Medición del ph del Mueller Hinton. Dr. Esteban Riera Fanego- Bioquímico- Microbiólogo Consultor OPS

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Gerardo Camacho Gallego
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1 Medición del ph del Mueller Hinton Dr. Esteban Riera Fanego- Bioquímico- Microbiólogo Consultor OPS

2 qué es el ph? Rango PH H + conc (mol/l) OH + conc (mol/l) Ácido ,1 0,01 0,001 0,0001 0, , , , , , , , , Neutro 7 0, , Alcalino , , , , , , , , , ,0001 0,001 0,01 0,1 1

3 qué es el ph? Ec. Sörensen ph = - Log 10 [H+] n [H+]= 0, = 10-7 ph= - Log 10 [H+] 7 = -(-7)= 7 ph= 7

4 Cómo se mide? ecuación de Nernst: E = Eº - 2,3 RT x ph ; nf Eº = constante para cada solución; R = constante de gas; F= constante de Faraday; T=temperatura en Kelvin; n= carga del ión.

5 Cómo se mide? ecuación de Nernst: E = Eº - 59,16 mv x δph para 25ºC (298ºK), y n=+1 (H + ) Pendiente ideal= 59,16 mv= 100% eficiencia Pendiente =50 mv= 85% eficiencia Eº (punto cero) 30 mv

6 Puntos de Calibración del phchímetro ecuación de Nernst: E = Eº - 59,16 mv x δph para 25ºC (298ºK), y n=+1 (H + ) Pendiente ideal= 59,16 mv= 100% eficiencia Pendiente =50 mv= 85% eficiencia Punto cero (Eº) 30 mv

7 Puntos de Calibración del phchímetro ecuación de Nernst: E = Eº - 59,16 mv x δph para 25ºC (298ºK), y n=+1 (H + ) Pendiente ideal para mediciones buffer ph 7 y ph 4 (δph = 3) Pendiente ideal= 59,16 mv x 3 = 177,5 mv (100% eficiencia) Pendiente =50 mv x 3 = 150 mv ( 85% eficiencia) Punto cero (Eº) 30 mv

8 Puntos de Calibración del phchímetro ecuación de Nernst: E =Eº - 59,16 mv x ph δph para 25ºC (298ºK), y n=+1 (H + ) +mv después del ajuste 0 7 ph - mv antes del ajuste Ajuste del punto cero (Eº) ( ph7 = 0 mv)

9 Puntos de Calibración del phchímetro ecuación de Nernst: +mv 59,2 E = Eº - 59,16 mv x ph δph para 25ºC (298ºK), y n=+1 (H + ) 56,0 6 7 ph - mv Ajuste de la pendiente (m)

10 ph varía con la temperatura de medición 4 factores: 1) El coeficiente de temperatura de la solución medida; 2) La dependencia de la temperatura de la pendiente (ecuación de Nernst); 3) Posición del punto de intersección de las isotermas; 4) Diferente tiempo de respuesta del electrodo (causada por cambios en la temperatura).

11 ph varía con la temperatura de medición 1) El coeficiente de temperatura de la solución medida; I = [H + ] x [OH + ] = Molar (a 25ºC);

12 Variación del ph de con la temperatura: coeficiente de temperatura de la solución Temperatu ra ºC Buffer ph 4,00 Buffer ph 7,00 Buffer ph 10,01 5ºC 4,00 7,09 10,25 10ºC 4,00 7,06 10,18 15ºC 4,00 7,04 10,12 20ºC 4,00 7,02 10,06 25ºC 4,00 7,00 10,01 30ºC 4,01 6,99 9,97 35ºC 4,02 6,98 9,93 40ºC 4,03 6,98 9,89 45ºC 40,04 6,97 9,86 50ºC 40,06 6,97 9,83

13 Variación del ph con la temperatura: Ecuación de Nernst ecuación de Nernst: E = Eº - (2,3 RT )x ph ; nf

14 Variación del ph con la temperatura: Posición del punto de intersección de las isotermas.

15 Calibración: dos puntos Punto cero: ph 7 = 0 mv Pendiente de la curva mv vs ph Medir ph de Buffers a igual temperatura que la solución.

16 Calibración: punto cero

17 Calibración: pendiente

18 Cómo medir el ph del Mueller Hinton? a qué temperatura? cuándo está derretido? antes de autoclavar? después de autoclavar?

19 Cómo medir el ph del Mueller Hinton? Intervalo aceptable ph 7,2 a 7,4

20 Determinación de ph a 25,0ºC en días consecutivos, antes y después de autoclavar Variación del ph del MH autoclavado durante 19 días consecutivos Valores de ph 7,45 7,40 7,35 7,30 7,25 7, Días consecutivos de medición Media ph antes autoclavar: 7,30 después autoclavar: 7,37 Diferencia significativa (valor p<0,001)

21 Medición del ph del MH a diferentes temperaturas temperatura ºC Curva de variación del ph del MH con la temperatura 50,0 40,0 30,0 20,0 10,0 MH SIN AUTOCLAVAR MH AUTOCLAVADO 0,0 7,00 7,10 7,20 7,30 7,40 7,50 ph

22 Calibración del sensor de temperatura del phchímetro Tm phchímetro Termómetr o Mercurio 38,5 39 Curva de Calibración del termómetro phchímetro con termómetro de Hg termómetro phchímetro y = 1,014x - 0,3413 R 2 = 0, ,4 33,5 28, , termómetro mercurio 19,9 20

23 Determinación de HUMEDAD DEL MUELLER HINTON MH lote Difco Fecha de inicio de uso: 18 Nov/03 Fecha fin de uso: 29 Dic/03 Venc. Febr 2006 Medición de Humedad: MH Difco lote con 41 días de uso. Humedad (%)= (peso final peso inicial) X 100. Peso inicial Fecha 29 dic h: peso inicial= 5,033 g 30 min en estufa a 80ºC= 4,994 g 60 min en estufa a 80ºC= 4,982 g 90 min en estufa a 80ºC= 4,972 g Humedad (%)= 1,2% Fecha 20 ene h: peso inicial = 5,011 g 45 min en estufa a 75ºC = 4,967 g 120 min en estufa a 75ºC = 4,884 g Humedad (%)= 2,5% Tiempo de uso del MH: 18 nov/03 a 20 ene/04= 62 días

24 EFECTO DEL ph EN EL ANTIBIOGRAMA S. aureus ATCC Efecto del ph 7,69 sobre el halo de inhibición Antimicrobiano MH ph 7,27 MH ph 7,69 Dif. de promedios placa 1 placa 2 placa 1 placa 2 genta aumenta oxa ,5 s/c tet ,5 disminuye van ,5 s/c

25 EFECTO DEL ph EN EL ANTIBIOGRAMA E. Coli ATCC cip ,5 aumenta ctx ,5 s/c amk aumenta amp disminuye genta ,5 aumenta tet disminuye

26 EFECTO DEL ph EN LA ACTIVIDAD DE LOS ATB Atb que aumentan su actividad a ph ácido: Amoxicilina Ampicilina Carbenicilina Piperacilina Tetraciclina Doxiciclina Minociclina Nitrofurantoína

27 EFECTO DEL ph EN LA ACTIVIDAD DE LOS ATB Atb que aumentan su actividad a ph alcalino: Amicacina Netilmicina Estreptomicina Tobramicina Claritromicina Eritromicina Ác. Nalidíxico Quinolonas fluoradas

28 EFECTO DEL ph EN LA ACTIVIDAD DE LOS ATB Atb que disminuyen su actividad a ph ácido: Azitromicina Claritromicina Clindamicina Metronidazol

29 Atb que tienen pequeños cambios de actividad con el aumento o disminución del ph: Penicilina Cefalotina Cefalexina Cefoperazona Ceftazidima Ceftriaxona Cloranfenicol Sultonamidas y trimetoprima

30 MEDIR EL ph del MH después de autoclavar, a 25ºC, y triturado en un tuvo boca ancha.

31 Coord. Prog. Antimicrobianos LCSP. Marzo 2004 MEDICIÓN DEL ph del Mueller Hinton Recomendaciones. 1. La medición del ph del Mueller Hinton debe hacerse por el método potenciométrico (phchímetro) y no con tiras de papel ph; 2. El ph del MH debe medirse después de autoclavado y a 25ºC; 3. El phchímetro debe calibrarse diariamente con soluciones buffers ph7 y ph 4 o Verificar mensualmente el grosor y el ph del Mueller Hinton. Registrar en el Control de Calidad Interno. Dr. Esteban Riera

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