TEMA 9. Métodos ópticos para el diagnóstico de laboratorio de enfermedades infecciosas

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Monica Flores Figueroa
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1 TEMA 9 Métodos ópticos para el diagnóstico de laboratorio de enfermedades infecciosas

2 Tema 9. Métodos ópticos para el diagnóstico de laboratorio de enfermedades infecciosas 1. Examen microscópico del material fresco 1.1. Tipos de microscopía óptica 1.2. Preparaciones en fresco levemente modificadas 2. Examen de muestras teñidas 2.1. Tinción de Gram 2.2. Tinción de ácido-alcohol resistencia 2.3. Otros tipos de tinciones 3. Microscopía de fluorescencia 3.1. Fundamento 3.2. Principales fluorocromos utilizados 3.3. Inmunofluorescencia 4. Microscopía electrónica 4.1. Transmisión 4.2. Barrido 5. Resumen de las características y aplicaciones más frecuentes de los diferentes tipos de microscopía en Microbiología Clínica

Otros tipos de tinciones 3. Microscopía de fluorescencia 3.1. Fundamento 3.2. Principales fluorocromos utilizados 3.3. Inmunofluorescencia 4.

3 1. Examen microscópico del material fresco 1.1. Tipos de microscopía óptica Microscopía de campo claro Células sanguíneas Microorganismos en muestras líquidas (orina, heces diarreicas, LCR) Hongos en la piel Protozoos en sangre y tejidos Microscopía de campo oscuro Movilidad bacteriana Células finas (espiroquetas) Microscopía de fluorescencia Inmunofluorescencia

diarreicas, LCR) Hongos en la piel Protozoos en sangre y tejidos Microscopía de campo

4 1.2. Preparaciones en fresco levemente modificadas KOH al 10% (azul de lactofenol) Hongos Tinta china o nigrosina Bacterias y levaduras capsuladas Lugol (solución de yodo) Quistes de parásitos Azul de metileno Leucocitos en heces Reacción de Quellung

y levaduras capsuladas Lugol (solución de yodo) Quistes de

5 2. Examen de muestras teñidas 2.1. Tinción de Gram 2.2. Tinción de ácido-alcohol resistencia Ziehl-Neelsen (caliente) Kinyoun (frío)

6 2.3. Otros tipos de tinciones Esporas (Schaeffer y Fulton) Tinción de Wheatley Parásitos Tinción de Gomori Parásitos

7 2.3. Otros tipos de tinciones Tinción de Giemsa Diferenciación de parásitos en frotis de sangre y cortes de tejidos Tinción de Wright (Wright-Giemsa) Diferenciación de parásitos en frotis de sangre y cortes de tejidos

cortes de tejidos Tinción de Wright (Wright-Giemsa)

8 3. Microscopía de fluorescencia 3.1. Fundamento

9 3.2. Principales fluorocromos utilizados Naranja de acridina (se une a los ácidos nucleicos) Auramina-Rodamina (micobacterias) Blanco de calcoflúor (hongos) Isotiocianato de fluoresceína (inmunofluorescencia)

10 3.3. Inmunofluorescencia

11 4. Microscopía electrónica 4.1. Transmisión

13 4.2. Barrido

14 5. Resumen de las características y aplicaciones más frecuentes de los diferentes tipos de microscopía en Microbiología Clínica Microscopia óptica Características clave Aspecto de la imagen Principales aplicaciones Campo claro El contraste se logra por absorción. Imagen clara. Las muestras requieren tinción. Para observar organismos completos. Contraste de fases El contraste se consigue por interferencia; las diferencias en el indice de refracción cambian la fase de la luz Imágenes claras y detalladas rodeadas de un balo. No requiere tinción; se pueden observar preparaciones en fresco de células vivas. Movilidad Campo oscuro Solamente la luz dispersada por la muestra entra en el objetivo, produciéndose un contraste elevado. Imagen brillante contra un fondo oscuro. Para observar células vivas o flagelos demasiado finos para la microscopia de contraste de fases; pocos detalles internos. Movilidad. Fluorescencia Se basa en la capacidad de emitir luz visible que tienen los especimenes fluorescentes cuando se les ilumina con luz uv. Especimenes muy coloreados (luminosos) contra un fondo oscuro. Utilizando anticuerpos fluorescentes se pueden identificar tipos especificos de microorganismos en una mezcla compleja. Microscopía electrónica Transmisión (MET) Hace pasar un haz de electrones a través de la preparación, produciendo un gran aumento útil Imágenes muy ampliadas con gran detalle. Para observar virus y la ultraestructura celular. No se pueden observar organismos vivos porque las preparaciones ban de ser totalmente desecadas. Barrido (MEB) Barre los especimenes con un chorro de electrones, produciendo la salida de electrones secundarios que crean una señal, que, a su vez, genera una imagen por ordenador. Imagen tridimensional. Para ver estructuras de organismos intactos, e incluso estructuras internas con detalles reales. Las muestras han de ser desecadas, por tanto, no se puede aplicar a organismos vivos

$Contraste de fases El contraste se consigue por interferencia; las diferencias en el indice de refracción cambian la fase de la luz Imágenes claras y detalladas rodeadas de un balo.$

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