Evaluación de alternativas para el control poscosecha de aislamientos de Penicillium digitatum resistentes a imazalil

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1 Agroienia Uruguay - Volumen 15 1: enero/junio Evaluaión de alternativas para el ontrol pososeha de aislamientos de Peniillium digitatum resistentes a imazalil Lado Joanna 1, Luque Eleana 1, Blano Oribe 2, Pérez Faggiani Elena 2 1 Área Pososeha. Programa Naional de Investigaión en Produión Citríola, Instituto Naional de Investigaión Agropeuaria. Estaión Experimental Salto Grande. Camino al Terrible s/n C.P Salto.Uruguay. Correo eletrónio: jlado@sg.inia.org.uy. 2 Área Fitopatología. Programa Naional de Investigaión en Produión Citríola, Instituto Naional de Investigaión Agropeuaria. Estaión Experimental Salto Grande. Camino al Terrible s/n C.P Salto.Uruguay. Reibido: 28/7/10 Aeptado: 22/12/10 Resumen El ontrol del moho verde produido por Peniillium digitatum en las plantas de empaque de ítrios de Uruguay se basa prinipalmente en el fungiida imazalil (IMZ). Esto ha inrementado las poblaiones de biotipos resistentes del patógeno. El objetivo del presente trabajo fue evaluar alternativas para el ontrol de aislamientos de P. digitatum resistentes a IMZ (1,0 mg l -1 in vitro). Frutos de Valenia y Ellendale fueron inoulados on aislamientos de P. digitatum sensible y resistente a imazalil y tratados por inmersión 15 s on IMZ, pirimetanil (PYR) o fludioxonil (FLU) en ombinaión on sales: biarbonato sódio (BCS), arbonato sódio (CS) o sorbato potásio (SP). Se ontabilizó la inidenia luego de 15 días a 20 ± 2 ºC. En Ellendale, el IMZ fue el fungiida más efetivo en ontrolar el aislamiento sensible, alanzando 100% de ontrol on 500 mg l -1. La inidenia fue menor al 25% utilizando 500 μl l -1 de PYR o FLU, aunque el ontrol fue inferior al del IMZ. Para el ontrol del aislamiento resistente, los tratamientos PYR y FLU fueron tan efetivos omo la apliaión de 1500 mg l -1 de IMZ, obteniéndose un 80% de frutos sanos. La ombinaión de 3% de BCS y 500 mg l -1 de IMZ fue signifiativamente superior al resto de los tratamientos. En naranja Valenia se obtuvieron ontroles superiores al 90% on IMZ 1500 mg l -1 e IMZ + PYR 750 μl l -1. Las alternativas evaluadas aportan a un manejo anti-resistenia del moho verde, poteniando el ontrol de biotipos resistentes al IMZ. Palabras lave: pirimetanil, fludioxonil, biarbonato sódio, arbonato sódio, sorbato potásio Summary Evaluation of alternatives for Peniillium digitatum imazalil resistant strains postharvest management The ontrol of Green mold aused by Peniillium digitatum in Uruguayan pakinghouses is based in imazalil (IMZ) appliation. As a result, resistant strains appeared. The aim of this work was to evaluate different alternatives for postharvest ontrol of IMZ resistant (1.0 mg l -1 in vitro) P. digitatum strains. Valenia and Ellendale fruit were inoulated with P. digitatum S22 (IMZ sensitive) and R20 (IMZ resistant) strains. Afterwards, they were treated by a 15 s immersion in IMZ, pyrimethanil (PYR) or fludioxonil (FLU) alone or ombined with salts: sodium biarbonate (BCS), sodium arbonate (CS) or potassium sorbate (SP). After 15 days of storage at 20 ± 2 ºC pathogen inidene was registered. For Ellendale, IMZ was the best fungiide for sensitive strain management, ahieving 100% ontrol with 500 mg l -1. Although disease inidene was lower than 25% with 500 μl l-1 PYR or FLU appliation, ontrol effiay was lower than for IMZ treatment. For resistant strain PYR

2 56 Lado, J.; Luque, E.; Blano, O.; Pérez Faggiani, E. Agroienia Uruguay and FLU were as effetive as IMZ (1500 mg l -1 ), with 80% of healthy fruit. BCS applied at 1, 2 or 3% redued pathogen inidene, being signifiantly superior in mixture with IMZ 500 mg l -1. For Valenia oranges an inidene redution higher than 90% was obtained by IMZ 1500 mg l -1 and IMZ + PYR 750 μl l -1. These alternatives reveal that is possible to develop anti-resistane strategies for P. digitatum IMZ resistant strains management. Key words: pyrimethanil, fludioxonil, sodium arbonate, sodium biarbonate, potassium sorbate Introduión Una de las prinipales ausas de pérdida de la alidad de la fruta ítria durante su almaenamiento y vida mostrador es provoada por hongos del género Peniillium (Plaza, et al., 2003; Kanetis y Adaskaveg, 2005). Cuando la oseha se produe bajo ondiiones de días húmedos y temperaturas templadas se favoree el desarrollo de estos patógenos, provoando más del 90% del total de las pérdidas en pososeha (Ekert y Eaks, 1989). A nivel mundial el ontrol de Peniillium spp., se basa prinipalmente en el uso de fungiidas de síntesis. Los prinipios ativos más utilizados son el imazalil (IMZ), Proloraz (PRO), Orto-fenil fenato de sodio (SOPP) y Tiabendazol (TBZ (Smilanik, et al., 2008). No obstante, en ambientes donde se ha heho un uso ontinuo de ellos, se han observado inrementos en las poblaiones del patógeno apaes de resistir las dosis omeriales de estos fungiidas. En California, la proporión de aislamientos resistentes a IMZ, SOPP y TBZ, aumentó en plantas de empaque de un 43,1% en 1988 a 74,2% en Los biotipos detetados mostraron en iertos asos, resistenia úniamente a uno de los produtos; aunque algunos aislamientos fueron resistentes a los tres prinipios ativos (Holmes y Ekert, 1999). En Uruguay el fungiida TBZ se utilizó en la déada del 70 y 80 del siglo pasado y fue sustituido por IMZ debido a la alta inidenia de aislamientos resistentes que provoaron una pérdida en la efetividad omerial del produto. Delgado, et al. (1997) detetaron un 65-70% de aislamientos tolerantes a TBZ en Peniillium italium, Peniillium digitatum y Peniillium ulaiense. En el aso del SOPP e IMZ, aunque se han reportado biotipos resistentes a ambos produtos químios (Lado y Pérez, 2009; Delgado, et al., 1997), a nivel omerial siguen siendo alternativas efetivas, utilizándose en todas las plantas de empaque uruguayas que proesan fruta para exportaión. Sin embargo, para mantener un ontrol adeuado del patógeno, las onentraiones de IMZ utilizadas aumentaron gradualmente desde 500 mg l -1 a mg l -1. Esta situaión es altamente preoupante, debido a que se ha alanzado el límite máximo sugerido para mantener el nivel de residuo del produto en antidades admisibles (5 mg kg -1 ). Atualmente no se uenta on otras alternativas ajustadas para las ondiiones partiulares de Uruguay, aunque se onoe que para lograr un manejo antiresistenia, es onveniente realizar apliaiones onjuntas o en seuenia de produtos químios on diferente prinipio ativo (Zhang, 2007). En California, a nivel de plantas de empaque, son omunes las apliaiones de biarbonato de sodio (BCS), IMZ, TBZ, pyrimetanil (PYR) y fludioxonil (FLU) para el ontrol de los agentes ausales de las prinipales podredumbres (P. digitatum, P. italium y Geotrihum itri-aurantii) (Smilanik, et al., 2008). La utilizaión de sales on efeto fungistátio sobre Peniillium spp., es una de las alternativas más promisorias para poteniar el ontrol de biotipos del patógenos resistentes a los fungiidas. El arbonato de sodio (CS), BCS y el sorbato de potasio (SP) han surgido omo alternativas para ser apliadas solas o en onjunto on fungiidas (Smilanik, et al., 2008). Su aión fungistátia enlentee el reimiento del patógeno, afetando la fisiología elular y por lo tanto, la germinaión de esporas y produión de enzimas (Obagwu y Korsten, 2003; Smilanik, et al., 2005). Estas alternativas no han sido aún evaluadas para el ontrol de los biotipos de P. digitatum presentes en plantas de empaque de Uruguay, resistentes a altas onentraiones del fungiida IMZ. A su vez, las interaiones del patógeno on variedades de ítrios produidas

3 Alternativas para el ontrol pososeha de P.digitatum resistente a imazalil 57 en limas diferentes también pueden haer variar los resultados. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la efetividad del IMZ, PYR y FLU solos o en ombinaión on sales: BCS, CS o sorbato de potasio, para el ontrol de aislamientos de Peniillium digitatum representativos de las poblaiones de Uruguay. Materiales y métodos Patógeno Se utilizaron dos biotipos de P. digitatum S-22 y R-20 araterizados en trabajos previos por su resistenia uantitativa y ualitativa a IMZ y su alta patogeniidad en Limón, Spring Navel y Ellendale (Lado y Pérez, 2009). El aislamiento S-22 es sensible a 0,1 mg l -1 de IMZ in vitro, siendo inapaz de esporular sobre fruta tratada on 0,5 mg l -1 de IMZ, a su vez, R-22 es resistente a 3,0 mg l -1 de IMZ in vitro. Tratamientos e inoulaión Se trabajó on frutos del Tangor Ellendale y naranja dule Citrus sinensis var. Valenia seleionados por alibre, olor y sin lesiones aparentes. En laboratorio, la fruta fue desinfetada superfiialmente, mediante inmersión por 60 s en una soluión al 1% de loro ativo (ph 7,0) y enjuagada una vez en abundante agua destilada. A ontinuaión permaneió a temperatura ambiente durante 6 h para permitir el seado, siendo inoulada on un punzón de 2 mm de profundidad y 1 mm de diámetro, on una soluión de 1,0 x 10 6 esporas/ml del patógeno (Ekert y Brown, 1986). Posteriormente, la fruta se mantuvo a temperatura ambiente durante h, realizándose la apliaión de los distintos tratamientos por inmersión durante 15 s. Se trabajó on una inmersión de 15 s simulando las apliaiones omeriales que se realizan a nivel de plantas de empaque en Uruguay (5-10 s). La temperatura de las distintas soluiones se mantuvo en 20 ± 3 C. El ontrol para ada biotipo onsistió en fruta inoulada bañada en agua. En todos los asos en que se apliaron sales: CS (1,5%), BCS (1-3%) y SP (1-3%) (Pharma Chemial, Jiangsu, China), se evaluó la pérdida de peso on relaión al ontrol, pesando fruta no inoulada almaenada a 5 y 20 C luego de 7 y 15 días de almaenamiento on el fin de determinar si se produe un inremento en la deshidrataión por deposiión de sales en la ásara (Larrigaudieíre, et al., 2002). Los produtos fungiidas evaluados fueron: IMZ (Fungaflor 75 PS, Janssen Pharmaeutia), PYR + IMZ (Philabuster SC, Janssen Pharmaeutia) y PYR (Pyrus 300SC, Lanafil S.A.), FLU (Sholar 230SC, Syngenta S.A.). En el Cuadro 1 se detallan los tratamientos realizados en ada uno de los experimentos. La fruta inoulada fue evaluada luego de 15 d a 20 ± 2 C y 80-90% de HR, registrándose el porentaje de inidenia (número de frutos on pudriión/ total de frutas por repetiión * 100) y esporulaión (número de frutos que forman onidios/total de frutos por repetiión*100) del patógeno. Cada uno de los experimentos fue repetido dos vees. Análisis estadístio Se utilizaron 8 repetiiones de 10 frutas por tratamiento, on un diseño ompletamente al azar. Los datos fueron transformados para su análisis (Aroseno raíz de la proporión-p) y analizados mediante el proedimiento GLM programa SAS (SAS Institute IN., Cary, NC.). La omparaión de medias se realizó mediante el test de Tukey (p 0,05). Se realizó un análisis de varianza (repetiión del ensayo Nº 1 vs. repetiión del ensayo Nº 2) que onfirmó la posibilidad de presentar los datos promedios en ada ensayo. Resultados Ensayo 1-Ellendale Las apliaiones de IMZ a altas onentraiones (1500 mg l -1 ) redujeron signifiativamente la inidenia de pudriiones produidas por ambos biotipos (<15% inidenia), siendo más efetivas para minimizar el reimiento del biotipo sensible (Figura 1). La apliaión de 500 mg l -1 de IMZ no ontroló efetivamente el aislamiento resistente (45% inidenia). Sin embargo, on la adiión de CS se mejoró en forma signifiativa el ontrol del mismo (Figura 1), reduiendo la inidenia a la mitad. La mezla del IMZ (500 mg l -1 ) on la sal registró idéntio ontrol del biotipo resistente al ompararla on ualquiera de las otras alternativas evaluadas

4 58 Lado, J.; Luque, E.; Blano, O.; Pérez Faggiani, E. Agroienia Uruguay Cuadro 1. Produtos on atividad fungiida evaluados para el ontrol de epas de Peniillium digitatum resistentes y sensibles a imazalil en mandarina Ellendale y naranja Valenia. Variedad Ellendale (experimento 1) Ellendale (experimento 2) Valenia Prinipio ativo Dosis fungiida Prinipio ativo Dosis fungiida Prinipio ativo Dosis fungiida (*mg l -1 / **µl l -1 ) (mg l -1 ) (*mg l -1 / **µl l -1 ) IMZ 500* BCS (1%) - SP (1%) - IMZ+CS (1,5%) 500* BCS (2%) - SP (2%) - CS (1,5%) - BCS (3%) - SP (3%) - IMZ 1500* IMZ+BCS (3%) 500 IMZ+PYR+SP(2%) ** IMZ+PYR ** IMZ 500 IMZ + PYR ** PYR 500** IMZ 1500* FLU 500** IMZ 500* IMZ + SP (2%) 500* Mandarina Ellendale o Naranja Valenia. IMZ= imazalil; PYR= pirimetanil; FLU=fludioxonil; CS= arbonato de sodio; SP= sorbato de potasio; BCS= biarbonato de sodio; IMZ+PYR=Philabuster. La onentraión de las sales está expresada en relaión p/v. (Figura 1). El CS apliado solo redujo la inidenia de ambos biotipos on respeto al ontrol, on un mayor efeto sobre el biotipo sensible, no obstante, la inidenia del biotipo resistente fue de un 57%, no difereniándose de IMZ 500 mg l -1. El nivel de ontrol del biotipo resistente alanzado por el CS fue de igual magnitud que la apliaión de IMZ (500 mg l -1 ). El FLU y el PYR ontrolaron ambos biotipos, siendo más efetivos que el IMZ para el ontrol del biotipo resistente, apliados a la misma onentraión. Sin embargo, en el aso del biotipo sensible, la efiienia del ontrol fue menor en ambos asos (Figura 1). El ontrol del biotipo resistente alanzado on 500 mg l -1 de FLU o PYR no se diferenió del ontrol logrado por el IMZ a 1500 mg l -1 y el IMZ+CS (Figura1). Ensayo 2-Ellendale El BCS resultó efetivo en reduir la inidenia y el porentaje de fruta on esporulaión de Peniillium digitatum on respeto al ontrol. No se detetaron diferenias entre las apliaiones al 1, 2 y 3% Inidenia (%) a a Sensible Resistente b b d d d d Control IMZ 1500 IMZ+PYR PYR 500 FLU 500 IMZ 500 IMZ + CS CS 1,5% Tratamiento Figura 1. Efeto de diferentes fungiidas y del arbonato de sodio en el ontrol de los aislamientos de P. digitatum sensible (S-22) y resistente (R-20) a imazalil en fruta de naranja Valenia inoulada artifiialmente. Medias (± ES) seguidas de igual letra entre tratamientos para ada biotipo no difieren signifiativamente (Tukey p 0,05). Control (fruta tratada on agua); IMZ1500= imazalil apliado a 1500 mg l -1 ; IMZ+PYR= imazalil 500 μl l-1 + pirimetanil 500 μl l -1 (Philabuster 500 μl l -1 ); PYR500= pirimetanil 500 μl l-1; FLU500=fludioxonil 500 μl l -1 ; IMZ500=imazalil 500 mg l -1 ; IMZ+CS= imazalil500 mg l -1 +arbonato de sodio 1,5%; CS1,5%= arbonato de sodio 1,5%.

5 Alternativas para el ontrol pososeha de P.digitatum resistente a imazalil 59 Cuadro 2. Efeto de diferentes onentraiones de biarbonato de sodio apliado solo o en mezla on imazalil en el ontrol de aislamientos de P. digitatum sensible (S-22) y resistente (R- 20) a imazalil artifiialmente inoulados en mandarina Ellendale. Inidenia (%) 2 Fruta on esporulaión (%) 2 Aislamientos de P.digitatum Tratamiento 1 S-22 R-20 S-22 R-20 Control (agua) 60,5 a 53,9 a 40,0 a 42,0 a BCS 1% 33,7 b 19,8 b 13,3 b 17,5 b BCS 2% 20,3 b 16,2 b 20,0 b 15,8 b BCS 3% 13,5 b 16,2 b 7,5 b 15,8 b IMZ + BCS 3% 6,7 3,6 6,7 b 3,5 IMZ 13,4 41,3 a 6,6 b 31,5 a 1 Luego de apliados los tratamientos, la fruta se mantuvo hasta el momento de la evaluaión, 15 días en almaenamiento a 20 ºC ± 2 ºC y 80-90% de HR. 2 Medias seguidas de igual letra dentro de la misma olumna no difieren signifiativamente (Tukey p 0,05) =Biarbonato de sodio (% p/v); =imazalil 500 mg l -1. Cuadro 3. Control de aislamientos de P. digitatum sensible (S- 22) y resistente (R-20) a imazalil inoulados artifiialmente en naranja Valenia mediante diferentes dosis de sorbato potásio y el fungiida imazalil solo o ombinado on pyrimetanil. Inidenia (%) 2 Fruta on esporulaión (%) 2 Aislamientos de P. digitatum Tratamiento 1 S-22 R-20 S-22 R-20 Control (agua) 83,0 a 65,0 a 72,5 a 58,8 a Sorbato de K (SP) 1% (p/v) 30,5 b 60,0 a 22,5 50,0 a SP 2% (p/v) 58,5 a 28,0 b 47,5 b 25,0 b SP 3% (p/v) 29,0 b 35,5 b 21,3 30,0 b PYR + IMZ 750 µl l-1 3,5 5,2 d 2,6 d 6,2 d Imazalil 1500 mg l-1 1,1 10,0 d 1,2 d 10,0 d Imazalil 500 mg l-1 6,2 23,5 b 5,1 d 18,0 b Imazalil 500 mg l-1 + SP 2% 10,5 25,5 b 10,0 d 22,5 b PYR + IMZ 750 µl l-1 + SP 2% 4,1 3,6 d 5,1 d 3,8 d 1 Luego de apliados los tratamientos, la fruta se mantuvo hasta el momento de la evaluaión, 15 días en almaenamiento a 20 ºC ± 2 ºC y 80-90% de HR. 2 Medias seguidas de igual letra dentro de la misma olumna no difieren signifiativamente (Tukey p 0,05) SP= sorbato de potasio; IMZ+PYR=Philabuster. de BCS (Cuadro 2). La apliaión de BCS logró una reduión en la inidenia del biotipo sensible de un 27 al 47% y en el aso del resistente del 34 al 37%, on respeto al ontrol. La adiión de sales de sodio al IMZ (500 mg l -1 ) potenió el ontrol de la inidenia de ambos biotipos y del porentaje de fruta on esporulaión del biotipo resistente, sin registrarse ningún efeto sobre el ontrol alanzado en el biotipo sensible (Figura 1 y Cuadro 2). Ensayo 3-Valenia La mezla de PYR e IMZ (Philabuster ) apliado a 750 µl l-1 logró un ontrol efetivo del patógeno en las dos variables evaluadas (Cuadro 3). La apliaión de SP en la mayoría de los asos produjo una reduión signifiativa en la inidenia on respeto al testigo (Cuadro 3). Nuevamente, el efeto fue mayor en el aso del biotipo resistente para onentraiones de SP 2 y 3% (p/v), no siendo

6 60 Lado, J.; Luque, E.; Blano, O.; Pérez Faggiani, E. Agroienia Uruguay efetivo al 1% en estas ondiiones. A diferenia de lo observado para el BCS, no existió poteniaión en el ontrol entre el SP y ninguna de las formulaiones evaluadas (Cuadro 3). Pérdida de peso de la fruta No existieron diferenias en la pérdida de peso registrada en el testigo y los tratamientos on sales, siendo la misma en promedio de 3,52% y 14,2% luego de 15 da 5 y 20 C, respetivamente (datos no presentados). Disusión A nivel mundial se han desarrollado diferentes estudios tendientes a la búsqueda de alternativas más inouas para el manejo de P. digitatum. Conjuntamente on esto, el desarrollo de resistenia a los fungiidas más utilizados ha inrementado la neesidad de ontar on alternativas apliables para el ontrol de nuevos biotipos, umpliendo a su vez on las ondiiones de alidad e inouidad soliitadas por los distintos merados. Es importante onsiderar también que la respuesta a un determinado manejo es altamente dependiente de la variedad ítria on la que se trabaje (Montesinos-Herrero, et al., 2009), así omo su interaión on los diferentes biotipos de patógenos presentes. Los biotipos de P. digitatum resistentes al IMZ poseen una apaidad de reimiento sobre fruta ítria más limitada (Holmes y Ekert, 1995). Estas diferenias de omportamiento entre biotipos también se observan en la respuesta obtenida en el ontrol. En el aso del FLU, el ontrol alanzado fue altamente dependiente del biotipo inoulado, siendo menor la efiaia en el ontrol del biotipo sensible, on mejores resultados para el resistente (Figura 1). En onordania on esto, varios trabajos menionan resultados errátios para este prinipio ativo. Según Smilanik, et al. (2008) el FLU apliado por inmersión a 300 µl l - 1 no ontroló efetivamente el desarrollo de la enfermedad en naranjas Valenia, luego de dos semanas a 20 ºC. Sin embargo, según Zhang (2007) onentraiones de entre 500 y 2000 µl l -1 han resultado efetivas para el ontrol de P. digitatum. Este mismo autor reporta un efeto muy pobre del FLU en el ontrol del porentaje de fruta on esporulaión en omparaión on el IMZ, apliado en idéntias ondiiones. El tiempo en que la fruta permanee en ontato on la soluión del fungiida es determinante del efeto del mismo, enontrándose diferenias importantes entre un tiempo de inmersión de 30 s y de 180 s para el FLU (Smilanik, et al., 2008). Shirra, et al. (2005) reportan un ontrol altamente efetivo por parte del FLU al ser apliado por inmersión (180 s) a 400 mg l -1 en naranjas Taroo. Las diferenias on los resultados obtenidos en esta investigaión podrían expliarse por el tiempo de ontato y/o por el tiempo entre la inoulaión y la apliaión del tratamiento. Según Shirra, et al. (2005) el FLU es tan efetivo omo el IMZ apliado a la misma onentraión y temperatura, aunque la sensibilidad in vitro es menor. Las apliaiones de este prinipio ativo son más efetivas para el ontrol de P. digitatum uando son realizadas dentro de las h luego de la inoulaión del patógeno (Kanetis et al., 2007). Es importante reordar que FLU es un fungiida de ontato, on mínima aión sistémia (Syngenta Crop Protetion, In., 2006), lo ual explia los resultados poo efetivos uando el patógeno se enuentra ya dentro de la herida. En este trabajo, no se alanzaron niveles aeptables de ontrol (<15% a 20 C) para fruta tratada luego de h. El PYR surge también omo otra alternativa promisoria para el ontrol de biotipos resistentes al IMZ, on un desempeño destaado uando se aplia en onjunto on éste. En el presente experimento el PYR apliado sólo a 500 µl l -1 resultó efetivo para el ontrol de biotipos resistentes (Figura 1). Esto onuerda on trabajos realizados en California, en donde la apliaión de 500 o 1000 µl l -1 de PYR en soluión auosa mediante inmersión o drenher durante 30 s, redujo en forma muy importante la inidenia de P. digitatum, en limones y naranjas (Smilanik et al., 2006a). Según estos autores, apliaiones de PYR (inmersión durante 60 s en 500 µl l -1 a 20 ºC) también ontrolaron efetivamente aislamientos sensibles y resistentes al IMZ. Este prinipio ativo posee una importante aión urativa, siendo muy efetivo apliado inluso 24 h luego de la inoulaión, a diferenia de lo que ourre on el FLU. Su efetividad es muy similar a 500 o 1000 µl l -1. Posee aión protetora débil, siendo inapaz de

7 Alternativas para el ontrol pososeha de P.digitatum resistente a imazalil 61 ontrolar infeiones posteriores a su apliaión (24 y 48 h), a diferenia de lo que ourre on el IMZ y el TBZ (Smilanik et al., 2006a). Estos autores manifiestan que es importante onsiderar siempre la mezla de IMZ + PYR, teniendo en uenta el efeto antiesporulante del IMZ apliado on la era y el ontrol de aislamientos resistentes al mismo por el PYR. De esta forma, se minimizaría el desarrollo de resistenia al PYR por parte del patógeno. De auerdo a los resultados obtenidos en este trabajo, la apliaión de IMZ y PYR en mezla (Philabuster ) resultó en un ontrol efetivo de ambos biotipos del patógeno al ser apliado a 750 µl l -1. Sin embargo, a 500 µl l -1 no se diferenió del IMZ 1500 mg l -1 (Figura 1). Existen diversos trabajos a nivel mundial que evalúan el efeto de distintas sales en el ontrol de diversos patógenos (Deliopoulos et al., 2010). En el aso espeífio de los ítrios y Peniillium, el CS, BCS y el SP han sido evaluados en distintas ondiiones por investigadores de California (Smilanik et al., 2008), España (Palou et al., 2002; Montesinos- Herreros et al., 2009), Sudáfria (Obagwu y Korsten 2003) e Italia (Dore et al., 2010) entre otros, on resultados alentadores. En este trabajo, la adiión de BCS y CS al 3 y 1,5%, respetivamente, potenió en forma signifiativa el ontrol del IMZ al biotipo resistente (Figura 1, Cuadro 2) lo ual no ourrió al agregar SP al 2% en la mezla (Cuadro 3). El efeto sinérgio del BCS no debería ser expliado por una mayor residualidad del fungiida, ya que se ha demostrado que la aión prinipal de las sales en el ontrol de Peniillium se debe a un efeto fungistátio (Smilanik et al., 1999) y a la induión direta de resistenia en la fruta (Dore et al., 2010). El efeto fungistátio observado es provoado prinipalmente por la inativaión de enzimas produidas por el patógeno (fumarasa, aspartasa y suínio-dehidrogenasa) relaionadas on su reimiento (York y Vaughn, 1964), modifiando también la permeabilidad de las membranas y la fisiología de sus élulas (Smilanik, et al., 2005). Por otro lado, la induión de resistenia por parte del BCS se desarrolla mediante la estimulaión de la produión de la fitoalexina soparona en el albedo, no siendo afetada la misma por la presenia de IMZ (Dore et al., 2010). Estos autores menionan que onjuntamente on el efeto fungistátio del BCS, existe también un inremento en la toxiidad del IMZ, poteniando la absorión del mismo en frutos on heridas. Existen reportes sobre la poteniaión de los fungiidas uando son apliados on sales y/o agua aliente, existiendo sinergismo en el ontrol de Peniillium spp. (Palou et al., 2000; Smilanik et al., 1999; Smilanik et al., 2005). Los resultados obtenidos oiniden on lo reportado por Smilanik et al. (2005), en donde el IMZ apliado solo (500 mg l -1 ) no ontroló los aislamientos resistentes a diho prinipio ativo; sin embargo, uando fue apliado a la misma onentraión en onjunto on BCS al 3%, ontroló el desarrollo de ambos aislamientos (sensibles y resistentes). Es importante destaar que la adiión de sales no modifia el nivel de residuos del fungiida en la ásara de frutos sanos (Dore et al., 2010), evitando las difiultades en el umplimiento de los límites máximos exigidos por los distintos merados. El nivel de residuos en limones sumergidos durante 30 s en IMZ (500 mg l -1 ) o en BCS (3%) + IMZ (500 mg l -1 ), fue de 2,59 y 2,56 mg kg -1, respetivamente, aumentando a 3,58 y 3,02 mg kg -1 on un tiempo de inmersión de 60 s (Smilanik et al., 2005). Algunos autores (Larrigaudieíre et al., 2002) menionan que la presenia del residuo de las sales sobre la fruta inrementa la tasa de pérdida de peso, partiularmente uando no reibe reubrimiento posterior on era y la fruta es almaenada durante largos períodos (Smilanik et al., 2006b). Larrigaudieíre et al., (2002) han reportado una mayor pérdida de peso y firmeza durante un almaenamiento de 2 meses en lementinas tratadas on soluiones de BCS y CS al 2%, en omparaión on los ontroles. En ontraposiión, en este trabajo no se detetaron diferenias en la pérdida de peso entre los testigos y la fruta que reibió sales (BCS, CS y SP). El SP apliado al 2 y 3% p/v provoó una reduión en la inidenia y el porentaje de fruta on esporulaión del biotipo resistente, siendo una herramienta a onsiderar para futuros ensayos. Su desempeño mejoró al estar mezlado on fungiidas, aunque no se detetó una poteniaión del efeto de los prinipios ativos evaluados (Cuadro 3). Esto podría expliarse por las altas onentraiones de

8 62 Lado, J.; Luque, E.; Blano, O.; Pérez Faggiani, E. Agroienia Uruguay IMZ y PYR evaluadas, ya que según Montesinos- Herreros, et al. (2009), el efeto sinérgio sí es visualizado uando se trabaja on menores onentraiones (< a 500 mg l -1 ) del prinipio ativo o uando se logra un mayor tiempo de ontato entre la fruta y la soluión. Estos autores reportan también efeto del SP en el ontrol del patógeno uando es apliado por inmersión en agua aliente. En ensayos semiomeriales se logró una reduión del 95% en la inidenia del patógeno en naranja valenia on respeto al ontrol (77% de inidenia), mediante apliaiones por inmersión (30 s) de SP al 1% (Montesinos-Herrero et al., 2009). A su vez, la inidenia se redujo de 95% a 10% en fruta tratada on SP (1%) a 62 C durante 15 s, sin observarse daño en la ásara de esta variedad (Montesinos-Herrero et al., 2009). En ontraposiión on los resultados obtenidos en el presente estudio, en donde el SP no potenió el ontrol de ambos biotipos por parte del IMZ, Smilanik et al. (2008) reportan que fruta tratada on IMZ (500 mg l -1 ) ombinado on SP (0,50%) en agua a 50 ºC (inmersión durante 30 s), logró un ontrol efetivo de aislamientos de P. digitatum resistentes a diho prinipio ativo. (Smilanik et al., 2008). Esto podría estar expliado por las diferenias en la temperatura del agua y el tiempo de inmersión, ya que ambas variables influyen diretamente en el ontrol alanzado (Smilanik et al., 2008). Similarmente a lo que ourre on el BCS, el meanismo de aión de la sal no estaría expliado por un aumento en el residuo del prinipio ativo en la fruta, ya que estos mismos autores no detetaron un aumento de residuos de los fungiidas (IMZ, PYR y FLU) luego de la apliaión de la mezla on la sal. En este sentido también, es importante onsiderar que la respuesta del patógeno al tratamiento on sales no depende úniamente del tipo de apliaión, existiendo una interaión importante on la variedad. Montesinos- Herrero et al. (2009) reportaron diferenias muy importantes en la efiaia del tratamiento on SP entre Valenia y Clemenules, alanzándose reduiones del 95% en el primer aso y un efeto muy reduido en el segundo. A partir de los experimentos realizados detetamos que la efiaia en el ontrol del biotipo resistente se redujo en forma signifiativa (aumento mayor al 100% en la inidenia del patógeno) al bajar la onentraión del IMZ de 1500 a 500 mg l -1 (Cuadro 3). Para alanzar un ontrol efetivo de estos biotipos fue neesario aumentar la onentraión del prinipio ativo o ombinarlo on distintas alternativas que potenien el ontrol. En ausenia del IMZ, los aislamientos resistentes son menos ompetitivos que los no resistentes (Holmes y Ekert, 1995), siendo deseable no mantener onstante diha presión de seleión, apliando estrategias que ombinen distintos prinipios ativos on sales y/o nuevas alternativas. Conlusiones Existen herramientas disponibles, ya sea nuevos prinipios ativos o su ombinaión on sales, para poteniar el ontrol de biotipos de Peniillium digitatum resistentes al IMZ presentes en Uruguay. Sin embargo, en el aso del ontrol de biotipos sensibles, el IMZ es el produto más efiiente. En ondiiones experimentales es posible alanzar un ontrol adeuado de biotipos resistentes ya sea mediante la ombinaión de IMZ en onjunto on BCS o mediante la inorporaión al manejo de la mezla de IMZ y PYR. Estos resultados deberían validarse en ondiiones omeriales. Agradeimientos A las empresas itríolas uruguayas Citríola Salteña, Milagro y URUD OR por la olaboraión onstante on fruta y partiipaión direta en la definiión de los ensayos. A todo el equipo de trabajo de pososeha, fitopatología y operaiones de INIA Salto Grande que hizo posible el desarrollo de estos trabajos. Bibliografía Delgado R.A., Pérez G. y Díaz, L Comportamiento de Peniillium digitatum, P. italium y P. ulaiense en pososeha de itrus en Uruguay. En: IX Congreso Latinoameriano de Fitopatología ;12-17 otubre 1997 ; Montevideo, Uruguay. Deliopoulos T., Kettlewell P.S. and Hare, M.C Fungal disease suppression by inorgani salts : A review. Crop Protetion, 29(10) : Dore A., Molinu M.G., Venditti T. and D Hallewin, G Sodium biarbonate indues rystalline wax generation, ativates host-resistane, and inreases imazalil level in rind wounds of oranges, improving the ontrol of green mold during storage. Journal of Agriultural and Food Chemistry, 58(12) :

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