Mesa redonda: Agentes etiológicos y diagnóstico microbiológico de diarreas. 3er Congreso Bioquímico de Córdoba. 3-5 Septiembre, 2015

Transcripción

1 Mesa redonda: Agentes etiológicos y diagnóstico microbiológico de diarreas Riesgo de infección por rotavirus por ingestión de aguas superficiales de uso recreacional en Córdoba, Argentina. Estudio de caso: Complejo hídrico Embalse San Roque-Río Suquia. 3er Congreso Bioquímico de Córdoba. 3-5 Septiembre, 2015 Dra. Silvia V. Nates

2 AGENTES ETIOLOGICOS DE DIAREA Adenovirus 40/41 rotavirus norovirus astrovirus

3 Los rotavirus son los agentes etiológicos más frecuentes de diarrea aguda en población infantil en el mundo

4 ESTIMACION MUNDIAL DE LA ENFERMEDAD POR ROTAVIRUS EVENTO RIESGO Muertes: : 293 Internaciones: 2 millones 1: 65 Consultas ambulatorias: 25 millones 1: 5 Episodios domiciliarios: 111 millones 1: 1 Emerging Infect Dis Vol 9, May, 2003

5 Impacto de la enfermedad por rotavirus en la admision hospitalaria por diarrea. Hospital Infantil Municipal, Córdoba, Argentina Rotavirus: Un tercio de los casos de diarrea severa que requieren hospitalizacion. 35,0%

6 Disminución del 85% de los episodios de diarrea grave por rotavirus, Disminución del 86% de las internaciones por gastroenteritis por rotavirus.

7 DIAGNOSTICO POR LABORATOIO Prueba de inmunocromatografía: Sensibilidad del 92% (84-99%, IC 95%) Especificidad del 91% (78-100%, IC 95%), Ensayo de inmunocromatografía: una opción para el diagnóstico rápido y certero de rotavirus en materia fecal. Macedo R, Barril P, Giordano M, Nates S. Revista on line COBICO

8 Mecanismo de Transmisión Fecal-oral

9 Alta carga viral en materia fecal. Alta carga viral en aguas servidas convirtiendo las aguas residuales y toda matriz acuosa en contacto con aguas servidas, en fuentes potenciales de infección por rotavirus

10 Riesgo de infección por rotavirus por ingestión de aguas superficiales de uso recreacional en Córdoba, Argentina. Estudio de caso: Complejo hídrico Embalse San Roque-Río Suquia.

11 Materiales y Métodos

12 Sitios de monitoreo y frecuencia Bajo Grand e - Muestreo de Aguas : estacional. Estación húmeda: (Octubre-Marzo; Estación seca (Marzo-Septiembre) (n=28); 2 muestras por mes. Año 2010

13 Análisis bacteriológicos Coliformes totales y fecales. Técnica: Número más probable (MPN), de acuerdo a métodos standard. Niveles guia: Agencia de Protección del Ambiente (EPA) de los Estados Unidos de América (USA). Coliformes totales / Coliformes termotolerantes 200 / 200

14 Concentración de virus Volume de muestra: 1.5-litros Concentración 100 veces Método: Centrifugaciones, elusion y precipitación con PEG.

15 Detección de genoma viral: Rotavirus. Extracción del ácido núcleico y síntesis de cdna Detección molecular de genoma viral por PCR con primers específicos.

16 Detección de enterovirus viable. La infectividad fue evaluada por inoculación de las muestras concentradas en cultivos celulares de la línea celular HEp-2 y revelado por inmunofluorescencia con un panel de anticuerpos monoclonales

17 Resultados

18 Coliformes totales y Coliformes termotolerantes Bajo límite de valor guia Arriba límite de valor guia

19 Detección de rotavirus, y enterovirus viable BAJO GRANDE Detección viral Se detectó: En todos los puntos de muestreo del río, en las 4

20 Análisis de resultados El Embalse San Roque genera el nacimiento del Río Suquía con aguas de calidad bacteriológica aceptable pero con carga de rotavirus y enterovirus viable. La detección de enterovirus viable señala la presencia de virus con potencial infectivo en el agua.

21 La detección de virus en agua señala el riesgo potencial de infección viral en individuos expuestos a esa matriz acuosa.

22 EVALUACIÓN CUANTITATIVA DE RIESGO MICOBIOLÖGICO (QMRA) POR EXPOSICIÓN A AGUAS MICOBIOLOGICAMENTE CONTAMINADAS

23 EVALUACION CUANTITATIVA DE RIESGO MICROBIOLOGICO (QMRA) Una estimación matemática de la relación entre la dosis administrada y la probabilidad de infección.

24 Materiales y Métodos

25 Cuantificación de genoma de rotavirus (carga viral). Extracción del ácido y síntesis de cdna Cuantificación de la carga viral por qrt-pcr

26 Análisis dosis-respuesta (probabilidad de infección en individuos expuestos)» β-poisson dose response model: Dosis: Volumen de agua ingerido; Partículas infectivas. Eficiencia del método de concentración y extracción de ácido nucleico PI(d) Es la probabilidad o riesgo de infección en una exposición individual a la dosis estimada α = Constante de infectividad del patógeno que caracteriza la relación dosis-respuesta (rotavirus ) N 50 = El número de patógenos requeridos para causar una infección en el 50% de la población expuesta (rotavirus 6.17)

27 Procesamiento estadístico de datos: Simulación de Montecarlo Probabilidad media de infección por punto muestreado, con los correspondientes límites de confianza.

28 Resultados

29 Río Suquia: Probabilidad de infección por ingestión de 10 ml de agua (contacto secundario)

30 Que la infección viral se traduzca en enfermedad depende de: Edad Estado inmunológico del individuo infectado.

31 Utilidad de estimar dosis-respuesta (probabilidad de infección en individuos expuestos) Identificar sitios con mayor riesgo de exposición. (diferentes sitios de recreación) Evaluar políticas de intervención. Quantification of human infection risk caused by rotavirus in surface waters from Córdoba, Argentina. Prez VE1, Gil PI1, Temprana CF2, Cuadrado PR1, Martínez LC1, Giordano MO1, Masachessi G1, Isa MB1, Ré VE1, Paván JV1, Nates SV1, Barril PA1* En prensa, Science of the total environment, 2015

32 Gracias!!!!

33 Bibligrafía First detection of hepatitis E virus in Central Argentina:Environmental and serological survey. Maribel G. Martínez Wassaf, María B. Pisano, Patricia A. Barril,Osvaldo C. Elbarcha, Marcelo A. Pinto, Jaqueline Mendes de Oliveira,Pablo DiGiusto, Silvia V. Nates, Viviana E. Ré J Clin Virol Nov;61(3): Quantification of human infection risk caused by rotavirus in surface waters from Córdoba, Argentina. Prez VE1, Gil PI1, Temprana CF2, Cuadrado PR1, Martínez LC1, Giordano MO1, Masachessi G1, Isa MB1, Ré VE1, Paván JV1, Nates SV1, Barril PA1*, Science of the total environment, 2015 Evidence of Hepatitis A virus circulation in central Argentina: Seroprevalence and environmental surveillance. Yanez LA, Lucero NS, Barril PA, Díaz Mdel P, Tenaglia MM, Spinsanti LI, Nates SV, Isa MB, Ré VE. Elpizarrondelagua.blogspot.com.ar J Clin Virol. 61:

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