ESTUDIO Y CLASIFICACIÓN DE MUTACIONES PATOGÉNICAS EN BRCA1 Y BRCA2: SÍNDROME DE CÁNCER DE MAMA Y OVARIO HEREDITARIO (CMOH)

Transcripción

1 ESTUDIO Y CLASIFICACIÓN DE MUTACIONES PATOGÉNICAS EN BRCA1 Y BRCA2: SÍNDROME DE CÁNCER DE MAMA Y OVARIO HEREDITARIO (CMOH) Marina Fernández Villares (1), David Gómez-Sánchez (2), Montserrat De Miguel Reyes (2) (1) Hospital Universitario Puerta del Mar (2) Hospital Universitario 12 de Octubre

2 CÁNCER DE MAMA Neoplasia más frecuente Incidencia Detección precoz REDUCCIÓN RIESGO QUÉ PROPORCIÓN DE CÁNCER ES HEREDITARIO?

3 GENES DE SUSCEPTIBILIDAD DESCRITOS BRCA 1 (17q21) 5592 NT 24 exones 1863 aa BRCA 2 (13q12) 1385 NT 27 exones 3418 aa

4 Mutaciones somáticas versus mutaciones en línea germinal Mutaciones somáticas En las células tumorales de un determinado tejido (p.ej. mama) En tejidos no germinales No heredable Propio del cáncer esporádico Mutación en el gameto En línea germinal Progenitor Descendiente Presente en todas las células de los hijos En todas células del cuerpo Transmisible a la descendencia Origina Sdme. Cáncer Hereditario

5

6

7 OBJETIVO Analizar los resultados de 983 estudios completos de los genes BRCA1 y BRCA2, y detectar las mutaciones más frecuentemente encontradas. MATERIAL Y MÉTODOS Estudio retrospectivo de 983 pacientes con neoplasia sugestiva de corresponder a CMOH IDENTIFICACIÓN DE VARIANTES PATOGÉNICAS

8 MATERIAL Y MÉTODOS Sangre total Análisis exones y regiones intrónicas adyacentes Extracción DNA BRCA1 BRCA2

9 MATERIAL Y MÉTODOS Secuenciación masiva (Ion Torrent, Illumina) MLPA(Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification) HRM (High Resolution Melting) Bases de datos específicas de locus: -BRCA Mutation Database (University of UTAH) -UMD Share -BRCA Exchange (incluye Bic, ClinVar, ESP, ExAC, ENIGMA, LOVD, exlovd, 1000 Genomes) Secuenciación Sanger Clasificación de las variantes patogénicas en base a los transcritos de referencia: NM_ (BRCA1) NM_ (BRCA2)

10 RESULTADOS 43 variantes patogénicas diferentes 22 aparecen en 1 solo paciente 27 variantes patogénicas diferentes 5 aparecen en varios pacientes (27) 33 aparecen en 1 solo paciente 10 aparecen en varios pacientes (29)

11 RESULTADOS Gráficos 2 y 3. Dominios funcionales de las proteínas BRCA1 y BRCA2,respectivamente, y posición de las diferentes mutaciones. BRCA1 BRCA2 Gráfico 4. Leyenda de dominios de proteínas BRCA1 y BRCA2 en lollipop plot.

12 RESULTADOS: BRCA1 Gráfico 2. Dominios funcionales de la proteína BRCA1 y posición de las diferentes mutaciones. Mutaciones en BRCA1 presentes en (n) pacientes n=2 c.1687c>t p.(gln563fs) Q563* c.181t>g p.(cys61gly) C61G c.211a>g p.(arg71gly) R71G c g>a IVS18-1G>A c.5095c>t p.(arg1699trp) R1699W c.5266dupc p.(gln1756profs*74) Q1756Pfs*74 c.3331_3334delcaag p.(gln1111asnfs*5) Q1111Nfs*5 n=3 c.68_69delag p.(glu23valfs*17) E23Vfs*17 n=4 c.302-1g>a n=8 c.5123c>a p.(ala1708glu) A1708E

13 RESULTADOS: BRCA2 Gráfico 3. Dominios funcionales de la proteína BRCA2 y posición de las diferentes mutaciones. Mutaciones en BRCA2 presentes en (n) pacientes n=2 c.9382c>t p.(arg3128*) R3128* n=5 c.3922g>t p.(glu1308*) E1308* c.9026_9030delatcat p.(tyr3009serfs*7) Y3009Sfs*7 n=6 c.6275_6276deltt p.(leu2092profs*7) L2092Pfs*7 n=9 c.2808_2811delacaa p.(ala938profs*21) A938Pfs*21

14 RESULTADOS Cáncer Mama (CM) Cáncer Ovario (CO) CM bilateral Fenotipo en pacientes con mutaciones en BRCA1 (n=62) y BRCA2 (n=49) BRCA1 BRCA2 CO bilateral Cáncer mama CM bilateral y ovario y CO (CMO) Otras neoplasias CM y Endometrio Portadores sanos Gráfico 5. Distribución de variantes patogénicas en función del fenotipo expresado

15 CONCLUSIONES 1. El 11,3% de los estudios completos realizados (111 pacientes) presentaron alguna variante patogénica (clase 5). 2. Se encontró un mayor número de mutaciones en BRCA1 respecto a BRCA2: 62 pacientes (55,85%) con mutaciones en BRCA1 y 49 pacientes (44,15%) con mutaciones en en BRCA2. 3. Se detectaron 43 variantes patogénicas diferentes en BRCA1, y 27 en BRCA2; apareciendo la mayoría en un único paciente. Entre las que se repetían en varios pacientes, las más frecuentes fueron: c.5123c>a p.(ala1708glu) en BRCA1, en 8 pacientes; y c.2808_2811delacaa p.(ala938profs*21) en BRCA2, en 9 pacientes. 4. El fenotipo más expresado fue cáncer de mama unilateral (47,7% de todos los casos).

16