Aplicaciones de la biología molecular en hemopatías
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- Pedro Caballero Cordero
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1 Aplicaciones de la biología molecular en hemopatías Dr. Carlos Santamaria Q, MQC, PhD. Jefe. Laboratorio de Diagnóstico Molecular. Hospital Nacional de Niños Director Centro de Diagnóstico Molecular y Estudios Genéticos (CEDIMEG S.A.)
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5 Serie roja Talasemias y Hematología Serie blanca Leucemias: LMA, LLA, LMC. Linfomas Otros: SMPc Coagulación Factor II G20210A Factor V Leyden
6 BIOLOGÍA MOLECULAR: HEMOPATÍAS MALIGNAS. DIAGNÓSTICO HEMOPATÍAS MALIGNAS PRONÓSTICO TRATAMIENTO ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL
7 Análisis disponibles-microbiología Patógenos respiratorios Anaplasma phagocytophillum Bordetella holmesii Bordetella parapertussis Bordetella pertussis Chlamydophyla pneumoniae Mycobacterium tuberculosis detección de ARN 16S Mycoplasma pneumoniae Patógenos tracto digestivo Patotipos Escherichia coli (EPEC, ETEC, EHEC, EIEC, DAEC, EAEC) Yersinia enterocolitica Parásitos/Hongos Leishmania spp Sporothrix schenkii Fiebres de origen oscuro Ehrlichia canis Ehrlichia chaffeensis Ehrlichia ewingii Anaplasma phagocytophilum Rickettsia spp Bartonella spp Virulencia-resistencia ATB en S. aureus Gen de resistencia a meticilina (meca) Gen de toxina de síndrome de shock tóxico (stts) Leucocidina de Panton Valentine (gen PVL) Toxina exfoliativa A Toxina exfoliativa B Encefalitis virales Herpes simplex virus I y II Enterovirus EBV VZV
8 Análisis disponibles-onco-hematología Leucemia linfoblástica aguda B t(1;19)(q23;p13) E2A-PBX1* t(4;11)(q21;q23)mll-af4* t(9;22)(q34;q11) BCR-ABL p190* t(9;22)(q34;q11) BCR-ABL p210* t(12;21)(p13;q22) TEL-AML1* Leucemia linfoblástica aguda T HOX11- L2 del(1)(p32;p32) SIL-TAL1* Leucemia mieloblástica aguda FLT3-ITD NPM1 (Mutación A y B)* t(8;21)(q22;q22) AML-ETO * inv(16)(p13;q22) CBF -MYH11* Leucemia promielocítica aguda t(15;17)(q22;q21) PML-RAR Síndrome mieloproliferativos crónicos t(9;22)(q34;q11) BCR-ABL p190* t(9;22)(q34;q11) BCR-ABL p210* FIP1L1-PDGFRα JAK2-V617F Síndrome linfoproliferativos crónicos t(11,14)(q13;q32) BCL1/JH MCL-1 t(14,18)(q32;q21)bcl2/jh MBR t(14,18)(q32;q21)bcl2/jh mcr (t(8;14)(q24;q32) cmyc-igh Tumores sólidos t(1;13) PAX7-FKHR (RMS alveolar) t(2;13) PAX3-FKHR (RMS alveolar) t(11;22) EWS-FLI1 (Sarcoma de Ewing) t(21;22) EWS-ERG (Sarcoma de Ewing) Trombofilias Factor II (Protrombina) G20210A Factor V Leiden MTHFR (C677T/A1298C)
9 Hemopatías serie blanca Agudas Crónicas LMA LLA SMPc SLPc LMA-M0 LMA-M1 LMA-M2 LMA-M3 (LPA) LMA-M4 LMA-M5a LMA-M5b LMA-M6 LMA-M7 LLA-B común LLA-B nula LLA-T LMC P. vera T. esencial MFP LNH-B Manto Folicular Burkitt Otros LNH-B LNH-T LLC M. Múltiple Macroglob
10 Hemopatías serie blanca Agudas Crónicas LMA LLA SMPc SLPc LMA-M0 LMA-M1 LMA-M2 LMA-M3 (LPA) LMA-M4 LMA-M5a LMA-M5b LMA-M6 LMA-M7 LLA-B común LLA-B nula LLA-T LMC P. vera T. esencial MFP LNH-B Manto Folicular Burkitt Otros LNH-B LNH-T LLC M. Múltiple Macroglob
11 Frotis de sangre periférica NORMAL LEUCEMIA MIELOIDE CRÓNICA
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13 Cariotipo normal 46, XY
14 t(9;22)(q34;q11) BCR/ABL Cromosoma 22 p q 5 3 BCR (q11) Cromosoma 9 p q Cromosoma PHILADELPHIA BCR/ABL Traslocación recíproca ABL (q34) 5 3 ABL/BCR
15 Cromosoma Philadelphia 46,XY, t(9;22)(q34;q11)
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17 t(9;22)(q34;q11) BCR/ABL BCR (22q11) b2 b cen m-bcr. ~55 Kb M-bcr. ~2 9 Kb -bcr tel p190 (minor) p210 (major) ABL (9q34) a2 a3 1b 1 21a cen Breakpoint region ~200 Kb tel
18 PCR para BCR/ABL M-bcr.BCR-ABL p210 b3a2 b2a ~55% ~40% ENF 5012 (3173) ENR561 (277) sonda Primers o cebadores
19 T A C G A C C T T A G C C T G A C G A G A T G C T G G A A T C G G A C T G C T C TAC GA CC TTA GC TGA CG AG AT GC TGG AT CG AC TGC TC PCR Reacción en Cadena de la Polimerasa TAC GA CC TTA GC TGA CG AG AT GC TGG AT CG AC TG CT C TAC GA CC TTA GC TGA CG AG AT GC TGG AT CG AC TGC TC TAC GA CC TTA GC TGA CG AG TAC GA CC TTA GC TGA CG AG AT G TGG AT C AC TG CT C AT G TGG AT C AC TG TC TAC GA CC TTA GC TGA CG AG TAC GA CC TTA GC TGA CG AG AT AG C GT AGG CC TA T AC G CG AT CG TA GC GT AC G AT TA GC GT AGG CC TA T AC G CG AT CG TA GC GT AC G T CT GG T G AC T CT C T CT GG T G AC T CT C TAC GA CC TTA GC TGA CG AG TAC GA CC TTA GC TGA CG AG AT GC TGG AT CG AC TG CT C AT GC TGG AT CG AC TG CT C TAC GA CC TTA GC TGA CG AG TAC GA CC TTA GC TGA CG AG AT GC TGG AT CG AC TG CT C AT GC TGG AT CG AC TGC TC TAC GA CC TTA GC TGA CG AG TAC GA CC TTA GC TGA CG AG AT GC TGG AT CG AC TG CT C AT GC TGG AT CG AC TGC TC
20 Biología Molecular Dr. Cristian Pérez C.
21 PCR cuantitativa-tiempo real t(9;22) BCR-ABL Positivo BCR-ABL Negativo
22 Efecto biológico del Imatinib Goldman J, Frontiers in Bioscience 11, , 2006
23 Leucemia Mieloide Crónica O`Brien, N Engl J Med 2003;348:
24 Resistencia a imatinib: mutaciones puntuales (T315I) A ACT= Thr (T) B ATT= Ile (I) T315I
25 Otros Síndromes Mieloproliferativos crónicos (SMPc) Trombocitosis esencial Policitemia vera Mielofibrosis JAK2 V617F 90% PV 40-60% TE 40-60% MFP
26 JAK2: V617F JAK2 V617F 90% PV 40-60% TE 40-60% MFP Mori et al, Genet. Mol. Biol.2008: 31,
27 Resultados: JAK2 PM M1 M2 M3 Cneg C+
28 Situación en Costa Rica
29 Laboratorio Diagnóstico Molecular
30 Muestras Hematología Molecular según hospital 500 Muestras Onco-Hematología Molecular HNN HSJD HMEX HCG HMP HSVP
31 Muestras Hematología Molecular HNN vs. Otros hospitales % % HNN HNN HNN OTROS hospitales 65% OTROS hospitales 74% OTROS hospitales % HNN OTROS hospitales 85%
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34 Investigaciones en curso ONCO-HEMATOLOGIA 1. Detección de mutaciones de IKZF y CRLF2 en LLA-B en niños (UCR, St Jude Research Hospital TN, USA). 2. Estudio de incidencia y respuesta a tratamiento en pacientes adultos con LMC (HSJD, HMEX, HCG, HMP). 3. Incidencia de mutaciones de oncogen RET en carcinoma de tiroides (HMEX). 4. Estudios de mutaciones en NALP3 para CAPS (Hospital Clinic Barcelona, España)
35 Diagnóstico Molecular Secuenciació n de Sanger Donado por JPS Secuenciación de nueva generación
36 Secuenciación Sanger: una secuencia a la vez Next generation sequencing (NGS): millones de secuencias simultáneas
37 Mensaje para llevar a casa El diagnóstico genético y molecular debe considerarse como parte básica del abordaje clínico del paciente. Nuestro país tiene una oferta incipiente de análisis genético y molecular, pero tiene! Ante un cuadro de difícil diagnóstico, consulte. Una nueva prueba puede estar disponible!
38 Colaboradores División Diagnóstico Molecular DLC. Karol Alfaro DLC Jean Carlo García DLC. Ariana Moya Dr. Andrey Montero Dra. Estela Morera Dra. Valeria Peralta Dr. Cristian Pérez Dr. Carlos Santamaría
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