Vigilancia de Vibrio cholerae Instituto de Salud Pública de Chile

Transcripción

1 Vigilancia de Vibrio cholerae Instituto de Salud Pública de Chile Dr. Juan Carlos Hormazábal O. Jefe Subdepto. Microbiología Clínica Instituto de Salud Pública de Chile

2 Enfermedades Transmitidas por Alimentos MARCO REGULATORIO EDUCACIÓN DETECCIÓN PACIENTES/AMBTE/VET SIST. VIGILANCIA DET. BROTES CONTROL AUTURIDAD SANIT. LOCAL BUENAS PRACTICAS INDUSTRIA ALIMENTOS INOCUOS POBLACIÓN SALUDABLE

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4 El Vibrio cholerae Bacilo curvo Gram Negativo Móvil, flagelo polar Prolifera en el ambiente en agua dulce y salada Familia Vibronaceae 139 serotipos diferentes Algunos serotipos de V. cholerae son capaces de producir diarrea. Los casos mas severos V. cholerae O1 y O139 toxigénicos Enfermedad de Cólera

5 Solo las cepas de serogrupos O1 y O139 han sido causa de brotes epidémicos y estos casos deben ser reportados a la OMS como Cólera. V. cholerae O1 dos biotipos Clásico El Tor Cada biotipo tiene dos serotipos diferentes, Inaba y Ogawa. Reservorio: Las aguas salobres o marinas cálidas representan el reservorio natural del agente etiológico del cólera. No existen hospederos animales (no humanos) para el Vibrio cholerae.

6 Confirmación de Laboratorio V. cholerae en Chile Aislamientos de Origen Humano: Resultado V.cholerae No O1, No O Total Vibrio spp Desde el último brote en 1997, No se ha detectado la presencia de V. cholerae Toxigénico O1 O139 en nuestro país Laboratorio Referencia Vibrios, Sección Bacteriología.

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8 Aislamiento (TCBS) Identificación Bioquímica Caracterización Serológica

9 Reacción de la Polimerasa en Cadena: Métodos Rápidos de Detección gen Vc-m (16S-23S): codifica fragmento específico para Vibrio cholerae de 16S y 23S del rdna. gen ctxa : codifica para la subunidad A de la toxina colérica (CT ). gen tcpa :codifica para la proteína efectora (subunidad del pili) específico del Biotipo El Tor.

10 Reacción de la Polimerasa en Cadena: Métodos Rápidos de Detección 564 pb 451 pb tcpa ElTor ctxa 300 pb Vc-m (16S-23S)

11 V. cholerae, Estudio de Susceptibilidad Brote Haití 2010: Perfil de Resistencia Antimicrobiana: Sensible: Tetraciclina (Doxiciclina) Ciprofloxacino Kanamicina Circular Ministerio Salud Resistente: Trim-Sulf Furazolidona Ac. Nalidíxico Streptomicina

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13 Estudio de Susceptibilidad Antimicrobiana: AMP NIT SXT CIP CHL NAL TET TET NIT ERY? Doxiciclina Furazolidona Metodología Clin Infect Dis. 15; 49(10): (2009) Lancet 363: (2004) N. Engl. J. Med. 354: (2006) East African Medical Journal 77 (7): (2000) J. Antimicrob. Chemother. 52 (2): (2003).

14 Capacidad detección brotes, nuevas tecnologías: Implementación de Métodos Moleculares

15 Capacidad detección brotes, nuevas tecnologías: Huella Digital Bacteriana: PFGE PulseNet International, CDC, PAHO/WHO Standars, Capacitación, Certificación Capacidades Tipificación PFGE Tres Equipos PFGE Bionumerics software Capacitación continua y certificación PulseNet E. Coli O157:H7 Vibrio parahaemolyticus Vibrio cholerae Clostridium botulinum Campylobacter jejuni Yersinia enterocolitica Salmonella Listeria Shigella sonnei Clostridium perfringens Otros E. coli

16 Tipificación Molecular V. cholerae: Electroforesis de Campo Pulsado: Análisis filogenético de cepas chilenas de Vibrio cholerae no O1 Patrones genéticos de cepas de V. cholerae O1 Haití. Bases de datos regional PulseNet Dice (Op t:1. 50% ) (Tol 1.5 % -1.5% ) (H> 0. 0% S> 0. 0% ) [0. 0% % ] PFG E -Not I PFGE-N oti Base de Datos Genética Nacional Patrones genéticos de cepas de V. cholerae no O1 Bases de datos nacional PulseNet

17 Capacidad de Detección de Brotes y Clones Circulantes: Implementación de Tipificación Genética y Análisis Bioinformático Dice(Opt:1.50%)(Tol 1.5%-1.5%)(H>0.0%S>0.0%)[0.0%-100.0%] PFGE-NotI PFGE-NotI Comparación de Aislamientos Chile Chile Haiti 1 Haiti 2 Aislamientos V.cholerae de Chile año 1991, comparadas con patrones genéticos de aislamientos de Haití año 2010 Estándares PulseNet International, Centers for Disease Control, Atlanta EEUU, OPS.

18 Capacidades Instituto de Salud Pública: El laboratorio de Referencia del Instituto de Salud Pública dispone de las metodologías para la confirmación microbiológica de los aislamientos sospechosos. Identificación bacteriana Caracterización serológica de los aislamientos. Paralelamente se dispone de herramientas de epidemiología molecular para la tipificación de aislamientos ante un escenario de brotes. El laboratorio de Referencia se ha mantenido en permanente contacto con la Red GFN (Global Food Network) y PulseNet International (CDC OPS) para la implementación de técnicas de diagnostico y tipificación.

19 Plan Cólera: Fortalecimiento Lab. Referencia Instituto Salud Pública Identificación y Serotipificación rápida, con inclusión de métodos moleculares abreviados Tipificación genética por Electroforesis de Campo Pulsado, Según protocolo CDC-PulseNet, para definir clones circulantes. Refuerzo de los Laboratorios Locales Envío de medio recultivo TCBS a los laboratorios de los hospitales Base del país. Envío de medio de transporte Cary-Blair a los laboratorios de los hospitales Base del país. Capacitación y Transferencia Tecnológica: Coprocultivo e Id. de Vibrio cholerae

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