Métodos Diagnósticos en Microbiología

Transcripción

1 Técnica de diagnóstico ideal Métodos Diagnósticos en Microbiología María Teresa Ulloa Flores. Programa Microbiología Micología ICBM. Facultad de Medicina, Universidad de Chile 2012 Confiables: 100% S y 100% E Rápidas: resultados antes de dejar la consulta Baratas: costo beneficio Ojalá a partir de muestras no invasivas TENDENCIAS EN EL DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO RESULTADOS MAS OBJETIVOS IMPACTO CLINICO RESULTADOS MAS RAPIDOS COSTO ADICIONAL OBJETIVO Realizar el diagnóstico etiológico de una enfermedad infecciosa con el fin de indicar una terapia específica y, en algunos casos, determinar la gravedad. 1

2 Diagnóstico Etiológico Muestra paciente MUESTRA 1.- Obtención n de la muestra REPRESENTATIVA DE LA INFECCION SITIO ESTERIL DIRECTO Evidencia Antígeno 1. Tradicional: Cultivo 2. Detección de Antígeno directo INDIRECTO Evidencia : Anticuerpo Serología Detección de Anticuerpos 3. Molecular: Detección de Ácidos nucleicos TRANSPORTE SANGRE: HEMOCULTIVO MANTENER LA MUESTRA LO MAS CERCANO POSIBLE A SU ESTADO ORIGINAL FUNDAMENTAL : RECUENTO BACTERIANO UROCULTIVO 2

3 Diagnóstico Directo Muestra paciente Tinción n de Gram Se basa en las características de la pared celular bacteriana DIRECTO Antígeno INDIRECTO Anticuerpo Tradicional Inmunológico Molecular Inmunológico Reacción tintorial Forma Agrupación Tinción n de Gram Ejemplos de Observación microscópica directa de la muestra * Informe preliminar Tinción de Gram Directa de LCR 3

4 Tinción de Gram Cont Tinciones en situaciones especiales Directa de LCR Permiten realizar diagnóstico etiológico preliminar y orientar terapia inicial. Directa: calidad de la muestra Directa diagnóstica: Gonorrea en el hombre BACILOSCOPIA: T. Ziehl Nielsen Tuberculosis Tinta china LCR Paciente VIH-SIDA Cápsula de Criptococcus Diagnóstico Directo Cultivo Piedra angular del diagnóstico etiológico de enfermedad infecciosa. Permite recuperar el microorganismo para realizar estudio de susceptibilidad. Cuando las etapas previas (TM, transporte, siembra) se han realizado correctamente: Especificidad 100% 4

5 A. sangre A. Mac Conkey Medios Cromógenos E coli Klebsiella A. chocolate A. BCYE H. influenzae legionella E. coli: ß-glucuronidase (ß GUR) and indole Proteus: tryptophane-deaminase (TDA) Enterococci: ß-glucosidase (ß GLU) Medios Cromógenos Pruebas de Diagnóstico Bacilos Gram Negativo Fermentación de glucosa Fermentación de azúcares y degradación de aá sulfurados Utilización de citrato como fuente de carbono 5

6 Pruebas de Diagnóstico Bacterias Gram Positivo Coagulasa Catalasa Estudio de susceptibilidad ANTIBIOGRAMA POR DIFUSIÓN (Técnica de Kirby-Bauer) Análisis de varios antibióticos Presencia de enzimas Sensible Resistente Identificación: n: Fenotípica Manual miniaturizado Diagnóstico Directo: Detección de antígeno Automatizado( VITEK ) 6

7 Diagnóstico Directo Muestra paciente 2. Detección de antígeno directo de la muestra Detección de antígenos Fundamento: detección de partículas antigénicas de un determinado agente infeccioso mediante reacción antígeno-anticuerpo Tipos: Látex (S. aureus, RotaV) EIA: ELISA, IF, RIA EIA: SGA, C.difficile, S. pneumoniae, Legionella pneumophila, VRS, RotaV) IF: Bordetella, Chlamydia trachomatis, virus resp.) Western blots (HIV, HTLV, HCV, Borrelia burgdorferi) Detección de antígenos Direct Antigen Detection Tests by Agglutination Assays or by Enzyme Immunoassays Consideraciones: Sensibilidad variable según agente y cantidad de antígeno. Especificidad variable según tipo Ac utilizado y antígeno buscado. No reemplaza cultivo (gold standard) 7

8 LATEX LATEX LCR IFD directa IFD Bordetella 8

9 Diagnóstico de S. pyogenes : Detección de ag. directo Cultivo + cultivo - total StrepA StrepA Total Prevalencia: 42/150 : 28% Neumonia en adultos: Detección de ag. urinario Detecta polisacárido-c de S. pneumoniae en orina, mediante reacción de antígenoanticuerpo sobre soporte sólido (membrana), revelando una línea coloreada si el resultado es positivo. Especificidad 99% Sensibilidad 90.5% Ulloa MT et. Congreso Chileno de Microbiología. Valdivia 2000 Diagnóstico Indirecto 9

10 Diagnóstico Indirecto DIRECTO Antígeno Muestra paciente INDIRECTO Anticuerpo INMUNODIAGNOSTICO DETECCION DE RESPUESTA INMUNE: Inmunoglobulinas Igs clase específica Tradicional Inmunológico Molecular Inmunológico RESPUESTA DE Ac. A UNA INFECCIÓN Variable según huésped Test serológico utilizado (tipo de Ag y técnica) La ausencia de Ac. puede reflejar: -Poca inmunogenicidad del agente -Uso de técnica inapropiada -Momento de obtención de muestra inadecuado. DETECCION DE ANTICUERPOS Cultivos no disponibles: -Metodología a no desarrollada (T.pallidum) -Impracticables en laboratorio de rutina (Mycoplasmas, Chlamydia) Terapia antimicrobiana previa 10

11 Inmunofluorescencia indirecta ELISA 11