Estudio de Bioequivalencia de Clonazepam

Transcripción

1 Universidad de Chile Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas Departamento Ciencias y Tecnología Farmacéutica Estudio de Bioequivalencia Estudio solicitado por Laboratorio Chile S.A.

2 Estudio de Bioequivalencia

3 Resumen Lugar del Estudio: Centro de Desarrollo en Tecnología Farmacéutica, Universidad de Chile, Santiago, Chile. Objetivo: Comparar la velocidad y cantidad de la absorción de Clonapam (Clonazepam mg Laboratorio Chile) comprimidos, test, versus Ravotril comprimidos mg (Laboratorio Roche), referencia, administrado en dosis única (a igual dosis de mg) a voluntarios en ayunas. Metodología: Clínica: Estudio randomizado, cruzado de x, que corresponde a dos períodos de administración en el que cada sujeto sirve como su propio control. La dosis administrada fue de mg. Analítica: HPLC con detector UV a 33 nm. Estadística: Se determinó la normalidad de los parámetros farmacocinéticos y de sus formas logarítmicas mediante el test de Shapiro-Wilks. Se aplicó el análisis de igualdad de medias (t de Student para datos pareados) a los parámetros con y sin transformación logarítmica. A los parámetros que no siguieron una distribución normal se les aplicó el test de rangos signados de Wilcoxon. Siguiendo las recomendaciones de la Food and Drug Administration (FDA) se aplicó el método Two one-sided para las transformaciones logarítmicas de ABC y Cmáx y se construyeron los respectivos intervalos de confianza. El análisis estadístico se realizó mediante el programa Statistical Analysis System (SAS) disponible en la Red de la Universidad de Chile. Sujetos: 17 sujetos. Criterio de inclusión: Sujetos sanos (historia médica, examen físico, exámenes de laboratorio clínico) masculinos, adultos 1-33 años. Parámetros Farmacocinéticos: Clonapam Ravotril Parámetros Media±DS CV (%) Media±DS CV (%) ABC ( a t) 57. ± ± 5.1 (ng h/ml) Cmáx (ng/ml) 1.9 ± ± Tmáx 1.5 ± ± Exposición.1 ± ± temprana (ng h/ml) Comparación de tratamientos Clonapam versus Ravotril. Análisis Relación Intervalo de confianza estadístico Clonapam / Ravotril límites observados ABC - t 11. % % C máx 5.1 % ,7 % Exposición temprana p value =.793 Los límites observados en la relación Clonapam/Ravotril para los parámetros ABC y Cmáx están dentro del intervalo de bioequivalencia, -15%. El análisis estadístico para la exposición temprana-indicativo de la velocidad de absorción-indica que no existen diferencias estadísticamente significativas. En consecuencia, no se detectaron diferencias en los parámetros que miden cantidad absorbida y velocidad de absorción, por lo que ambos Estudio de Bioequivalencia 3

4 productos pueden ser considerados bioequivalentes. Estudio de bioequivalencia de clonazepam solicitado por Laboratorio Chile. Introducción El clonazepam es una benzodiazepina utilizada como anticonvulsivante. Tiene una vida media larga, de alrededor de 3 horas, aunque se pueden encontrar valores que fluctúan entre y horas. La variabilidad en su vida media es típica de fármacos en los cuales su eliminación ocurre principalmente por metabolización. Se administra en preparados de liberación convencional y su absorción suele ser del orden de un 9%. El máximo de concentración plasmática se encuentra aproximadamente horas después de su administración. Objetivo del estudio Establecer la bioequivalencia de un comprimido de mg de Laboratorio Chile, utilizando como referencia el producto innovador Ravotril mg. Materiales y métodos 1.- Productos en estudio El producto evaluado correspondió a una formulación de Clonapam comprimidos de mg fabricado por Laboratorio Chile, lote fecha de expiración 5/. Como referencia se utilizó Ravotril comprimidos de mg, fabricado por Laboratorio Roche, lote B111, fecha de expiración 3/..- Sujetos En el estudio participaron 17 sujetos jóvenes, sanos, varones, no fumadores. La selección la hizo el médico participante y en base a los criterios de inclusión, exámenes médicos y pruebas de laboratorio clínico. Los criterios de inclusión fueron: sanos, varones, entre y 3 años de edad, no fumadores, con una relación peso/talla normal, patrón normal de alimentación y pruebas de laboratorio clínico y examen médico que demostraron su estado de buena salud. Los valores significativamente anormales en los exámenes médicos o de laboratorio clínico, alcoholismo, enfermedades preexistentes que comprometieran la funcionalidad hepática y renal, discrasias sanguíneas y proteinuria, fueron considerados como factores de exclusión. 3.- Exámenes médicos y pruebas de laboratorio clínico. Los sujetos fueron sometidos a un examen físico por parte del médico que supervisó las experiencias (Anexo 1). Se realizó una anamnesis remota para detectar enfermedades previas, historia de enfermedad hematológica, cardiovascular, gastrointestinal, hepática o renal, abuso de fármacos o alcoholismo. Como pruebas de laboratorio clínico se realizaron: hemograma con VHS, GPT, GT, fosfatasas alcalinas totales, bilirrubina total y directa, creatinina endógena, glicemia, proteínas totales y análisis completo de orina. Se incluyó la prueba de VIH..- Obtención del consentimiento informado. El estudio se hizo de acuerdo a las normas internacionales de experimentación en humanos. Se solicitó la aprobación del protocolo al Comité de Etica del Hospital Clínico de la Universidad de Chile. Se realizó una charla a los voluntarios, que tuvo por finalidad explicar en detalle el estudio, haciendo especial énfasis en el tipo de medicamento a utilizar, la dosis, las reacciones adversas que presenta el fármaco, el volumen de sangre que se extraería en cada experiencia, el material con que se Estudio de Bioequivalencia

5 obtendrían estas muestras, el personal encargado de obtenerlas y de supervigilar la experiencia, las restricciones alimenticias a las que se verían enfrentados y toda la información que ellos requirieron para decidir libremente su participación en el estudio y firmar el consentimiento informado (Anexo ). Los sujetos que consintieron en participar fueron entonces sometidos a revisión médica y se analizaron los exámenes de laboratorio clínico. En esta etapa el médico decidió la nómina de los 17 sujetos que finalmente participaron en el estudio. 5.- Desarrollo de los experiencias Tres días antes del inicio de cada experiencia los voluntarios debieron abstenerse de ingerir medicamentos, alcohol y cualquier alimento o bebida que contuviera metilxantinas. Estas restricciones se mantuvieron durante todo el tiempo en que se obtuvieron las muestras. El día de la experiencia llegaron con un ayuno de 1 horas. La enfermera universitaria les puso una mariposa en una vena del brazo y obtuvo una muestra de sangre a la que se denominó tiempo cero. Posteriormente cada sujeto recibió el producto asignado para ese día de acuerdo con el diseño experimental, el que fue ingerido entero con 15 ml de agua. El ayuno se mantuvo hasta horas después del inicio de la experiencia y los voluntarios permanecieron en reposo, en cama, durante las primeras horas de la experiencia. El esquema de alimentación fue el siguiente: a las horas de comenzada la experiencia se sirvió el desayuno, a las horas el almuerzo, a las 11 horas la cena y a las 1 horas una colación igual al desayuno. El tipo de alimentación correspondió a una dieta normal para la población chilena. El período de depuración entre una administración y otra fue de 3 semanas y las experiencias se hicieron bajo supervisión médica. Toma de muestras: se obtuvieron muestras de sangre a los tiempos: -,5-1- 1,5 - -, y 9 horas Tratamiento y almacenamiento de las muestras: se recolectaron en tubos heparinizados, se centrifugaron para separar el plasma, el que fue congelado a - C hasta su análisis por HPLC..- Diseño experimental El estudio de bioequivalencia se realizó de acuerdo a una secuencia de administración según un diseño cruzado de x, que corresponde a dos períodos de administración y donde cada sujeto sirve como su propio control. La dosis administrada fue de mg. Voluntarios Período 1 Período Determinación en plasma. La metodología analítica se encuentra en el anexo Análisis farmacocinético. Se obtuvieron los siguientes parámetros: área bajo la curva de concentración plasmática versus tiempo (ABC), concentración máxima (Cmáx), tiempo al cual se obtiene la concentración máxima (tmáx) y exposición temprana. El ABC fue calculado por el método de los trapecios. Los Cmáx y tmáx fueron estimados por observación de las curvas experimentales de concentración plasmática versus tiempo. La exposición temprana fue calculada como el ABC acumulativa obtenida para ambos productos hasta el tiempo máximo del producto de referencia..- Análisis estadístico. Se determinó la normalidad de los parámetros farmacocinéticos y de sus formas Estudio de Bioequivalencia 5

6 logarítmicas mediante el test de Shapiro-Wilks. Se aplicó el análisis de igualdad de medias (t de Student para datos pareados) a los parámetros con y sin transformación logarítimica. A los parámetros que no siguieron una distribución normal se les aplicó el test de rangos signados de Wilcoxon. Siguiendo las recomendaciones de la Food and Drug Administration (FDA) se aplicó el método Two one-sided para las transformaciones logarítimicas de ABC y Cmáx y se construyeron los respectivos intervalos de confianza. El análisis estadístico se realizó mediante el programa Statistical Analysis System (SAS) disponible en la Red de la Universidad de Chile. Resultados y discusión Este trabajo fue originalmente planteado como un estudio en dosis múltiples, atendiendo a que las concentraciones plasmáticas que se obtendrían con una dosis única de clonazepam podrían tener una limitación de tipo analítico. Los problemas asociados a la administración de este fármaco en dosis múltiple en voluntarios sanos fueron una excesiva somnolencia, que les impedía realizar cualquier tipo de actividad, por lo que el estudio debió replantearse a la modolidad de dosis única. En ningún momento se consideró la alternativa de hacer el estudio en dosis múltiple en pacientes, por problemas de tipo ético. El trabajo se inició con 17 sujetos y ninguno de ellos abandonó el estudio. Su edad promedio fue de 5 + 3,5 años, su peso promedio de 7.±11,7 Kg y su altura promedio fue de 1.7±, m. Todos ellos presentaron una relación normal peso/talla y fueron considerados sanos de acuerdo con el examen físico que les hizo el médico y los resultados de las pruebas de laboratorio clínico. En las tablas 1 y 3 se observan las concentraciones plasmáticas obtenidas para cada sujeto con el producto en estudio y el de referencia. Las tablas y corresponden a los valores promedios con las respectivas medidas de dispersión obtenidos para ambos productos: este comportamiento promedio puede apreciarse gráficamente en la Figura 1. Es posible apreciar una variabilidad similar para ambos productos en estudio. En el Anexo se encuentran las figuras con el comportamiento por voluntario con ambos productos. En las tablas 5 a se encuentran resumidos los parámetros farmacocinéticos obtenidos en este estudio. Consecuente con la variabilidad en los perfiles de concentración plasmática, también se observa una gran variabilidad interindividual en estos parámetros. Todos los parámetros farmacocinéticos analizados -ABC, Cmáx, tmáx y exposición temprana- resultaron estadísticamente semejantes entre ambos productos (Anexo 5). El criterio de bioequivalencia de la FDA requiere que el intervalo de confianza al 9% de la diferencia entre los valores de las medias del ABC y Cmáx del producto en estudio y el de referencia debe caer dentro de los límites -15%. El análisis de la exposición temprana ha sido considerado por el FDA como un mejor indicador que el tmáx de la velocidad de absorción. En consecuencia, ambos productos no presentan diferencias en la cuantía y en la velocidad de absorción, por lo que pueden ser considerados bioequivalentes. Estudio de Bioequivalencia

7 Tabla 1 Concentraciones plasmáticas individuales (ng/ml) obtenidas después de administrar producto innovador a 17 voluntarios. Tiempo Vol. 1 Vol. Vol. 3 Vol. Vol. 5 Vol. Vol. 7 Vol. Vol. 9 Vol. 1 Vol. 11 Vol. 1 Vol. 13 Vol. 1 Vol. 15 Vol. 1 Vol Tabla Concentraciones plasmáticas promedio (ng/ml) de los 17 voluntarios con el producto innovador. Tiempo Promedio Desviación Coeficiente de Estándar Variación (%) Tabla Concentraciones plasmáticas promedio (ng/ml) de los 17 voluntarios con el producto en estudio. Tiempo Promedio Desviación Coeficiente de Estándar Variación (%) Tabla 3 Concentraciones plasmáticas individuales (ng/ml) obtenidas después de administrar producto en estudio a 17 voluntarios. Tiempo Vol. 1 Vol. Vol. 3 Vol. Vol. 5 Vol. Vol. 7 Vol. Vol. 9 Vol. 1 Vol. 11 Vol. 1 Vol. 13 Vol. 1 Vol. 15 Vol. 1 Vol Estudio de Bioequivalencia 7

8 Figura 1 Perfiles promedio de concentraciones plasmáticas versus tiempo. Tabla Concentraciones plasmáticas máximas (ng/ml) observadas después de la administración de los productos en estudio. Concentración plasmática (ng/ml) 1 1 Tabla 5 1 T i e m p o ( H r s. ) Areas bajo la curva de concentración plasmática versus tiempo (ngh/ml) entre el tiempo cero y el último punto experimental con concentraciones cuantificables de clonazepam, obtenidas después de la administración de los productos en estudio. Voluntario Innovador Estudio Promedio Desviación estándar Coeficiente de variación (%) Voluntario Innovador Estudio Promedio Desviación estándar Coeficiente de variación (%) Tabla 7 Tiempos máximos (horas) observados después de la administración de los productos en estudio. Voluntario Innovador Estudio Promedio Desviación.7.93 estándar Coeficiente de 3.3. variación (%) Estudio de Bioequivalencia

9 Tabla Exposición temprana, expresada como el área bajo la curva de concentración plasmática versus tiempo (ngh/ml) obtenida hasta el tiempo máximo del producto de referencia. Voluntario Innovador Estudio Promedio.7.1 Desviación estándar Coeficiente de variación (%) Parámetro p value two one sided test Intervalo de confianza ABC. y Cmáx. y Exposición temprana.793 Estudio de Bioequivalencia 9

10 Anexo Perfiles de concentración plasmática para cada voluntario con ambas formulaciones Voluntario Voluntario Voluntario Voluntario Voluntario 3 Voluntario Estudio de Bioequivalencia

11 Voluntario 7 Voluntario Voluntario Voluntario Voluntario 9 Voluntario Estudio de Bioequivalencia 11

12 Voluntario 13 Voluntario Voluntario 1 Voluntario Voluntario Estudio de Bioequivalencia

13 Anexo 5 Análisis estadístico Análisis de datos de clonazepam in vivo en escala logarítmica. log: C:\Correlación\analclonaLn.log log type: text opened on: 1 Jan,17:5: Análisis de varianza para el área bajo la curva entre cero y t.. pkcross Inabcot sequence variable = sequence período variable = period treatment variable = treat carryover variable = carry id variable = id Analysis of variance (ANOVA) for a x crossover sfudy Source of Variation Partial SS df MS F Prob > F Intersubjects Sequenca effect Residuals Intrasubjects Treatment effect Period effect Residuals Total 9. 9 Omnibus measure of separability of treatment and carryover =.%.- Análisis de varianza para Cmáx.. pkcross Incmax sequence variable = sequence period variable = period treatment variable = treat carryover variable = carry id variable = id Analysis of variance (ANOVA) for a x crossover study Source of Variation Partial SS df MS F Prob> F Intersubjects Sequence effect Residuals Intrasubjects Treatment effect Period effect Residuals Total. 9 Omnibus measure of separability of treatment and carryover =.% 3.- Prueba de bioequivalencia para área bajo la curva entre cero y t. pkequiv Inabcot treat period sequence id, tost anderson Classic confidence interval for bioequivalence (equivalence limits) (test limits) difference: ratio: % 1% 5.53% 9.13% probability test limits are wilhin equivalence limits =.97 Schuirmann's two one-sided tests upper test statistic = -9.7 p-value =. lower test statistic = p-value =. Anderson and Hauck's test noncentrality parameter =.393 test statistic = -.5 empirical p-value =.1 note: reference treatment = 1 Estudio de Bioequivalencia 13

14 .- Prueba de bioequivalencia para Cmáx. pkequiv Incmax treat period sequence id, tost anderson Classic confidence interval for bioequivalence (equivalence limits) (test limits) difference: ratio: % 1% 9.1% 1.7% probability test limits are within equivalence limits = 1. Schuirmann's two one-sided tests upper test statistic = -.99 p-value =. lower test statistic =.7 p-value =. Anderson and Hauckts test noncentrality parameter = 5. test statistic = -1.1 empirical p-value =. note: reference treatment = 1.log close log: C:\Correlación\analclonaLn.log log type: text closed on: 1 Jan,1::13 las medias Grados de libertad 3 Estadístico,53 P(T<= ) una cola,39339 Valor crítico de (una 1,93 cola) P(T<= ) dos colas,7979 **no hay diferencia Valor crítico de (dos,3931 con p- colas) value=.797 Prueba para dos muestras suponiendo varianzas desiguales tetr telp Media,735,15 Varianza 35,777 39,51 Observaciones diferencia hipotética de las medias Grados de libertad 3 Estadístico,53 P(T<= ) una cola,39339 Valor crítico de (una 1,93 cola) P(T<= ) dos colas,7979 **no hay diferencia Valor crítico de (dos,3931 con p- colas) value Análisis estadístico para exposición temprana Prueba para dos muestras suponiendo varianzas iguales tetr tetp Media,735,15 Varianza 35,777 39,51 Observaciones Varianza agrupada 37,31199 Diferencia hipotética de 1 Estudio de Bioequivalencia