Ejercicio 5 Actividades Bioquímicas En Bacterias

Transcripción

1 Objetivos Ejercicio 5 Actividades Bioquímicas En Bacterias Entender los procesos bioquímicos de distintas reacciones enzimáticas como son las fermentaciones e hidrólisis. Describir el patrón de las reacciones producidas por los microorganismos. Determinar cuales son los productos de metabolismo asociados a los substratos y microorganismos seleccionados para este ejercicio. Introducción Las bacterias completan varias actividades bioquímicas usando los nutrientes que el ambiente les ofrece. Las transformaciones bioquímicas que ocurren dentro y fuera de la célula y son mediadas por las enzimas. En este ejercicio se observarán tales actividades bioquímicas en bacterias y se observará la habilidad de las mismas para degradar carbohidratos, lípidos, proteínas y aminoácidos. Una vez las bacterias realizan estas actividades de degradación, los organismos liberan productos que pueden ser utilizados para su caracterización o para la confección y producción de materiales y alimentos. Procedimiento Fermentación de Carbohidratos Las fermentaciones son reacciones bioquímicas que producen energía en las cuales las moléculas orgánicas sirven como aceptadores y donadores de electrones. Los productos de la fermentación son alcoholes, ácidos, gases y otras moléculas orgánicas. Los medios para la realización de pruebas de fermentación de hidratos de carbono son a menudo preparados en tubos con caldo. Cada tubo contiene un pequeño tubo invertido llamado Durham, el cual captura cualquier gas formado cuando el caldo es inoculado. Cada caldo contiene nutrientes esenciales como: un hidrato de carbono y el rojo fenol para indicar el cambio en ph. Prueba con tubos Durham 1. Rotula los tubos con tu nombre, nombre del organismo, fecha y tipo de medio de cultivo. 2. Usando una técnica aséptica inocula cada tubo (lactosa, sucrosa y glucosa) con el microorganismo asignado. 3. Coloca los tubos a 35 C de horas.

2 Segundo Periodo 1. Al cabo de las horas examina los tubos y anota en la sección de reporte la presencia de ácido (cambio de rojo a amarillo) o gas (burbujas atrapadas en el tubo Durham). Hidrólisis de Almidón Muchas bacterias producen enzimas llamadas hidrolasas. Estas catalizan el rompimiento de moléculas orgánicas en unas más simples en presencia de agua. El almidón es un ejemplo de estas moléculas, donde las enzimas (α- Amilasa) actúan en su rompimiento. Almidon [Amilosa+ Amilopectina] α -amilasa Dextrina+ Maltosa+ Glucosa 1. Divide una palca con Starch Agar en dos con un marcador permanente. Rotula cada lado con las bacterias que se asignen. 2. Usando una técnica aséptica transfiere las bacterias a cada porción de las placas dibujando una sola línea derecha. 3. Incuba la placa horas a 35 C. Segundo periodo 1. Coloca en la placa varias gotas de Yodo Gram (en cada línea de bacterias). Si alrededor de la línea esta claro, es que el almidón se ha hidrolizado en esa porción de la placa. 2. Anota tus resultados en la sección de reporte. Hidrólisis de lípidos Los lípidos son compuestos de alto peso molecular los cuales poseen grandes cantidades de energía almacenada. Las lipazas son las encimas que hidrolizan los lípidos en moléculas más simples como glicerol y ácidos grasos. Cuando los lípidos son añadidos a agar solidificado los microorganismos pueden hidrolizar el mismo en el laboratorio. La hidrólisis se puede detectar añadiendo indicadores de ph al medio de cultivo. 1. Divide una placa con Spirit Blue Agar con un marcador permanente.. Rotula cada lado con las bacterias que se asignen. 2. Coloca las bacterias en cada lado asignado. Inocula las mismas en forma de punto. 3. Incuba la placa horas a 35 C.

3 Segundo periodo 1. Examina la evidencia de hidrólisis observando la zona alrededor de la colonia. Se forma un color azul alrededor de la colonia cuando hay hidrólisis. Si no hay reacción el color lavanda se mantiene en la placa. 2. Mide la zona de inhibición con una regla y anota los resultados en la sección de reporte. Prueba Litmus Milk e hidrólisis de caseína La caseína es una larga porción de la leche que no puede penetrara la membrana plasmática de las bacterias y que esta presente en la leche. Las bacterias degradan la proteína en aminoácidos utilizando enzimas proteolíticas las cuales catalizan la hidrólisis de caseína. Litmus Milk es un medio versátil y a veces confuso porque hay muchas reacciones que se pueden obtener de el. El indicador Litmus cambia de color según el ph. Cuando hay presencia de ácidos cambia a color rojo y a color violeta cuando hay bases. 1. Rotula los tubos con tu nombre, nombre del organismo, fecha y tipo de medio de cultivo. 2. Usando una técnica aséptica inocula cada tubo de Litmus Milk con el microorganismo asignado. 3. Coloca los tubos a 35 C de horas. Segundo Periodo 1. Al cabo de las horas examina los tubos y anota en la sección de reporte la presencia de ácido, base o proteolisis entre otras reacciones. 2. Anota tus resultados en la sección de reporte.

4 Ejercicio de Laboratorio 5 Fermentación de Carbohidratos 1. Apariencia de los tubos. Llene los espacios vacíos con lo siguiente: (A) ácido, (-) no reacción, (G) gas o (AG) ácido o gas. Tubo Lactosa Dextrosa Sucrosa Nombre de las bacterias 2. Defina fermentación. 3. Cuál es la función del tubo Durham en este experimento? 4. Todos los organismos tiene la misma reacción y productos en la fermentación? 5. Cuáles son los productos metabólicos producidos por los distintos organismos utilizados en este experimento? busca información adicional Hidrólisis de almidón 1. Realiza un diagrama de la presencia o ausencia de almidón en la hidrólisis.

5 2. Describa la función de las hidrolasas. Hidrólisis de Lípidos 1. Realiza un diagrama de la presencia o ausencia de lípidos en la hidrólisis. 2. Describa la función de las lipasas. 3. Cuál es la función de los lípidos en las células bacteriales? Prueba Litmus Milk e hidrólisis de caseína 1. Realiza un diagrama de la reacción de los microorganismos en el medio de cultivo en los tubos de ensayo. 2. Defina lo siguiente: a. Proteína = b. Hidrólisis =

6 c. Caseína = d. Proteasa = e. Aminoácido = f. Enlace polipéptido = g. Proteolisis = 3. Cuál es la función del Litmus en medio de leche? 4. Por qué la leche es blanca? Conclusión