Identificación de anticuerpos contra Anaplasma phagocytophilum y Anaplasma platys en perros del Municipio de Arroyo Seco, Querétaro.

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1 Tlamati Sabiduría, Volumen 7 Número Especial 2 (2016) 4 Encuentro de Jóvenes Investigadores CONACYT Acapulco, Guerrero 21, 21 y 23 de septiembre 2016 Memorias Identificación de anticuerpos contra Anaplasma phagocytophilum y Anaplasma platys en perros del Municipio de Arroyo Seco, Querétaro. Resumen Disseiri Mondragón Juárez (Becario) Universidad Autónoma de Guerrero Unidad Académica de Medicina Veterinaria y Zootecnia No.1 Programa del 3 er Verano de Investigación Científica Jóvenes de la UAGro por la Ciencia dis_joejonas@hotmail.com Área en la que participa: VI Biotecnología y Ciencias Agropecuarias Dr. Juan Joel Mosqueda Gualito (Asesor) Profesor- Investigador de la Universidad Autónoma de Querétaro joel.mosqueda@uaq.mx La anaplasmosis canina es causada por bacterias gram negativas, de crecimiento intracelular obligado. Anaplasma phagocytophilum y Anaplasma platys, son Rickettsias, es un agente ampliamente conocido que causa infecciones granulocíticas tanto en animales como en humanos. El propósito del presente estudio fue identificar anticuerpos contra Anaplasma phagocytophilum y Anaplasma platys en perros del Municipio de Arroyo Seco, Querétaro. Se realizó un muestreo aleatorio, obteniendo 37 muestras de sangre que se centrifugaron para separar el suero, y realizar el diagnostico in vitro mediante Inmunocromatografia de Flujo Lateral (CaniV-4 Tets Kit) para la detección de anticuerpos contra Anaplasma phagocytophilum y A. platys. Por lo tanto se encontró perros con anticuerpos contra Anaplasma phagocytophilum y A. platys con un 46% de la población total. Palabras Clave: Anaplasma phagocytophilum, Anaplasma platys, Anticuerpo, CaniV-4 Test Kit. Introducción Las investigaciones sobre enfermedades transmitidas por vectores son de gran importancia en el país, sobre todo por la amplia distribución de microorganismos con potencial zoonótico y,

2 4 Encuentro de Jóvenes Investigadores CONACYT Acapulco, Guerrero 21, 22 y 23 de septiembre 2016 más aún, de aquellos vectores biológicos que contribuyen en su propagación (Tateishi y col., 2015). Anaplasmosis canina es una enfermedad de importancia mundial ya que es capaz de parasitar un amplio rango de huéspedes vertebrados, es transmitida por vectores como garrapatas. La anaplasmosis produce en el perro un cuadro clínico caracterizado por un síndrome febril y hemolítico, lo que origina cuadros importantes de anemia y hemoglobinuria (Peñaloza, 2015; Cicuttin y col., 2014). En los últimos tiempos se ha registrado un incremento en la ocurrencia de casos humanos de rickettsiosis en áreas urbanas. Es así que emergieron nuevos patógenos humanos como R. massiliae y R. felis, mientras que otras rickettsiosis tradicionalmente relacionadas con áreas silvestres (tales como R. rickettsii y R. parkeri) comenzaron a diseminarse a estas áreas a medida que aumentaba la dispersión de distintos vectores y reservorios, generalmente a causa de las acciones humanas. Además se encontraron nuevos ciclos de transmisión como en el caso de R. typhi, incluyendo a animales de compañía y sus ectoparásitos (Cicuttin y col., 2014). Anaplasma platys y Anaplasma phagocytophilum son bacterias intracelulares obligatorias que pertenecen a la familia Anaplasmataceae en orden Rickettsiales (Alberdi y col., 2015). A. platys infecta a las plaquetas de perros y causa una enfermedad infecciosa crónica llamada trombocitopenia cíclica canina (ICCT) como bacteriemia y la trombocitopenia se producen en ciclos a intervalos de 1-2 semanas (Lai y col., 2016). Varias garrapatas del genero Ixodes pueden servir como vectores de A. phagocytophilum e infectar a una amplia gama de mamíferos, incluyendo perros, gatos, humanos y especies silvestres. El agente vector de A. platys no ha sido claramente determinado, pero se ha identificado su ADN en garrapatas de los géneros Dermacentor y Riphicephalus (Rubio y col., 2011). La presencia de anticuerpos contra Anaplasma phagocytophilum y Anaplasma platys, nos ayudan a identificar los perros que han estado expuestos al patógeno y quienes no, así como también detectar una infección antigua o reciente. Materiales y Métodos Diseño de estudio Se realizó un diseño aleatorio, debido a que es más simple y sencillo, seleccionando los perros al azar.

3 Tlamati Sabiduría Volumen 7 Número Especial 2 (2016) Población Una población de 37 perros (21 hembras y 16 machos), que fueron seleccionados con las variables de edad (mayores de 3 meses), el tamaño (mediano y grande), con propietario e infestación de garrapatas. Técnica de muestreo Utilice método de sujeción para los perros, para extraer sangre de la vena cefálica y colocar 2ml en tubo de tapa roja y separar la sangre del suero con lo que se realizó la Inmunocromatografia de Flujo Lateral (CaniV-4 Test Kit) diagnóstico in vitro para la detección de anticuerpos contra Aplasma phagocytophilum y Anaplasma platys primero deposite 20µl de suero de la muestra en todas las ventanas, después se agregó 3 gotas de diluente en cada venta y por último la interpretación de los resultados. Lugar El Municipio de Arroyo Seco está ubicado al Norte del Estado, entre los paralelos 99 25' y 99 47' de longitud Oeste y los meridianos 21 15' y 21 35' de latitud Norte. Se encuentra a 980 msnm promedio pues existen diferentes zonas que van de los 560 a los msnm. Las Trancas, se localiza en el Municipio Arroyo Seco del Estado de Querétaro Arteaga México y se encuentra en las coordenadas longitud y latitud La localidad se encuentra a una mediana altura de 560 metros sobre el nivel del mar. El Salitrillo, se localiza en el Municipio Arroyo Seco del Estado de Querétaro Arteaga México y se encuentra en las coordenadas longitud y latitud

4 Perros positivos 4 Encuentro de Jóvenes Investigadores CONACYT Acapulco, Guerrero 21, 22 y 23 de septiembre 2016 Resultados Los resultados arrojados de la técnica con CaniV-4 Test Kit, de los 37 perros muestreados, se obtuvieron 17 positivos de anticuerpos contra Anaplasma phagocytophilum y Anaplasma platys, un 46% de la población total (véase gráfica.1). El porcentaje de co-infección fue de 70.58%, por lo tanto nos dice que los anticuerpos contra Anaplasma phagocytophilum y Anaplasma platys pueden estar relacionados a Ehrlichia cani. 35% 32% 30% 25% 20% 15% 14% 10% 5% 0% Machos Sexo Hembras Grafica 1. Representativa del porcentaje de las muestras positivas de sueros caninos, obtenidas de la Inmunocromatografia de Flujo Lateral (CaniV- Test Kit) Discusión y conclusión En el estudio realizado de la identificación de anticuerpos contra Anaplasma phagocytophilum y Anaplasma platys, se encontró la presencia de anticuerpos en perros infestados por garrapatas en el Municipio de Arroyo Seco. Las técnicas moleculares como la PCR y sus variaciones se consideran importantes herramientas diagnosticas porque son sensibles, específicas y pueden detectar con mayor precisión la presencia de A. platys en perros (Ramos y col., 2009). En otros estudios de Italia y México el menor porcentaje de perros positivos de Anaplasma platys ha sido mostrado, 2.5%, 4% y 3%, respectivamente (Silva et al., 2016). Sin embargo la técnica de diagnóstico de Inmunocromatografia de Flujo Lateral es menos sensible (88.5%), pero su tiempo de realización es más corto, fácil de interpretar y permite confiar en sus resultados (QBiotech.gr, 2014).

5 Tlamati Sabiduría Volumen 7 Número Especial 2 (2016) La co-infección de A. platys y E. canis se han reportado en diferentes regiones del mundo, como China, el Caribe, Venezuela y Brasil. En este estudio, el 32% (32/100) de los animales examinados por npcr se presentaron infectados con ambos patógenos. Estos datos sugieren que A. platys y E. canis pueden ser transmitidos por el mismo vector (Ramos y col., 2009). Nuestro estudio pone de manifiesto la presencia de R. massiliae en garrapatas R. sanguineus del Municipio de Bahía Blanca, siendo la segunda zona urbana de Sudamérica donde se ha detectado. En caninos detectamos la infección por A. platys, siendo la región más austral de Argentina donde ha sido notificada (Cicuttin y col., 2014). Rickettsia massiliae ha sido detectada en garrapatas del género Rhipicephalus con diversos niveles de infección, de 2,5-18% en Europa, 5-6% en África, 25% en Israel hasta más de 25% en Estados Unidos de América. En Sudamérica, sólo había sido detectada en CABA, con un nivel de infección de 3,4 a 20% (Cicuttin y col., 2014). En conclusión, el estudio permitió identificar la presencia de anticuerpos contra Anaplasma phagocytophilum y Anaplasma platys en las comunidades el Salitrillo y las Trancas, Municipio de Arroyo Seco Querétaro y por tanto evidenciar que se encuentra en riesgo de salud pública. Agradecimientos A mis padres, que siempre me dieron el apoyo incondicional para llegar hasta donde ahora estoy, por su amor, esfuerzo y dedicación haciendo de mí una persona con valores, virtudes y con deseos de triunfar en la vida. A mi investigador el Dr. Juan Mosqueda que me abrió las puertas a su programa de investigación, dándome la atención, apoyo, comprensión y conocimientos para realizar mi proyecto de Identificación de anticuerpos contra Anaplasma phagocytophilum y Anaplasma platys en perros del Municipio de Arroyo Seco, Querétaro. A su manera, ha sido capaz de ganarse mi admiración, así como sentirme en deuda con él por todo lo recibido durante el periodo de investigación científica en mi estancia de verano. Quiero agradecer a mi Universidad Autónoma de Guerrero y maestros ya que ellos me enseñaron valorar los estudios y superarme cada día, dándome las herramientas para ser mejor estudiante. Agradezco a Dios por darme salud, por tener cabeza con la que puedo pensar y una mente de bien. Y sin olvidar a mí Programa del 3 er Verano de Investigación Científica Jóvenes de la UAGro por la Ciencia y a la beca que me brindo CONACYT muchas gracias por tomarme en cuenta y aceptar mi solicitud y con el apoyo de $7000, pude realizar dicha estancia, con la cual estoy muy

6 4 Encuentro de Jóvenes Investigadores CONACYT Acapulco, Guerrero 21, 22 y 23 de septiembre 2016 satisfecha con mi desempeño estudiantil. Me da más ánimos de seguir adelanten con mis estudios para conseguir todas mis metas. Referencias Alberdi, P., Ayllóna, N., Cabeza, A., Bell-Sakyi, L., Zweygarthd, E., Stuenf, S & De la Fuente. (2015). Infection of Ixodes spp. tick cells with different Anaplasma phagocytophilum isolates induces the inhibition of apoptotic cell death. Ticks and Tick-borne Diseases. Doi: Cicuttin, G., Vidal, P., Salvo, N, Beltrán, F., Dohmen, F. (2014). Detección molecular de Rickettsia massiliae y Anaplasma platys en garrapatas Rhipicephalus sanguineus y caninos domésticos del municipio de Bahía Blanca (Argentina). Rev. SCIELO Santiago. Vol.31 no.5. Recuperado de Lai, T., Parraga, M., Álvarez & Rikihisa, Y. (2016). Anaplasma platys Immunoblot Test Using Major Surface Antigens. VECTOR-BORNE AND ZOONOTIC DISEASES. Vol. XX n.20, 1-5. Doi: /vbz Peñaloza, M. (2015). Diagnóstico de Dirofilariosis y Anaplasmosis canina en perros de los barrios rurales del cantón catamayo de la provincia de Loja a través del Test SNAP 4DX canino (Tesis titular). Universidad Nacional de Loja, Ecuador. Qbiotech.gr. (2016). CaniV Prueba Rápida de mascotas. [En línea] Disponible en: [acceso 01 de de agosto De 2016]. Ramos, C.A:N., Ramos, R.A.N., Araúju, F.R., Guedes D.S., Souza, I.J.F., Ono, T.M., Vieira, A.S., Pimentel, D.S., Rosas, E.O., Faustino, M.A.G., Alves, L.C., Comparison of nested-pcr with blood smear examination in detection of Ehrlichia canis and Anaplasma platys in dogs. Rev. Bras. Parasitol. Vet Rubio, A., Salas, E., & Gómez, G. (2011). Presencia de anticuerpos contra Borrelia burgdorferi y Anaplasma sp en canes de la ciudad de Lima. Rev SCIELO Perú. Vol 22 n.3. Recuperado de

7 Tlamati Sabiduría Volumen 7 Número Especial 2 (2016) Silva C., Azevedo H., González M., Uzedo C., Corona B., Fuentes M., Sandes M., Pecklea M., Lins R., Vivas G & Luiz C. (2016). Molecular detection and characterization of Anaplasma platys in dogs and ticks in Cuba. Ticks Tick-borne Dis. 7. Doi: /j.ttbdis Tateishi, V., Lí, O., Hoyos, L., Rivera, H., Manchego, A., Barrios, L & More, J. (2015). Identificación Hematológica y Molecular de Anaplasma platys en Caninos Domésticos de Lima Metropolitana con Signos Clínicos Compatibles con Anaplasmosis. Revista Chilena de Infectiología. Vol. 26 no. 1: Santiago. Recuperado de Anexos Imágenes Imagen: Elías Guadalupe Pérez Imagen: Disseiri Mondragón

8 4 Encuentro de Jóvenes Investigadores CONACYT Acapulco, Guerrero 21, 22 y 23 de septiembre 2016 Imagen: José Rayas Imagen: Aquileo Pineda

9 Tlamati Sabiduría Volumen 7 Número Especial 2 (2016) Imagen: Juan Mosqueda Imagen: Aquileo Pineda Encuesta UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE QUERETARO Cuidado con la garrapata! Nombre del propietario: Municipio: Comunidad: Datos del perro

10 4 Encuentro de Jóvenes Investigadores CONACYT Acapulco, Guerrero 21, 22 y 23 de septiembre 2016 Nombre: Edad: Sexo: Presencia de garrapatas: Tríptico

11 Tlamati Sabiduría Volumen 7 Número Especial 2 (2016)

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