Servicios de Calibración y Cualificación en instalaciones y equipamientos en centros de Cultivo Celular. Cualificación de Equipos de Laboratorio

Transcripción

1 Servicios de Calibración y Cualificación en instalaciones y equipamientos en centros de Cultivo Celular

2 Introducción a la cualificación de Equipos Analíticos

3 INTRODUCCIÓN Cualificación de equipos de laboratorio USP 31 / NF 28 (2008) General Chapter <1058>: Cualificación de Instrumentos Analíticos Carácter de recomendación Etapas de cualificación Cualificación del Diseño (DQ) Cualificación de la Instalación (IQ) ió l l ió Cualificación de la Operación (OQ) Cualificación de la Ejecución del Proceso (PQ)

4 INTRODUCCIÓN Etapas de cualificación Cualificación del Diseño (DQ) Definir las especificaciones funcionales y operacionales Equipo Software A realizar antes de la compra del instrumento Cualificación lf de la Instalación(IQ) l Garantizar que el equipo se ha entregado conforme a las especificaciones de diseño Garantizar la correcta instalación del equipo A realizar en el momento de la instalación

5 INTRODUCCIÓN Etapas de cualificación Cualificación de la Operación (OQ) Documentar que el equipoequipo funciona de acuerdo a sus especificaciones funcionales en el el ambiente seleccionado Cualificación de la Ejecución del Proceso (PQ) Documentar el comportamiento consistente del equipo de acuerdo a su uso previsto Incluye, durante todo el tiempo de operación de un equipo todo el tiempo de operación de un equipo actividades de calibración de rutina mantenimiento preventivo y las reparaciones necesarias controles de cambios.

6 INTRODUCCIÓN Etapas de cualificación Validación Método Especific. de Diseño (DS) Diseño del Equipo Selección del equipo (DQ) Fabric. del Equipo FAT SAT In nstalación n (IQ) Confirmac ión de la operación (OQ) Funcionam. Continuado (PQ) Soporte Técnico

7 Exigencias de cualificación

8 Exigencias de cualificación En función de la criticidad de los equipos Exigencias documentales Exigencias de Cualificación Dos ejemplos de clasificación l ió Recomendación QTI Recomendación USP

9 EXIGENCIAS DE CUALIFICACIÓN Recomendación QTI CRIT. CLASE CARACTERÍSTICAS DOCUMENTACIÓN EJEMPLO Tipo I Equipo de Se utiliza para la generación de un dato analítico, Documentación del suministrador Balanzas, phmetro, medición y (dato primario) URS HPLC, KF, IR, ensayo Debe ser chequeado y /o calibrado a unas calibrado a unas PNTs Neveras, frecuencias determinadas Calibración / cualificación Congeladores, Sist. Debe mantenerse en estado validado Formación del personal de tto de agua, Logbook de equipo Micropipetas, estufas TipoI Tipo I Equipo de Se utiliza para controlar o verificar un equipo de o un equipo Documentación del suministrador Pesas de referencia control y medición y ensayo URS Registro de verificación Debe calibrarse a unas frecuencias determinadas. PNTs condiciones Calibración / cualificación ambientales Formación del personal Tipo II NC Equipo de apoyo analítico Equipo de apoyo al laboratorio Interviene directamente en la realización de un ensayo pero no genera un resultado analítico Debe ser chequeado o controlado a unas frecuencias determinadas Interviene en el proceso de análisis de forma indirecta NO es necesario efectuar chequeos específicos, y no necesita ser validado ld d Puede tener procedimiento asociado Logbook de equipo Documentación del suministrador PNTs Formación del personal PNTs (si procede) Documentación del suministrador Baño de temperatura Centrífuga Cronómetros Placas calefactoras Agitadores Ultrasonidos

10 EXIGENCIAS DE CUALIFICACIÓN Recomendación USP CAT Criterio de Clasificación Exigencias de Cualificación Ejemplos A B C Equipamiento estándar de laboratorio, sin capacidad de de medición ni requerimientos de calibración Instrumentos estándares con valores de medida o control de parámetros físicos Equipos complejos y sistemas informatizados Especificaciones: las del fabricante Registro documental de la verificación de de la erificación de conformidad con requerimientos Requerimientos de usuario dentro de las funciones del equipo Requiere Calibración Registro documental de conformidad con requerimientos PNTs Cualificación de la Instalación (IQ) y la operación (OQ) Cualificación completa Verificación de las funciones específicas ió f i Agitadores magnéticos Vortex Centrífugas Baños de ultrasonidos Balanzas phmetros Termómetros Bombas Hornos Baños de agua Test de disolución HPLC Espetrofotómetros

11 Contenido del curso

12 CONTENIDO DEL CURSO De qué trata este seminario? Equipos del grupo A Verificación internainterna Equipos del grupo B Calibración Cualificación Equipos del grupo C Contrato de mantenimiento y servicio técnico con la casa suministradora

13 CONTENIDO DEL CURSO Ejemplos que trataremos Equipos susceptibles de Calibración phmetro Balanzas Mapeos térmicos Estufas Cámaras frías y congeladores Cámaras climáticas Cualificación de equipos de esterilización Autoclaves

14 CALIBRACIÓN DE EQUIPOS ANALÍTICOS

15 Calibración de equipos analíticos Calibración de masa Balanza analíticaanalítica Calibración química phmetro

16 Calibración de ph

17 CALIBRACIÓN DE ph ph Medida de la acidez o basicidad de una solución. Concentración de cationes hidrógeno [H cationes + ] presentes en una solución. en solución La sigla significa peso de hidrógeno o potencial de hidrógeno (pondus Hydrogenii o potentia Hydrogenii). Logaritmo negativo de base 10 de la actividad de los iones hidrógeno. Esto es:

18 CALIBRACIÓN DE ph Calibración de ph INDICADOR PH 7,5 º ph SOLUCION PATRÓN ph Se pueden llevar a cabo ajustes de la recta de calibración con soluciones patrón certificadas en casi todo el rango de medición, entre 2 y 12 de ph. En caso de no poder atemperarse el medio, se no atemperarse el medio se deberá llevar a cabo siempre una medición de la temperatura para poder compensar los valores de dicha solución, muy variables con la temperatura. MEDIO LIQUIDO ATEMPERADO APROX 23 ºC

19 CALIBRACIÓN DE ph Reacciones RED OX Reacciones de transferencia de electrones. REDUCTOR (forma oxidada): es aquel elemento químico que tiende a ceder electrones de su q q estructura química al medio, quedando con una carga positiva mayor a la que tenía. OXIDANTE (forma reducida ): es el elemento químico que tiende a captar esos electrones, quedando con carga positiva menor a la que tenía. d t Cuando un elemento químico reductor cede electrones al medio se convierte en un elemento oxidado. oxidado Forma un par red ox con su precursor. Cuando un elemento químico capta electrones del medio se convierte en un elemento l d l di i l reducido. Forma un par red ox red ox con su precursor reducido. reducido

20 CALIBRACIÓN ph

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24 Calibración de masa

25 CALIBRACIÓN DE MASA Calibración de balanzas analíticas UNE EN Aspectosmetrológicos Aspectos metrológicos de los instrumentos de pesar en funcionamiento no automático los instrumentos pesar en no automático G ENAC 13 Calibración de instrumentos de pesaje en funcionamiento no automático lb d

26 CALIBRACIÓN DE MASA Clases de Masas y errores máximos tolerados (± mg) E 1 E 2 F 1 F 2 M 1 M 2 M 3 50 kg kg kg kg kg kg g g g g g g g E 1 E 2 F 1 F 2 M 1 M 2 M 3 2 g g mg mg mg mg mg mg mg mg mg

27 Método de calibración Antes de empezar Estabilización (15 minutos) Comprobación de la base de apoyo Revisión visual del equipo ió i ld l i Identificación y anotación de los datos que detallen de forma inequívoca dicho equipo. Comprobación del cero (ausencia de peso alguno). Selección de las masas patrón Selección de 5 puntos el rango de trabajo

28 CALIBRACIÓN DE MASA La pesada 10 pesadas distintas en cada punto seleccionado 5 centradas 5 descentradas repartidas entre los distintos cuadrantes Entre cada repetición: la indicación de la balanza vuelve a cero. ti ió i di ió d l l l A la finalización del ensayo: la balanza vuelve al cero.

29 CALIBRACIÓN DE MASA Utilización de lastre Hasta un máximo del mayor valor realizado con las masas patrón utilizadas Corregir el peso del lastre indicado por la balanzael lastre indicado por la Registrar Indicación peso lastre en balanza. Peso patrón lo más próximo al del lastre. Indicación en balanza del peso patrón. Corrección en dicho punto a realizar en la indicación de la balanza. Peso del lastre con la corrección correspondiente.

30 CALIBRACIÓN DE MASA

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34 MAPEO TÉRMICO DE CÁMARAS

35 Equipos más conflictivos Cámaras climáticas Temperatura y Humedad Cámaras frías, congeladores Aislamiento térmico Distribución de temperatura Penetración en la carga

36 Cámaras climáticas

37 CÁMARAS CLIMÁTICAS Condiciones necesarias en todo el volumen de la cámara ESTABILIDAD NORMAL 25 ±2 ºC 60 ± 5 % HR ESTABILIDAD ACELERADA 40 ±2 ºC 75 ± 5 % HR ESTABILIDAD INTERMEDIA 30 ± 2 ºC 60 ± 5 % HR

38 CÁMARAS CLIMÁTICAS Distribución de sondas

39 CÁMARAS CLIMÁTICAS Temperatura y Humedad Temp peratura (ºC) 30,0 29,0 28,0 27,0 26,0 25,0 24,0 23,0 22,0 21,0 20,0 Tiempo Límite Superior (27ºC // 65%HR) Límite inferior (23ºC // 55% HR) Hum medad Relativ va (%HR)

40 CÁMARAS CLIMÁTICAS Aspectos clave Calibración y ajuste: muy importante Dientes de sierra más acentuados cuanto más extremo es el funcionamiento de la cámara (40ºc,75% HR), sobre todo en la variable humedad. La redistribución de aire (ventilador) resulta otra variable crítica en el buen funcionamiento de la cámara. Influencia de la carga en las zonas en las que se dificulte la circulación del aire, cuando la carga es excesiva. Ciclos de duración variable (de 4 a 12 horas, según tamaño y regulación de la cámara). Normativa reguladora: ICH guidelines.

41 Neveras, cámaras frías, congeladores

42 NEVERAS, CÁMARAS FRIGORÍFICAS Y CONGELADORES NEVERAS Suelen ser de pequeño/mediano tamaño (1 m 3 máximo). Las bandejas para soportar la carga deben permitir el paso de aire frío a través de los soportar deben permitir el paso aire a través los espacios libres. Problemas con el exceso de carga (muy habitual). el exceso carga Temperatura de funcionamiento: 5ºC ± 3ºC. Dientes de sierra muy acusados. Se recomienda sistema de ventilación forzada.

43 NEVERAS, CÁMARAS FRIGORÍFICAS Y CONGELADORES NEVERAS: Distribución térmica La ubicación de las sondas pretende identificar zonas de enfriamiento preferencial, o zonas donde se enfriamiento o donde se acumule aire caliente. Es muy típico que dientes de sierra muy acusados en todas las sondas coincidan con poca dispersión térmica por existir poca densidad de carga.

44 NEVERAS, CÁMARAS FRIGORÍFICAS Y CONGELADORES NEVERAS: Distribución térmica Temp peratura (ºC) Horas

45 NEVERAS, CÁMARAS FRIGORÍFICAS Y CONGELADORES Cámaras frigoríficas Tamaño muy variable Generalmente grandes o muy grandes, permitiendo el tránsito de personas (varios metros muy grandes, el tránsito personas metros cúbicos). Las baldas para colocar carga se ubican en las paredes laterales p Pasillos para la correcta distribución de aire. Grupos de frío situados en el techo, encima de la puerta,.. d lt i d l t Ventiladores de impulsión para forzar el movimiento del aire frío. Dientes de sierra muy dependientes de la ubicación de la sonda de control y el grupo de frío. Duración del estudio: 24 horas

46 NEVERAS, CÁMARAS FRIGORÍFICAS Y CONGELADORES Cámaras frigoríficas Aislamiento térmico a través de las paredes y puerta/s: Estudios extra: Apertura de puertas puertas Corte de tensión Importante diferenciar sondas en distribución sondas en penetración Especificaciones de temperatura: definidas por el propio principio de definidas por el propio principio conservación del producto. 5 ± ± 3ºC 3 ºC

47 NEVERAS, CÁMARAS FRIGORÍFICAS Y CONGELADORES Cámaras frigoríficas En esta distribución de sondas se persigue localizar puntos fríos/calientes entre los termopares ubicados en cámara. Además, se comprobará el comportamiento de la carga, en función de su ubicación dentro de la cámara y la distribución de la corriente de aire frío.

48 Cámaras frías: Ubicación de sondas

49 NEVERAS, CÁMARAS FRIGORÍFICAS Y CONGELADORES CÁMARA FRIGORÍFICA: Distribución Tempe eratura (ºC) 10 9, ,5 8 7,5 7 6,5 6 5,5 5 4,5 4 3,5 3 2,5 2 1,5 1 0,5 0 Máx (8 ºC) Mín (2 ºC) Horas

50 NEVERAS, CÁMARAS FRIGORÍFICAS Y CONGELADORES CÁMARA FRIGORÍFICA: Penetración Temper ratura (ºC) 10 9, ,5 8 7,5 7 6,5 6 5,5 5 4,5 4 3,5 3 2,5 2 1,5 1 0,5 0 Máx (8 ºC) Mín (2 ºC) Horas

51 NEVERAS, CÁMARAS FRIGORÍFICAS Y CONGELADORES CONGELADORES y ULTRACONGELADORES Temperaturas por debajo de 18ºC (congeladores) hasta 80ºC (ultracongeladores). Fuertes dispersiones térmicas entre los diferentes cajones térmicas entre diferentes cajones Muy influenciados por la cantidad de carga Fuentes de error importantes t t Formación de bloques de hielo en las paredes y en la carga. Control térmico poco preciso Grandes dientes de sierra. Duración del estudio: 8 12 horas

52 NEVERAS, CÁMARAS FRIGORÍFICAS Y CONGELADORES CONGELADORES Y ULTRACONGELADORES Cajón A Cajón A 1 Cajón B 3 Cajón B Cajón C Cajón C 4 6 Cajón D 5 Cajón D 6

53 CONGELADORES Y ULTRACONGELADORES Distribución térmica Temp peratura Horas

54 Almacenes

55 ALMACENES Distribución por zonas registro de las condiciones ambientales Verificar distribución horizontal / vertical del aire. Ubicación de sondas 12 sensores por cada 200 m 2 aproximadamente alturas hasta 6 8 metros Duración del estudio 72 horas Verano e Invierno Periodos laborables y no laborables

56 ALMACENES Distribución de sondas

57 ALMACENES Distribución térmica Temp peratura (º C) Horas

58 ALMACENES Temperatura cinética media (MKT) Manera teórica de ponderar el efecto de un pico/excursión de temperatura Temperaturas por encima de los 0 por encima ºC Controlar procesos envío de productos biológicos supervisión de equipos de temperatura controlada.

59 ALMACENES Ecuación de Arrhenius T K H R T 1 a T n N Temperatura cinética media (ºK) Energía de Activación (entre KJ/mol) Constante universal de los gases ideales (8, KJ/mol ºK) Temperaturas de cada muestra (ºK) d Número de ensayos de temperatura

60 ALMACENES Ejemplo Cámara frigorífica (2,0 8,0 ºC) Sonda de registro de temperatura que registra datos de de temperatura registra datos cada minuto Min Tª (ºC) MEDIA 5,9 MKT 6,3

61 ALMACENES Conclusiones a partir de MKT MKT es mayor que la media aritmética Mássensibile Más sensibile a las variaciones de temperatura Estudios prolongados Se amortiguan excursiones puntuales de temperatura MKT: justificación de pequeñas excursiones de temperatura

62 CUALIFICACIÓN DE EQUIPOS DE ESTERILIZACIÓN: AUTOCLAVES

63 Conceptos básicos

64 CONCEPTOS GENERALES Esterilización ESTERILIDAD Ausencia de todas las formas de vida. ESTERILIZACIÓN Proceso por el cual se mata o elimina todas las formas de vida (no sólo microorganismos). l l l d d CICLO DE ESTERILIZACIÓN Secuencia automática de las etapas de funcionamiento realizadas en un esterilizador con el fin de lograr la esterilización.

65 CONCEPTOS GENERALES Esterilización En la práctica, se trata de un proceso peligroso para los microorganismos, más que letal, ya que se pone a los microorganismos en Riesgo de muerte. EJEMPLO Tratamos una botella contaminada con Bacillus stearothermophilus con calor húmedo a 121 ºC durante 1 min (tomando D 121 =1min). Si está contaminada con 10Mil 10 Mil esporas sobrevivirá ~ 1 Millar. 10 Millones de esporas sobrevivirá ~ 1 Millón.

66 CONCEPTOS GENERALES Esterilización Dicho de otro modo: Experimentalmente se ha comprobado que los métodos habitualmente utilizados para los métodos habitualmente utilizados para esterilizar consiguen una reducción exponencial de la población microbiana respecto al tiempo. Cada vez que transcurre un cierto intervalo de tiempo (denominado D, tiempo de reducción decimal), se reduce en un 90% (una unidad logarítmica) la población de microorganismos.

67 CONCEPTOS GENERALES Supervivencia a 121 ºC B. Stearothermophilus (tomando D 121 =1 minuto) MINUTOS SUPERVIVIENTES Log ,000, ,000, , , , ,1 1.00

68 CONCEPTOS GENERALES Supervivencia Menores valores de D t significan una mayor tasa de muerte o una muerte más rápida. Cuando el logaritmo del número de supervivientes es menor a cero se habla de logaritmo del número de es menor a se de probabilidad de supervivencia. Si la probabilidad es 1, significa que hay 0,1 microorganismos viables por unidad esterilizada. Dicho de otro modo: una unidad contaminada por cada 10 unidades idénticas procesadas

69 CONCEPTOS GENERALES Curva de Supervivencia a 121 ºC ón microb biana Poblaci D 121 = Minutos de esterilización

70 CONCEPTOS GENERALES Curva de Supervivencia a 121 ºC 10 Log Po oblación microbia na D Minutos de esterilización

71 CONCEPTOS GENERALES Tiempo de reducción decimal (D) El valor de D está estrechamente relacionado con la temperatura. De ahí que se denomine también D D T, siendo T el valor de la temperatura de esterilización. la esterilización. El valor de D se incrementa cuanto más resistente sea el microorganismo cuanto más suave sea el proceso de esterilización.

72 CONCEPTOS GENERALES Tiempo de reducción decimal (D) N N 0 10 t / D T Donde: N 0 población inicial de microorganismos N población de microorganismos en el minuto t T tiempo de esterilización, en minutos D T tiempo de reducción decimal a la decimal a la temperatura T Si la contaminación inicial es de 10 6 microorganismos y su valor de D 121 es 1 minuto, será necesaria una exposición mínima de 12 minutos a 121ºC para conseguir la esterilidad del producto (es decir, 10 6 ).

73 CONCEPTOS GENERALES Esterilidad Un producto se considera estéril cuando la probabilidad de encontrar un microorganismo en él es inferior a uno entre un millón. Según el modelo de reducción exponencial de la población esta probabilidad se consigue cuando la cantidad de microorganismos se ha reducido a 10 6 microorganismos. Norma UNE EN 556

74 Métodos usuales de esterilización

75 Métodos usuales de esterilización Calor seco Altas temperaturastemperaturas Calor Húmedo Vapor, 121ºC Radiación Ionizante Radiaciones letales para los microorganismos Métodos Químicos Empleo de Óxido de Etileno

76 MÉTODOS USUALES DE ESTERILIZACIÓN Parámetros críticos Método empleado Calor seco Parámetros críticos Temperatura, Recirculación de aire Calor húmedo Temperatura, Presión, Saturación de vapor Radiación Dosis de irradiación, Longitud de onda Óxido de etileno Temperatura, Humedad, Concentración del gas

77 ESTERILIZACIÓN POR CALOR

78 ESTERILIZACIÓN POR CALOR Letalidad LETALIDAD de un proceso de esterilización (F) T To F 10 Z t Depende de: La intensidad del método (de la temperatura en este caso) La duración de la exposición La letalidad no es la duración del proceso de esterilización.

79 ESTERILIZACIÓN POR CALOR Letalidad El valor de letalidad F se expresa en unidades de tiempo equivalentes T To F 10 Z t To es la temperatura de referencia para la cual es conocida Dt. T es la temperatura de esterilización real para cada intervalo de tiempo t.

80 ESTERILIZACIÓN POR CALOR Letalidad Z (Coeficiente de temperatura) Número de grados de variación de la temperatura que produce una variación del valor de Dt produce una del valor de 10 veces. T To F Z 10 t Depende de d microorganismo que se desea eliminar Bacillus stearothermophilus Bacillus subtilis y del método de esterilización

81 ESTERILIZACIÓN POR CALOR Letalidad El valor usual de Z en la esterilización a vapor es de 10ºC Corresponde al microorganismo más resistente más resistente Bacillus estearothermophilus T To Z F 10 t D111 = 6,2 minutos D121 = 0,62 minutos Z = D = 10 ºC

82 ESTERILIZACIÓN POR CALOR Relación entre Z y D Log D Value o C z is the number of degrees to change the D value by one log. -1 Sterilising Temperature, o C

83 AUTOCLAVES

84 ESTERILIZACIÓN POR VAPOR. AUTOCLAVES Tipos de autoclaves Pequeños o grandes Menos o más de un módulo de esterilización: o módulo esterilización: 300 x 300 x 600 mm Generador de vapor de Independiente o propio del autoclave

85 ESTERILIZACIÓN POR VAPOR. AUTOCLAVES Tipos de autoclaves

86 ESTERILIZACIÓN POR VAPOR. AUTOCLAVES Normativa de aplicación Validación y Control de rutina de la esterilización por vapor de agua UNE EN 554:1995EN Esterilización. Esterilizadores de vapor. Esterilizadores grandes UNE EN 285:1997 Criterios de letalidad: EP y USP

87 ESTERILIZACIÓN POR VAPOR. AUTOCLAVES Parámetros críticos Temperatura 121ºC, 134ºC Saturación de vapor / calidad de vapor. Presión muy relacionada con la temperatura

88 ESTERILIZACIÓN POR VAPOR. AUTOCLAVES Etapas del proceso de esterilización Prevacío Calentamiento Flash Esterilización Secado Enfriado

89 ESTERILIZACIÓN POR VAPOR. AUTOCLAVES Etapas del proceso de esterilización Prevacío Cl Calentamiento Flash Esterilización Secado Enfriado PREVACÍO: elimina el aire de la cámara del autoclave para evitar que se formen bolsas, aire la del autoclave evitar las cuales impiden al vapor acceder a todos los puntos de la cámara. Normalmente, se alternan pulsos de vapor y vacío para acelerar la extracción del aire.

90 ESTERILIZACIÓN POR VAPOR. AUTOCLAVES Etapas del proceso de esterilización Prevacío CALENTAMIENTO Calentamiento Flash Esterilización Secado Enfriado el objetivo de esta fase es alcanzar la temperatura de esterilización esta es alcanzar la temperatura de esterilización la esterilización prevista (normalmente 121ºC o superior) utilizando para ello el vapor que penetra en la cámara elevando la temperatura de ésta y su contenido. Lógicamente, al ser un recipiente cerrado aumenta la presiónaumenta la presión en el interior de la cámara. El calentamiento de la recámara facilita el calentamiento y el mantenimiento de la meseta actuando como aislante térmico con respecto al exterior evitando la formación de condensados.

91 ESTERILIZACIÓN POR VAPOR. AUTOCLAVES Etapas del proceso de esterilización Prevacío EQUILIBRIO Calentamiento Flash Esterilización Secado Enfriado Se iguala la temperatura en todos los puntos de la cámara y de la carga. en todos los puntos de de carga. El valor de la presión en el interior de la cámara corresponde al punto de punto de Saturación de Vapor. De no ser así, podrían quedar residuos de aire en la cámara. El calentamiento de la recámara es muy importante para la es muy importante para correcta redistribución de vapor igualación térmica.

92 ESTERILIZACIÓN POR VAPOR. AUTOCLAVES Etapas del proceso de esterilización Prevacío MANTENIMIENTO Calentamiento Flash Esterilización Secado Aquí comienza la esterilización térmica esterilización térmica propiamente dicha. térmica Se mantienen las condiciones de temperaturatemperatura y presión durante el tiempo necesario para asegurar la letalidad la letalidad Fo requerida. La duración y temperatura de esta fase son los parámetros usados habitualmente para definir el ciclo. Enfriado

93 ESTERILIZACIÓN POR VAPOR. AUTOCLAVES Etapas del proceso de esterilización Prevacío ENFRIAMIENTO Calentamiento Flash Esterilización Secado Enfriado Cuando termina el proceso de esterilización, se corta el suministro de el de esterilización, se corta el suministro de vapor. La temperatura y la presión comienzan a descender hasta las condiciones ambientales. Normalmente, este proceso es empleado en ciclos de esterilización de líquidos contenidos en recipientes. El objetivo es evitar que la presión ejercida en el interior del envase le pueda hacer explosionarexplosionar por un cambio brusco de presión.

94 ESTERILIZACIÓN POR VAPOR. AUTOCLAVES Etapas del proceso de esterilización Prevacío SECADO Calentamiento Flash Esterilización Secado Enfriado Se corta el suministro de vapor. La temperatura y la presión descienden temperatura la presión descienden hasta las condiciones ambientales, y al mismo tiempo se lleva a cabo la extracción de aire de la cámara. El vacío acelera el secado de la cámara y de la carga al extraer de ella el vapor residual y el aire caliente. Este paso es muy útil para secar de condensados el material poroso material poroso (sobre todo textiles) La estanqueidad de la cámara es crítica en este punto, evitando que evitando que entre aire no estéril una vez concluida la esterilización.

95 ESTERILIZACIÓN POR VAPOR. AUTOCLAVES Proceso de esterilización por vapor Para la esterilización con vapor se define F0 como: Tiempo que duraría una esterilización si se hubiera realizado a 121 una esterilización si se realizado a 121ºC. C. Esta temperatura de referencia se ha elegido por ser un buen compromiso entre efectividad y economía para la mayoría de los materiales. economía mayoría de los materiales. T 121 F 0 10 Z t

96 ESTERILIZACIÓN POR VAPOR. AUTOCLAVES Letalidad (F 0 ) La letalidad de un ciclo de 12 minutos a 121 ºC (para D=1 minuto y Z=10). Qué tiempo de exposición sería necesario para conseguir la misma letalidad a una temperatura de 116 ºC? F 0 10 T 121 Z t El tiempo de exposición ió sería: 12 = 10 ( )/10 x t 12= 10 0,5 x t t = 12 / 0,32 t = 37,5 minutos

97 AUTOCLAVES: CUALIFICACIÓN

98 AUTOCLAVES. CUALIFICACIÓN Fases del proceso de cualificación Cualificación del diseño (DQ ) Adecuación al uso y especificaciones del propio usuario. al uso especificaciones del propio usuario. Cualificación de la Instalación (IQ) están correctamente instalados los componentes según diseño original? l d l Cualificación de la Operación (OQ) qué tal funciona el autoclave en vacío? Distribución térmica Cualificación de la ejecución del proceso (PQ) y que tal la carga? Penetración térmica

99 CUALIFICACIÓN DE AUTOCLAVES Cualificación de la Operación Calibraciones / verificaciones Funcionamiento de alarmas, panel de control, etc. alarmas control etc Capacidad operacional: DISTRIBUCIÓN TÉRMICA, durante el tiempo de mantenimiento (meseta) Temperaturas dentro de la banda de esterilización especificada (max: Tª + 3K) Fluctuaciones inferiores a 1 ºC (dientes de sierra) Dispersión máxima: 2ºC Eficacia esterilización del filtro de airefiltro de aire

100 CUALIFICACIÓN DE AUTOCLAVES Distribución de sondas ENTRADA TERMOPARES 3 9 PUERTA ZONA ESTÉRIL PUERTA ZONA NO ESTÉRIL DESAGÜE

101 CUALIFICACIÓN DE AUTOCLAVES Distribución de sondas Distribución de sondas (Puntos críticos) Desagüe Zona inferior, suelo. Paredes laterales. Confluencia de paredes con con el techo. Sonda móvil.

102 CUALIFICACIÓN DE AUTOCLAVES Autoclaves grandes

103 CUALIFICACIÓN DE AUTOCLAVES Distribución térmica (OQ) Temper ratura (ºC) Tiempo

104 CUALIFICACIÓN DE AUTOCLAVES Distribución térmica (OQ) 123,0 122,5 Temper ratura (ºC) 122,0 121,5 121,0 120,5 120,0 Tiempo

105 CUALIFICACIÓN DE AUTOCLAVES Distribución térmica (OQ) Temper ratura (ºC) Tiempo

106 CUALIFICACIÓN DE AUTOCLAVES Penetración térmica (PQ) Carga: peor caso en cada uno de los programas (worst en cada de programas case) Criterios de temperatura: Temperatura del vapor se encuentra dentro de la temperatura de esterilización dl d d l temperatura de esterilización Intervalo de tiempo entre la obtención de la temperatura en la carga y la cámara del esterilizador: 15 segundos ( 800l) 30 segundos ( 800l).

107 CUALIFICACIÓN DE AUTOCLAVES Penetración térmica (PQ) Criterio de letalidad: 15 minutos (E.P.) 12 minutos (U.S.P). Eficacia microbiológica i i i empleo de indicadores biológicos, normalmente esporas de B. Stearothermophilus

108 CUALIFICACIÓN DE AUTOCLAVES Letalidad acumulada F 0 acumulado 10 T 121 Z t t: Temperatura en el instante de la lectura. T: Temperatura base (121,1 ºC para F 0 ) Z: Incremento de la temperatura requerido para cambiar el valor de D en una unidad temperatura requerido para cambiar el en una unidad logarítmica (para F 0 se asume Z=10) L: Intervalo de lectura (en minutos). lectura D: Tiempo de reducción decimal a una temperatura determinada (para para F 0 se asume D=1).

109 CUALIFICACIÓN DE AUTOCLAVES Las claves de la cualificación Número de sondas: 12 sondas / m 3, suficientes por experiencia. experiencia. Por cada m 3 más, varias recomendaciones. Número de ciclos: Validación inicial: 3 ciclos (sin carga y para cada carga) Revalidaciones: 1 ciclo Periodos de revalidación: anual suele ser suficiente (con la misma carga).

110 CUALIFICACIÓN DE AUTOCLAVES Ciclos con carga sólida

111 CUALIFICACIÓN DE AUTOCLAVES Ciclo con carga sólida

112 CUALIFICACIÓN DE AUTOCLAVES Ciclo con carga sólida Temp peratura (ºC) Tiempo

113 CUALIFICACIÓN DE AUTOCLAVES Cargas líquidas (volúmenes diferentes)

114 AUTOCLAVES. CUALIFICACIÓN Cargas líquidas (diferentes volúmenes) Temp peratura (ºC) Tiempo

115 CONCLUSIONES

116 CONCLUSIONES La cualificación de equipos de laboratorio requiere un análisis de criticidad para determinar el alcance de la cualificación Los procedimientos de calibración y/o cualificación dependen en gran medida de la naturaleza del instrumento y/o equipo La identificación de los puntos críticos resulta vital para el establecimiento de los criterios de aceptación y el análisis eficaz de los resultados

117 Alguna duda?

118 Muchas gracias Podéis contactar conmigo en roberto es o en mi teléfono ( ) Podéis contactar conmigo en roberto.e@qti.es o en mi teléfono ( ) Hasta pronto!