INSPECCIÓN SANITARIA DE CAMARÓN BLANCO (Litopenaeus vannamei), CULTIVADOS EN GRANJAS DE PRODUCCIÓN ACUÍCOLA EN EL ESTADO DE COLIMA

Transcripción

1 Av. Sábalo Cerritos S/N. A.P Mazatlán, Sinaloa, México. C.P Tel: +52 (669) ; Fax: +52 (669) INSPECCIÓN SANITARIA DE CAMARÓN BLANCO (Litopenaeus vannamei), CULTIVADOS EN GRANJAS DE PRODUCCIÓN ACUÍCOLA EN EL ESTADO DE COLIMA RESPONSABLE DEL PROYECTO: Dra. MARÍA SOLEDAD MORALES COVARRUBIAS (CIAD-MZT) COLABORADORES: ING. JOSÉ ANTONIO FERNÁNDEZ MENESES (CESACOL) M.V.Z. RODOLFO LOZANO OLVERA (CIAD-MZT) L.A.R.M. DIANA JAEEL SANCHEZ POMPOSO (CESACOL) BIÓL. DIANA ARIZMENDI CÁRDENAS (CESACOL) OCEAN. FRANCISCO JAVIER PRECIADO GOMEZ (CESACOL) CONVENIO ESPECÍFICO COMITÉ DE SANIDAD ACUÍCOLA DEL ESTADO DE COLIMA. FECHA DE INICIO: 22 DE MARZO DEL 2011 FECHA DE TÉRMINO: 26 DE MARZO DEL 2011 Mazatlán, Sinaloa México Abril del 2011

2 RESUMEN En el presente estudio se realizó una inspección sanitaria de juveniles de camarón blanco (Litopenaeus vannamei), cultivados en agua dulce utilizando análisis en fresco, bacteriológicos, histopatológicos y moleculares en 3 granjas de producción acuícola del estado de Colima. Los resultados de este trabajo muestran la presencia de las siguientes enfermedades: necrosis del hepatopáncreas séptico (NHP-S), virus de la necrosis hipodérmica y hematopoyética infecciosa (IHHNV por sus siglas en ingles), endoparásitos (nematodos), ectoparásitos (Epistylis, Vorticella, Acineta), enteritis hemocítica, hipertrofia de la glándula antenal y necrosis muscular idiopática 2

3 1. INTRODUCCIÓN La creciente demanda en el consumo del camarón, la drástica declinación de sus reservas naturales y la sobrepesca del mismo, trajo consigo el surgimiento de la camaronicultura. La industria del cultivo de camarón en agua oceánica y salobre, ha surgido como una de las fuentes de mayor generación de divisas y empleos. En México, en años recientes se ha adoptado una variante de cultivo conocida como cultivo de camarón tierra adentro surgida en Tailandia, la cual utiliza agua de baja salinidad en zonas alejadas de la costa (Flaherty et al., 2000). Esto es posible debido a la capacidad osmorreguladora de L. vannamei que le permite sobrevivir en un amplio intervalo de salinidades (de 0.5 a 45 g L -1) (Roy et al., 2007; Pérez-Velásquez et al., 2007). Un factor importante que ha influido en esta tendencia ha sido la creencia de que, las áreas tierra adentro están libres de patógenos de camarones, y que en ellas no se presentan las enfermedades comúnmente reportadas en los ambientes costeros (Flaherty y Vandergeest, 1998; Flaherty et al., 2000), sin embargo, existen reportes en zonas de cultivo en ambientes dulceacuícolas de la incidencia de algunos agentes patógenos y simbiontes; como, el Virus de la Mancha Blanca (WSSV), Virus de la Cabeza Amarilla (YHV) y protozoarios como Zoothamnium spp. (Flaherty y Vandergeest, 1998; Flaherty etal., 2000). Al trasladar el camarón marino a un ambiente de agua dulce en tierra dentro, es probable el surgimiento de interacciones entre organismos patógenos del nuevo ambiente en el caso probable de que existan y los organismos transferidos, pudiéndose presentar o no una enfermedad, o bien, en el caso de agentes patógenos que logren pasar las barreras ambientales, es posible que la interacción patógeno hospedero se presente de forma diferente a como ocurre en el ambiente marino. Ante esta situación, se planteo: 3

4 2. OBJETIVO GENERAL Realizar una inspección para determinar que agentes patógenos se encuentran en los organismos de cultivo y si estos afectan al camarón blanco L. vannamei cultivado en ambiente dulceacuícola en el estado de Colima México. 3. OBJETIVOS ESPECÍFICOS a). Análisis de muestras de camarón blanco para detectar enfermedades utilizando análisis en fresco, bacteriológicos, histopatológicos y moleculares. b). Detectar cuales patógenos se encuentran presentes en organismos sintomáticos y asintomáticos en los estanques de cultivo con presencia de mortalidades en zonas con historial de mortalidades recurrentes. c). Detectar cuales patógenos se encuentran presentes en organismos sintomáticos y asintomáticos en los estanques de cultivo sin presencia de mortalidades en zonas con historial de alta sobrevivencia. 4. MATERIAL Y METODOS Obtención de las muestras para diferentes análisis. Para la realización del presente trabajo se colectaron 30 organismos al azar de 2 secciones del estanque Selección de los lugares de muestreo. Área de muestreo No. de Estanques Muestra/estanque Total de organismos por Granja GRANJA MONTE 1, 21 y organismos 90 GRANDE GRANJA AQUAFRUTAS 17 y organismos 60 GRANJA EL COCO organismos 30 4

5 Preservación y procesamiento de los organismos. Los organismos colectados, fueron depositados en contenedores de plástico con agua del estanque y aireación para su traslado al laboratorio de CESACOL donde se procesaron inmediatamente. A los organismos colectados se les extrajo hemolinfa del seno ventral cerca del primer par de pleópodos con una jeringa para insulina para análisis bacteriológico, se revisaron físicamente para detectar alteraciones externas, se tomó una muestra de branquias para luego hacer la extracción del hepatopáncreas tomando cuatro muestra para los análisis histológicos, bacteriológicos, en fresco y análisis molecular, respectivamente Preservación y procesamiento de muestras para histología. La porción del hepatopáncreas, así como organismos sin hepatopáncreas y completos se inyectaron con solución Davidson AFA. Las muestras fueron depositadas en frascos de 250 y 500 ml y mantenidas en inmersión por 48 horas, tras de lo cual se enjuagaron con agua corriente y posteriormente se conservaron en alcohol etílico al 70%, hasta su proceso por histología de rutina convencional, utilizando la metodología de Bell y Lightner 1988 y Lightner El diagnóstico histopatológico general para revisar alteraciones en los diferentes órganos y tejidos de los organismos se realizó con base en lo publicado por Bell y Lightner 1988, Lightner 1996 y Morales-Covarrubias Análisis bacteriológicos 5

6 Las muestras fueron procesadas y analizadas utilizando la metodología descrita por Lightner 1996 y la interpretación de resultados se realizó con base en lo publicado por Gómez-Gil Procesamiento de muestras por análisis en fresco. El diagnóstico en fresco general se realizaron con base en los procedimientos publicados por Lightner 1996 y Morales-Covarrubias Procesamiento de muestras por análisis molecular. Se utilizó el kit IQ2000 TM (Farming IntelliGene Corporation Technology), siguiendo la metodología descrita por el fabricante para la detección de IHHNV, NHP-B, WSSV, YHV y TSV. 5. RESULTADOS Se analizaron 180 camarones correspondientes a 3 granjas de camarón los resultados obtenidos del diagnóstico histopatológico, en fresco, bacteriológico y molecular a estos organismos revelaron la presencia de necrosis del hepatopáncreas séptico (NHP-S), virus de la necrosis hipodérmica y hematopoyética infecciosa (IHHNV por sus siglas en ingles), endoparásitos (nematodos), ectoparásitos (Epistylis, Vorticella, Acineta), enteritis hemocítica, hipertrofia de la glándula antenal y necrosis muscular idiopática. 6

7 Los epicomensales (fig. 1), melanización (fig. 2), necrosis, materia orgánica (fig. 3) y nódulos hemocíticos (fig. 4) en branquias se detectaron en los organismos de las tres granjas; principalmente en la granja Monte Grande en el estanque 33 con grados 2 y 3 de severidad y Aquafrutas (grado 2 de severidad); para la granja Monte Grande estas observaciones pudieran estar relacionadas con el incremento natural de la biomasa en los camarones, incremento de la ración alimenticia y aumento en la cantidad de excretas, lo que provoca un incremento de la materia orgánica en el estanque y un decremento del oxígeno derivando a su vez en una situación de desventaja para los camarones y favorable para los epibiontes. Para Aquafrutas la presencia de epicomensales y materia orgánica se debe quizás al movimiento de los fondos y a la letargia de los camarones. El efecto de obstrucción mecánica ocasionado por los epibiontes y la presencia de necrosis en las branquias pueden ocasionar interferencia de las funciones, principalmente en camarones altamente infestados, ya que las branquias son estructuras de vital importancia en los procesos de intercambio de gases y osmorregulación. Solamente en los intestinos de los camarones del estanque 21 de la granja Monte Grande se detectaron nematodos (fig. 5) en grado 1, en todos los intestinos analizados de las 3 granjas se observaron cianobacterias pero en la mayoría de los organismos de Aquafrutas no presentaron restos de alimento. La enteritis hemocítica (fig. 6) y las cianobacterias principalmente Hyella caespitosa (fig. 7), se observaron en la tres granjas con mayor prevalencia en Monte Grande (33.33%). En los organismos analizados se observó necrosis del hepatopáncreas séptico (fig. 8), principalmente en las granjas Monte Grande (20% de prevalencia) y El 7

8 Coco (10% de prevalencia), con infiltración de hemocitos, formación de nódulos hemocíticos melanizados y presencia de masas de bacterias en el centro del nódulo y en el lumen de los túbulos del hepatopáncreas con grado 1 y 2 de severidad, pero al realizar el análisis bacteriológico 3 organismos de la granja el Coco presentaron mayor unidades formadoras de colonias (1X10 3 ) en hemolinfa y hepatopáncreas (probable inicio de NHP-S). Los resultados de bacteriología muestran crecimiento en Agar sangre, Agar soya tripticasa (TSA) y Agar tiosulfato citrato bilis sacarosa (TCBS) de 6 formas distintas de unidades formadoras de colonias las cuales necesitan caracterización bioquímica y molecular. En los organismos de Aquafrutas se observó atrofia tubular, desprendimiento celular y muy pocas vacuolas lipídicas (esto debido a la inanición). El hepatopáncreas dañado, favorece la presencia, multiplicación y dispersión de patógenos en órganos y tejidos de los organismos esto se debe a que el hepatopáncreas realiza varias funciones, entre ellas las de almacenar temporalmente alimento, síntesis, absorción, secreción y metabolismo de lípidos e hidratos de carbono y la producción de proteínas que se encargan de funciones vitales, como la que realiza la hemocianina que se encarga de transportar el oxigeno a todas las células del camarón. La prueba de diagnóstico mediante la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) aplicada al ADN y cadn de los tejidos de los camarones de las tres granjas solo amplificaron segmentos específicos de IHHNV para la granja Monte Grande, estanque 21 con una prevalencia del 10%, no amplificaron segmentos específicos de WSSV, TSV, YHV y NHP-B descartándose la presencia de los virus y de intracelulares en los organismos analizados de las granjas 8

9 analizadas. Los resultados muestran la presencia de agentes patógenos, que pudieran ponen en riesgo la supervivencia del camarón, especialmente cuando las condiciones de calidad del agua y suelo no son las adecuadas incrementan el riesgo de mortalidad. El monitoreo permanente de los organismos de cultivo para la presencia de patógenos en conjunto con el monitoreo de la calidad del agua y suelo ayudarán en la toma de decisiones para la optimización de la producción. 9

10 Figura. 1. Epistylis en Figura. 2. Melanización multifocal Figura. 3. Materia orgánica Dendobranquias en dendobranquias en dendobranquia Figura. 4. Nódulos hemocíticos Figura. 5. Nematodo Figura 6. Enteritis hemocítica Dendobranquias Intestino Intestino Figura. 7. Hyella caespitosa Figura. 8. Deformación tubular, atrofia tubular y formación de nodulos hemociticos 10