Diagnóstico de laboratorio de vibrios causantes de ETAs

Tamaño: px

Comenzar la demostración a partir de la página:

Download "Diagnóstico de laboratorio de vibrios causantes de ETAs"

Alfredo Villalba Valdéz
hace 5 años
Vistas:

1 Costa Rica, 27 de abril 2 de mayo Diagnóstico de laboratorio de vibrios causantes de ETAs Hilda Ma. Bolaños os Acuña Centro Nacional de Referencia en Bacteriología INCIENSA Costa Rica

Características microbiológicas Los miembros del género g Vibrio son: Bacilos Gramnegativos (0,5 a 0,8 x 1,4 a 2,6 µm) Móviles por flagelos polares Anaerobios

2 Características microbiológicas Los miembros del género g Vibrio son: Bacilos Gramnegativos (0,5 a 0,8 x 1,4 a 2,6 µm) Móviles por flagelos polares Anaerobios facultativos Oxidasa positivos (excepto V. metschnikovii) Su metabolismo es fermentativo Miembros de la familia Vibrionaceae (Aeromonas, Plesiomonas y Vibrio)

3 Diferenciación n entre el género g Vibrio y otros Gramnegativos oxidasa () Prueba bioquímica Vibrio Aeromonas Plesiomonas Crecimiento en agar TCBS () Fermentación n de glucosa Gas de glucosa Fermentación n de inositol Fermentación n de manitol Prueba de cordón Crecimiento requiere o es estimulado por iones Na

4 Vibrios de importancia clínica Especie Presentación n clínica Gastrointestinal Infección n de heridas, oídoso Septicemia V. cholerae O1 () V. cholerae no O1 (incluyendo O:139) V. mimicus V. parahaemolyticus () V. vulnificus V. alginolyticus : Presentación n más m s común; : otra presentación n clínica; () presentación n poco usual

5 Vibrio cholerae V. cholerae O1* 2 biotipos: Clásico El Tor 3 serotipos: Inaba Ogawa Hikojima V. cholerae no O1 (> 200 serogrupos): V. cholerae O139 * V. cholerae no O1, no O139 * Cepas epidémicas

6 Espectro clínico del cólerac 75% infección asintomática* 2% enfermedad grave 5% enfermedad moderada 18% enfermedad leve * Portadores: personas que que no presentan síntomas s pero pueden transmitir la enfermedad. Importantes en diseminación n de la enfermedad.

7 Recolección n y transporte de muestras fecales En el período agudo de la enfermedad Antes de iniciar el tratamiento antibiótico tico Heces enteras o hisopado fecal en Cary Blair (máx. 5 días) d a temperatura ambiente (no refrigerar) Es ideal procesar la muestra dentro de 2 a 4 horas después s de recolectada Normas de bioseguridad

8 Flujograma de aislamiento de vibrios a partir de materia fecal Muestra de materia fecal APA 35 37º C x 68 hs Agar TCBS / TSA 35 37º C x 1824 hs KIA LIA indol estría a TSA 35 37º C x 1824 hs Pruebas bioquímicas complementarias Oxidasa, cordón Serotipificación n O1 y O139 V. cholerae O1, O139 o no O1 no O139

9 Crecimiento de vibrios en agar TCBS Sacarosa () V. V. cholerae Sacarosa () () V. V. mimicus V. V. parahaemolyticus Agar TCBS

10 Diferenciación n bioquímica de vibrios causantes de ETAs Característica V. cholerae V. mimicus V. parahaemolyticus V. vulnificus Colonias en TCBS Amarillas Verdes Verdes Verdes Ferm.. sacarosa Ferm.. lactosa Ferm.. arabinosa Crec.. 0% NaCl Crec.. 1% NaCl Crec.. 8% NaCl Sens O129 (10 µg) S S R S Sens O129 (150 µg) S S S S

Serotipificación n de Vibrio cholerae Aglutinación: n:

fresco (1824 horas) Control de aglutinación Seguir

antisuero contiene aglutininas contra la bacteria se

11 Serotipificación n de Vibrio cholerae Aglutinación: n: organismo (antígeno) suero inmune (anticuerpo) Cultivo fresco (1824 horas) Control de aglutinación Seguir especificaciones de fabricantes de antisueros Si el antisuero contiene aglutininas contra la bacteria se produce rápidamente r una aglutinación n fuerte, firme y granular

12 Cepa con caract BQ de V. cholerae en ABHI o ATS Serotipificación n de Vibrio cholerae Aglutinar en SS 0.85% Cepa rugosa Pasajes en AS 1 Aglutinar con antisuero poly O1 V. cholerae O1 V. cholerae no O1 Aglutinar con antisuero O139 NOTIFICAR * V. cholerae O139 Determinación n de factores de virulencia (PCR) V. cholerae no O1, no O139

13 Serotipificación n de V. cholerae O1 1 Aglutinar con antisuero Inaba V. cholerae O1 Inaba NOTIFICAR * Determinación n de factores de virulencia (PCR) y PSA Aglutinar con antisuero Ogawa V. cholerae O1 Ogawa NOTIFICAR * Si aglutina con Inaba y Ogawa corresponde al serotipo Hikojima (el aislamiento se debe referir a un Centro de Referencia Internacional para su confirmaci ción) RSI: Cólera por V. cholerae O1, O139: NOTIFICACION INTERNACIONAL

14 Diferenciación n de los biotipos de V. cholerae O1 Ensayo Biotipo Voges Proskauer ( 1% NaCl) Hemólisis en agar sangre de carnero Zona de inhibición n alrededor del disco de polimixina B (50U) Lisis por bacteriófago El Tor 5 Lisis por bacteriófago clásico IV Clásico El Tor

15 Desempeño o del CholeraSMART en el diagnóstico rápido r del cólera c en Costa Rica Evaluar el desempeño o de dos pruebas rápidas r utilizadas en Costa Rica para el diagnóstico del cólera c en comparación con el cultivo tradicional Evaluar la utilidad del análisis de la motilidad al fresco, como tamizaje para priorizar el uso de las pruebas rápidasr Proponer una estrategia para el uso de estas pruebas Bolaños os H, et al Desempeño o de los sistemas CholeraSMART y Pathogen Detection Kit en el diagnóstico del cólera. c Rev. Panam.. Salud Pública P 16:

16 Materiales y métodosm Se procesaron 237 especímenes fecales: Cultivo ( standard de oro ) SMART TM Pathogen Detection Kit TM

17 Sensibilidad analítica del SMART 12 Alta (líquidas, agua de arroz) 10 Mediana (semiformadas, moco y sangre) ufc/ml 10 ufc log Baja (h. rectales o muestras postantibi antibiótico) tico) Horas SMARTD SMART6 SMART18 Motilidad Motilidad Motilidad CultivoD Cultivo APA6 Cultivo APA18 Resultado

18 Análisis de la motilidad Observación de motilidad (n = 138) Sospechosa 65 (47%) No sospechosa 73 (53%) V. cholerae O1 V. cholerae no O1 V. mimicus,, otros Todas negativas por V. cholerae y otros vibrios

19 Conclusiones Las prueba rápida r de SMART mostró un desempeño o excelente (100% especificidad y 100% sensibilidad) al establecer el diagnóstico de V. cholerae O1 en todas las muestras de heces que fueron positivas por cultivo, en un tiempo menor. Estas pruebas, utilizadas en conjunto con la observación n de la motilidad de la muestra, constituyen un recurso accesible para ser s utilizado en la vigilancia del cólera, c aún a n en países en vías v de desarrollo.

20 Muchas gracias

Documentos relacionados

Diagnóstico de laboratorio del cólera

Taller El papel de laboratorio en la prevención y control del cólera INCIENSA, 8 de noviembre de 2013 Esta charla fue actualizada el 06/12/2013 Diagnóstico de laboratorio del cólera Dra. Elena Campos Chacón,