LEUCEMIAS AGUDAS, CLASIFICACION, DIAGNOSTICO, TRATAMIENTO Y APORTACION DE LAS NUEVAS TECNICAS DIAGNOSTICAS. Ana Maria Gómez García FIR 3º año Análisis Clínicos
CANCERES INFANTILES
MIELOBLASTICAS LINFOBLASTICAS LEUCEMIAS CRONICAS Expansión de elementos maduros de MO AGUDAS Expansión clonal de precursores hematopoyeticos 80% L.infantiles son LLA 15% son LMA Restantes son indiferenciadas o cronicas (LMC, LMMC JUVENIL)
LEUCEMIAS AGUDAS EN LA INFANCIA
ANTECEDENTES HISTORICOS Virchow, 1845 Ehrich, 1891 Citoquimica Farber, 1948 empleo Aminopterina
ESTRATEGIAS DE ESTUDIO DE LAS L.A: METODOS DE LABORATORIO PARA CARACTERIZAR BLASTOS LEUCEMICOS: CLINICA DATOS LABORATORIO MORFOLOGIA L.A. BIOLOGIA MOLECULAR INMUNOFENOTIPO FISH CITOGENETICA Complejo diagnostico de las Leucemias en la Actualidad.
DEFINICION LEUCEMIA Proliferación neoplásica a partir de una célula hematopoyética inmadura que ha perdido la capacidad de diferenciarse. Disminución del tejido hematopoyetico normal en MO y posterior invasión de sangre periférica y otros órganos. Enfermedad oncológica más frecuente diagnosticada en menores de 15 años.
ETIOLOGIA La mayoría carecen de etiología clara Factores predisponentes: Factores genéticos Anomalías cromosómicas Inmunodeficiencias congénitas Radiaciones ionizantes Fármacos mielotóxicos. Enfermedades inmunológicas Virus
CLINICA SINTOMAS CONSTITUCIONALES: astenia, debilidad, perdida peso, sudoración nocturna. SINTOMAS POR INFILTRACION DE LA MO: - desplazamiento serie roja: Anemia ( palidez) - desplazamiento serie blanca: Fiebre (50%), infecciones 2ª a neutropenia. - desplazamiento serie plaquetar: diátesis hemorrágicas (petequias, sangrado) por la plaquetopenia.
CLINICA SINTOMAS POR INFILTRACION DE ALGUN ORGANO O TEJIDO: 1. - 50-80% hepatoesplenomegalia 2. - linfoadenopatias 3. - 40% niños dolor óseo o articular 4. - hipertrofia gingival 5. - infiltración piel, mediastino y SNC (5-7% de niños con L.A.)
DATOS DE LABORATORIO 95% Anemia normocítica, normocrómica y arregenerativa ( ret ) Neutropenia. El compromiso de 2 o mas series hematopoyeticas 90% Trombocitopenia. MIELOGRAMA 16% carecen de blastos en SP.
CARACTERISTICAS SERICAS LDH elevada: Se correlaciona con la masa tumoral y la gravedad de la enfermedad Otras menos frecuentes Hipercalcemia Hiperuricemia Aumento de transaminasas Uremia
FROTIS SANGUINEO NORMAL PLAQUETAS LINFOCITO MONOCITO NEUTROFILO
AUTOANALIZADOR : ADVIA 120 SISTEMA AUTOMATIZADO PARA ESTUDIO DEL HEMOGRAMA
ADVIA 120: AUTOANALIZADOR HEMATOLOGICO Autoanalizador por citometria de flujo. Tres sistemas analíticos: 1Citómetro de flujo con lámpara diodo laser para canales: RBC/PLAQ BASOLOBULARIDAD RETICULOCITOS 2.Citometro de flujo con lámpara tungsteno para canal de PEROXIDASA. 3.Colorimetro para medir HEMOGLOBINA.
Autoanalizador hematologico: Graficas serie blanca tamaño mieloperoxidasa Graficas serie roja Complejidad nuclear Serie plaquetar VOLUMEN DENSIDAD CONCENTRACIO N DE Hb TAMAÑO
HEMOGRAMA AUTOMATIZADO DE SANGRE NORMAL
DIAGNOSTICO DIFERENCIAL Reacciones leucemoides linfocitarias: mononucleosis infecciosa, Bordetella Pertussis. Hiperplasia linfoide madura en niños< 2 años. Otros: Anemia aplasica, linfoma, neuroblastoma, síndromes hemorrágicos (purpura trombocitopenica aguda), síndrome mielodisplasico
MONONUCLEOSIS INFECCIOSA AUTOMATIZADO MANUAL Atipias linfocitarias
LEUCEMIA AGUDA VISTA AL M.OPTICO BLASTOS
LEUCEMIA AGUDA (SISTEMA AUTOMATIZADO:
LEUCEMIAS AGUDAS.CLASIFICACION FAB British Journal of Hematology, 1976 Aug ; 33(4): 451-8 Proposals for the Classification of the Acute Leukaemias FRENCH-AMERICAN-BRITISH (FAB) CO-OPERATIVE GROUP Bennett JM, Catovsky D, Daniel MT, Flandrin G, Galton DA, Gralnick HR, Sultan C, Accepted for publication 26 January 1976 PROBLEMAS CON LA CLASIFICACION FAB: No todas las L. Agudas tienen 30% blastos (traslocaciones especificas). Excluye leucemias bifenotipicas. No incluye L. multilínea u otras poco frecuentes Excluye información esencial para tto y pronostico.
CLASIFICACION MORFOLOGICA FAB (1976) MIELOBLÁSTICA L1 L2 L3 LINFOBLÁSTICA Tamaño celular Morfología Nuclear Nucleolos Basofilia citoplasmática Vacuolas citoplasmáticas L1: cels pequeñas L2: cels pequeñas y grandes L3: tipo Burkitt. M0 minimamente diferenciada M1 Sin maduración M2 Con maduración M3 promielocitica M4 mielomonocitica M5 monoblástica M6 eritroleucemia M7 megacarioblástica
LEUCEMIA AGUDA CLASIFICACION OMS ( 2001) L.MIELOIDES AGUDAS L.LINFOIDES AGUDAS De precursor de cel B De precursor de cel T De Burkit L.MIELOIDE CRONICA L.LINFATICA CRONICA
LEUCEMIA AGUDA CLASIFICACION OMS ( 2001) L. AGUDA 20% BLASTOS CLASIFICACION OMS: MORFOLOGIA GENETICA FENOTIPO
CLASIFICACION INMUNOFENOTIPICA EGIL (1995) Mas usada LINFOBLASTICAS AGUDAS MIELOBLASTICAS AGUDAS BIFENOTIPICAS AGUDAS
SCORE INMUNOFENOTIPICO DE LAS LEUCEMIAS BIFENOTIPICAS
ESTUDIO INICIAL DE LA LEUCEMIA. CITOMETRIA DE FLUJO Paneles de anticuerpos monoclonales empleados para el estudio inicial de las LAs (FITC/ PE/ ECD/ PC5/ PC7) LLA LLA DE de FENOTIPO fenotipo B B LLA LLA DE de FENOTIPO fenotipo TT LMA cmpo/ ccd79a/ CD45/ ccd3 ntdt/ cigm/ CD45/ CD34 CD45/ CD4/ CD8/ CD3/ CD19 CD10/ CD20/ CD45/ CD34/ CD19 CD38/ CD22/ CD45/ HLADR/ CD19 CD15/ CD13/ CD45/ CD33/ CD19 KOR-SA/ 7.1/ CD45/ CD24/ CD19 IP (DNA)/ pan-b cmpo/ ccd79a/ CD45/ ccd3 ntdt/ cigm/ CD45/ CD34 CD45/ CD4/CD8/ CD3/ CD19 CD7/ CD34/ CD3/ HLADR/ CD5 CD7/ CD1a/ CD45/ CD33/ CD56 CD7/ CD13/ CD45/ CD10/ CD2 CD38/ TCRαβ/ CD45/ TCRγδ/ CD3 cmpo/ ccd79a/ CD45/ ccd3 ntdt/ cigm/ CD45/ CD34 CD45/ CD4/ CD8/ CD3/ CD19 CD15/ CD13/ CD45/ CD33/ CD34 CD7/ CD117/ CD45/ CD34/ CD56 CD65/ CD135/ CD45/ CD2/ CD34 CD64/ CD11b/ CD45/ CD14/ CD16 HLADR/ CD235a/ CD45/ CD34/ CD41 INMUNOFENOTIPOS LEUCÉMICOS
LEUCEMIAS 2001-2005 MIELOIDES MIELOIDES 25% LINFOIDES 75% LINFOIDES LEUCEMIA T LEUCEMIA B
LEUCEMIAS NIÑO JESUS 2005 LINFOIDES LLA T INTERMEDIA LLA PROB LLA B PROB- PREB LLA T PRO T MIELOIDE M0 CD56+ MIELOIDE M0 MIELOIDE M3 MIELOIDE M4 MIELOIDES MIELOIDE M5 LLA B COMUN LMC LMMJ
LEUCEMIAS LINFOBLÁSTICAS AGUDAS B (EGIL): FRECUENCIA 5% SUBTIPOS LAL B1 o pro-b MARCADORES INMUNOLOGICOS CD79a+ y/o CD 22+ y/o CD19+,CD34+ CD34+ TdT + CD19+ CD22+ 60% 15% 3% LAL B2 o comun LAL B3 o pre- B LAL B4 o maduros CD79a+ y/o CD 22+ y/o CD19+,CD34± CD 10+ CD79a+ y/o CD 22+ y/o CD19+, Cad µ intracitoplasmatica CD79a+ y/o CD 22+ y/ocd19+, Ig Sup+ CD10++ CD34+/- TdT+ CD19+ CD22+ CD10 +d CD10+/- CD20++ IgM+ CD19+ CD22++ CD20++ IgM+ CD19+ CD22+ Ig super+
LEUCEMIAS LINFOBLÁSTICAS AGUDAS T (EGIL): FRECUENCIA 15% SUBTIPOS MARCADORES INMUNOLOGICOS TdT+ CD3+ CD34 + CD7+ LAL T1 o pro-t LAL T2, pre-t + CD 7 Y CD3 citoplasmático, CD34+ A lo anterior añadir + CD 2 y/o CD 5 y/o CD8. CD2+ TdT+ CD3+ CD8+ CD5+ CD7+ MAS FRECUENTE LAL T3, tímicocortical LAL T4, madura + CD1a Demostración de la existencia de CD 3 de sup en ausencia de CD 1a. CD4+ CD8+ CD1a+ TdT + CD3+ CD3+ CD4 o CD8 CD2 CD5 CD7 TdT+ CD2+ CD5+ CD7+
LEUCEMIAS LINFOBLASTICAS T Menos frecuentes ( 15% LAL pediátricas). Mas agresivas (30% recaen a los dos años). Menos caracterizadas citogeneticamente (25-50% presentan cariotipos alterados). Menos información pronostica. Ttos menos específicos.
CLASIFICACION INMUNOLOGICA- MORFOLOGICA TIPO inmunolog TdT HLA DR CD10 CALLA CD3 CD1 a CD7 CD2 CD5 CD8 CD19 CIg SIg Tipo FAB prob + + - - - - - + - - L1L2 COMUN + + + - - - - + - - L1L2 PreB + + ± - - - - + + - L1L2 B NEG + ± - - - - + - + L3 ProT + - ± +cit - + - - - - L1L2 PreT + - ± +cit - + + - - - L1L2 TIMICO CORTICAL + - - +cit POS + + - - - L1L2 TIMICO MADURO - - - +sup NEG + + - - - L1L2
LEUCEMIAS AGUDAS 1. DIAGNOSTICO 2. TRATAMIENTO 3. TRANSPLANTE 4. EMR
COMO SE REALIZA UN DIAGNOSTICO? ANALIZADORES AUTOMATICOS. EXTENSION DE SANGRE PERIFERICA. EXTENSIONES DE MEDULA OSEA CITOQUIMICA DE EXTENSIONES MO. CITOMETRIA DE FLUJO DEL ASPIRADO DE MEDULA OSEA PARA TIPIFICAR LA LEUCEMIA CITOGENETICA Y BIOLOGIA MOLECULAR
FROTIS NORMAL MO megacariocito eritroblastos
MO PATOLOGICA LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA LEUCEMIA LINFOIDE AGUDA
CONTRIBUCION DE LA CITOQUIMICA AL DIAGNOSTICO HEMATOLOGICO La citoquímica estudia la composición qca. de las células y hace posible detectar y precisar la localización de algunos principios inmediatos, enzimas y sust.inorgánicas (metales pesados). Compuestos: Carbohidratos: reacción del ác peryódico de Shiff o reacción del PAS. Enzs oxidantes: reacción de las peroxidasas. Enzs hidrolíticas: fosfatasas alcalinas, ácidas, ß- glucuronidasa, muramidasa, N-acetil- ß- glucosaminidasa, esterasas inespecíficas. Componentes inorgánicos: hierro azul de Prusia o de Perls.
CITOQUIMICA Tipos FAB L1 L2 L3 MO M1 M2 M3 M4 M5 M6 PAS + GRANO + GRANO - + MPX - - - - + ++ +++ ++ -+ - P acida +T +T - Cloroacetato esterasa - - - - -+ ++ +++ -+ - - ANAE ( naftol acetato estarasa) +T +T - - - - - + ++ -
FOTOS CITOQUIMICA ANAE PAcida PAS MPX
GRACIAS