Microbiología. Trabajo Práctico 3. Cultivo e identificación de bacterias. GRACIELA NATALIA PUCCI

Transcripción

1 Microbiología Trabajo Práctico 3. Cultivo e identificación de bacterias. GRACIELA NATALIA PUCCI

2 Objetivos: Reconocer los distintos medios de cultivo utilizados para la recuperación de bacterias, y comprender las distintas técnicas que posibilitan la identificación de los agentes etiológicos responsables de los procesos infecciosos. Mapa conceptual diagnostico tratamiento clinico microbiologico toma de muestra cultivo identi2icacion de germen Sensibilidad antibiotica Pruebas metabolicas, serologicas. Tecnicas moleculares Introducción. Para aumentar la biomasa de las bacterias es necesario cultivarlas en el laboratorio. Como toda célula las bacterias necesitan condiciones ambientales y nutricionales para poder desarrollarse. Por lo tanto estos microorganismos para crecer y multiplicarse van a necesitar nutrientes (fuente de carbono, nitrógeno e hidrógeno) y condiciones adecuadas de ph, temperatura, atmósfera y tiempo de incubación. Para el desarrollo de las bacterias se utilizan medios de cultivo estériles que pueden ser: sólidos, semisólidos y líquidos, estos son el soporte que les brinda los nutrientes para el desarrollo.

3 Los medios de cultivo sólidos se fraccionan en placasde Petri y se utilizan para aislamiento y recuento, utilizando la técnica de agotamiento por estría que se muestra en la figura de abajo. Esta técnica se realiza de forma aséptica, esterilizando el ansa en el mechero entre cada estría. En los medios de cultivo líquidos. Fig. Tomado de 7_9.html la presencia de turbidez indicará el desarrollo bacteriano. Los medios de cultivo se los puede clasificar en: Medios Nutritivos: Son medios simples que contienen los nutrientes básicos para permitir el crecimiento de bacterias heterótrofas. Medios enriquecidos: La adición al caldo o agar nutritivo de componentes como sangre, suero, vitaminas, aminoácidos u otros componentes ricos en compuestos orgánicos, les proporciona sustancias nutritivas complementarias que permiten el crecimiento de organismos heterótrofos más exigentes. Medios selectivos:

4 Añadiendo al agar nutritivo ciertos productos especiales, puede impedirse el desarrollo de algunos grupos bacterianos sin inhibir otros. Por ejemplo, el cristal violeta en concentraciones específicas previene el crecimiento de bacterias Gram positivas (salvo los Estreptococcus ß- hemolíticos y Enterococcus) sin afectar el desarrollo de Gram negativas. Medios diferenciales: La adición de ciertas sustancias químicas a los medios de cultivo trae como resultado determinado tipo de crecimiento bacteriano o cambios, permitiendo diferenciar distintos tipos de bacterias. Por ejemplo, si se siembra una mezcla de bacterias en un medio agar sangre, algunas bacterias pueden hemolizar los glóbulos rojos (apareciendo una zona clara alrededor de la colonia), mientras que otras no lo hacen. Así es posible distinguir entre bacterias hemolíticas y no hemolíticas que proliferan en un mismo medio. Identificación de bacterias Las bacterias se pueden identificar, asignar un nombre, por diferentes métodos, entre ellos están los métodos clásicos de identificación metabólica. Actividad Práctica: La cátedra les dará placas con medio de cultivo plaqueado en caja de Petri y usted realizará la técnica aséptica previa postración del personal de la cátedra. Las diferentes colonias pueden tener diferentes formas y tamaños. El personal de la cátedra les mostrará identificaciones de bacilos Gram negativos. En tubos que es la forma tradicional o antigua

5 La cátedra les dará placas con medio de cultivo plaqueado en caja de Petri y usted realizará la técnica aséptica previa postración del personal de la cátedra. Las diferentes colonias pueden tener diferentes formas y tamaños. Existen equipos comerciales como los API. Fig. Foto tomado de Otras técnicas que se utilizan: Para poder arribar a un diagnóstico certero de una determinada enfermedad infecciosa además de los cultivos microbiológicos para recuperar el germen causal, deben tenerse en cuenta otras herramientas de evaluación que ayudan a la confirmación de los diagnósticos: examen clínico médico, serología, técnicas moleculares, examen microscópicos Algunos ejemplos de diagnóstico: SIFILIS ü Campo oscuro (Tinción Fontana Tribondeau): observación de espiroquetas ü VDRL (tamizaje inespecífico) (Treponema pallidum) ü FTAbs (prueba confirmatoria) Chlamydias ü Métodos inmunocromatográficos (antígeno) ü Prueba confirmatoria: PCR o cultivo celular Recordar: Chlamydias es un género de bacterias intracelulares

6 Streptococo Beta Hemolítico grupo A : ü Métodos inmunocromatográficos (Antígeno) - RAPIDO ü Cultivo de Fauces: 72 hs- CONFIRMATORIO