RSV Respi - Strip (C-1006)
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- Lucía del Río Mendoza
- hace 5 años
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1 RSV Respi - Strip (C-1006) Test immunocromatográfico in vitro para diagnosticar el Virus Sincicial Respiratorio en las secreciones nasofaringeas USO IN VITRO Referencia: C-1006, 25 tests por estuche I. INTRODUCCIÓN El Virus Sincicial Respiratorio (VSR o RSV) ocasiona muy a menudo enfermedades respiratorias tanto en bebés como en adultos. Representa la causa mas importante de infecciones graves del aparato respiratorio en pediatría y mas particularmente en niños de edades inferiores a 4 años. También es responsable de problemas graves en personas de cierta edad y en inmunodeficientes, siendo una razón importante de mortalidad. Las pulmonías y bronquiolotis son las dos infecciones más severas en niños de 2 a 6 meses, siendo menos importantes en niños mayores o en adultos, limitándose entonces a secreciones nasales y derrames parecidos a resfriados. Anualmente hasta el 50% de las infecciones por el VSR en los niños ocasionan el 70% de las bronquiolitis, causando entre y hospitalizaciones en los Estados Unidos en recién nacidos y niños que padecen asma, problemas pulmonares o cardiacos. Además, la bronquiolitis causada por VSR durante el primer año de vida es uno de los factores de riesgo mas determinantes en el desarrollo futuro de problemas asmáticos. El VSR es una enfermedad altamente contagiosa si se entra en contacto con secreciones respiratorias. Es también una infección nosocomial corriente con una prevalencia que aumenta cuando hay reuniones de la población. El VSR ataca tanto el aparato respiratorio superior que el inferior, pero las neumonías y bronquiolitis son las dos enfermedades clásicas del aparato inferior. La bronquiolitis se identifica gracias a una tos, un silbido respiratorio, un principio de disnea, un incremento de la velocidad respiratoria hasta 40 respiraciones por minuto y un descoloramiento azulado de la piel que rodea la boca. Los síntomas mas clásicos de la pulmonía son el apuro respiratorio y crepitaciones durante las auscultaciones. II. PRINCIPIO DEL TEST El test está listo para ser utilizado y se basa en el uso de un sistema homogéneo inmunocromatográfico a base de partículas de oro. La muestra de heces debe diluirse en el tampón de dilución previsto. Una membrana de nitrocelulosa ha sido sensibilizada con anticuerpos dirigidos contra el VSR.
2 La especificidad se debe a un anticuerpo monoclonal conjugado con partículas de oro y dirigido contra los antígenos del VSR. Este conjugado se insolubiliza en una membrana de poliéster. El test permite la detección del virus ya sea en secreciones nasofaringeas ya sea en el líquido que sobrenada un cultivo si se requiere incrementar la sensibilidad. Cuando se introduce la varilla en la fase líquida de la suspensión de secreciones nasofaringeas o extractos de cultivo, el conjugado solubilizado migra por capilaridad con la muestra y el conjunto encuentra el polisuero anti-vsr adsorbido en la nitrocelulosa. Si hay VSR en la muestra, el complejo conjugado- VSR se fija a nivel del polisuero anti-vsr. El resultado puede verse al cabo de 10 minutos cuando aparece una raya rojiza en la varilla. La migración continua y la solución encuentra un segundo reactivo (un anticuerpo anti-igg de ratón) que fija el exceso de conjugado, generando otra raya rojiza. III. REACTIVOS Y MATERIALES Cada estuche contiene: 1. Varillas RSV Respi-Strip ( 25 ) Cada varilla está sensibilizada con un antisuero monoclonal de ratón anti-vsr y un polisuero de cabra anti-igg de ratón. Los reactivos están purificados por cromatografía de afinidad en proteína A o G y están adsorbidos en la nitrocelulosa. El conjugado anti-vsr se produce con un anticuerpo monoclonal de ratón dirigido contra los antígenos del VSR humano. Este anticuerpo está purificado en proteína G y acoplado a partículas de oro coloidal. Estas varillas se encuentran en un frasco con desecante. 2. Tampón de extracción (15 ml ) Solución salina tamponada de ph 7,5 con NaN3 (<0,1%), un detergente y proteínas de carga. Material necesario no suministrado: Tubos de ensayo de 3 ml o de 5 ml. Asas de siembra para la toma de muestras de heces. Material suministrado opcionalmente: Control positivo RSV (Ref. : C-1086) IV. PRECAUCIONES PARTICULARES
3 Cualquier manipulación ligada al uso del test debe hacerse respetando las Buenas Prácticas de Laboratorio (B.P.L). El RSV Respi-Strip sólo puede utilizarse para diagnósticos in vitro. Procure no tocar la nitrocelulosa con los dedos. Manipule las muestras con guantes. Tire a la basura los guantes, las escobillas, los tubos de ensayo y las varillas sensibilizadas según las B.P.L. No utilice nunca los reactivos de otro estuche. Cierre el frasco que contiene las varillas sensibilizadas inmediatamente después de haber sacado las varillas que necesite para la manipulación pues la humedad podría estropearlas. Compruebe que la bolsita desecante está dentro. Dos rayas verdes indican el lugar de adsorción de los anticuerpos. Desaparecen cuando se desarrolla la prueba. Tire el tapón de dilución si está contaminado por bacterias o mohos. No se garantiza la calidad de los reactivos si ha expirado la fecha de caducidad o si los reactivos se conservan en malas condiciones. V. CONSERVACIÓN El estuche RSV Respi-Strip puede conservarse sin abrir entre 4 y 37ºC y utilizarse hasta la fecha límite de conservación que figura en el envase. Las varillas y la solución del tampón de dilución del estuche RSV Respi-Strip permanecen estables 18 meses antes de abrirlas si se conservan en su frasco, entre 4 y 37ºC. Las varillas permanecen estables 15 semanas después de abrir el frasco si se conservan entre 4 y 37 C y en un ambiente seco. El estuche RSV Respi-Strip no debe congelarse. VI. TOMA DE MUESTRAS Las muestras nasofaringeas deben estudiarse lo antes posible después de haberse tomado. Si fuera necesario, se pueden conservar durante 24 horas entre 2 y 8ºC o a 20ºC para periodos más largos. Procure no tratar las muestras con soluciones que contengan formol o derivados del formol. VII. MODO OPERATIVO Preliminares: Si el estuche RSV Respi-Strip ha sido conservado a 4ºC, deje que los reactivos se estabilicen a temperatura ambiente antes de realizar el test. Indique el nombre del paciente o el número de muestra en el tubo de ensayo (prever un tubo de ensayo por toma). Disponga los tubos identificados en un portatubos. Modo operativo:
4 1. Si la muestra proviene directamente de un paciente (es decir sin medio de transporte) introduzca 0.25 ml u ocho gotas de la solución del tampón de extracción y 0.25 ml de la muestra para obtener una disolución 1/2. 2. Si la muestra ya viene diluida en un medio de transporte, introduzca 0.25 ml u ocho gotas de la solución del tampón de extracción y 0.25 ml de la muestra para obtener una disolución 1/2. 3. Agite para homogeneizar la solución y deje incubar 10 minutos a temperatura ambiente. 4. Sumerja la varilla sensibilizada en el tubo de ensayo siguiendo el sentido indicado por la flecha. 5. Deje la varilla hundida 15 minutos antes de leer el resultado (nunca mas de 20 minutos). Para que no se diluya el conjugado a base de oro coloidal en la solución, procure no sumergir la varilla más allá de la línea colocada debajo de la flecha marrón. VIII. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS Los resultados deben interpretarse de la manera siguiente: 1 raya = Negativo 2 rayas = Positivo 0 rayas = Inválido* * Si no aparece la raya de control, es decir la raya superior, el resultado no es valido. En ese caso, se tiene que llevar a cabo un nuevo test con la muestra. Para conservar los resultados, deje secar la varilla después de haber retirado el material absorbente que se encuentra en la parte inferior de la misma. Puede aparecer una ligera sombra a nivel de la raya de test. IX. CONTROL DE CALIDAD De acuerdo con las Buenas Prácticas de Laboratorio, se recomienda controlar con regularidad la eficacia del test. Para ello pueden utilizarse el control positivo RSV Respi-Strip (C-1086) en el que se sumerge la varilla. Los controles están listos para ser empleados y deben ser incubados sin extracción previa. X. EFICACIA A. Sensibilidad - Especificidad (Correlación): 1 ) La validación se ha realizado en el hospital Saint-Pierre de Bruselas (Bélgica) comparando los resultados obtenidos con el estuche RSV Respi-Strip y los obtenidos con el cultivo celular. La sensibilidad y la especificidad del estuche RSV Respi-Strip han sido probadas en 113 muestras NPS. Se obtuvieron los resultados siguientes:
5 Cultura Positivo Negativo Total RSV Respi-Strip Positivo Negativo Total Sensibilidad = % = (36/38)*100 Especificidad = % = (69/75)*100 Valor positivo predictivo = 87.5% = (36/42)*100 Valor negativo predictivo = 97.2% = (69/71)*100 Fiabilidad (Concordancia) = 92.9 % = (105/113) (N = 113) Si comparamos con un test latex obtenemos los resultados siguientes en las mismas condiciones: Sensibilidad = % = (33/38) Especificidad = % = (56/64) Fiabilidad (Concordancia) = 97.2 % = (89/102) (N = 102) 2 ) Un segundo estudio de Especificidad y de Sensibilidad fue llevado a cabo en el Trinity Hospital de Dublin (Irlanda) con 120 muestras nasofaringeas comparando los resultados con un test de immunofluorescencia directa y los del RSV Respi-Strip. RSV Respi-Strip Positivo Negativo Total Immunofl.Dir. Positivo Negativo Total Sensibilidad = 85.7 % = (60/70)*100 Especificidad = 94.0 % = (47/50)*100 Valor positivo predictivo = 95.2% = (60/63)*100 Valor negativo predictivo = 82.5% = (47/57)*100 Fiabilidad (Concordancia) = 89.2 % = (107/120)*100 (N = 120) B. Precisión: Intra-lote: Una muestra de cultivo vírico positivo en VRS fue probada 15 veces en el mismo lote de RSV Respi-Strip. El tampón de extracción fue probado 15 veces paralelamente al cultivo vírico positivo en VRS. Los resultados son correctos en un 100% de los casos. Los 15 tests efectuados en la muestra de cultivo vírico positivo en VRS dilución 1/48 - fueron todos positivos con aparición de dos rayas. Los 15 tests llevados a cabo con el tampón de dilución fueron todos negativos, con aparición de una sola raya (la raya de control).
6 Inter-lote: Una muestra de cultivo vírico positivo en VRS fue probada 3 veces en lotes diferentes de RSV Respi-Strip. El tampón de dilución fue probado de la misma manera paralelamente al cultivo vírico positivo. Todos los lotes probados en cada test han dado resultados positivos con el cultivo vírico positivo en VRS dilución 1/20 y resultados negativos con el tampón de extracción. C. Interferencias: Los patógenos siguientes han sido probados para buscar reactividades cruzadas posibles: adenovirus, virus del herpes, parainfluenza, influenza A, influenza B, enterovirus, rhinovirus, enterobacteria, nocardia asteroides, streptococcus pneumoniae, moraxella catarrhalis, staphylococcus aureus, streptococcus pyogenes, aspergillus niger, legionella pneumophilae, candida albicans, hemophilus influenza. No se ha observado ninguna reaccion cruzada. XI. LIMITES DEL ESTUCHE Los resultados del estuche RSV Respi-Strip deben compararse con el resto de las informaciones clínicas y biológicas disponibles. Un test positivo no excluye la posibilidad de que estén presentes otros agentes patógenos. El RSV Respi-Strip es un test de control en fase aguda. Las muestras de heces recogidas tras esta fase pueden contener concentraciones de antígenos inferiores al umbral de sensibilidad del reactivo. Si una muestra resulta negativa incluso habiendo síntomas, el resultado debe ser confirmado vía un cultivo. Ultima puesta al día: Agosto del NOT-5406/00 Rev:00 Fabricante: Coris BioConcept
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