LA CITOGENÉTICA EN LOS LINFOMAS. UNA PERSPECTIVA DESDE LA EXPERIENCIA
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- Juan Francisco Palma Zúñiga
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1 LA CITOGENÉTICA EN LOS LINFOMAS. UNA PERSPECTIVA DESDE LA EXPERIENCIA Blanca Espinet Citogenètica Molecular, Servei de Patologia IMIM-Hospital del Mar
2 CONSIDERACIONES TÉCNICAS Es esencial estudiar el tejido infiltrado por el clon neoplásico Ganglio linfático: linfomas Sangre periférica: LLC y linfomas leucemizados Médula ósea: linfomas con infiltración medular Otros tejidos: bazo, estómago/intestino, líquidos biológicos, en caso de infiltración
3 CONSIDERACIONES TÉCNICAS Citogenética convencional. Tipo de cultivo segun la madurez de las células Células inmaduras: Cultivos directos (Burkitt) Cultivos de 24h sin mitógeno (LDCG) Células maduras: Cultivos de 72h+mitógeno (LLC, LF, LM, LEZM...) FISH en tejidos Selección correcta del tejido. Selección area problema Optimización de la técnica: pretratamientos y digestión Selección correcta de la sonda a aplicar
4 IMPORTANCIA DEL ESTUDIO GENÉTICO DE LAS NEOPLASIAS LINFOIDES Diagnóstico. Clasificación OMS Pronóstico. Estratificación de pacientes Seguimiento de la enfermedad Tratamiento. Desarrollo de nuevos fármacos
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6 LEUCEMIA LINFÁTICA CRÓNICA CC Alteraciones de 13q 10% 55% Alteraciones de 11q 8% 18% Trisomía 12 19% 16% Alteraciones de 17p 4% 7% Alteraciones de 6q 6% 7% Alteraciones de 14q 4% 4% *Second IWCCLL, Juliusson et al. 1991; **Heidelberg Study, Döhner et al ifish
7 LEUCEMIA LINFÁTICA CRÓNICA Alteraciones citogenéticas en la LLC Ninguna alteración es específica de esta patología: NO BIOMARCADORES DIAGNÓSTICOS Porcentajes de casos alterados variables según la técnica utilizada (CC ó FISH) Dificultad de obtener metafases del linfocito B tumoral Alteraciones pequeñas, crípticas por CC FISH
8 133 mo 114 mo 32 mo 79 mo 111 mo
9 haematologica 2009; 94(3)
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12 RESURGIMIENTO DE LA CITOGENÉTICA CONVENCIONAL EN LA LLC?
13 Citogenética convencional En casos de diagnóstico dudoso el cariotipo puede ayudar a definir el diagnóstico Linfoma del manto leucemizado con t(11;14) Linfoma folicular leucemizado con t(14;18)» Aunque entre 3-5% LLC pueden tener la t(14;18) Sólo se obtienen cariotipos alterados en el 40-50% casos: importante usar IL2+OCPG FISH LEUCEMIA LINFÁTICA CRÓNICA Esencial para determinar presencia/ausencia de alteraciones con valor pronóstico: del(11)(q22q23) y del(17)(p13)
14 TRANSLOCACIONES CROMOSÓMICAS DE LOS LINFOMAS B Las translocaciones en los linfomas B afectan mayoritariamente a los genes de las inmunoglobulinas: cadena pesada, IGH cadenas ligeras, IGK e IGL
15 t(14;18)(q32;q21) t(2;18)(p11;q21) t(18;22)(q21;q11) BCL2 LF (85%) LDCG (12-30%) Linfomas doble hit (15%) t(11;14)(q13;q32) CCND1 LCM (90-95%%) t(11;18)(q21;q21) t(14;18)(q32;q21) MALT1 L MALT (20-50%) t(3;v)(q27;v) BCL6 LDCG (30-40%) LF (15%) Linfomas doble/triple hit (5-10%) t(8;14)(q24;q32) t(2;8)(p11;q24) t(8;22)(q24;q11) MYC LB (90-100%) LDCG (10%) Linfomas doble hit (35-50%)
16 LINFOMA FOLICULAR Alteración primaria: t(14;18)(q32;q21), IGH/BCL2 Incidencia variable según grado histológico 85-90% LF grados 1 y 2 75% LF grado 3A 15% LF grado 3B Variantes t(2;18)(p11;q21) y t(18;22)(q21;q11) poco frecuentes t(14;18) muy característica pero no específica del LF 15-30% LDCG 5% LLC t(14;18) IGH/MALT1 cromosómicamente idéntica
17 IGH, 14q32 BCL2, 18q21
18
19 46,XY,der(4),del(7)(q22),del(10)(q22),inv(11)(p11q25)
20 IGH, 14q32 BCL2, 18q21
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22 LINFOMA FOLICULAR Alteraciones secundarias, 90% casos +7, +8, +12, +3, +18, +X, 10-20% casos t(3;v)(q27;v), BCL6, 5-15%, grados 3B del(6)(q21), 60% FISH del(17)(p13), 20% FISH Cariotipos complejos: pronóstico desfavorable
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24 LINFOMA DE CÉLULAS DEL MANTO Alteración primaria: t(11;14)(q13;q32), IGH/CCND1 Alteración altamente específica de LCM Incidencia 65-70% CC 90-95% FISH 40-70% PCR, según primers utilizados Se ha descrito también en Mieloma Múltiple Raramente t(2;11)(p11;q13) ó t(11;22)(q12;q11) 5% de LCM no presentan la t(11;14)(q13;q32): CCND1-
25 46,XX,t(11;14)(q13;q32) IGH, 14q32 CCND1, 11q13
26 55%
27 5 IGK 3 IGK 5 CCND2 3 CCND2 t(2;12)(p12;p13) IGK-CCND2
28 Alteraciones secundarias, 50-90%
29 PRONÓSTICO DE LAS ALTERACIONES SECUNDARIAS, CITOGENÉTICA CONVENCIONAL
30 Indicadores de mal pronóstico: Cariotipo complejo Ganancias 3q27-qter Pérdidas 8p21-pter, 9p21-pter, 9q21-q32
31 LINFOMA DE LA ZONA MARGINAL EXTRANODAL TIPO MALT Alteraciones citogenéticas más frecuentes t(11;18)(q21;q21), API2/MALT Incidencia 20-50% Linfoma MALT gástrico y pulmonar Resistencia a terapia erradicadora de Helicobacter pylori: Biomarcador predictivo de respuesta t(14;18)(q32;q21), IGH/MALT Incidencia 10-20% Linfoma MALT de conjuntiva/órbita y glándula salival, piel (?)
32 t(11;18)(q21;q21) API2/MALT1 5 MALT1 3 MALT1
33 LINFOMA DE LA ZONA MARGINAL EXTRANODAL TIPO MALT Otras alteraciones citogenéticas t(1;14)(p22;q32), IGH/BCL10 Incidencia 5% Linfomas MALT de alto grado t(3;14)(p14;q32), IGH/FOXP1 Incidencia 10% Linfoma MALT de conjuntiva/órbita, tiroides, piel (?) Nunca en estómago, glándula salival y en otros linfomas marginales Trisomías 3 y 18 +3: 20-60%,variable según tipo de tejido y series. No papel en progresión +18: más frecuente en linfomas MALT de alto grado
34 LINFOMA DIFUSO DE CÉLULA GRANDE Alteraciones primarias t(14;18)(q32;q21), IGH/BCL2 Incidencia 15-30% Casos que derivan de un LF previo La gran mayoría de casos presentan alteraciones secundarias asociadas t(3;v)(q27;v), BCL6 Incidencia 5-10% CC; 20-30% FISH Gran variedad de parejas de reordenamiento: 14q32, 2p11, 22q11, 4p11, 6q21, 11q23 t(8;14)(q24;q32), IGH/MYC Incidencia 7-10% CC+FISH
35 48,XX,t(3;14)(q27;q32),+2mar
36 LINFOMA DIFUSO DE CÉLULA GRANDE Alteraciones secundarias Trisomías 3, 5, 6, 11, 12, 18 y X Ganancias 1q, 6p Deleciones 1p, 6q, 7q32-ter, 8p, 9p, 11q, 17p ABC: Ganancias 3/3q, 18q21-22, deleciones 6q21 GCB: Ganancias 12p12
37 54,XX,+1,+5,del(6)(q25),+7,add(9p),del(11q),add(17)(p13), +19,+21,+22,+2mar
38 LINFOMA DIFUSO DE CÉLULA GRANDE Valor pronóstico de las alteraciones citogenéticas Translocaciones de MYC: pronóstico desfavorable Dobles y triples hits (MYC, BCL2, BCL6): pronóstico desfavorable cuando MYC implicado Translocaciones de BCL6 y BCL2: no valor pronóstico
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41 LINFOMA DE BURKITT Alteracion primaria: t(8;14)(q24;q32), IGH/MYC Característica pero no específica de LB: también en LDCG Incidencia 70-80% Variantes: t(2;8)(p11;q24),10-15% t(8;22)(q24;q11), 2-5% 10%: ausencia de translocación de MYC Punto de rotura de IGH/MYC muy variable, no PCR Formas endémicas: rotura en IGHV Formas esporádicas: rotura en IG switch region
42 LINFOMA DE BURKITT Alteraciones secundarias Duplicaciones 1q21q25 Deleciones 6q11q14 Deleciones 17p13 +12, +7, +8, +18
43 46,XY,add(6)(q27),t(8;14)(q24;q32),der(9)
44 QUÉ ESTUDIOS CITOGENÉTICOS HACEMOS EN LOS LINFOMAS? Citogenética convencional Importante seleccionar muestra tumoral y tipo cultivo Cultivo de ganglios limitado por cantidad de tejido Si obtenemos metafases pueden ser muy informativas FISH Elección de sonda según diagnóstico. Altamente específica Complementar con PCR. Muy sensible Seguimiento EMR
45 CONSIDERACIONES TÉCNICAS Para interpretar los resultados citogenéticos siempre tener en cuenta: los datos clínicos, citológicos, histológicos, inmunofenotípicos y de biología molecular DIAGNÓSTICO INTEGRADO
46 AGRADECIMIENTOS Laboratori de Citogenètica Molecular Laboratori de Citologia Hematològica Laboratori de Biologia Molecular Servei de Patologia Servei d Hematologia Clínica
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49 BIOMARCADORES Los biomarcadores pueden ser: proteínas (ej determinados antígenos), perfiles genéticos, epigenéticos y de proteómica; proporcionan información específica sobre un proceso de la enfermedad Marcador diagnóstico se basa en el reconocimiento inicial de cáncer o bien en su recidiva. Marcador pronóstico proporciona información perteneciente a la historia natural de la enfermedad, la probabilidad de recidiva de la enfermedad y la duración de la remisión. Independiente del tto. Marcador predictivo identifica la probabilidad de respuesta a un agente o modalidad terapéutica específicos.
50 LEUCEMIA LINFÁTICA CRÓNICA Qué papel van a tener los arrays genómicos? FISH: del(13q) y +12 Array: del(13q), +12, +18, +19 CC: 49,XX,+12,+18,+19 Ventajas: -Elevada resolución, detecta alt. pequeñas -Informa de todo el genoma Limitaciones: -Sensibilidad baja: mín. 30% infiltración -Precio? euros
51 LINFOMA FOLICULAR Detección Enfermedad Mínima Residual (EMR) El seguimiento de la EMR con técnicas de PCR cuantitativa a tiempo real proporciona información sobre la cinética de aparición/desaparición de células patológicas circulantes Los datos obtenidos pueden ser predictivos de recaída o remisión continuada La obtención de respuesta molecular (RM) disminuye el riesgo de recaída aumenta el tiempo libre de enfermedad La consecución de RM no es sinónimo de curación Con el estado de conocimiento actual, la obtención de RM debe ser uno de los objetivos del tratamiento? En el LF, el beneficio de conseguir RM está aún por dilucidar La t(14;18) se ha hallado en un 50% de indivíduos sanos, en proporciones muy bajas, !!
52 LEUCEMIA LINFÁTICA CRÓNICA Del(11q) Poco detectada por CC (3%) vs FISH (18%) Genes candidatos: ATM, RDX, PPP2R1B, IL1BC, Caspasas 1, 4 y 5 Correlaciones clínicas: individuos jóvenes, predominancia de sexo masculino estadios avanzados, adenomegalias resistencia al tratamiento rápida progresión de la enfermedad y supervivencia corta
53 LEUCEMIA LINFÁTICA CRÓNICA Del(17)(p13) Poco frecuente de novo (2-4%), más frecuente en pacientes refractarios a tratamiento (30%) Genes implicados: TP53 Correlaciones clínicas Estadios avanzados, linfadenopatias, síntomas B Requerimiento rápido de tratamiento Resistencia al tratamiento, supervivencia corta
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55 RESURGIMIENTO DE LA CITOGENÉTICA?
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58 Qué debemos recordar? LLC +12, del (13q), del (11q), del(17p): Ninguna exclusiva Pronóstico desfavorable: del(17)(p13), del(11)(q22q23) LZME del(7q), +3: no exclusivas No alteraciones claramente asociadas a pronóstico LMALT t(11;18): gástricos y pulmonares; resistencia tratamiento H. Pylori Otras poco frecuentes: t(14;18) IGH/MALT, t(1;14) IGH/BCL10, t(3;14) FOXP1/IGH Trisomías 3, 18 LF t(14;18)(q32;q21), IGH/BCL2: característica pero no exclusiva 90% casos alteraciones secundarias No alteraciones claramente asociadas a pronóstico LM t(11;14)(q13;q32), CCND1/IGH: muy característica! Pronóstico desfavorable: +3q, del(17)(p13) LDCG t(14;18)(q32;q21), IGH/BCL2; t(3;v)(q27;v), BCL6; t(8;14)(q24;q32), IGH/MYC Cariotipos complejos Doble y triple hits: pronóstico desfavorable LB t(8;14)(q24;q32), IGH/MYC: característica pero no exclusiva 10% casos sin translocación MYC
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