Teórico Practico: Introducción a la Inmunología Molecular. Dra Carolina Montes
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- Marcos Soler Martín
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1 Teórico Practico: Introducción a la Inmunología Molecular Dra Carolina Montes
2 La respuesta inmune en organismos normales: Mediante el desarrollo de modelos en animales de experimentación ej ratones, ratas. Mediante la transferencia de anticuerpos o células efectoras a animales de experimentación
3 Animales con mutaciones naturales o manipulados genéticamente son una herramienta muy útil para el estudio del rol de los distintos componentes del SI Ratones nude Mutaciones Naturales Ratones SCID Ratones Xid Ratones beige
4 Ratones nude: Falla en la maduración y el desarrollo del timo. Carecen de timo funcional. Carecen de células T. Qué funciones inmunológicas están alteradas? Producción de anticuerpos que requieren la Li CD4+ Respuesta inmune mediada por células (que requieren CD4+ y CD8+ Prueba de hipersensibilidad de tipo demorada (participan CD4+) Muerte de células infectadas por virus o células tumorales (requiere Li CD8+) No rechazan injertos (participan Li CD4+ y CD8+)
5 La ausencia de LiT hace que los ratones nude no puedan rechazar injertos aún cuando sean de otras especies A. Piel Humana a los 60días. B. Piel de gato a los 51 días. C. Piel de pollo a los 32 días D. Piel de camaleón (reptil) a los 41 días. E. Piel de reptil a los 28 días. F. Piel de Sapo a los 40 días.
6 Cual es la utilidad de estos ratones? Representan una importante herramienta para el estudio del rol del timo en la diferenciación de Li. Al repoblar estos animales con distintas subpoblaciones de Li T (CD4+, CD8+) permite evaluar la función individual de cada una de estas poblaciones. Han sido ampliamente utilizados para estudiar factores que regulan el crecimiento de tumores humanos y la metástasis de células cancerosas.
7 Ratones SCID: Inmunodeficiencia severa combinada. El defecto genético se localiza a nivel de los genes que Codifican para las enzimas RAG1 y RAG2 Carecen de Li B y T pero el estroma de sus órganos linfáticos es normal Qué funciones inmunológicas van a estar alteradas? Producción de Acs: hay un arresto en la diferenciación de Li B. Déficit de células CD3+, TCR αβ+, arresto en Li T CD4-CD8-. Inmunidad mediada por células alterada. Altamente sensible a infecciones con diferentes patógenos.
8 Cual es la utilidad de estos ratones? Los ratones SCID representan un excelente herramienta para el estudio de la Inmunodeficiencia Severa Combinada que se presenta en humanos. Presentan un microambiente estromal normal por lo que si se los injerta con MO de un animal N se produce diferenciación N de LiB y T generando un SI intacto (QUIMERA) Se utilizan para el estudio de la RI frente a distintos patógenos
9 QUIMERA SCID-hu Toxoide Tetánico Li de sangre periférica humana Acs contra TT SCID SCID-hu Tejido fetal de hígado, timo y Nod linfático Virus HIV AZT SCID SCID-hu
10 Ratones Xid: Presentan inmunodeficiencia ligada a X. Tienen una mutación en el locus BtK (Bruton tirosin kinasa) Enzima que se expresa en Li progenitores y maduros y es esencial para el desarrollo de la Li B. No se expresa en LiT Qué funciones inmunológicas están alteradas? Defecto en la respuesta inmune hacia Ags TI-2. Normal respuesta hacia Ags TI-1. Comprometida la respuesta hacia Ags TD Comprometida la respuesta a mitógenos de la cel B
11 Cual es la utilidad de estos ratones? Estudios realizados en estos animales aportan importantes conocimientos relacionados con el desarrollo y la maduración de la cel B. Han sido utilizados en modelos de infección con diferentes patógenos como T cruzi, leishmania.
12 Ratones beige: defecto funcional en granulocitos y macrófagos. Deficientes en células NK. Qué funciones inmunológicas van a estar alteradas? Comprometida la citólisis de células tumorales Alta susceptibilidad a infecciones con bacterias pirogénicas Cual es la utilidad de estos ratones? La inmunodeficiencia de estos ratones es análoga a la Enfermedad Chediak-Higashi en humanos. Representan una herramienta interesante para evaluar la participación de las cel NK en diferentes procesos infecciosos.
13 Técnicas para manipular el sistema inmune Irradiación: Radiaciones x o γ con dosis que matan a las Células linfoides y que no afecten los otros tejidos. Con dosis mas elevadas que matan todas las cel de origen hematopogético (quimeras irradiadas). Esta técnica ha sido muy utilizada en los estudios del desarrollo de la cel T Timectomía: Extirpación quirúrgica del timo obteniendose animales deficientes en cél T. Tratamiento con Acs in vivo: Se inyecta al humano o al ratón con un Ac monoclonal dirigido contra una molécula particular de la superficie celular. El Ac actúa sobre las cel que expresen esa molécula inhibiendo la función de dicha molécula.
14 Uso de oligonucleótidos antisentido: están diseñados para inhibir la traducción de RNA por unión con alta afinidad y selectividad al RNA blanco
15 RNA interferencia (RNAi): inhibición específica de la expresión del gen mediada por una doble cadena de RNA llamada RNA de interferencia corta o si RNA.
16 Terapia Génica Tratamiento de la deficiencia en adenosina deaminasa (ADA). (Niños de la burbuja de plástico) Presentan una SCID,defectos en la función de Li B y T. Infecciones recurrentes con patógenos oportunistas. El tratamiento de la deficiencia de ADA es transplante de MO o administración sistémica de ADA conjugada con PEG.
17 Protocolo publicado por Anderson PEG-ADA Se obtuvieron las células T, se las hizo proliferar Transfiere el gen funcional de la enzima ADA con vector retroviral. Cultivadas expandidas y re-inyectadas al paciente luego de 9 días. Seguimiento evaluando el numero de Li T, respuesta a DTH, a Ags específicos, Acs, a mitógenos.
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