CURSO DE INMUNOLOGÍA BÁSICA 2017 CARGA HORARIA: 70 horas OBJETIVOS Y CONTENIDOS: Introducción al sistema inmunitario. Células de la inmunidad innata Objetivos: introducir al alumno a la función del sistema inmunitario, conocer los factores fisiológicos que pueden modular su funcionamiento. Enumerar y describir las barreras naturales de un animal y describir las moléculas que pueden ser reconocidas como extrañas por el sistema inmunitario. Conocer cuáles son los órganos linfoides, su localización y clasificación. Identificar los componentes celulares de la inmunidad innata. Conocer la ontogenia, localización e identificación de las células sanguíneas. Contenidos: Inmunidad. Estructura del sistema inmunitario (breve reseña de órganos, células y moléculas involucradas). Órganos linfoides primarios (médula ósea, bursa de Fabricio, placas de Peyer ileocecales, timo). Órganos linfoides secundarios: linfonódulos, bazo, placas de Peyer yeyunales. Sistema inmune asociado a mucosas (MALT) y sus compartimientos. Barreras naturales: físicas, químicas y biológicas. Generalidades de los sistemas inmunitarios innato y adaptativo. Antígeno e inmunógeno. Concepto. Tipos de sustancias antigénicas. Células de la inmunidad innata: granulocitos: neutrófilos, eosinófilos, basófilos. Agranulocitos: monocitos, linfocitos. Patrones moleculares asociados a patógenos (PMAPs): concepto, ejemplos. Receptores para moléculas asociadas a patógenos: localización y función. Macrófagos: subpoblaciones (características morfológicas, receptores, localización). Opsonización y fagocitosis. Mecanismos bactericidas. Células dendríticas: subpoblaciones (ontogenia, características morfológicas, localización y función). Mastocitos: características morfológicas, localización, función. Células NK: características morfológicas, reconocimiento y función. Linfocitos T y linfocitos B1: localización y funciones. Componentes humorales de la inmunidad innata Objetivo: Identificar los principales mecanismos efectores de la inmunidad innata y la inflamación. Contenidos: Proteínas y péptidos de acción inespecífica: defensinas, enzimas antibacterianas, proteínas captadoras de nutrientes, etc. Complemento: definición, características, funciones. Proteínas de fase aguda: definición, características, funciones. Citoquinas definición y funciones generales. Quimioquinas. Interleuquinas proinflamatorias. Respuesta de fase aguda. Sistema del interferón (INF) tipo I. Inflamación: efectos locales y sistémicos. 1
Receptores de antígeno. Procesamiento y presentación. Tolerancia central Objetivos: Conocer los distintos mecanismos de reconocimiento del Ag, los receptores involucrados, localización, estructura y especificidad. Conocer las vías de procesamiento del Ag. Conocer las características y etapas de la respuesta inmunitaria adaptativa. Contenidos: Receptores de Ag de linfocitos B y T: generación de diversidad, estructura. Co-receptores. Complejo Mayor de Histocompatibilidad (CMH): concepto. Moléculas de clase I y II del CMH: estructura, propiedades y función. Captación, procesamiento y presentación de Ag. Vía endosómica y citosólica de procesamiento del Ag. Concepto de presentación cruzada y presentación en moléculas CD1. Maduración de los linfocitos T: selección tímica positiva y negativa. Células y moléculas que intervienen. Concepto de tolerancia central. Selección clonal: concepto, localización. Respuesta inmunitaria celular adaptativa Objetivos: Conocer las interacciones celulares y las moléculas y factores solubles involucrados en la respuesta inmunitaria celular adaptativa. Conocer los mecanismos inmunitarios conducentes a la eliminación de células infectadas por parásitos intracelulares y células anormales. Conocer factores que determinan inmunogenicidad o tolerancia, y los mecanismos involucrados en la tolerancia. Contenidos: Linfocitos T: Subpoblaciones (LT citotóxicos, LTh0, LTh1, LTh2, LTh17, LThf Ontogenia, receptores de Ag, localización y función. Citoquinas más importantes. Respuesta inmunitaria contra bacterias intracelulares y virus. Activación de Macrófagos. Citotoxicidad (LTc y NK): diferencias y similitudes. Inducción de apoptosis. Factores que determinan inmunogenicidad o tolerancia. Mecanismos de tolerancia central, periférica y oral. Respuesta inmunitaria humoral adaptativa. Funciones biológicas de los anticuerpos. Síntesis de Ig en mucosas Objetivos: Conocer los requisitos necesarios para el reconocimiento de Ag por parte de LB y LT, las interacciones celulares y las moléculas y factores solubles involucrados en la respuesta inmunitaria humoral. Conocer las funciones biológicas de los anticuerpos y la síntesis de IgA secretoria. Diferenciar la respuesta inmunitaria primaria de la secundaria y comprender el fundamento de estas diferencias. Diferenciar las repuestas a Ag T- dependientes con respecto a T-independientes. Contenidos: Activación de linfocitos B. Fenómeno de cooperación entre LT y LB: moléculas y citoquinas involucradas, localización. Coestimulación y citoquinas principales. Anticuerpos: definición, estructura. Maduración de la afinidad. Cambio de isotipo de Ig, localización y funciones biológicas de cada isotipo. Generación de memoria. Respuesta inmune primaria y secundaria. Diferencias entre Ag T-dependientes y T-independientes. Respuesta a antígenos T independientes. Eliminación de complejos inmunitarios solubles. Síntesis de IgA en mucosas. 2
Respuesta inmune en acción Objetivos: Identificar y relacionar los mecanismos efectores de la inmunidad innata y adaptativa involucrados en la respuesta a bacterias y virus. Contenidos: Respuesta inmune a bacterias. Bacterias extracelulares. Bacterias intracelulares. Respuesta inmune a virus. Inmunoprevención Objetivo: Conocer los tipos de inmunidad, los objetivos de la inmunoterapia y de la inmunoprevención, los tipos de vacunas y adyuvantes. Contenidos: Inmunidad pasiva. Transferencia materno-fetal. Sueroterapia. Sueros inmunes, producción, efecto, ejemplos. Inmunidad activa. Vacunación. Vacunas: mecanismo de acción. Fines de la vacunación. Clasificación (estado biológico, relación con el agente etiológico, variedad de componentes). Adyuvantes: clasificación y función. Vías de administración. Respuesta a vacunas vivas y muertas. Importancia del sistema inmune común de las mucosas en la inmunización. Regulación de la respuesta inmunitaria Objetivo: Conocer los principales mecanismos de regulación de la respuesta inmune celular y humoral. Contenidos: Interacción entre el sistema inmunitario y otros sistemas. Regulación de la respuesta inmune por parte del antígeno. Regulación de la respuesta inmune por parte de anticuerpos. Células T reguladoras. Trabajos Prácticos: TP 1: Toma y conservación de muestras. Proteinograma. Serología. Medición de Ig totales Objetivos: Conocer las muestras más utilizadas para la detección de anticuerpos y/o antígenos en el diagnóstico serológico, su obtención, remisión y conservación, y los fundamentos de la serología. Conocer distintas técnicas para evaluar los niveles de Ig totales. Contenidos: Venas de elección para la extracción de sangre en las diferentes especies. Material necesario, modo de obtención. Toma de muestra con y sin anticoagulantes. Remisión al laboratorio. Separación de plasma y suero. Características de una buena muestra. Conservación de la muestra (tiempo y temperaturas adecuadas). Toma de otros tipos de muestra: secreciones (leche, calostro, lágrimas, mucus, secreción vaginal y prepucial, semen y plama seminal, líquido articular, etc) y tejidos (biopsias). Serología: definición y valor diagnóstico. Anticuerpos. Fuerzas de unión entre anticuerpos y antígenos. Observación de diferentes técnicas para evaluar los niveles de Ig totales: Proteinograma electroforético, precipitación de Ig con sales, coagulación con glutaraldehído y densitometría. 3
TP 2: Pruebas de interacción primaria: fundamentos Objetivo: Comprender los fundamentos de las principales técnicas serológicas de interacción primaria utilizadas en diagnóstico veterinario. Contenidos: Clasificación de las pruebas serológicas. Sueros policlonales y Ac monoclonales: diferencias, obtención, aplicaciones. Anti-inmunoglobulinas como herramientas en técnicas inmunológicas. Técnicas de interacción primaria. Fundamentos, conjugado, tipos de marcadores, enzimoinmunoensayo (ELISA), inmunohistoquímica e inmunocitoquímica, inmunofluorescencia directa e indirecta (IFD, IFI), radioinmunoensayo (RIA), Western blot, polarización de la fluorescencia, inmunocromatografía, citometría de flujo. TP 3: Pruebas de interacción primaria: ELISA e inmunocromatografía Objetivos: Conocer los pasos de una prueba de ELISA indirecto, comprender la importancia del uso de controles en la pruebas de laboratorio e interpretar los resultados. Interpretar diferentes variantes de pruebas de ELISA y sus posibles resultados. Conocer las etapas de una prueba de inmunocromatografía e interpretar los resultados. Conocer y utilizar los materiales de laboratorio empleados para realizar estas pruebas. Contenidos: ELISA indirecto en placa. Pasos, material y reactivos necesarios. Importancia del bloqueo, lavados y controles. Lectura de resultados. Inmunocromatografía para diagnóstico de embarazo en humanos. Pasos, material y reactivos necesarios. Lectura e interpretación de los resultados. TP 4: Pruebas de interacción secundaria: fundamentos Objetivo: Comprender los fundamentos de las principales técnicas serológicas de interacción secundaria utilizadas en diagnóstico veterinario. Contenidos: Pruebas de interacción secundaria. Concepto. Fundamentos, clasificación (aglutinación en placa, aglutinación en tubo, precipitación, tipos de inmunodifusión). Fenómeno de prozona. Identificación de diferentes isotipos de Ig. TP 5: Pruebas de interacción secundaria: aglutinación y precipitación Objetivo: realizar pruebas de aglutinación en placa (rápidas) cualitativas y semicuantitativas. Calcular el título de un suero. Observar resultados de pruebas de aglutinación en tubo (lentas) y de inmunodifusión radial y bidimensional. Identificar los factores que influyen sobre las pruebas de interacción secundaria. Explicar el fenómeno de prozona. Identificar el isotipo responsable de la aglutinación comparando resultados de pruebas en presencia y ausencia de -mercaptoetanol. Contenidos: Pruebas de interacción secundaria. Fundamentos, clasificación (aglutinación en placa, aglutinación en tubo, inmunodifusión radial, inmunodifusión bidimensional), detección de diferentes isotipos de Ig. Fenómeno de prozona. Título de un suero. 4
TP 6: Características de las pruebas serológicas. Integración de TP Objetivos: Discutir conceptos importantes relacionados a la serología. Identificar y describir las pruebas serológicas adecuadas para distintas situaciones, realizando un repaso de los temas tratados en los diferentes TP. Contenidos: Conversión serológica o seroconversión. Ac monoclonales. Afinidad, avidez, especificidad de un Ac, reacción cruzada, sensibilidad y especificidad de una prueba serológica. Pruebas de interacción primaria y secundaria. 5