS GENERALES.

Transcripción

1 ENFERMEDADES DIAGNÓSTICO Y TERAPIAS, CONCEPTOS GENERALES. Seminario Técnico: SANIDAD Y BIOSEGURIDAD EN LA INDUSTRIA DE LA ACUICULTURA Dr. Juan Battaglia Aljaro DMV AB&T, PERU SAC juan.battaglia@gmail.com Neiva, Colombia Marzo 2016.

2 Enfrentando las patologías en acuicultura. 1 Muestreo 2 Veterinario/biólogo 3 Diagnóstico 4 Laboratorio 5 Autoridad 6 Historial

3 Qué ve el productor? Deterioro Sostenido Mortalidad. Indicadores de crecimiento: Factor de condición FCR SGR GF3

4 Gestión de muestras

5 Del muestreo depende la calidad de los resultados

6 Distribución espacial

7 Zonificación, el primer paso

8 Por especies

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12 Toma de muestras

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14 Observación de sintomatología. La observación del comportamiento de los peces y la aparición de anomalías externamente son las primeras señales que el productor debe pesquisar para tomar las medidas necesarias.

15 Necropsia. Actividad que se realiza para analizar la sintomatología de los peces, que consta de un análisis anatomopatológico externo e interno. Aquí además se toman las muestras necesarias para los análisis posteriores que pueden incluir: Siembra en medios. Sistema miniaturizados Api. Frotis para tinción. Frotis para IFAT. Muestras para PCR. Muestras para CC. Muestras para ELISA. Muestra para histología. Antibiograma y MICs.

16 Necropsia.

17 Frotis para tinción. Existen diversas metodologías de tinción de frotis, las más utilizadas son: Tinción de Gram. Tinción de AOS. Tinción de Giemsa.

18 Métodos convencionales en tubo y placa Existe una gran variedad de pruebas bioquímicas que se realizan a las bacterias pero existen algunas que son sumamente importantes, entre las que podemos destacar: Forma celular Motilidad Gram Oxidasa Catalasa Crecimiento a diferentes Tº y Salinidades. Crecimiento en diferentes medios

19 Cultivos bacterianos. Comercialmente existen una serie de medios de cultivos que pueden ser divididos en tres categorías: Generales Selectivos o específicos Metabólicos

20 Medios generales. Estos medios se caracterizan por presentar los nutrientes necesarios para el desarrollo de una gran variedad de bacterias, sin embargo, no todas las bacterias crecen en este tipo de medio.

21 Medios generales Entre los más utilizados en el diagnóstico en acuicultura están: TSA con y sin suplemente de NaCl. En este medio se puede crecer bacterias como Vibrio anguillarum, V. ordalii, Aeromonas salmonicida y Yersinia ruckeri. Agar Nutritivo: de amplio espectro. Agar Chocolate: es un medio sumamente rico en nutrientes y se ocupa ampliamente en la microbiología. En la acuicultura se utiliza para el crecimiento de P. salmonis. Agar Marino (2216 de Zobbels): Agar para el aislamiento de bacterias marinas.

22 Medios Selectivos o específicos Estos medios se utilizan para aislar los patógenos de otras bacterias ambientales. También son usados para aislar bacterias de fastidioso crecimiento, como Flavobacterium psychrophilum, Tenacibaculum maritimus o Renibacterium salmoninarum.

23 Medios Selectivos o específicos Entre los más utilizados en el diagnóstico en acuicultura están: TCBS: Selectivo para Vibrios. MacConkey: Selectivo para Enterobacterias (Yersinia ruckeri y Aeromonas salmonicida). Columbia Blood Agar: Bacterias β Hemoliticas (Streptococcus spp). TYES / AOA: selectivo para bacterias de la familia Flavobacteriacea de FW. FMM: Selectivo para bacterias de la familia Flavobacteriacea de SW. KDMC / KDM2: Selectivo para el patógeno de peces Renibacterium salmoninarum.

24 Medios Selectivos o específicos

25 Medios metabólicos Estos medios sirven para determinar actividades enzimáticas, degradación de azucares y aminoácidos principalmente. Entre los más utilizados para la caracterización de patógenos bacterianos podemos encontrar: Medio Descarboxilasa de Moller (Aminoácidos). OF (Azucares). Citrato de Simmons.

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27 IFAT. Immuno Florescent Antibody Technique. Está técnica sirve para detectar al patógeno directamente en frotis de órganos y lesiones mediante el uso de anticuerpos específicos que están marcados con fluoróforos. Existen una gran variedad de Kits comerciales para la realización de esta herramienta diagnóstica.

28 PCR. La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una herramienta altamente utilizada para la detección de patógenos bacterianos y virales principalmente. Existen 2 tipos de PCR PCR Convencional. PCR en Tiempo Real. PCR convencional encontramos 3 tipos de protocolos: PCR de Detección PCR de Tipificación RT PCR.

29 PCR convencional (Detección) En la literatura existe una gran cantidad de protocolos de PCR para la detección de patógenos bacterianos de peces, entre los que podemos encontrar: Aeromonas salmonicida. Yersinia ruckeri. Flavobacterium psychrophilum. Flavobacterium columnare. Tenacibaculum maritimus. Piscirickettsia salmonis. Vibrio anguillarum. Streptococcus phocae Streptococcus iniae.

30 PCR en tiempo real.

31 PCR de tipificación.

32 Cultivo Celular

33 ELISA Enzyme Linked Immuno Sorbet Assay. Ensayo Inmuno Enzimatico. Existen dos tipos: Detección de antígenos. Detección de anticuerpos.

34 Histología

35 Antibiograma y MICs

36 Antibiograma y MICs 20 µl de Inoculo bacteriano 80 µl de medio cultivo 100 µl de medio de cultivo con Ab C- 0,031 0,063 0,125 0,25 0, C+ 32 X X X X X X X X X X X

37 Antibiograma y MICs. CMI FLU Flavobacterium psychrophilum 36% 20% 16% 4% 4% 8% 4% 8% 0,031 ppm 0,063 ppm 0,125 ppm 1 ppm 4 ppm 8 ppm 32% CMI OT Flavobacterium psychrophilum 4% 4% 24% 16% 4% 12% 4% 0,031 ppm 0,063 ppm 0,25 ppm 0,5 ppm 2 ppm 4 ppm 16 ppm CMI FFC Flavobacterium psychrophilum CMI AO Flavobacterium psychrophilum 32% 8% 4% 8% 16% 32% 0,125 ppm 0,25 ppm 0,5 ppm 1 ppm 4 ppm 32 ppm 68% 8% 8% 4% 8% 4% 0,063 ppm 0,125 ppm 2 ppm 8 ppm 16 ppm 32 ppm

38 Sistemas minuaturizados Api.

39 Aglutinación en porta objetos y Dot Blot.

40 Western Blot.

41 Secuenciación de genes.

42 GRACIAS!