DILUTORES EN LA CONSERVACION DE LA VIABILIDAD DE SEMEN FRESCO EN DOS RAZAS DE CARNEROS (Ovies aries) SUFFOLK Y CORRIEDALE EN EL CEHM

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1 DILUTORES EN LA CONSERVACION DE LA VIABILIDAD DE SEMEN FRESCO EN DOS RAZAS DE CARNEROS (Ovies aries) SUFFOLK Y CORRIEDALE EN EL CEHM *.Juan Carlos Canqui Villarroel **Randy Laime Oporto. **Julio Calizaya Saravia PALABRAS CLAVES Dilución de semen, conservación, semen fresco, dilutores citrato, yema de huevo. 1. INTRODUCCIÓN.- De los cinco pilares fundamentales para una crianza de la especie ovina le pondremos especial atención a dos, de los mismos; estos son la Reproducción y Mejoramiento Genético; sin que esto signifique que la Sanidad. Alimentación, Manejo e inclusive la infraestructura sean considerados de menor importancia. La inseminación artificial (IA), una de las biotecnologías de gran relevancia que se viene desarrollando desde hace varios años y que permite un rápido avance genético, con el mejor aprovechamiento de los sementales de características productivas superiores. El éxito de la IA depende en gran medida del desarrollo de diluyentes satisfactorios para el semen, el cual debe incrementar el volumen de un eyaculado, proteger a los espermatozoides durante el enfriamiento y prolongar su vida con un mínimo efecto sobre la fertilidad. La IA en ovinos es limitada en comparación con otras especies, debido entre otros factores a la dificultad para congelar y descongelar el semen, ya que algunos diluyentes pueden resultar tóxicos para los espermatozoides. Actualmente en el mercado de nuestra región no existen diluyentes comerciales, por lo cual se viene desarrollando ensayos con el empleo de dilutores como el citrato-yerna y leche descremada-yema. RESUMEN: La escasa existencia de dilutores e insumos en nuestro medio destinados a la crioncoservacion de semen de especies domesticas obliga a buscar alternativas económicas y eficientes para prolongar la vitalidad y viabilidad de los espermatozoide mejores reproductores. En este sentido el trabajo se desarrollo en la gestión 2009 y 2010 en el Centro Experimental Huajra Muntuna de la FCAV de la UTO con la evaluación de 6 carneros de la raza corriedale y 6 carneros suffolk. Dichos reproductores fueron evaluados reproductivamente mediante el recolección de semen por el método de la vagina artificial para ser sometidos a los dos tratamiento de diluyentes TA en base a Citrato de Sodio y TB =Leche descremada Los resultados obtenidos fueron los siguientes. Los datos obtenidos del volumen de semen muestran que las mejores recolecciones fueron por las mañana siendo estas sometidas a los dos tratamientos Por otra parte la relación entre razas Corriedale y Suffolk tiene una diferencia de 0,22cc mas en la raza suffolk en la mañana y de 0,12 cc en la misma raza por la tarde. En relación al factor concentración vemos que la concentración espermática por ml no es significativa entre razas, mas aun no es así entre los horarios de recolección ya que este factor influye de forma significativa.en relación a las horas de viabilidad podemos observar que el tratamiento TB (leche descremada + yema de huevo) fue en que reporta mayor vibilidad en las dos razas hasta 12 a 18 horas de vida. 31

2 Los dilutores conteniendo yema de huevo son beneficiosos en la preservación de la fertilidad de espermatozoides, en la protección contra el shock por frío y variaciones de temperatura de conservación, por las lipoproteinas y lecitinas contenidas en la yema de huevo. La leche descremada usada como dilutor también protege del shock por frío a los espermatozoides manteniendo su fertilidad, debido a la caseína presente en la leche (Cole y Cupps, 1977). 2.- OBJETIVOS. Evaluar la eficiencia de los dilutores A y B en la conservación de semen. Determinar la viabilidad optima con dos dilutores entre carneros de la raza corriedale y Suffolk Establecer el tiempo mas optimo para la conservación de material seminal. 3.- MATERIALES Y METODOS.- El presente estudio se llevó a cabo en el Laboratorio de Reproducción del Centro Experimental Huajra Muntuna, dependiente de la Facultad de Ciencias Agrarias y Veterinarias de la Universidad Técnica de Oruro. El CEHM geográficamente esta ubicado a los 64º latitud sud y 80º longitud oeste del meridiano de Grendwich, a una altura de 3737 m.s.n.m. y cuenta con una temperatura media de 8 ºC como mínimo 7,5 ºC y como máximo 16,7 ºC presenta una precipitación de 220 m.m. y una humedad relativa de 33% con 150 a 200 días de heladas anualmente. Unidades de muestreo Para el presente estudio se seleccionaron a seis ejemplares de la raza Corriedale comprendidos entre los 24 a 38 meses de edad; de la misma forma se utilizaron seis carneros Suffolk con el mismo rango de edad, en ambos casos se realizo un examen minucioso del aparato reproductor como es la uniformidad testicular, el desprendimiento prepucial y ausencia de infecciones así como pruebas de eficiencia reproductiva (capacidad de monta) para la verificación del material genético a valorar. Metodología de campo.- El desarrollo metodológico del trabajo se realizo en tres fases: Primera fase: Selección e identificación de carneros de dos razas (Suffolk y Corriedale). Acostumbramiento de ejemplares a la técnica de recolección por vagina artificial en dos tiempos. Segunda fase: Evaluación física de los dilutores (ph, color, olor. Determinación de las características macro y microscópicas de las muestras de semen extraídas. Tercera Fase: Evaluación de parámetros en laboratorio. Medición de la viabilidad espermática en los dos tratamientos. De los tratamientos. TA Citrato de Sodio Agua bidestilada Penicilina Estreptomicina TB Leche descremada Penicilina (solución) Estreptomicina (solución) 2.9 g 100 cc 500,000 UI 2 g 25 ml 0.25 ml ml Fuente Simón (1981) En ambos casos se tomó el 80% de los dilutores y se le adicionó 20% de yema de huevo. Las variables de respuesta consideradas fueron: Características macroscópicas por raza. Volumen. Color ph Características microscópicas por raza Concentración. Motilidad. 32

3 El color del semen se valoró en el mismo tubo de colección por observación directa. El ph se midió con el papel tornasol, el cual tuvo una variación de 6.6 a 6.8. El volumen se determino directamente en el vaso de recolección graduado. La concentración espermática se determinó con una dilución de 1:2 en solución de agua Bidestilada ionizada, para inmovilizar a los espermatozoides, y la lectura se realizó con la cámara de Neubawer. La motilidad masal del semen obtenido se estimó en base al vigor de la onda de movimiento. A través del análisis de tiempo a un evento (Curva de Kaplan Meier), se determinó en que tiempo la motilidad progresiva de las células espermáticas llegó al 60%, considerando el análisis de cada eyaculado en forma independiente. Utilizando las variables: dilutor, raza, hora de muestra y temperatura para el análisis de regresión, se determinó las variables estadísticamente significativas, que intervienen sobre la viabilidad de los espermatozoides del semen ovino. 4.-RESULTADOS Y DISCUSIONES- Volumen de semen eyaculado por razas. Los datos de volúmenes de semen recolectado se detallan a continuación. Cuadro Nº1 ANVA Volumen de semen mañana. F.V. SC gl CM F p-valor Modelo. 0,17 1 0,17 0,56 0,4622 Raza 0,17 1 0,17 0,56 0,4622 Error 6, ,30 Total 6,71 23 CV = 36,78 En el cuadro Nº1 se muestra el análisis de variabilidad en relación a la cantidad en volumen de semen recolectado por las mañanas, en función a las dos razas, observándose que no existe una diferencia significativa al 99% de confiabilidad. La confianza alcanzada en el experimento llega a 36,78% interpretándose de esta manera que las razas deberán ser evaluadas individualmente, así como ajustar las unidades experimentales. Prueba de comparación de medias Duncan Alfa=0,05 Raza Medias n E.E. Corriedale 1, ,16 A suffolk 1, ,16 A La prueba de medias Duncan refleja que las medias en el volumen de semen en las dos razas fueron iguales estadísticamente al (p<0.05) constituyendo un solo grupo estadístico. Cuadro Nº 2 ANVA Volumen de semen tarde F.V. SC gl CM F p-valor Modelo. 0,14 1 0,14 1,16 0,2940 Raza 0,14 1 0,14 1,16 0,2940 Error 2, ,12 Total 2,71 23 CV = 31,79 Los datos del cuadro Nº2 reflejan el análisis de variabilidad en relación a la cantidad en volumen de semen recolectado por las tardes, en las dos razas, en estudio observándose que no existe una diferencia significativa al 99% de confiabilidad. Por otra parte el coeficiente de variación del trabajo por las tarde alcanzo 31,79% dato que no indica cierta confiabilidad en el ensayo por el cual se debe realizar la homogenización de los factores que pueden alterar este coeficiente. Duncan Alfa=0,05 Raza Medias n E.E. Corriedale 1, ,10 A Suffolk 1, ,10 A Las comparaciones de las medias mediante la prueba de Duncan al (p<0.05) nos muestra que el volumen de semen recolectado por las tardes no fue influenciando por las dos razas en estudio ya que estadísticamente no muestran diferencia. Color. Para la determinación del color de semen recolectado por razas se usaron las tablas de colores que presentan T Bonadona (1996). 33

4 Cuadro Nº 3 Coloración de 24 muestras recolectadas de semen en dos razas y dos periodos. Según el cuadro Nº1 se puede deducir que las mejores muestras recolectadas de semen se dan por las mañanas y que la mejor raza en cuanto al factor color es la raza Suffolk del que se obtuvieron muestras de color Blanco cremosos siendo este valor correlativo a la concentración espermática, Por otro lado las muestras obtenidas en la tarde por la raza corriedale no están dentro de los rangos para su procesamiento en función al color blanco grisáceo que representa una menor concentración. ph.- Raza Suffolk Corriedale Mañana Blanco Cremoso Blanco Lechoso Color Tarde Blanco lechoso Blanco grisáceo Cuadro Nº 4 ANVA para el potencial de hidrogeno. F.V. SC gl CM F p-valor Modelo. 11,54 2 5,77 20,74 <0,0001 raza 8,59 1 8,59 30,88 <0,0001 Hora 2,95 1 2,95 10,61 0,0021 Error 12, ,28 Total 24,05 47 CV = 8,78% El análisis de variabilidad del cuadro Nº 4 demuestra que el potencial de hidrogeno ph presenta una diferencia significativa en relación a las dos razas en evaluación. Sin embargo el factor hora de recolección no presenta una diferencia significativa al ph, de las muestras de semen Los datos fueron evaluados con una confiabilidad de 8,78% siendo aceptable este valor. ph Figura Nº 1 Prueba de medias Duncan para el ph por raza y hora de recolección. 6,77 6,54 6,31 6,08 5,86 5,63 5,40 5,17 4,94 6,57 6,29 suffolk:mañana suffolk:tardecorriedale:mañana Corriedale:tarde raza*hora coleccion 5,23 La figura Nº1 muestra las media obtenidas por las razas en los dos horarios de recolección de semen los cuales son estadísticamente diferentes al ph de las muestras, conformando dos grupos estadísticos diferentes en las razas y dos grupos diferentes estadísticamente a una probabilidad de (p<= 0,05) Concentración.- Para la determinación de la concentración de las muestras se procedió por el sistema de valoración de la onda de movimiento. Cuadro Nº 5 ANVA para la concentración espermática en dos razas y en dos horarios. F.V. SC gl CM F p-valor Modelo. 7,89 2 3,94 3,58 0,0361 raza 1,51 1 1,51 1,37 0,2486 Hora 6,38 1 6,38 5,79 0,0203 Error 49, ,10 Total 57,45 47 CV = 24,88 En el cuadro Nº 5 de análisis de variabilidad muestra que el factor raza no tiene una diferencia estadísticamente significativa a la concentración espermática. De igual manera se aprecia en el mismo cuadro que el factor horario de recolección si tuvo una influencia significativa sobre la concentración espermática para ambas razas, siendo estos datos de relativa confianza con 24,88% 34

5 motilidad Figura Nº 2 Prueba de medias Duncan para la concentración por raza y hora de recolección Medias con una letra común no son significativamente diferentes(p<= 0,05) 5,02 4,70 4,38 4,05 3,73 3,41 3,08 4,50 4,29 suffolk:mañana suffolk:tardecorriedale:mañana Corriedale:tarde raza*hora coleccion 4,67 3,42 En la figura Nº 2 se observa que las medias de la concentración espermática no muestran diferencias estadísticas entre las dos razas en estudio. Por otra parte el factor horario de recolección estructuro dos grupos estadísticos diferentes los cuales influyen en la concentración espermática en ambas razas, siendo estos datos sometidos a una probabilidad de (p<= 0,05) Viabilidad espermática en los dos tratamientos. Tratamiento A: semen de ovinos (citrato-yema de huevo; Dilución B: semen ovino con leche descremada-yema de huevo **: Diferencia altamente significativa (p<0.05) entre filas. Bonadona (1986) y Evans (1990) manifiestan que el empleo de la leche de vaca descremada y esterilizada, como dilutor de semen, no da siempre resultados uniformes, debido a que presenta variabilidad en su composición. La comparación de ambos diluyentes a diferentes tiempos, evidenció una clara superioridad del TB leche descremada-yema, a diferencia del TA citratoyema como dilutor de semen de carneros pero sobre todo cuando el semen diluido es conservado a 30 C. Estos resultados fueron muy influenciados por las variables: temperatura y dilutor. La dilución de semen de ovino conteniendo leche descremada-yema proporcionó mejores resultados tanto a temperatura ambiente como en refrigeración a comparación del citrato-yema, donde la viabilidad espermática no superó las 12 horas en ningún caso. Siendo mas influenciado la raza corriedale. Similares resultados han obtenido diversos investigadores con el uso de leche descremada como dilutor de semen caprino, donde las dificultades fueron generadas por la interacción del plasma seminal con los fósfolípidos existentes en dicho dilutor: Nuñes (1980 y 1993). Los resultados sobre el efecto de los tratamientos sobre la motilidad individual de semen refrigerado de ovinos así como sobre el porcentaje de espermatozoides vivos se aprecia en el Cuadro 6. Donde mejores resultados se obtuvieron con el dilutor TB (leche descremada) en comparación al dilutor TA (citrato-yema de huevo), Cuadro Nº 6 Eficiencia de los dilutores para la conservación de semen fresco por razas. Tiempo en Horas MOTILIDAD (%) SUFFOLK MOTILIDAD (%) CORREIDALE TA TB TA TB , , , , ,6** ,3* ,6** ,3** ,2** ,5** 0,0 + 1, ,8** 0, ** ,4** 0, ,0 + 0,0 0, , CONCLUSIONES Con los resultados obtenidos llegamos a las siguientes conclusiones: Los resultados muestran que el volumen mayor es en la colecciones de la mañana con 0,42 cc en la raza SUFFOLK, de la misma forma en carneros CORRIEDALE en volumen es superior en la mañana con 0.32 cc. Por otra parte la relación entre razas Corriedale y Suffolk tiene una diferencia de 0,22cc mas en la raza suffolk en la mañana y de 0,12 cc en la misma raza por la tarde. En relación al factor concentración vemos que la concentración espermática por ml no 35

6 es significativa entre razas, mas aun no es así entre los horarios de recolección ya que este factor influye de forma significativa. En relación a las horas de viabilidad podemos observar que el tratamiento TB (leche descremada + yema de huevo) fue en que reporta mayor vibilidad en las dos razas hasta 12 a 18 horas de vida. 6.- BIBLIOGRAFIA.- BEARDEN, H. J. Y J. FUQUAY Reproducción animal aplicada. Manual Moderno. México D. F. pp BONADONA T (1986) Reproducción animal e inseminación artificial. Tomo 1 Editorial Hemisferio. Buenos Aires ARG. 272 pag. COLE Y CUPPS, (1977). Fisiología reproductiva e inseminación artificial en animales domésticos. Mag Graun Hill, Barcelona ESPAÑA. 1º Edic pag ENSMINGER M.E. (1980) Producción Ovina, Sistemas reproductivos Editorial el ATENEO, Buenos Aires Argentina. 537 pag. EVANS G (1990). Inseminación artificial de ovejas y cabras, Editorial Acribia. Zaragoza ESPAÑA. 192 pag. GARCIA, A Inseminación Artificial en Animales Domésticos. 3 ra Ed. Ediciones Mundi-Prensa. Madrid-España. 258 Pág. NUÑES.L y Dilutores para la conservación de semen de cabras. Tesis de grado para obtener el titulo de Medico veterinario. Fac Med Vet Cordoba ARG. Pag

7 Revista Científica de Investigaciones en OVINOS ANEXOS.- Galería de fotografías. Foto 1 Dilución con yema de huevo. Foto 2. Dilución con leche descremada Foto 3 Solución del TA Citrato de Sodio para diluir el semen. Foto 4 Estreptomicina y penicilina para diluir el semen. Foto 5 Determinación del ph por el método del papel tornasol. Foto 6 Determinación del ph por el método del papel tornasol. 37

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