C O C C I D I O S I S I N T E S T I N A L PARASITOS EMERGENTES

Transcripción

1 C O C C I D I O S I S I N T E S T I N A L PARASITOS EMERGENTES Hospital Infantil de México Federico Gómez Universidad Nacional Autónoma de México Dra. Rosamaría Bernal Redondo

2 Coccidias intestinales Cryptosporidium hominis C. parvum Cyclospora cayetanensis Isospora belli

3 DINAMICA DE TRANSMISION MEDIO AMBIENTE PARASITO HUESPED

4 Coccidias intestinales Apicomplexa Conoíde Micronemas Micropilo Núcleo Esporozoíto y Merozoíto Anillos Polares Microtúbulos Roptrias (Factor Estimulador de Penetración) Retículo Endoplásmico Mitocondria Membrarna subpedicular

5 METABOLISMO anaerobio glucolisis sin ciclo de pentosas carbohidratos amilopeptina ácidos grasos sin fosforilación oxidativa sintetiza poliamidas AMPc, CaM Intracelular y extracitoplasmático No construye: azúcares amino-ácidos nucleótidos Convierte nucleósidos a nucleótidos Mitocondria atípica Nutrientes del huésped

6 GENOTIPIFICACION Genotipo 1 Antroponótico sólo humano C. hominis Genotipo 2 Zoonótico Bovino, Ovino y Porcino C. parvum

7 TRANSMISION FECAL-ORAL MALOS HABITOS HIGIENICOS DEFICIENCIAS SANITARIAS CONTACTO CON ANIMALES ALMEJAS, OSTION, MEJILLÓN ALIMENTOS: COSECHA CONSUMO Fresas, lechuga, albahaca Resistente a cloro

8 TRANSMISION PERSONA - PERSONA NOSOCOMIAL GUARDERIAS

9 C. hominis y C. parvum

10 Cyclospora cayetanensis Ortega Y. CDC ATLANTA 2000

11 Ciclo de vida C. cayetanensis Ooquiste no esporulado cigoto Exquistación interna Esquizogonia intracelular intracitoplasmática Gametogonia intracelular Esporogonia fuera del huésped Ortega Y. CDC ATLANTA 2000

12 CICLO BIOLOGICO DE Isospora belli Enterocito gametogonia esporozoíto esquizogonia huésped ooquiste esporogonia

13 Respuesta Innata Moléculas asociadas a patógenos (PMP) Receptores de reconocimiento (TLR2 TLR4) β defensina humana-2 (HBD-2) NF-λB (factor de transcripción) Inhiben la apoptosis (6-48 hrs) CITOCINAS: Interferon - γ 1L-4 1L-8, Prostaglandinas, Oxido nítrico TNF-α (f. de necrosis tumoral), TGF-β (factor de crecimiento) Actuan sobre Cel. cebadas, PMN, linfocitos, NKiller y liberan mediadores pro-inflamatorios

14 Respuesta Adaptativa Célula presentadora de Ag Linfocitos T (respuesta celular) Cél citotóxicas (Tc) Th 1 Cél. cooperadoras Th 2 Cél. T CD4 + (lámina propria) Incremento de cél T que inducen atrofia e hiperplasia Ooquistes en nódulos linfáticos mesentéricos y en cél. M Linfocitos B (respuesta humoral) Anticuerpos IgG, IgM, IgA e IgE locales. IgA secretora bloquea la penetración

15 PATOGENIA Tubo Digestivo (FARINGE-RECTO) Epitelio Bronquial Adhesión, Invasión, Ruptura de células epiteliales Atrofia y destruye microvellosidades Conducto biliar (colecistitis) Altera permeabilidad, diminuye la absorción de agua, electrolitos, aumento de la secreción Ocasiona diarrea acuosa Infiltrado inflamatorio Hiperplasia de criptas

16 Inmunocompetentes: Diarrea acuosa y aguda Deshidratación leve Se autolimita C L I N I C A Inmunocomprometidos: Diarrea voluminosa, malestar general, pérdida de peso y agua Dolor abdominal, náusea, vómito, fiebre y astenia Evacuaciones 20/24 horas. Deshidratación, choque hipovolémico y muerte. <200 CD4+ situación grave

17 Diagnostico Etiologico PARASITOLOGICO Ooquistes C. hominis y C. parvum Exámen directo teñido con azul de Löeffler con un aumento de 40x. Ooquistes 4 6 µm

18 Coproparasitoscópicos (CPS) concentración por flotación Técnica de Faust Soluciones con densidad(δ) >1.0 ZnS0 4 δ y 1.19 baumé Identificación de ooquistes Seco debil (10x) Seco fuerte (40X) Método cualitativo Faust, 1954 Modificada por la NCCLS Método cuantitativo Ferreira 57

19 Coproparasitoscópicos (CPS) concentración por flotación Ferreira 1:10

20 T I N C I Ó N DE KINYOUN Ooquistes 4 6 µm Preparación permanente Elaboración de frotis Fijar con calor Fijar con metanol Tinción de Kinyoun: Fucsina básica, H 2 SO 4 y verde brillante Lavar con agua corriente Observación 100x con aceite de inmersión Montaje en resina

21 METODO DE CONATIN CONCENTRACION Técnica de Ritchie ACLARAMIENTO Incubación con NaOH 0.1N TINCION - Kinyoun Ooquiste de Cryptosporidium sp. con CONATIN, se observan los cuatro esporozoítos de 4.6 a 4.8 µm de largo por 0.7 a 0.9 µm en la parte más ancha. Ramírez & Bernal Parasitología 1988;1:14

22 ESPOROZOITOS cuerpo residual PARED 0.04 µm 2 a 4 hrs ESPOROQUISTE OOQUISTE ESPORULADO OOQUISTE NO ESPORULADO EN HECES ESPOROBLASTO 132 ooquistes inician una infección. Viables a 4 C y 22 C, soportan -20 C OOQUISTE DE C. hominis y C. parvum 4-6 µm

23 Pared del Ooquiste 0.04 µm rica en uniones disulfuro línea de sutura Capa Externa de 5 nm material filamentoso y glicoproteínas ácidas Zona de separación de 5 nm Capa central rígida 10 nm electrodensa lipídica y glicoproteíca, ácido-alcohol resistente Ooquiste Esporulado Capa Interna de 20 nm glicoproteíca, rigidez y elasticidad OOQUISTE DE C. hominis y C. parvum Del Coco y colab, 2009

24 Cyclospora cayetanensis O o q u i s t e s Examen Directo Ooquiste 8 a 10 µm. Técnica de Kinyoun

25 Cyclospora cayetanensis PRUEBAS ESPECIALES Autofluorescencia Luz Ultravioleta 365 nm Esporulación in vitro dicromato de K 2.5% Reducción de D-xilosa y Vitamina B 12 Grasa en heces

26 OOQUISTE ESPOROZOITO ESPOROQUISTE 8 10 Micrometros Pocos ooquistes en heces Ooquiste de Cyclospora cayetanensis

27 Ooquiste de Isospora belli Ooquiste µm Ooquiste inmaduro con un esporoblasto Ooquiste maduro con dos esporoquistes Esporoquistes con cuatro esporozoitos cada uno (tetrazoico)

28 esporoquiste esporozoíto Ooquiste µm Cristales de Charcot-Leyden Autofluorescencia

29 INMUNODIAGNOSTICO INMUNOFLUORESCENCIA Anticuerpos marcados con fluoresceína Luz ultravioleta (495 nm) Cualitativa y cuantitativa

30 E L I S A CAPTURA DE ANTÍGENO Anticuerpos marcados con enzimas Fosfatasa alcalina (405 nm) Peroxidasa (450 nm) Sistemas de amplificación (Biotina/estreptoavidina) Cuantitativo UDO Correa,D. Técnicas modernas en Inmunología. 2000

31 DIAGNOSTICO MOLECULAR INDICACION DISPONIBILIDAD PRODUCTO BIOLOGICO METODOLOGIA PCR Dx en lab. clínico RFLP (polimorfismo de la longitud de los fragmentos de restricción ) para diferenciar especie y genotipificación

32 GRACIASRabel, 1982