Pathromtin* SL. Intended Use Reagent for the determination of the activated partial thromboplastin time (APTT) in citrated human plasma.

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1 Intended Use Reagent for the determination of the activated partial thromboplastin time (APTT) in citrated human plasma. Summary and Explanation Pathromtin* SL Reagent enables rapid screening for disorders of the intrinsic coagulation system and sensitively detects Factors VIII and IX as well as the contact factors. In conjunction with deficient plasmas it enables the individual factors of the intrinsic system to be quantified and permits diagnosis of hemophilia. In addition it can be used for monitoring heparin therapy 1. The use of the APTT as a screening test for coagulation disorders is indicated particularly prior to surgical interventions as this allows potential hemophiliacs to be diagnosed and given special therapeutic protection. The presence of non-specific inhibitors such as the lupus-like anticoagulant may prolong the APTT, but this effect is variable and generally recognized as being related more to the nature of the APTT reagent employed 2. Principle of the Method Incubation of plasma with the optimal quantity of phospholipids and a surface activator leads to activation of factors of the intrinsic coagulation system. The addition of calcium ions triggers the coagulation process; the time to formation of a fibrin clot is measured. Reagents Materials provided 10 x 5 ml, [REF] OQGS x 5 ml, [REF] OQGS 35 Composition Pathromtin* SL Reagent: Silicon dioxide particles (1.2 g/l), plant phospholipids (0.25 g/l), sodium chloride, Hepes, ph 7.6 Preservative: Sodium azide (< 1 g/l). Warnings and Precautions 1. For in-vitro-diagnostic use. 2. Contains sodium azide (< 0.1 %) as a preservative. Sodium azide can react with copper or lead pipes in drain lines to form explosive compounds. Dispose of properly in accordance with local regulations. Preparation of the Reagents Pathromtin* SL Reagent must be gently inverted (5 to 8 times) to mix before first use and must be used at room temperature (+15 to +25 C). Every 24 hours of use, the reagent must be inverted to resuspend any sediment. Calcium chloride solution mol/l: warm to +37 C. Storage and Stability Stored unopened at +2 to +8 C Pathromtin* SL Reagent may be used by the expiry date given on the label. Once opened Pathromtin* SL Reagent must be used within 2 weeks (store at +2 to +25 C). Information regarding on-board stability is specified in the Reference Guides (Application Sheets) for the different coagulation analyzers. Materials required but not provided - Calcium Chloride (CaCl 2 ) Solution mol/l - Control Plasma N, or Dade Ci-Trol Level 1 as control for the normal range - Control Plasma P, or Dade Ci-Trol Level 2, or Dade Ci-Trol Level 3 as control for the pathological/therapeutic range - Coagulation analyzer (see Equipment ) - Pipettes - Plastic test tubes Equipment: Pathromtin* SL can be used manually or on automated coagulation analyzers. Siemens Healthcare Diagnostics provides Reference Guides (Application Sheets) for several coagulation analyzers. The Reference Guides (Application Sheets) contain analyzer/assayspecific handling and performance information which may differ from that provided in these Instructions for Use. In such a case, the information contained in the Reference Guides (Application Sheets) supersedes the information in these Instructions for Use. In addition, please also consult the instruction manual of the instrument manufacturer. Specimen Collection and Preparation To obtain the plasma, carefully mix 1 part sodium citrate solution (0.11 mol/l) with 9 parts venous blood, avoiding the formation of foam. Immediately centrifuge for 15 minutes at 1500 x g, remove the supernatant plasma and keep at +15 to +25 C until use in the test (max. 4 hours). In the US please refer to the CLSI Document H21-A4, entitled Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and Performance of Coagulation Assays 3. Procedure Manual Testing: Pipette into a test tube pre-warmed to +37 C: Citrated plasma 100 µl Pathromtin* SL Reagent 100 µl Incubate for 2 minutes at +37 C Calcium chloride solution (+37 C!) 100 µl On adding the calcium chloride solution start the stopwatch or timer on the coagulation analyzer and measure the coagulation time. Internal Quality Control Normal range: Control Plasma N, or Dade Ci-Trol Level 1 Pathological range: Control Plasma P, or Dade Ci-Trol Level 2, or Dade Ci-Trol Level 3 Two controls (one in the normal range and one in the pathological/therapeutic range) must be measured at the start of the test run, after each change of reagent vial, and at least once during an 8-hour shift. The control material should be prepared and processed in the same manner as the patient samples. Each laboratory should establish its own confidence intervals for the controls. This interval is generally ± 2 to ± 2.5 standard deviations from the mean control value. If the control values are outside of the confidence interval, the controls, reagents and instrument must be checked. Before reporting the patient values, it is recommended that all steps should be documented that were taken to identify and rectify the problem. New control ranges should be defined for each new lot of reagents or controls. Results The result is given in seconds. Limitations of the Procedure Interferences of APTT are described in bibliography references 4-6. Therapeutic doses of hirudin or other direct thrombin inhibitors may prolong clotting times 7. The choice of anticoagulant (i.e. oxalate instead of citrate) and the condition of the specimen (e.g. hemolyzed, lipemic, parenteral feeding, etc.) may affect results. The latter is particularly true of optical instrumentation measurements of the APTT. Preactivation of the sample due to poor phlebotomy technique can lead to false results. Referencing the Sample handling and Collection section of CLSI Document H21-A4 it is recommended that test tubes with non-wetable surfaces (e. g., plastic) be used rather than glass test tubes. Siemens has validated use of these reagents on various analyzers to optimize product performance and meet product specifications. User defined modifications are not supported by Siemens as they may affect performance of the system and assay results. It is the responsibility of the user to validate modifications to these instructions or use of the reagents on analyzers other than those included in Siemens Application Sheets or these instructions for use. Results of this test should always be interpreted in conjunction with the patient s medical history, clinical presentation and other findings. Expected Values Reference intervals vary from laboratory to laboratory depending on the population served and the technique, method, equipment and reagent lot used. Therefore, each laboratory must establish its own reference intervals or verify them whenever one or more of the aforementioned variables are changed. In a study of ostensibly healthy individuals using a specific lot of Pathromtin* SL Reagent, the following values were obtained: Median 90 % Reference Interval 5 th Percentile 95 th Percentile 111 individuals Sysmex CA sec sec sec. 111 individuals BCS System 30.2 sec sec sec. Reference ranges for other populations such as pediatric groups should also be established where warranted. Specific Performance Characteristics Precision Using opto-densitometric detection, precision studies were run over a 5 day period, twice per day (n = 8 replicates per day), to total n = 40 for normal and pathological control plasmas as well as a heparin plasma pool. Intra-assay precision was calculated from the individual n = 4 precision values for the daily runs over the 5 days. Intra-assay precision ranged from % CV, while the inter-assay precision ranged from % CV. Method Comparison Results of a comparison of APTT determinations using Pathromtin* SL Reagent and another commercially available APTT reagent gave a correlation coefficient of 0.96 and a y-intercept of 2.1 sec., and a slope of Bibliography 1. Wagner C, Dati F. Activated partial thromboplastin time (APTT) test. In: Thomas L, ed. Clinical Laboratory Diagnostics. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft, 1998: Brandt JT, Triplett DA, Rock WA, et al. Effect of lupus anticoagulants on the activated partial thromboplastin time. Arch Pathol Lab Med 1991; 115: CLSI. Collection, Transport, and Processing of Blood Specimens for Testing Plasma- Based Coagulation Assays; Approved Guideline - Fourth Edition. CSLI document H21- A4 [ISBN ]. CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania USA, Poller L, Thomson JM. The activated partial thromboplastin time (aptt) In: Jespersen J, Bertina RR, Haverkate F, eds. A Manual of Laboratory Techniques. Kluwer Academic Publishers, Hingham, MA, 1992: Brack MJ, More RS, Hubner PJ, Gershlick AH. The effect of low dose nitroglycerin on plasma heparin concentrations and activated partial thromboplastin times. Blood Coagul Fibrinolysis 1993; 4: Harder S, Graff J, Klinkhardt U, et al. Transition from argatroban to oral anticoagulation with phenprocoumon or acenocoumarol: effects on prothrombin time, activated partial thromboplastin time, and Ecarin Clotting Time. Thromb Haemost 2004; 91: Boogen C, Niederau C, Reinauer H. Assessment of the influence of r-hirudin on coagulometric factor assays. Ann Hematol 1999; 78 (Suppl): 73 (Abstract). * Pathromtin is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics. BCS, Ci-Trol and Dade are trademarks of Siemens Healthcare Diagnostics. Sysmex is a registered trademark of SYSMEX CORPORATION. OQGS G29 E0501 (681) 1 Edition May 2008

2 Anwendungsbereich Reagenz zur Bestimmung der aktivierten partiellen Thromboplastinzeit (APTT) in menschlichem Citratplasma. Diagnostische Bedeutung Die Bestimmung der APTT mit Pathromtin* SL Reagenz ist ein schneller Suchtest auf Gerinnungsstörungen des endogenen Systems und erfasst empfindlich die Faktoren VIII und IX sowie die Kontaktfaktoren. Zusammen mit Mangelplasmen ist Pathromtin* SL Reagenz geeignet für die Bestimmung von Einzelfaktoren des endogenen Systems und zur Diagnose einer Hämophilie. Außerdem kann es zur Überwachung der Heparintherapie benutzt werden 1. Die Messung der APTT ist indiziert als Suchtest auf Gerinnungsstörungen insbesondere vor chirurgischen Eingriffen, um potenzielle Bluter unter besonderen therapeutischen Schutz stellen zu können. Die Anwesenheit von unspezifischen Inhibitoren, wie der des Lupus-ähnlichen Antikoagulans, können die APTT verlängern. Dieser Effekt ist jedoch variabel und ist generell als ein natürlicher Effekt des verwendeten APTT-Reagenz bekannt 2. Prinzip der Methode Inkubation von Plasma mit der optimalen Menge an Phospholipiden und einem Oberflächenaktivator führt zur Aktivierung von Faktoren des endogenen Gerinnungssystems. Durch Zugabe von Calcium-Ionen wird der Gerinnungsvorgang ausgelöst; gemessen wird die Zeit bis zur Bildung eines Fibringerinnsels. Reagenzien Inhalt der Handelspackungen Zusammensetzung Pathromtin* SL Reagenz: Siliciumdioxid-Partikel (1,2 g/l), pflanzliche Phospholipide (0,25 g/l), Natriumchlorid, Hepes, ph 7,6 Konservierungsmittel: Natriumazid (< 1 g/l) Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen 1. Nur zur in-vitro-diagnostischen Anwendung. 2. Enthält Natriumazid (< 0,1 %) als Konservierungsmittel. Natriumazid kann mit kupferoder bleihaltigen Abflussrohren explosive Verbindungen eingehen. Entsorgen Sie bitte ordnungsgemäß entsprechend den örtlichen Richtlinien. Vorbereitung der Reagenzien Pathromtin* SL muss vor erstmaligem Gebrauch durch 5 bis 8-maliges Überkopfddrehen resuspendiert werden und wird bei Raumtemperatur (+15 bis +25 C) eingesetzt. Das Resuspendieren muss alle 24 Stunden wiederholt werden, um Sedimentationseffekte zu vermeiden! Calciumchlorid-Lösung 0,025 mol/l auf +37 C erwärmen. Haltbarkeit und Lagerungsbedingungen Pathromtin* SL Reagenz ist, ungeöffnet bei +2 bis +8 C gelagert, bis zu dem auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum verwendbar. Nach dem erstmaligen Öffnen ist Pathromtin* SL Reagenz 2 Wochen bei +2 bis +25 C stabil. Die Angaben zur Stabilität auf dem Gerät sind in den Referenzhandbüchern (Applikationsvorschriften) für die einzelnen Gerinnungsmessgeräte aufgeführt. Zusätzlich benötigte Materialien - Calciumchlorid (CaCl 2 )-Lösung 0,025 mol/l - Kontroll-Plasma N oder Dade Ci-Trol Level 1 als Kontrolle für den Normalbereich - Kontroll-Plasma P oder Dade Ci-Trol Level 2 oder Dade Ci-Trol Level 3 als Kontrolle für den pathologischen/therapeutischen Bereich - Gerinnungsmessgerät (siehe Geräte ) - Pipetten - Teströhrchen aus Plastik Geräte Pathromtin* SL kann manuell oder an automatischen Gerinnungsmessgeräten verwendet werden. Siemens Healthcare Diagnostics stellt für verschiedene Gerinnungsmessgeräte Referenzhandbücher (Applikationsvorschriften) zur Verfügung. Diese enthalten geräte-/ testspezifische Informationen zur Abarbeitung und zu Leistungsdaten, die von den Informationen in dieser Gebrauchsanweisung abweichen können. In diesem Fall ersetzen die Informationen in den Referenzhandbüchern (Applikationsvorschriften) die Informationen in dieser Gebrauchsanweisung. Bitte auch die Bedienungsanleitung des Geräteherstellers beachten! Probenabnahme und -vorbereitung Zur Plasmagewinnung 1 Teil Natriumcitrat-Lösung (0,11 mol/l) mit 9 Teilen Venenblut sorgfältig unter Vermeidung von Schaumbildung mischen. Sofort mindestens 15 Minuten bei mindestens 1500 x g zentrifugieren, überstehendes Plasma abhebern und bis zum Test bei +15 bis +25 C aufbewahren (max. 4 Stunden). In den USA bitte auf das CLSI Dokument H21-A4 mit dem Titel Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and Performance of Coagulation Assays beziehen 3. Testdurchführung Manuelle Durchführung: In ein auf +37 C vorgewärmtes Teströhrchen pipettieren: Zu Beginn eines Testlaufs, bei jedem Reagenzflaschenwechsel und mindestens einmal während einer 8-Stunden-Schicht müssen zwei Kontrollen (eine im Normalbereich und eine im pathologischen/therapeutischen Bereich) gemessen werden. Das Kontrollmaterial sollte wie die Patientenplasmen behandelt werden. Jedes Labor sollte seinen eigenen Vertrauensbereich für die Kontrollen ermitteln. Dieser beträgt in der Regel ±2 bis ±2,5 Standardabweichungen vom mittleren Kontrollwert. Liegen die Kontrollwerte außerhalb des Vertrauensbereichs, sind die Kontrollen, Reagenzien und das Gerät zu überprüfen. Es wird empfohlen, vor der Ausgabe von Patientenwerten alle Maßnahmen zu dokumentieren, die zur Feststellung und Behebung des Problems ergriffen wurden. Bei jeder neuen Reagenzien- oder Kontrollencharge sollten neue Kontrollbereiche definiert werden. Ergebnisse Das Messergebnis wird in Sekunden angegeben. Einschränkungen der Testdurchführung Über Störungen der APTT wird in der Literatur berichtet 4-6. Therapeutische Dosen von Hirudin oder anderen direkten Thrombininhibitoren können zu verlängerten Gerinnungszeiten führen 7. Die Ergebnisse können außerdem durch das gewählte Antikoagulans (z. B. Oxalat anstelle von Citrat) beeinflusst werden, sowie durch die Beschaffenheit der Probe (z. B. hämolytisch, lipämisch, künstliche Ernährung, usw.), welche insbesonders bei der optischen Bestimmung der APTT von Bedeutung ist. Eine abnahmebedingte Voraktivierung der Probe kann zu falschen Ergebnissen führen. Im Abschnitt über Probennahme und -handhabung des CLSI Dokuments H21-A4 wird empfohlen, Teströhrchen mit nicht-benetzbarer Oberfläche (z. B. Plastik) anstelle von Glasröhrchen einzusetzen. Siemens hat den Einsatz dieser Reagenzien auf verschiedenen Analysengeräten auf optimale Produktleistung und Einhaltung der Produktspezifikationen überprüft. Vom Benutzer vorgenommene Änderungen werden von Siemens nicht unterstützt, da sie die Leistung des Systems und die Testergebnisse beeinflussen können. Es liegt in der Verantwortung des Benutzers, Änderungen an diesen Anleitungen oder die Verwendung dieser Reagenzien auf anderen als in den Applikationsvorschriften von Siemens oder diesen Gebrauchsanweisungen genannten Analysengeräten zu validieren. Resultate dieses Tests sollten stets in Verbindung mit der Vorgeschichte des Patienten, dem klinischen Bild und anderen Untersuchungsergebnissen interpretiert werden. Referenzbereiche Referenzintervalle variieren von Labor zu Labor in Abhängigkeit von der zu untersuchenden Population und den angewendeten Arbeitstechniken, Methoden, Geräten und Reagenzchargen. Daher sollte jedes Labor auf der Grundlage der jeweils angewendeten Arbeitstechniken, Methoden, Geräte und Reagenzchargen eigene Referenzbereiche ermitteln, bzw. die Referenzbereiche nach einem Wechsel der aufgeführten Parameter verifizieren. In einer Studie an offensichtlich gesunden Probanden wurden mit einer spezifischen Charge Pathromtin* SL Reagenz folgende Werte erhalten: Median 90 % Referenzintervall 5. Perzentile 95. Perzentile 111 Probanden Sysmex CA ,9 sec. 26,4 sec. 37,5 sec. 111 Probanden BCS System 30,2 sec. 25,9 sec. 36,6 sec. Für andere Kollektive, wie z. B. pädiatrische Patienten, sollten gegebenenfalls eigene Referenzbereiche ermittelt werden. Leistungsmerkmale des Tests Präzision Auf einem opto-densitometrischen Messverfahren wurden Präzisionsuntersuchungen an normalen und pathologischen Plasmen, sowie einem Heparin-Plasmapool, über 5 Tage, zweimal täglich (n = 8 Bestimmungen pro Tag), mit insgesamt 40 Bestimmungen durchgeführt. Der Variationskoeffizient in der Serie wurde aus den einzelnen 4-fach-Bestimmungen berechnet. Er lag zwischen 0,6 und 2,0 %, während der Variationskoeffizient von Tag zu Tag zwischen 0,3 und 2,8 % lag. Methodenvergleich Bei einem Vergleich von APTT-Bestimmungen mit Pathromtin* SL Reagenz und einem anderen APTT-Reagenz ergab sich mit Pathromtin* SL Reagenz ein Korrelationskoeffizient von 0,96 bei einem y-achsenabschnitt von 2,1 sec. und einer Steigung von 0,99. Literatur Siehe Seite 1. * Pathromtin ist ein Warenzeichen von Siemens Healthcare Diagnostics. BCS, Ci-Trol und Dade sind Warenzeichen von Siemens Healthcare Diagnostics. Sysmex ist eine eingetragene Marke der SYSMEX CORPORATION. Citratplasma 100 µl Pathromtin* SL Reagenz 100 µl 2 Minuten bei +37 C inkubieren Calciumchlorid-Lösung (+37 C!) 100 µl Mit Zugabe von Calciumchlorid-Lösung Stoppuhr bzw. Messstelle am Gerinnungsmessgerät starten und die Gerinnungszeit messen. Interne Qualitätskontrolle Normalbereich: Kontroll-Plasma N oder Dade Ci-Trol Level 1 Pathologischer Bereich: Kontroll-Plasma P oder Dade Ci-Trol Level 2 oder Dade Ci-Trol Level 3 OQGS G29 E0501 (681) 2 Ausgabe Mai 2008

3 Domaine d utilisation Réactif pour la détermination du Temps de Céphaline Activé (TCA) dans le plasma citraté humain. Intérêt diagnostique La détermination du TCA à l'aide de Réactif Pathromtin* SL est un test de dépistage rapide des troubles du système endogène de la coagulation, sensible aux Facteurs VIII, IX, et aux facteurs de la phase contact. Utilisé en association avec des plasmas exempts, Réactif Pathromtin* SL permet le dosage des différents facteurs du système endogène de la coagulation, ainsi que le diagnostic d'hémophilie. Il peut également être utilisé pour la surveillance des traitements à l'héparine 1. La détermination du TCA est indiquée comme test de dépistage des troubles de la coagulation, en particulier avant une intervention chirurgicale, afin de pouvoir prendre les mesures thérapeutiques appropriées chez les patients susceptibles de faire une hémorragie. La présence d inhibiteurs non spécifiques, tel l anticoagulant de type lupus, peut allonger le TCA, même si cet effet est variable et généralement considéré comme lié à la nature du réactif TCA utilisé 2. Principe de la méthode L'incubation du plasma avec une quantité optimale de phospholipides et d'un activateur de surface entraîne l'activation des facteurs du système endogène de la coagulation. L'addition d'ions calcium déclenche le processus de la coagulation. On mesure alors le temps écoulé jusqu'à la formation du caillot de fibrine. Réactifs Contenu des coffrets Composition Réactif Pathromtin* SL : particules de dioxyde de silicium (1,2 g/l), phospholipides végétaux (0,25 g/l), chlorure de sodium, Hépès, ph 7,6 Agent de conservation : azide de sodium (< 1 g/l) Mises en garde et précautions d emploi 1. Ne doit être employé que pour un usage in vitro. 2. Contient de l azite de sodium (< 0,1 %) comme conservateur. L azite de sodium peut réagir avec les tuyaux d évacuation en cuivre ou en plomb et former des composés explosifs. L évacuer conformément aux réglementations locales. Préparation des réactifs Avant son premier emploi, remettre le Réactif Pathromtin* SL en suspension en retournant le flacon 5 à 8 fois, et l utiliser à la température ambiante (+15/+25 C). La remise en suspension doit être répétée toutes les 24 heures pour éviter tout effet de sédimentation! Porter la Solution de chlorure de calcium 0,025 mol/l à +37 C. Stabilité et conditions de conservation Conservé non ouvert à +2/+8 C, Réactif Pathromtin* SL peut être utilisé jusqu à la date d expiration indiquée sur l étiquette. Après première ouverture, il reste stable 2 semaines à +2/+25 C. Les données de stabilité sur appareil sont indiquées dans les manuels de référence (protocoles d adaptation) des différents appareils de coagulation. Autres réactifs nécessaires - Solution de chlorure de calcium (CaCl 2 ) 0,025 mol/l - Plasma de contrôle N ou Dade Ci-Trol niveau 1 comme contrôle dans le domaine normal - Plasma de contrôle P ou Dade Ci-Trol niveau 2 ou Dade Ci-Trol niveau 3 comme contrôle dans le domaine pathologique/thérapeutique - Appareil de coagulation (cf. «Appareils») - Pipettes - Tubes à essai en plastique Appareils Pathromtin* SL peut être utilisé manuellement ou sur des automates de coagulation. Siemens Healthcare Diagnostics met à la disposition de ses clients des manuels de référence (protocoles d adaptation) pour différents appareils de coagulation. Ces manuels contiennent des informations spécifiques à chaque appareil et aux tests, fournissant des données de travail et de performance qui peuvent être différentes de celles indiquées dans cette fiche technique. Dans ce cas-là, utiliser les données du manuel de référence (protocole d adaptation) et non celles de cette fiche technique. Respecter les instructions d utilisation du fabricant de l automate utilisé! Prélèvement et préparation des échantillons Pour obtenir les plasmas, prélever 1 volume de solution de citrate de sodium (0,11 mol/l) avec 9 volumes de sang veineux, et mélanger avec précaution en évitant la formation de mousse. Centrifuger aussitôt pendant au moins 15 min à au moins 1500 x g, prélever le plasma surnageant, et le conserver à +15/+25 C (max. 4 heures) jusqu au test. Aux USA, se reporter au document CLSI H21-A4 intitulé «Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and Performance of Coagulation Assays» 3. Réalisation du test Méthode manuelle : Distribuer dans un tube à essai préchauffé à +37 C : Contrôle de qualité interne Domaine normal : Plasma de contrôle N ou Dade Ci-Trol niveau 1 Domaine pathologique : Plasma de contrôle P ou Dade Ci-Trol niveau 2 ou Dade Ci- Trol niveau 3 Au début de chaque série, à chaque changement de flacon de réactif, et au moins toutes les 8 heures de travail, mesurer deux contrôles (un dans le domaine normal et un dans le domaine pathologique/thérapeutique). Traiter les contrôles comme des échantillons de patients. Chaque laboratoire doit déterminer ses propres domaines de confiance pour les contrôles. Ils sont généralement de ±2 à ±2,5 déviation standard (DS) par rapport à la valeur moyenne du contrôle. Si les valeurs obtenues pour les contrôles sortent de leur domaine de confiance respectif, procéder à une vérification des contrôles, des réactifs et de l appareil. Il est recommandé de documenter toutes les mesures prises pour identifier et résoudre le problème rencontré avant de rendre les résultats des patients. Etablir de nouveaux domaines de confiance à chaque changement de lot de réactif ou de contrôle. Résultats Les résultats sont exprimés en secondes. Limites de réalisation du test La littérature fait état de perturbations du TCA 4-6. Des doses thérapeutiques d Hirudin ou d autres inhibiteurs directs de la thrombine peuvent entraîner un allongement des temps de coagulation 7. Les résultats peuvent également être influencés par l anticoagulant choisi (par ex. de l oxalate au lieu du citrate), ainsi que par l état de l échantillon (par ex. hémolytique, lipémique, alimentation artificielle, etc.), tout particulièrement en cas de détermination optique du TCA. Une préactivation de l échantillon due à la technique de prélèvement peut entraîner de faux résultats. Selon le document CLSI H21-A4 sur le prélèvement et le traitement des échantillons, il est recommandé d utiliser des tubes à essai non mouillables (par ex. en plastique) au lieu de tubes en verre. Siemens a validé l utilisation de ces réactifs sur plusieurs analyseurs afin d optimiser les performances du produit et répondre à ses spécifications. Les modifications apportées par l utilisateur ne sont pas sous la responsabilité de Siemens dans la mesure où elles peuvent affecter les performances du système et les résultats des dosages. Il est de la responsabilité de l utilisateur de valider toutes modifications apportées à ces instructions ou à l utilisation des réactifs sur les analyseurs autres que ceux mentionnés dans les protocoles d application Siemens ou dans la présente notice d utilisation. Les résultats de ce test doivent toujours être interprétés en rapport avec les antécédents médicaux du patient, les signes cliniques et autres constatations. Domaines de référence Les intervalles de référence varient d un laboratoire à l autre selon les populations étudiées, ainsi que selon les techniques de travail, les méthodes, les appareils et les réactifs utilisés. Aussi chaque laboratoire doit-il déterminer ses propres domaines de référence en fonction des techniques de travail et des méthodes qu il applique, ainsi que des appareils et des lots de réactifs qu il utilise, et vérifier ses domaines de référence après tout changement d un des paramètres. Dans le cadre d une étude effectuée sur des sujets apparemment sains, les valeurs suivantes ont été obtenues avec un lot spécifique de Réactif Pathromtin* SL : médiane 90 % de l intervalle de référence 5 ème percentile 95 ème percentile 111 échantillons sur Sysmex CA ,9 sec 26,4 sec 37,5 sec 111 échantillons sur BCS System 30,2 sec 25,9 sec 36,6 sec Pour d autres collectifs de patients, par ex. pédiatriques, il peut être nécessaire de déterminer un domaine de référence spécifique. Caractéristiques du test Précision Une étude de précision a été effectuée selon un procédé photo-densitométrique sur des plasmas normaux et pathologiques, ainsi que sur un pool de plasmas héparinés. Les échantillons ont été testés sur 5 jours, deux fois par jour (n = 8 dosages par jour). Un total de 40 dosages a été effectué. Les coefficients de variation de répétabilité ont été calculés à partir des dosages en quadruple, et trouvés entre 0,6 et 2,0 %. Les coefficients de variation de reproductibilité ont été trouvés entre 0,3 et 2,8 % Comparaison avec d autres méthodes La comparaison des dosages de TCA effectués avec Réactif Pathromtin* SL et de ceux effectués avec un autre réactif TCA a permis d obtenir pour Réactif Pathromtin* SL un coefficient de corrélation de 0,96, avec une intersection de l axe des y à 2,1 sec. et une pente de 0,99. Littérature Cf. Page 1. * Pathromtin est une marque commerciale de Siemens Healthcare Diagnostics. BCS, Ci-Trol et Dade sont des marques commerciales de Siemens Healthcare Diagnostics. Sysmex est une marque déposée de SYSMEX CORPORATION. Plasma citraté 100 µl Réactif Pathromtin* SL 100 µl Laisser incuber 2 min à +37 C Solution de chlorure de calcium (+37 C!) 100 µl Déclencher le chronomètre ou la chambre de mesure de l'automate de coagulation au moment de l'addition de la Solution de chlorure de calcium, et mesurer le temps de coagulation. OQGS G29 E0501 (681) 3 Edition Mai 2008

4 Settori d'impiego Reagente per la determinazione del tempo di tromboplastina parziale attivato (APTT) nel plasma citratato umano. Significato diagnostico Il Reagente Pathromtin* SL permette una rapida valutazione dei disturbi legati al sistema endogeno della coagulazione e rivela con sensibilità deficit dei fattori VIII, IX e dei fattori di contatto. Utilizzato con plasmi carenti, il Reagente Pathromtin* SL è adatto per la determinazione dei singoli fattori della via intrinseca e per la diagnosi di emofilia. Inoltre, può essere impiegato nel monitoraggio della terapia eparinica 1. La misura dell'aptt è indicata per rilevare potenziali soggetti emofilici, in modo da sottoporli ad un adeguato trattamento terapeutico prima di un intervento chirurgico. La presenza di inibitori non-specifici, come l anticoagulante lupus-like, possono prolungare l APTT. Questo effetto, però, è variabile e generalmente noto come un effetto collegato alla natura del reagente APTT utilizzato 2. Principio del metodo L'incubazione del plasma con una quantità ottimale di fosfolipidi e di un attivatore di superficie determina l'attivazione dei fattori del sistema endogeno della coagulazione. L aggiunta di ioni calcio innesca il processo della coagulazione; viene quindi misurato il tempo di formazione del coagulo di fibrina. Reagenti Contenuto delle confezioni 10 x 5 ml, [REF] OQGS x 5 ml, [REF] OQGS 35 Composizione Reagente Pathromtin* SL: particelle di biossido di silicio (1,2 g/l), fosfolipidi vegetali (0,25 g/l), cloruro di sodio, Hepes, ph 7,6 Conservante: sodio azide (< 1 g/l) Avvertenze e precauzioni 1. Solo per uso diagnostico in-vitro. 2. Contiene azoturo di sodio (< 0,1 %) come conservante. L azoturo di sodio può reagire con le tubazioni in rame o piombo nelle linee di scarico formando composti esplosivi. Provvedere allo smaltimento in modo appropriato e secondo le normative locali. Preparazione dei reagenti Il Reagente Pathromtin* SL deve essere delicatamente capovolto (da 5 a 8 volte) per miscelarlo prima del primo utilizzo e deve essere utilizzato a temperatura ambiente (da +15 a +25 C). Ogni 24 ore di utilizzo, il reagente deve essere capovolto per risospendere l eventuale sedimento. Riscaldare la soluzione di cloruro di calcio 0,025 mol/l a +37 C. Conservazione e validità Prima dell'apertura il Reagente Pathromtin* SL può essere utilizzato fino alla data di scadenza indicata sull etichetta del flacone se conservato, sigillato, a +2 a +8 C. Dopo la prima apertura il Reagente Pathromtin* SL è stabile per 2 settimane se conservato a +2 a +25 C. Le informazioni riguardanti la stabilità on-board sono specificate nelle Reference Guides (Protocolli Applicativi) per i diversi analizzatori per coagulazione. Materiale necessario, ma non fornito - Soluzione di Calcio Cloruro (CaCl 2 ) 0,025 mol/l - Control Plasma N, oppure Dade Ci-Trol Livello 1 come controllo nell intervallo normale - Control Plasma P, oppure Dade Ci-Trol Livello 2, oppure Dade Ci-Trol Livello 3 come controllo per l intervallo patologico - Analizzatore per coagulazione (vedere Strumentazione ) - Pipette - Provette di plastica Strumentazione Pathromtin* SL può essere utilizzato manualmente oppure su analizzatori per coagulazione automatici. Siemens Healthcare Diagnostics offre Reference Guides (Protocolli Applicativi) per numerosi analizzatori per coagulazione. Le Reference Guides (Protocolli Applicativi) contengono informazioni di gestione e prestazionali analizzatore/test-specifiche che possono differire da quelle offerte nella presenti istruzioni per l uso. In tal caso, le informazioni contenute nelle Reference Guides (Protocolli Applicativi) prevalgono sulle informazioni delle presenti Istruzioni per l Uso. Inoltre, si raccomanda di consultare il manuale di istruzioni del produttore dello strumento. Raccolta e preparazione del campione Per ottenere il plasma mescolare accuratamente 1 parte di soluzione di citrato sodico (0,11 mol/l) con 9 parti di sangue venoso, evitando la formazione di schiuma. Centrifugare immediatamente per 15 minuti a 1500 x g, rimuovere il plasma sovranatante e mantenerlo da +15 a +25 C fino all utilizzo nel test (max. 4 ore). Negli USA fare riferimento al Documento CLSI H21-A4, intitolato "Raccolta, Trasporto e Analisi di Campioni di Sangue per l Analisi della Coagulazione e l Esecuzione di Test Coagulativi" 3. Esecuzione del test Procedura Manuale Distribuire in una provetta preriscaldata a +37 C: Controllo di qualità interno Intervallo normale: Control Plasma N, oppure Dade Ci-Trol Livello 1 Intervallo patologico: Control Plasma P, oppure Dade Ci-Trol Livello 2, oppure Dade Ci-Trol Livello 3 Due controlli (uno per l intervallo normale e uno per l intervallo patologico/terapeutico) devono essere misurati all inizio di ogni ciclo analitico, dopo ogni cambio di flacone del reagente, e almeno una volta ogni 8 ore. Il materiale di controllo deve essere preparato e processato allo stesso modo dei campioni dei pazienti. Ogni laboratorio dovrebbe definire i propri intervalli di accettabilità per i controlli. L intervallo è generalmente da ±2 a ±2,5 deviazioni standard dal valore medio del controllo. Se i valori dei controlli sono al di fuori dell intervallo di accettabilità, occorre verificare i controlli, i reagenti e lo strumento. Prima di refertare i valori dei pazienti, si raccomanda di documentare tutte le azioni intraprese per identificare e correggere il problema. Nuovi intervalli di controllo dovrebbero essere definiti per ogni nuovo lotto di reagente o di controllo. Risultati Il risultato viene dato in secondi. Limitazioni della esecuzione del test Le interferenze per l APTT sono descritte nelle referenze bibliografiche 4-6. Dosi terapeutiche di irudina o di altri inibitori diretti della trombina possono allungare i tempi di coagulazione 7. La scelta dell anticoagulante (es., ossalato invece di citrato) e la condizione dei campioni (es. emolizzati, lipemici, nutrizione parenterale, ecc.) possono influenzare i risultati. L ultima condizione vale in particolare per le misurazioni dell APTT con strumentazione ottica. La preattivazione del campione a causa della tecnica di prelievo carente può portare a falsi risultati. In riferimento alla sezione Gestione e Raccolta dei Campioni del documento CLSI H21-A4 si raccomanda di utilizzare provette con parete idrofobica (es. plastica) piuttosto che provette di vetro. Siemens ha validato l uso di questi reagenti su vari analizzatori per ottimizzare le prestazioni e rispettare le specifiche dei prodotti. Le modifiche definite dall utente non sono supportate da Siemens poiché possono influire sulle prestazioni del sistema e sui risultati del test. Pertanto è responsabilità dell utente validare tutte le modifiche apportate a queste istruzioni, l uso dei reagenti su analizzatori diversi da quelli inclusi nei fogli di istruzioni o nelle istruzioni d uso fornite da Siemens. I risultati di questo test devono essere sempre interpretati alla luce della anamnesi del paziente, della presentazione clinica e valutando contestualmente l esito di altri accertamenti. Valori Attesi Gli intervalli di riferimento variano da laboratorio a laboratorio secondo la popolazione affluente e secondo la tecnica, il metodo, la strumentazione ed il lotto di reagente utilizzati. Pertanto, ogni laboratorio deve definire i propri intervalli di riferimento o verificarli qualora cambi una o più delle variabili menzionate. In uno studio su soggetti evidentemente sani utilizzando un lotto specifico di Reagente Pathromtin* SL, sono stati rilevati i seguenti valori: Mediana Intervallo di riferimento al 90% 5 Percentile 95 Percentile 111 soggetti Sysmex CA ,9 sec. 26,4 sec. 37,5 sec. 111 soggetti Sistema BCS 30,2 sec. 25,9 sec. 36,6 sec. Anche gli intervalli di riferimento per altre popolazioni quali i gruppi pediatrici devono essere definiti ove richiesto. Caratteristiche del test Precisione Sono state eseguite delle verifiche di precisione mediante procedimento di misurazione ottico-densitometrico su plasmi normali e patologici, e su un pool di plasmi eparinizzati, per 5 giorni, due volte al giorno (n = 8 determinazioni al giorno), per un totale di 40 determinazioni. La precisione intra-ciclo è stata calcolata dai valori di precisione di n = 4 soggetti su cicli quotidiani per 5 giorni. La precisione intra-ciclo è risultata compresa nell intervallo CV 0,6-2,0 %, mentre la precisione inter-ciclo è risultata CV 0,3-2,8 %. Confronto tra i metodi Confrontando i valori di APTT ottenuti con il Reagente Pathromtin* SL e i valori ottenuti con altri reagenti per APTT è stato determinato un coefficiente di correlazione di 0,96 con intercetta 2,1 sec. e coefficiente angolare di 0,99. Bibliografia Vedi pagina 1. * Pathromtin è un marchio di Siemens Healthcare Diagnostics. BCS, Ci-Trol e Dade sono marchi di Siemens Healthcare Diagnostics. Sysmex è un marchio registrato di SYSMEX CORPORATION. Plasma citrato 100 µl Reagente Pathromtin* SL 100 µl incubare per 2 minuti a +37 C Soluzione di cloruro di calcio (+37 C!) 100 µl Dopo l aggiunta della soluzione di cloruro di calcio azionare il cronometro o il dispositivo di misura sull'analizzatore per coagulazione e determinare il tempo di formazione del coagulo. OQGS G29 E0501 (681) 4 Edizione Maggio 2008

5 Campos de aplicación Reactivo para la determinación del tiempo de tromboplastina parcial activado (APTT) en plasmas humanos citratados. Significado diagnóstico La determinación del APTT con Reactivo Pathromtin* SL es un test rápido para la búsqueda de anomalías del sistema endógeno de la coagulación, que además registra con precisión tanto los factores VIII y IX como los factores de contacto. Pathromtin* SL, en colaboración con plasmas deficientes, es apropiado para la determinación individual de los factores del sistema endógeno y para el diagnóstico de la hemofilia. Además, puede también emplearse para el control de la terapéutica heparínica 1. La medida de APTT es indicada como test de búsqueda de los trastornos de la coagulación, especialmente antes de intervenciones quirúrgicas, con el fin de poder someter a tratamientos preventivos a hemofílicos en potencia. La presencia de inhibidores no específicos, como los anticuoagulantes similares al lúpico, puede prolongar el APTT. Este efecto es, sin embargo, variable y es generalmente reconocido como un efecto más relacionado con la naturaleza del reactivo APTT empleado 2. Principio del método La incubación del plasma con cantidades óptimas de fosfolípidos y un activador de superficie conduce a una activación de los factores del sistema endógeno de la coagulación. Mediante la agregación de iones de calcio se desencadena el proceso de coagulación; se mide el tiempo transcurrido hasta la formación de un coágulo de fibrina. Reactivos Contenido de los envases comerciales Composición Reactivo Pathromtin* SL: Partículas de bióxido de silicio (1,2 g/l), fosfolípidos vegetales (0,25 g/l), cloruro de sodio, Hepes, ph 7,6 Medio de conservación: Azida de sodio (< 1 g/l) Advertencias y medidas de seguridad 1. Sólo para ser utilizado en diagnósticos in-vitro. 2. Contiene azida de sodio (< 0,1 %) como conservante. La azida de sodio puede reaccionar con tuberías de cobre o de plomo en los conductos de drenaje y formar compuestos explosivos. Elimine este producto de forma apropiada conforme a la normativa local. Preparación de reactivos El reactivo Pathromtin* SL, antes de usarse por primera vez, debe resuspenderse invertiendo el frasco de 5 a 8 veces y debe ser usado a temperatura ambiente (entre +15 y +25 C). La resuspensión se debe repetir cada 24 horas, para evitar efectos de sedimentación. Calentar la solución de cloruro de calcio 0,025 mol/l a +37 C. Estabilidad y almacenaje El Reactivo Pathromtin* SL, conservado cerrado entre +2 y +8 C, es estable hasta la fecha de vencimiento dada en la etiqueta. Una vez abierto Reactivo Pathromtin* SL es estable durante 2 semanas si se mantiene entre +2 y +25 C. Los datos de estabilidad están especificados en el manual de referencia (hojas de aplicación) para cada uno de los analizadores de coagulación. Materiales adicionales necesarios, pero no incluídos - Solución de cloruro de calcio (CaCl 2 ) 0,025 mol/l - Plasma control N o Dade Ci-Trol nivel 1 como control para el intervalo normal - Plasma control P o Dade Ci-Trol nivel 2 o Dade Ci-Trol nivel 3 como control para los intervalo patológico/terapéutico - Analizadores de coagulación (ver "Analizadores") - Pipetas - Tubos de ensayo de plástico Analizadores El reactivo Pathromtin* SL se puede usar en analizadores de coagulación manuales o automáticos. Siemens Healthcare Diagnostics pone a disposición manuales de referencia (hojas de aplicación) para los diferentes analizadores de coagulación. Estas hojas contienen información específica analizador /prueba, que pueden diferenciarse de la información dada en este folleto. En este caso, la información contenida en los manuales de referencia (hojas de aplicación) reemplaza la información de este folleto. Por favor consulte el manual de instrucciones del fabricante del analizador. Extracción y preparación de las muestras Para obtener el plasma, mezclar cuidadosamente 1 parte de solución de citrato de sodio (0,11 mol/l) con 9 partes de sangre venosa, evitando la formación de espuma. Centrifugar inmediatamente por lo menos 15 min a un mínimo de 1500 x g, separar el plasma sobrenadante y mantenerlo entre +15 y +25 C hasta la realización de la prueba (máx. 4 horas). En USA, por favor, referirse al documento H21-A4 del CLSI con el título Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for coagulation Testing and Performance of Coagulation Assays 3. Método Procedimiento manual: En un tubo de ensayo precalentado a +37 C, pipetear: Control de calidad interno Intervalo normal: Plasma control N o Dade Ci-Trol nivel 1 Intervalo patológico: Plasma control P o Dade Ci-Trol nivel 2 o Dade Ci-Trol nivel 3 Se deben medir dos niveles de control (uno en el intervalo normal y uno en el intervalo patológico/terapéutico), al comienxo de cada serie de análisis, en cada cambio de frasco del reactivo y por lo menos cada 8 horas en un día de trabajo. El material de control debe ser tratado como las muestras de pacientes. Cada laboratorio debe determinar sus propios intervalos de confianza para los controles. Este intervalo, por lo general se encuentra entre ±2 a ±2,5 desviaciones estándard (s) del valor promedio del control. Si los resultados de las medidas del control se encuentran fuera del intervalo de confianza, se deben comprobar los controles, los reactivos y los instrumentos. Antes de reportar los resultados de los pacientes, se recomienda documentar todas las medidas tomadas para identificar y eliminar el problema. Para cada nuevo lote de reactivos o de controles se debe definir un nuevo intervalo de referencia. Resultados Los resultados de las medidas se deben dar en segundos. Limitaciones del procedimiento Sobre alteraciones del APTT se informa en la literatura 4-6. Dosis terapéuticas de hirudina o de otros inhibidores directos de la trombina pueden conducir a tiempos prolongados de coagulación 7. Los resultados pueden también ser influenciados por el anticoagulante escogido (por ej., oxalato en lugar de citrato), así como también, por las condiciones de la muestra (por ej., hemolítica, lipémica, alimentación parenteral, etc), la cual es de gran significado en la determinación óptica del APTT. Una preactivación dependiente de la toma de la muestra puede conducir a resultados falsos. En la sección sobre Toma y manejo de las muestras del documento H21-A4 del CLSI se recomienda usar tubos de ensayo con una superficie no mojable (por ej., plástico) en lugar de tubos de vidrio. Siemens ha validado el uso de los reactivos en varios analizadores para optimizar el rendimiento del producto y cumplir con las especificaciones del mismo. Las modificaciones definidas por el usuario no están garantizadas por Siemens dado que pueden afectar al rendimiento del sistema y a los resultados del ensayo. Es responsabilidad del usuario validar las modificaciones realizadas a estas instrucciones o el uso de los reactivos en analizadores distintos a los incluidos en las hojas de aplicaciones de Siemens o en estas instrucciones de uso. Los resultados de esta prueba deberán interpretarse siempre de acuerdo con la historia clínica del paciente, la sintomatologia clínica y otras observaciones. Rangos de referencia Intervalos de referencia El intervalo de referencia varía de laboratotio a laboratorio, dependiendo de la población investigada y de las técnicas de trabajo, métodos, instrumentos y lotes de referencia utilizados. Por esta razón, cada laboratorio debe determinar sus propios intervalos de referencia basados en las correspondientes técnicas de trabajo, métodos, instrumentos y lotes de referencia utilizados, como también el verificar el intervalo de referencia al cambiar alguno de los parametros arriba mencionados. En un estudio realizado con individuos presuntamente sanos, para un lote específico del reactivo Pathromtin* SL, se obtuvieron los siguientes resultados: Mediana 90% Intervalo de referencia 5. percentil 95. percentil 111 Individuos Sysmex CA ,9 seg. 26,4 seg. 37,5 seg. 111 Indivicuos Sistema BCS 30,2 seg. 25,9 seg. 36,6 seg. Para otros colectivos, como por ej., pacientes pediátricos, se debe determinar, en cada caso, su propio intervalo de referencia. Características de la prueba Precisión Con un procedimiento de medición optodensitométrico se realizaron medidas de precisión de plasmas normales, patológicos y de un pool de plasmas heparínicos durante 5 días, dos veces al día (n = 8 determinaciones por día), con un total de 40 determinaciones. El coeficiente de variación en la serie se obtuvo a partir de los valores de una determinación cuádruple, dando un resultado entre 0,6 y 2,0 %, mientras el coeficiente de variación día a día fue entre 0,3 y 2,8 %. Comparación de métodos Al comparar una determinación de APTT con Reactivo Pathromtin* SL y una con otro reactivo para APTT se encontró para Reactivo Pathromtin* SL un coeficiente de correlación de 0,96 para un corte de eje-y de 2,1 seg. y una pendiente de 0,99. Bibliografía Ver página 1. * Pathromtin es una marca comercial de Siemens Healthcare Diagnostics. BCS, Ci-Trol y Dade son marcas comerciales de Siemens Healthcare Diagnostics. Sysmex es una marca registrada de SYSMEX CORPORATION. Plasma citratado 100 µl Reactivo Pathromtin* SL 100 µl Incubar 2 min. a +37 C Solución de cloruro de calcio ( +37 C!) 100 µl Agregar la solución de cloruro de calcio y simultáneamente accionar el cronómetro o el aparato de medida de la coagulación y medir el tiempo de coagulación. OQGS G29 E0501 (681) 5 Edición Mayo 2008

6 Campo de aplicação Reagente para determinação do tempo de tromboplastina parcial activado (TTPA) em plasmas humanos citratados. Significado diagnóstico A determinação do TTPA com Reagente Pathromtin* SL é um teste rápido para detecção de transtornos do sistema intrínseco da coagulação e que detecta de modo sensível os factores VIII e IX, assim como os factores de contacto. Usado com plasmas deficitários, Reagente Pathromtin* SL é um instrumento apropriado para a determinação de factores singulares do sistema intrínseco e o diagnóstico da hemofilia. Além disso, pode ser utilizado para o controlo da terapia heparínica 1. A medição do TTPA está indicada como teste de triagem de perturbações da coagulação especialmente antes de intervenções cirúrgicas, a fim de poder submeter potenciais hemofílicos a um tratamento preventivo. A presença de inibidores não específicos, como os anticoagulantes lúpicos, pode prolongar o TTPA, mas este efeito é variável e geralmente atribuido à natureza do reagente de TTPA utilizado 2. Princípio metodológico A incubação do plasma com quantidades óptimas de fosfolípidos e um activador de superfície leva a uma activação dos factores do sistema intrínseco da coagulação. Mediante a agregação de iões de cálcio é desencadeado o processo de coagulação. Mede-se o tempo transcurso até à formação de um coágulo de fibrina. Reagentes Conteúdo da embalagem comercial Composição Reagente Pathromtin* SL: Partículas de dióxido de silício (1,2 g/l), fosfolípidos vegetais (0,25 g/l), cloreto de sódio, Hepes, ph 7,6 Agente de conservação: azida sódica (< 1 g/l) Advertências e medidas de precaução 1. Só para uso diagnóstico in-vitro. 2. Contém azida de sódio (< 0,1 %) como conservante. A azida de sódio pode reagir com os tubos de cobre ou de chumbo das canalizações de esgotos formando compostos explosivos. Elimine este produto de forma correcta e de acordo com as regulamentações locais. Preparação dos reagentes Antes do primeiro uso, o Pathromtin* SL tem de ser resuspenso invertendo o frasco 5 a 8 vezes e é utilizado à temperatura ambiente (+15 a +25 C). A resuspensão tem de ser repetida a cada 24 horas, para evitar os efeitos da sedimentação! Aquecer a solução de cloreto de cálcio 0,025 mol/l a +37 C. Estabilidade e condições de conservação Não aberto, e conservado entre +2 e +8 C, Reagente Pathromtin* SL mantém-se utilizável até à data de validade indicada no rótulo. Uma vez aberto, mantém-se estável durante 2 semanas à temperatura de +2 a +25 C. As indicações sobre a estabilidade no aparelho estão mencionadas nos manuais de referência (instruções de aplicação) para os diferentes coagulómetros. Outros materiais necessários - Solução de cloreto de cálcio (CaCl 2 ) 0,025 mol/l - Plasma de controlo N ou Dade Ci-Trol Level 1 como controlo para o intervalo normal - Plasma de controlo P ou Dade Ci-Trol Level 2 ou Dade Ci-Trol Level 3 como controlo para o intervalo patológico/terapêutico - Coagulómetro (veja Aparelhos ) - Pipetas - Tubinhos de ensaio em plástico Aparelhos Pathromtin* SL pode ser usado manualmente ou em coagulómetros automáticos. A Siemens Healthcare Diagnostics disponibiliza livros de referência (instruções de aplicação) para os diversos coagulómetros. Estes contêm informações específicas dos aparelhos/testes sobre o processamento e características de performance que podem divergir das informações deste manual de instruções. Neste caso, as informações dos livros de referência substituem as informações constantes neste manual de instruções. Por favor observe o manual de instruções do fabricante do aparelho! Colheita e preparação de amostras Para obter o plasma, misturar cuidadosamente 1 parte de solução de citrato de sódio (0,11 mol/l) com 9 partes de sangue venoso, evitando formação de espuma. Centrifugar, imediatamente, durante 15 min. no mínimo a 1500 x g, recolher o plasma sobrenadante e conservar até à realização do teste à temperatura entre +15 e +25 C (4 horas, no máximo). Nos EUA, por favor consultar o documento CLSI H21-A4 com o título Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and Performance of Coagulation Assays 3. OQGS G29 E0501 (681) Limitações do procedimento A literatura faz referências a perturbações de APTT 4-6. As doses terapêuticas de hirudina ou outros inibidores directos de trombina podem originar tempos de coagulação prolongados 7. Além disso, os resultados podem ser influenciados pelo anticoagulante escolhido (p. ex., oxalato em vez de citrato), e pelas características da amostra (p. ex., hemolítica, lipémica, alimentação artificial, etc.), que são importantes, sobretudo, para a determinação óptica do APTT. A activação prévia da amostra condicionada pela colheita, pode provocar resultados incorrectos. No capítulo sobre a colheita e manipulação de amostras do documento CLSI H21-A4 recomenda-se que sejam utilizados tubinhos de ensaio com superfície não humectante (p. ex., plástico), em vez de tubinhos de vidro. A Siemens validou a utilização destes reagentes em vários analisadores, com o intuito de optimizar o desempenho do produto e satisfazer as especificações do produto. As modificações definidas pelo utilizador não são suportadas pela Siemens, na medida em que podem afectar o desempenho do sistema e os resultados do ensaio. Constitui responsabilidade do utilizador validar as modificações efectuadas nestas instruções ou em relação ao uso dos reagentes noutros analisadores que não os incluídos nas folhas de instruções de aplicação da Siemens ou nestas instruções de utilização. Os resultados deste teste devem sempre ser interpretados em conjunto com o histórico médico do doente, estado clínico e outros dados de interesse. Intervalos de referência Os intervalos de referência variam de laboratório para laboratório em função da população a analisar, técnicas de trabalho, métodos, aparelhos e lotes de reagentes utilizados. Por isso, cada laboratório deverá determinar intervalos de referência próprios com base nas respectivas técnicas de trabalho, métodos, aparelhos e lotes de reagentes utilizados, ou verificar os intervalos de referência após mudança dos parâmetros acima referidos. Num estudo efectuado com indivíduos examinados aparentemente saudáveis, obtiveramse os seguintes valores com um lote específico do reagente Pathromtin* SL: Média Intervalo de referência 90 % 5.º Percentil 95.º Percentil 111 Indivíduos examinados com Sysmex CA ,9 seg. 26,4 seg. 37,5 seg. 111 Indivíduos examinados no sistema BCS 30,2 seg. 25,9 seg. 36,6 seg. Para os outros colectivos, como p. ex., pacientes pediátricos, também deverão ser determinados intervalos de referência próprios. Características do teste Precisão Com um processo de medição optodensitométrico foram efectuadas medições de precisão de plasmas normais, patológicos e de um pool de plasmas heparínicos durante 5 dias, 2 vezes por dia (n = 8 determinações por dia), com um total de 40 determinações. Os coeficientes de variação intra-assay foram calculados a partir de cada uma das determinações quádruplas e obtiveram-se resultados compreendidos entre 0,6 e 2,0 %, enquanto que, para os coeficientes de variação inter-assay, foram achados valores situados entre 0,3 e 2,8 %. Comparação de métodos A comparação de uma determinação do TTPA com Reagente Pathromtin* SL com outra efectuada com outro reagente para TTPA revelou para Reagente Pathromtin* SL um coeficiente de correlação de 0,96 com uma intersecção do eixo y de 2,1 seg. e um coeficiente angular de 0,99. Bibliografia Vide página 1. * Pathromtin é uma marca comercial da Siemens Healthcare Diagnostics. BCS, Ci-Trol e Dade são marcas comerciais da Siemens Healthcare Diagnostics. Sysmex é uma marca registada da SYSMEX CORPORATION. Procedimento Execução manual: Pipetar para um tubo de ensaio pré-aquecido a +37 C: Plasma citratado 100 µl Reagente Pathromtin* SL 100 µl Deixar incubar 2 min a +37 C Solução de cloreto de cálcio (+37 C!) 100 µl Simultaneamente com a adição de solução de cloreto de cálcio, pôr em marcha o cronómetro ou o aparelho de medição da coagulação e determinar o tempo de coagulação. Controlo de qualidade interno Intervalo normal: Plasma de controlo N ou Dade Ci-Trol Level 1 Intervalo patológico: Plasma de controlo P ou Dade Ci-Trol Level 2 ou Dade Ci-Trol Level 3 No início de uma série de teste, em cada mudança de reagente e uma vez, no mínimo, durante um turno de 8 horas, deverão ser medidos dois controlos (um no intervalo normal e um no intervalo patológico/terapêutico). O material de controlo deverá ser tratado como o plasma do paciente. Cada laboratório deverá determinar o seu intervalo de confiança próprio para os controlos. Normalmente, este apresenta desvios (s) standard de ± 2 a ± 2,5 em relação ao valor de controlo médio. Se os valores de controlo se situarem fora do intervalo de confiança, é necessário controlar os controlos, os reagentes e o aparelho. É aconselhável documentar todas as medidas que foram tomadas para a constatação e eliminação do problema antes da divulgação dos valores do paciente. Para cada lote de reagente ou controlo novo deverão ser definidos intervalos de controlo novos. Resultados O resultado da medição é expresso em segundos. OQGS G29 E0501 (681) 6 Edição Maio Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH. All rights reserved.