Pasos del diagnóstico, enfermedades virales y bacterianas más comunes en L. vannamei

Transcripción

1 Pasos del diagnóstico, enfermedades virales y bacterianas más comunes en L. vannamei Jenny Rodríguez Ph. D. María Sotomayor M. Sc. Fanny Panchana Tlga.

2 Pasos del Diagnóstico C E N A I M - E S P O L 1. Examen macroscópico : signos externos 2. Técnicas de campo : equipo sencillo Técnicas de histología rápida Técnicas microbiológicas Técnicas inmunológicas. Estado de salud 3. Correcto envío de muestras al laboratorio 4. Análisis de laboratorio

3 Dudas frecuentes Cómo enviar la muestra al laboratório? Qué información puede obtener a campo Qué información quiero obtener? Qué limitante y sensibilidad tiene cada prueba? Qué prueba pedir?

4 REMISIÓN DE MUESTRAS AL LABORATÓRIO Muestreo Forma de remitir las muestras Laboratorio Resultados En camaronera Procesamiento Análisis Influye Influyen

5 MUESTRAS HISTOLOGIA Fijación de animales vivos Preservar células y tejidos Sol. Davidson Formalina neutralizada Fijación Camarón juveniles - adultos Inyectar solución fijadora PL s sumergir en solución fijadora Calidad de los reactivos, tiempo de exposición al fijador, velocidad de fijación (proceso), conservación

6 Muestras para Bacteriología

7 ENFERMEDADES BACTERIANAS DEL CAMARÓN

8 Enfermedades bacterianas El progreso en Acuicultura y la intensificación de cultivos han creado un medio apto para el crecimiento bacteriano. Gran cantidad de patógenos bacterianos oportunistas presentes en los cultivos. Alto riesgo de enfermedades de etiología bacteriana Necesidad de herramientas de detección y diagnóstico

9 Enfermedades camarón Figura 1. Incidencia de algunas patolog (por an sis de histolog durante las campa de muestreo. Enfermedades de tipo Bacteriano Vibriosis (Vibrio spp.) OPORTUNISMO Necrosis del hepatopáncreas NHP Rickettsias Mycobacterias Bayot, 2001 Enfermedades Fungales Micosis larval Fusarium spp. Comensales y Parásitos Enfermedad del camarón algodonoso (Cotton Shrimp -Microsporidium spp.) Enfermedad por epicomensales (protozoarios,alga filamentosa, algas verde azules) Gregarinas, otros

10 Enfermedades bacterianas C E N A I M - E S P O L

11 Enfermedades bacterianas C E N A I M - E S P O L BACTERIAS LUMINISCENTES Reducción 70% producción de laboratorios. Especies: V. harveyi, V. splendidus Identificación: Deficiente Signos clínicos: Larvas: tienen colonización masiva en los apéndecis, e inicio del tracto digestivo y región oral. Densos cúmulos de bacterias en el hemocele de las larvas moribundas. Infección avanzada: colonización del intestino medio y hepatopáncreas (septicemia general) Larvas con luminiscencia. Diagnóstico: Aislamiento de la bacteria de larvas moribundas. Identificación? Tratamiento: antibiograma: resistencia

12 CENAIM - ESPOL VIBRIOSIS Síndrome de ZOEA II Especies afectadas: P. vannamei y P. stylirostris, Signos clínicos: nauplios con apariencia y salud normal, hasta el cambio de Z1,donde come connormalidad y largas cadenas feales son observadas Aparece horas (Zoea II) Interrupción alimentación, evacuación contenido estomaca, nado errático, pérdida normal pigmentación.l Letargia, nado errático, muerte por inanición. Muerte durante el paso Z1-2

13 La mortalidad cesa al paso a Z3, survivors continue normal larval development Patología interna: atrófia de la glándula digestiva, inflamación del las paredes intestinales. Posibles etiologías: toxicidad del agua, bacterias patógenas, patógeno viral (no respuesta antibiótico). 1997: se determinó como agente a una bacteria intra celular (TEM en HP) No se conoce tratamiento

14 Vibriosis sistémica Signos clínicos: alta mortalidad (PL s, juveniles); camarones moribundos, luminiscencia. Organos afectados: cutícula, hepatopáncreas, órgano linfoide, glándula antenal, hemolinfa, músculo. Diagnóstico presuntivo: Nado errático, en las orillas, letargia, anorexia, coloración del HP alterado, colonización por epibiontes, cromatóforos expandidos, melanizaciones. Altos niveles de bacterias en hemolinfa, alto porcentaje de colonias verdes y o verdes luminiscentes en agar TCBS Diagnóstico confirmatorio: aislación y purificación con medios apropiados Vibrios en TCBS: V. parahaemolyticus, V. vulnificus, V. harveyi, V. penaeicida (VERDES), identificación por API, rep-pcr. Necrosisis multifocal, inflamación hemocíticas, formación de nódulos en el órgano linfoide, corazón y branquias, etc. Nódulos con bacterias en su interior (histología).

15 Vibriosis sistémica Astillas negras o Black splinter Vibriosis crónica Infecciones cutícula, branquias Lesiones en la cutícula, melanizaciones. Regiones ennegrecidas del músculo Muerte, o manchas permanentes Camarones adultos

16 Vibriosis sistémica C E N A I M - E S P O L Camarón manchado brown spot dissease Pequeñas lesiones localizadas en tono café o negro, cutícula erosionada. Vibrios sp. Aeromonas sp, Siprillum sp, Flavobacterium sp. Adultos, stress. Astillas negras, vibriosis sistémica.

17 VIBRIOSIS Melanosis externa Ingreso: Ingestión, exposición, muda Enfermedad Vibrios en tejido interno Muda Eliminación Muerte Septicemia

18 Tipos y especies de Vibrio potencialmente C E N A I M - E S P O L patógenas en agar TCBS TCBS color colonias Verdes Verdes luminiscentes Amarillas Sin crecimiento Especie V. vulnificus, V. parahaemolyticus V. harveyi, V. parahaemolyticus V. alginolyticus, V. parahaemolyticus (10%) V. peneicida La forma, y el color no sirve para identificación, ni determinación de patogenicidad Roque, 2006

19 VIBRIOSIS Síndrome de la Gaviota Letargia, inapetencia, movimientos natatorios desorientados. Musculatura opaca y blanquecina, lesiones cuticulares en los extremos ventrolaterales. Melanización en filamentos branquiales Retraso en coagulación de la hemolinfa, pérdida del color azulado. Enrojecimiento de periópodos y pleópodos. Mortalidades de hasta 100% entre 1-5 días post-infección Agente causal: Vibrios sp. V. parahaemolyticus

20 NHP Hepatopancreatitis necrotizante Signos clínicos Anorexia, intestino vacío. Crecimiento reducido Cromatóforos expandidos (pleópodos, urópodos) Mortalidad alta (90%) HP pálido, túbulos melanizados, textura suave. Agente : bacteria Gram (-) intracelular, tipo ricketsias y pleomórfica Diagnóstico confirmatorio: histología, rep-pcr, sondas moleculares

21 RICKETSIAS Bacterias Intracelulares. Signos clínicos: 1. Juveniles con crecimiento lento y letárgicos. 2. HP atrofiado 3. HP Blanquecino 4. Músculo opaco Agente causal: Diagnóstico confirmatorio: MET, rep-pcr

22 CENAIM - ESPOL MICOBACTERIOSIS Areas melanizadas, en tejidos como ovarios, músculos, corazón, branquias,etc. Lesiones grandes melanizadas en las cutículas. Agente causal : micobacterias Diagnóstico confirmatorio: histología, tinciones, rap-pcr

23 Otras enfermedades causadas por Microorganismos

24 CENAIM - ESPOL Micosis Larvaria Lagenidium spp. Micosis adulto - Fusarium HONGOS

25 Alday and Flegel,1996

26 Parásitos y Comensales C E N A I M - E S P O L Camarón algodonoso,lechoso Alday and Flegel,1996

27 Parásitos y Comensales C E N A I M - E S P O L Microsporideos ( Cotton Shrimp ) Diagnóstico: Histopatología (H&E), Giemsa y ácido-resistentes. Análisis en fresco en frotis o impresiones teñidos con giemsa. Determinación de especies TEM. PCR para algunas especies. Reconocibles algunas especies por el tamaño y cantidad de esporas. Esporas refringentes al microscopio, con flagelo. A.duorara, A. nelsoni y Pleistophora infectan al camarón y reemplazan las células del músculo estriado Agnasoma penaei, infecta: gónadas, corazón, hemolinfa, branquias, hepatopáncreas e intestino, las gónadas se alargan con apariencia opaca, las branquias se inflaman y toman color blanco semejantes a un tumor. En camarones muy afectados, la cutícula tiene una coloración negra azulada Tratamiento: no hay tratamiento efectivo. Reportes en jaibas anticoccídicos de pollos o insectos. Control eliminación de portadores: peces.

28 Parásitos y Comensales C E N A I M - E S P O L GREGARINAS Protozoarios del grupo Apicomplexa. Géneros reportados: Nematopsis, Cephalolobus, Paraophioidina Diagnóstico: detección al microscopio de trofozoitos o gametocistos en el intestino medio o en sus contenidos. Signos clínicos: los juveniles afectados reducen su crecimiento, elevación del FCA: Aquellos muy infectados > 100 trofozoitos por cm de intestino medio, muestran signos visibles de una cloración amarillenta en el intestino observable a través de la cutícula de abdomen. Lesiones: en severas infecciones de juveniles, anomalías del epitelio y mucosa del intestino medio, perforaciones. En larvas y PLs, los trofozoitos se aprecian en el intestino. Histológicamente se aprecian en el lumen intestinal, reducción del e hiperplasia.

29 Parásitos y Comensales C E N A I M - E S P O L FOULING Alday and Flegel,1996

30 Parásitos y Comensales CENAIM - ESPOL FOULING Alday and Flegel,1996

31 Parásitos y Comensales CENAIM - ESPOL GUSANOS PARASITOS HELMITOS Helicometrina (tremátodo), 2004 Alday and Flegel,1996 nimia Del Río-

32 Parásitos y Comensales C E N A I M - E S P O L AMYLOODINIUM Amyloodinium, es un dinoflagelado ectoparásito obligatorio Carpio, 2007 Textura flácida, problemas de muda, melanización en branquias, nado errático, pérdida de aptito, mortalidad.

33 Enfermedades virales en peneidos

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35 DNA Viruses of Penaeid Shrimp WSSV ~130 x 350 nm IHHNV 20 nm HPV 22 nm BP, MBV, BMN ~75 x 300 nm RNA Viruses of Penaeid Shrimp PvNV 28 nm TSV 30 nm IMNV 40 nm YHV/GAV/LOV ~70 x 180 nm Scale Bar divisions are 20 nm

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37 Histopatología de enfermedades virales y bacterianas más comunes en Penaeus vannamei F. Panchana Laboratorio de Histopatología Centro Nacional de Acuicultura e Investigaciones Marinas

38 Herramientas del patólogo Signos externos (Observación macroscópica) Histopatología convencional Técnicas rápidas de histopatología (tínción rápida de branquias y de hemolinfa) Otras herramientas: Microscopía electrónica de transmisión (MET), Inmunohistoquímica, Hibridación In Situ, TUNEL (apoptosis).

39 Muestreos Se toman animales vivos o moribundos con claros signos externos de enfermedad. Considerar que los animales muertos sufren rápidas alteraciones post-mortem en los tejidos (muestras no idóneas). Fijador: Davidson. Si se desea realizar Hibridación in situ para virus de ARN (TSV, IMNV, YHV), se recomienda otro tipo de fijador (RF-fixative).

40 Signos externos más comunes observados en camarones enfermos Inanición/Letargia Nado errático Coloración roja o lechosa Manchas blancas Necrosis multifocal Deformidades

41 Virus de la Necrosis Hipodérmica y Hematopoyética Infecciosa (IHHNV): Signos externos

42 Virus de la Necrosis Hipodérmica y Hematopoyética Infecciosa (IHHNV): Lesiones observadas en cortes histológicos Signos más comunes: - Alta variabilidad de tallas en las poblaciones - Reducción o cese total del crecimiento. Los tejidos más afectados: Tejidos ectodérmicos Cordón nervioso Glándula antenal Epidermis cuticular Tejidos mesodérmicos Gónadas Tejido hematopoyético Órgano linfoide Tejidos conectivos

43 Virus de la Mancha Blanca (WSSV): Signos externos

44 CENAIM - ESPOL WSSV en P. vannamei Signos externos Coloración rojiza Manchas blancas Nado errático Tejido epitelial Tejido conectivo Epitelio intestino Tejidos más afectados Corazón Branquias Glándula antenal Órgano linfoide Tejido hematopoyético Órgano mandibular Órgano Y

45 Virus del Síndrome de Taura (TSV): Signos externos

46 Virus del Síndrome de Taura(TSV) Signos más comunes : Altas mortalidades (70% al 80%) Fase aguda.- poca o ninguna inflamación, células necróticas o agrandadas, inclusiones centrales acidófilas. Fase crónica.- Infiltraciones hemocíticas melanizaciones y colonizaciones bacterianas en la cutícula. Portador sano Tejidos afectados: La Necrosis multifocal (lesión tipo perdigón) se presenta en la cutícula y subcutícula del epitelio general del cuerpo, intestino anterior y posterior, branquias y apéndices.

47 Cambios a observarse en cortes histológicos por TSV en Penaeus vannamei

48 Virus de la cabeza amarilla (YHV) Cortes de Órganos Linfoides Signos externos Palidez en el cuerpo (amarillento), incluyendo las branquias y el hepatopáncreas Cefalotórax inflamado

49 Virus de la Necrosis Muscular Infecciosa (IMNV) en fresco

50 Virus de la Necrosis Muscular Infecciosa (IMNV) Signos más comunes : Corte histológico de músculo Mortalidades moderadas y persistentes. La necrosis muscular se presenta en uno o varios segmentos abdominales. Corte histológico de músculo

51 Baculovirus penaei (BP) Caracteristicas Las infecciones siempre son vía oral Desde etapas juveniles: Los síntomas no son específicos. En larvas y postlarvas: Alta mortalidad. Disminución en el consumo de alimento Disminución en el crecimiento Tejidos más afectados Lumen del estómago Lumen del Intestino. Tejido del Hepatopáncreas

52 CENAIM - ESPOL Cortes de hepatopáncreas con Hepatopancreatitis necrótica (NHP) Características Producida por Bacterias Gram negativas intracelulares tipo rickettsia Mortalidades 20-95% Signos más comunes Intestino vacío Crecimiento reducido Cromatóforos expandidos en urópodos y pleópodos Hepatopáncreas es pálido de estructura suave, túbulos melanizados, ausencia de lípidos y letargia abdominal.

53 Vibriosis en Penaeus vannamei camarones en fresco: Signos externos

54 Vibriosis en Penaeus vannamei Signos externos Coloración abdominal rojiza Ulceraciones en la cutícula Apéndices rojizos Urópodos rosados Características: Alta mortalidad La hemolinfa tarda en coagularse Marcada actividad fagocítica localizada en el músculo, hepatopáncreas y branquias

55 Microsporidios: signos externos e internos

56 Microsporidios Signos externos Difícil de identificar Opacidad (color blanquecino) en segmentos abdominales Cutícula de color azul oscuro, Signos internos Músculo necrosado

57 Gregarina Signos externos Difícil de identificar Presentan un color amarillento en la parte superior del estómago. Alta mortalidad Signos internos Intestino vacío e inflamado Reducción en crecimiento

58 GRACIAS CENAIM - ESPOL