Int. Cl. 7 : A61K 31/ Inventor/es: Platt, David. 74 Agente: Díez de Rivera y Elzaburu, Ignacio

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1 19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 Número de publicación: Int. Cl. 7 : A61K 31/722 A61P 31/ 12 TRADUCCIÓN DE PATENTE EUROPEA T3 86 Número de solicitud europea: Fecha de presentación : Número de publicación de la solicitud: Fecha de publicación de la solicitud: Título: Composición y método para tratar enfermedades fúngicas en animales. Prioridad: US Titular/es: David Platt Building 0, One Kendall Square Cambridge, Massachusetts , US 4 Fecha de publicación de la mención BOPI: Inventor/es: Platt, David 4 Fecha de la publicación del folleto de la patente: Agente: Díez de Rivera y Elzaburu, Ignacio ES T3 Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, Madrid

2 DESCRIPCIÓN Composición y método para tratar enfermedades fúngicas en animales. Campo de la invención Esta invención se refiere, en general, a la enfermedad fúngica. De forma más específica, la invención se refiere a un material derivado de carbohidratos que tiene utilidad en el tratamiento de enfermedades fúngicas en animales Antecedentes de la invención Las infecciones fúngicas son comunes a un gran número de especies animales. Los agentes comunes de las infecciones fúngicas incluyen diversas especies de los géneros Candida y Aspergillus y sus tipos, además de otros. Mientras que las infecciones fúngicas externas pueden ser relativamente leves, las infecciones fúngicas sistémicas pueden producir consecuencias médicas graves. La incidencia de infecciones fúngicas ha sufrido un aumento significativo, en particular en seres humanos. Este aumento es atribuible, al menos en parte, a un número creciente de pacientes que tienen sistemas inmunológicos deteriorados, como resultado de la terapia médica de otros trastornos, y como resultado de enfermedades como el SIDA, que comprometen al sistema inmunológico. La enfermedad fúngica, en particular cuando es sistémica, puede poner en peligro la vida de los pacientes que tienen un sistema inmunológico deteriorado. Se ha desarrollado una serie de agentes farmacéuticos de la técnica anterior para el tratamiento de enfermedades fúngicas. Estos materiales incluyen compuestos como la anfotericina B (AMB), triazoles y flucitosina. La AMB es el fármaco elegido para muchas infecciones fúngicas sistémicas, debido a su amplio espectro de actividad; sin embargo, es perjudicial para los riñones y debe administrarse por vía intravenosa. Muchos de los triazoles muestran una actividad de amplio espectro y pueden administrarse por vía oral; sin embargo, muchas cepas de hongos se han vuelto resistentes a estos materiales. Por consiguiente, existe la necesidad de un nuevo grupo de agentes que sean eficaces para eliminar la enfermedad fúngica, pero que tengan baja toxicidad para los pacientes. De modo ideal, estos materiales deben ser sencillos de preparar, estables y fáciles de administrar. El artículo Mol. Plant-microbe interact, 1994, 7(4), 31-33, indica que los polímeros de quitosano que tienen un peso molecular de 00 a tienen un efecto inhibidor sobre el crecimiento de microorganismos como Candida albicans. La patente US describe un ensayo en el que se estudia el efecto de oligómeros de quitosano sobre la proliferación de C. albicans. Como se describirá con más detalle a continuación en la presente, la presente invención se refiere a un agente muy eficaz para controlar la enfermedad fúngica. El material de la presente invención se deriva de materiales de carbohidratos naturales e, inherentemente, tiene baja toxicidad. El material se prepara, de forma específica, a partir de carbohidratos complejos como quitina o quitosano. Estos materiales están ampliamente distribuidos en la naturaleza y se encuentran, por ejemplo, en las conchas de los artrópodos y en las paredes celulares de los hongos. Estas y otras ventajas de la presente invención serán evidentes a partir del análisis, descripción y ejemplos que se ofrecen a continuación. Breve descripción de la invención En la presente se describe un material terapéutico para tratar enfermedades fúngicas en animales. El material terapéutico contiene oligómeros formados por unidades repetidas de beta-glucosamina. Los oligómeros tienen un peso molecular en el intervalo de a daltons, y en algunas realizaciones preferidas se encuentran en el intervalo de peso molecular de a daltons. Un material específico de la presente invención tiene un intervalo de peso molecular de aproximadamente a.000 daltons, siendo el peso molecular más preferido de aproximadamente daltons. Los oligómeros de beta-glucosamina pueden estar parcialmente acetilados a través de su nitrógeno, y en una realización específica, el material está acetilado aproximadamente de % al %. Los oligómeros, en algunos casos, pueden estar formados por el enlace de las unidades de glucosamina a través de sus cuatro posiciones. El material de la presente invención puede prepararse con facilidad mediante la hidrólisis de la quitina, quitosano y materiales similares. La hidrólisis puede realizarse mediante un tratamiento con ácidos minerales o mediante un tratamiento con enzimas, como celulasa. También dentro del alcance de la presente invención está el uso del agente terapéutico para la fabricación de un medicamento para tratar un animal infectado. Breve descripción de los dibujos La figura 1 es una curva de muerte típica para concentraciones variables del material de la presente invención, que ilustra su efecto contra aislados representativos de Candida. 2

3 La figura 2 es una curva de muerte que muestra el efecto de diversas concentraciones del material de la presente invención cuando se aplica a una cepa específica de Candida albicans Descripción detallada de la invención Según la presente invención, se ha descubierto que materiales oligoméricos concretos formados por unidades repetidas enlazadas de beta-glucosamina, y que tienen un peso molecular en el intervalo de a daltons, son muy eficaces para matar y/o limitar el crecimiento de una diversidad de organismos fúngicos del tipo que provocan enfermedad en animales, incluyendo seres humanos. En el contexto de la presente invención, se pretende que los organismos fúngicos incluyan, de forma específica, a las levaduras. El material de la presente invención se prepara, de modo más preferible, mediante la hidrólisis de quitina o quitosano. La quitina es un polisacárido complejo y se encuentra en el exoesqueleto de artrópodos y en las paredes celulares de una serie de hongos. El quitosano es un material semisintético formado por la desacetilación, al menos parcial, de la quitina. Como se describirá con más detalle a continuación en la presente, el material terapéutico de la presente invención está compuesto, principalmente, por unidades repetidas de beta-glucosamina, y las unidades de beta-glucosamina están unidas entre sí, principalmente, a través de sus cuatro posiciones. La estructura básica de la beta-glucosamina se representa mediante la fórmula I, a continuación Como se advertirá, la beta-glucosamina se acetila a través de su nitrógeno, y en la presente invención, se ha descubierto que el material terapéutico preferido está aproximadamente acetilado de % al %, comprendiendo el resto la amina. Un material particular preferido está acetilado al %. En general, se ha descubierto que los materiales que tienen un peso molecular en el intervalo de a daltons tienen utilidad, y los materiales con un peso molecular en el intervalo de a daltons tienen una utilidad particular contra una diversidad de hongos. De forma más específica, se ha demostrado que los materiales que tienen un peso molecular en el intervalo de a.000 daltons, y específicamente daltons, manifiestan una actividad particularmente alta contra hongos. En general, los oligómeros de al menos unidades repetidas de beta-glucosamina, y más preferiblemente de 22 a 2 unidades, tienen una utilidad muy demostrada. Los materiales de la presente invención pueden prepararse mediante una diversidad de métodos, incluyendo la síntesis directa. Sin embargo, se ha demostrado que es más barato preparar los materiales mediante la hidrólisis de la quitina o quitosano, puesto que estos materiales pueden adquirirse con facilidad en grandes cantidades y a un precio relativamente bajo. La hidrólisis puede realizarse mediante el uso de ácido minerales, como ácido clorhídrico, o pueden implementarse mediante el uso de enzimas, como celulasa. En cualquier caso, la hidrólisis implica la ruptura de un enlace éter que une las unidades de beta-glucosamina entre sí. Dependiendo de la fuerza y el tiempo de las condiciones de reacción, el peso molecular de los oligómeros resultantes puede controlarse con facilidad. Los oligómeros, según la presente invención, se preparan a partir de quitina según el siguiente procedimiento. Se agitó quitina molida ( gramos), obtenidas de caparazones de gambas y proporcionada por Sigma Chemical Corporation, con 0 mililitros de ácido clorhídrico concentrado durante aproximadamente tres horas a 0ºC. La suspensión resultante de quitina entonces se hidrolizó mediante el calentamiento de la mezcla hasta 32ºC durante aproximadamente una hora. La mezcla ácida se ajustó a un ph de aproximadamente 4,0 mediante la adición de hidróxido de potasio. La mezcla se centrífugo y se eliminó el sedimento. La disolución del sobrenadante se hizo pasar a través de una membrana que tiene un límite de exclusión de peso molecular de.000. El filtrado se concentró, después se desaló utilizando una membrana que tiene un límite de exclusión de peso molecular de aproximadamente 0 a 700. Esto produjo una mezcla de oligosacáridos, que se separó en una columna Bio-Gel P-4, y los diferentes picos se estudiaron mediante HPLC. Se descubrió que el material incluía oligómeros con un grado de polimerización de aproximadamente 2, que se corresponde con un peso molecular de aproximadamente.000. Se ha descubierto que un material similar puede prepararse utilizando quitosano como material de partida. Además pueden emplearse, de modo similar, otros ácidos, como ácido trifluoroacético, para realizar la hidrólisis. Los oligómeros de la presente invención pueden prepararse, de modo similar, mediante hidrólisis enzimática. En una preparación particular, 9 gramos de quitosano que tiene un peso molecular de aproximadamente daltons (obtenido de Sigma Chemical Company) se suspendieron en 0 mililitros de agua. Se añadieron 0 mililitros de ácido clorhídrico 0, N para solubilizar el quitosano, y el ph se ajustó a,0 mediante valoración con hidróxido de sodio 0, N. La disolución de quitosano se diluyó hasta aproximadamente 3%, y se añadió la enzima celulasa al 0,% (suministrada por Novo Chemical Company con el nombre Celluclast, y que tiene hasta cuatro unidades de actividad avicelasa por gramo de quitosano). La mezcla se calentó hasta 0ºC durante seis horas. La reacción entonces se extinguió haciendo pasar la mezcla a través de una membrana que tiene un límite de exclusión de peso molecular de 3

4 1.000 daltons. Esto eliminó la celulasa y cualquier oligómero de alto peso molecular. Como alternativa, la reacción puede extinguirse calentando hasta 8ºC durante diez minutos, lo cual desactiva la enzima. Como en el ejemplo previo, la disolución de oligómeros resultante se purificó mediante centrifugación y desalación. El producto producido de esta manera tiene un peso molecular en el intervalo de a.000 daltons. Debe entenderse que un experto en la técnica puede variar con facilidad las condiciones de reacción empleadas en la preparación de los oligómeros, y la presente invención no está limitada a los materiales producidos mediante un método específico cualquiera, sino que está dirigida al material oligomérico y su utilidad en el tratamiento de la enfermedad fúngica. Los materiales preparados de esta manera se analizaron y caracterizaron mediante cromatografía de gases/espectrometría de masas, y análisis de la resonancia magnética nuclear. El análisis confirmó que el enlace principal entre los oligómeros es una N-acetil-beta-glucosamina de cuatro enlaces. Los oligómeros también incluyen cantidades pequeñas de N-acetil-beta-glucosamina con enlaces 3,4 y 4,6, y estos enlaces pueden representar ramificaciones en los oligómeros. Los análisis de RMN unidimensionales y bidimensionales son coherentes con que la estructura está formada por unidades de beta-glucosamina repetidas. Los análisis de peso molecular de las muestras se realizaron mediante la medida de la viscosidad, así como mediante cromatografía de exclusión molecular, y ambas fueron coherentes en sus determinaciones. Evaluación experimental El material oligomérico de la presente invención se evaluó contra varios hongos, incluyendo cepas que son resistentes a materiales fungicidas convencionales. De forma específica, el material se evaluó contra 99 cepas de levaduras, que representan 14 especies diferentes. La mayoría de las cepas son aislados clínicos, y el resto se obtuvo de the American Type and Culture Collection en Rockville, Maryland. La distribución de las especies incluye 29 Candida albicans (14 de las cuales son resistentes al azol); 1 C. glabrata ( de las cuales son resistentes al azol); 6 C. parapsilosis (1 de las cuales es resistente al azol); 6 C. lusitaniae; 2 C. rugosa; C. tropicalis (2 de las cuales son resistentes al azol); 1 C. lambica resistente al azol; 8 C. crusei resistentes al azol; 9 C. guillermondii; C. kefyr; 4 C. stalatoidea; 1 C. paratropicalis; 1 C. lipolitica; y 2 Saccharomyces cerevisiae. El material también se evaluó contra especies de Aspergillus fumigatus. Diez de estas cepas representan aislados clínicos del laboratorio de microbiología del Detroit Medical Center; eran aislados de laboratorio resistentes al itraconazol y a la anfotericina B. Los cultivos de trabajo de las anteriores cepas se prepararon utilizando conidios como inóculo sobre placas de agar YPD obtenidas de Sigma Chemical Company de St. Louis, Missouri. Las placas se incubaron a ºC durante cuatro días, o hasta que los cultivos produjeron conidios, y los conidios frescos de los subcultivos se utilizaron como fuente del inóculo para todos los cultivos en los trabajos posteriores. El material empleado en esta evaluación fue un material oligomérico formado por unidades repetidas de betaglucosamina con un peso molecular de aproximadamente daltons. El material se preparó mediante la hidrólisis ácida de quitosano según los procedimientos mencionados anteriormente. El material concreto empleado se denominó CAN-296 y se utilizó como una disolución acuosa 0,1 mg/ml en el ensayo de susceptibilidad antifúngica de levaduras. Se determinó la concentración inhibidora mínima (MIC) y la concentración letal mínima (MLC) del material CAN- 296 utilizando el método de microdilución del caldo de cultivo, como recomienda el National Committee for Clinical Laboratory Standards (documento NCCLS nº M27, 1992), excepto que se utilizó TYG como medio de ensayo en lugar de RPMI 16. Según el procedimiento, los microorganismos se cultivaron en medio PYG al cual se añade el material CAN-296 en concentraciones que varían de a 0,019 microgramos por mililitro. La MIC se define como la concentración más baja que inhibe el crecimiento completamente. Las MIC se miden después de 48 horas de incubación a 3ºC. La MLC se determinó mediante el subcultivo de 0 microlitros de la primera concentración que demuestra una inhibición completa del crecimiento, y de todas las concentraciones que no producían un crecimiento visible. El subcultivo se realizó en placas de agar-dextrosa Sabouraud, que se incubaron a ºC durante 24 horas (72 horas para especies de Cryptococcus). La MLC se define como la concentración más baja con la cual se mata 99% del inóculo inicial. Estudios de susceptibilidad con Aspergillus fumigatus 6 Se determinó la susceptibilidad de A. fumigatus al CAN-296, así como al itraconazol y la anfotericina B, mediante la técnica de macrodilución del caldo de cultivo, según el procedimiento de Espinel-Ingroff et al., modificado por Manavathu et al., utilizando conidios frescos como fuente del inóculo. Para la preparación de las suspensiones de conidios se cultivaron diversos aislados sobre placas de agar-dextrosa-peptona-extracto de levadura (YPD) obtenidas de Sigma Chemical Company, durante seis días a ºC hasta que la placa entera estaba cubierta de crecimiento fúngico. Los conidios se recogieron empapando las superficies de agar con medio de crecimiento estéril (aproximadamente 22 mililitros), seguido de un suave rascado con una espátula de goma estéril. La suspensión resultante que contenía fragmentos de micelio, pequeños trozos de agar y otros restos celulares se recogió mediante aspiración. El aspirado se agitó en vórtice vigorosamente para liberar los conidios de los conidióforos, y se filtró a través de un tampón de algodón estéril ajustado a un embudo de filtración estéril. Se determinó la densidad celular mediante recuento hemocitométrico. Cada muestra se contó cuatro veces independientemente, y el valor medio del cuadruplicado se utilizó para el cálculo de la densidad celular. De forma típica, se obtuvieron 1-3 x 7 conidios por mililitro cuando se emplearon mililitros de medio de crecimiento para la resuspensión. La relación entre densidad celular, según se estimó mediante el recuento hemocitométrico, y el número de unidades formadoras de colonias se determinó mediante 4

5 el cultivo en placa de suspensiones celulares diluidas de forma apropiada sobre agar YPD. La estimación de la densidad celular mediante la producción de unidades formadoras de colonias (CFU) es aproximadamente -% menor que el valor obtenido mediante el recuento hemocitométrico. 1 2 Los experimentos de macrodilución del caldo de cultivo se realizaron en tubos de poliestireno de 6 mililitros estériles con un volumen final de 1 mililitro. Se preparó dos veces la concentración final requerida de CAN-296, intraconazol y AMB en 0, ml de medio de crecimiento mediante diluciones en serie en dos veces. Cada recipiente de muestra se inoculó con 0, ml de la suspensión de conidios (dos veces la CFU final requerida preparada en medio de crecimiento mediante una dilución en serie en dos veces), para obtener una CFU final de 1 x 4 por ml. Cada serie de concentraciones del fármaco se ensayó por triplicado, y cada determinación de MIC se repitió al menos una vez. Los tubos de AMB se envolvieron en una lámina de aluminio para evitar la exposición a la luz, y todos los tubos se incubaron a 3ºC durante 48 horas, y después de agitar en vórtice, rascando las paredes si es necesario, se puntuaron para el crecimiento visible. La MIC se define como la concentración más baja del fármaco en la cual no se produce crecimiento visible. Estudio del tiempo hasta la muerte Se estudió la actividad funguicida de CAN-296 mediante experimentos de curva de muerte utilizando dos aislados de C. albicans (B311 y 90028) y C. glabrata (324). En este estudio, los organismos de ensayo se cultivaron en caldo de cultivo YPD durante 24 horas a ºC en un agitador giratorio a 1 rpm. El cultivo se diluyó aproximadamente veces para obtener una densidad celular de 1 x 6 unidades formadoras de colonias (CFU) por ml. Se incubaron partes alícuotas de ml de los cultivos diluidos a ºC con diversas concentraciones de CAN-296 que varían de 0 a microgramos por ml. En diversos intervalos de tiempo de 0-24 horas, se retiraron partes alícuotas de 0,1 ml de la suspensión celular, se diluyeron en serie ( 2 a 6 veces), y las partes alícuotas de 0,1 ml se extendieron sobre placas de agar YPD en réplicas. Después de una incubación a ºC durante 48 horas, se estimó el número de CFU por ml de cultivo y se representó gráficamente frente al tiempo de exposición al CAN-296 para construir una curva de muerte. Resultados 3 4 La tabla 1 resume los resultados del ensayo de la eficacia del compuesto CAN-296 de la presente invención contra una diversidad de levaduras. La tabla representa los datos de MIC para el material sujeto, así como para los funguicidas preventivos, incluyendo AMB, flucitosina, cetoconazol, fluconazol, itraconazol y la pneumocandina L La tabla también presenta los datos de MLC para el material CAN-296. Como se verá, la gran mayoría de las especies ensayadas muestran una susceptibilidad muy uniforme al CAN-296 a concentraciones de 0,078 a 0,312 microgramos por ml. Las especies de Candida resistentes al azol y susceptibles al azol son sensibles de forma similar, y cuando se compara con L-733., el CAN-296 tiene un intervalo terapéutico más estrecho y más coherente. Las MIC del CAN-296 son comparables a las de la AMB. Sólo una cepa de C. glabrata demostró ser resistente al CAN-296 a microgramos por ml. Para todas las especies de Candida resistentes y susceptibles al azol, las MIC y MLC no diferían en más de dos veces. La acción funguicida es rápida; se observó en 1 minutos a una concentración de 2, a microgramos por ml, en 4 minutos a una concentración de 1,2 microgramos por ml, y en 1 minutos a una concentración de 0,62 microgramos por ml. La figura 1 representa las curvas de muerte típicas para los diferentes aislados de Candida. Las concentraciones de CAN-296 utilizadas para el estudio del tiempo-muerte varían de aproximadamente 2-16 veces, el valor de MIC principal para la mayoría de las especies de Candida. Como se muestra en la figura 1, la actividad funguicida de CAN-296 es dependiente de la concentración y del tiempo. Más de 99,999% de las células murieron en los primeros 1 minutos de la exposición al compuesto cuando la concentración de CAN-296 utilizada es mayor que ocho veces la MIC. TABLA 1 0 6

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7 Haciendo referencia ahora a la figura 2, se muestra la curva de muerte para el material CAN-296 que se desarrolló con respecto a la cepa de C. albicans La tabla 2 resume una comparación de los valores de MIC de CAN-296 para una diversidad de cepas de A. fumigatus, comparado con el itraconazol y AMB. Se advertirá que el material CAN-296 es un poco menos eficaz contra Aspergillus que contra levaduras; sin embargo, debe advertirse que las cepas resistentes al itraconazol y resistentes a la AMB de Aspergillus no mostraron resistencia al material de la presente invención. 7

8 TABLA Se evaluó la estabilidad térmica y frente al ph de CAN-296, y se descubrió que un hervido durante minutos no afectó a su capacidad para inhibir el crecimiento de C. albicans B311 y 90028, indicando que es un compuesto térmicamente estable. También se descubrió que el material era estable frente al ph, y no se advirtieron diferencias en la MIC cuando se varía el ph del medio (PYG). El anterior estudio demuestra que el material de la presente invención es un agente antifúngico de amplio espectro muy eficaz. Es eficaz incluso contra especies y cepas que son resistentes a materiales antifúngicos convencionales. Además, parece que no se produce resistencia cruzada entre el material de la presente invención y los agentes antifúngicos que se emplean de modo convencional. El material de la presente invención produce un muerte muy rápida de los hongos, de forma típica en los primeros 1 minutos de la exposición, sugiriendo, con ello, que este modo de acción es exclusivo. Aunque los inventores no quieren verse limitados por la especulación, se cree que es posible que el material de la presente invención puede envenenar el sistema enzimático del hongo o interferir, de otro modo, con el metabolismo celular. La estabilidad térmica y frente al ph demostradas del material aumenta su utilidad, permitiendo utilizar una diversidad de sistemas de transporte y simplificando aún más la conservación y manipulación. Puesto que el material no es degradado por los ácidos gástricos puede administrarse por vía oral, aunque en algunos casos puede administrarse, de forma ventajosa, por vía intravenosa. Se pretende que las anteriores figuras, datos, ejemplos y análisis sólo ilustren realizaciones concretas de la invención. 8

9 REIVINDICACIONES Oligómeros formados por unidades repetidas enlazadas de beta-glucosamina, teniendo dichos oligómeros un peso molecular en el intervalo de a daltons, para su uso en el tratamiento de la enfermedad fúngica en animales. 2. Oligómeros para el uso de la reivindicación 1, en los que dichos oligómeros tienen un peso molecular en el intervalo de a daltons. 3. Oligómeros para el uso de la reivindicación 1, en los que dichos oligómeros tienen un peso molecular en el intervalo de a.000 daltons. 4. Oligómeros para el uso de la reivindicación 1, en los que dichos oligómeros tienen un peso molecular de aproximadamente daltons.. Oligómeros para el uso de la reivindicación 1, en los que al menos una porción de las unidades repetidas de beta-glucosamina está acetilada a través de su nitrógeno. 6. Oligómeros para el uso de la reivindicación, en los que aproximadamente % al % de la unidades repetidas de beta-glucosamina están acetiladas. 7. Oligómeros para el uso de la reivindicación 1, en los que las unidades repetidas de beta-glucosamina que forman dichos oligómeros están unidas a través de sus enlaces Oligómeros para el uso de la reivindicación 1, en los que los oligómeros están formados por al menos diez unidades repetidas enlazadas de beta-glucosamina. 9. Oligómeros para el uso de la reivindicación 8, en los que dichos oligómeros están formados por aproximadamente 22 a 2 de dichas unidades repetidas.. Oligómeros para el uso de la reivindicación 1, en los que dichos oligómeros se preparan mediante la hidrólisis de la quitina o el quitosano. 11. Oligómeros para el uso de la reivindicación, en los que dicha etapa de hidrólisis de la quitina o el quitosano comprende hidrolizar dicha quitina o quitosano con un ácido mineral. 12. Oligómeros para el uso de la reivindicación, en los que dicha etapa de hidrólisis de la quitina o el quitosano comprende hidrolizar dicha quitina o quitosano con una enzima. 13. Oligómeros para el uso de la reivindicación 12, en los que dicha enzima comprende celulasa. 14. Oligómeros para el uso según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en los que la enfermedad fúngica en animales está provocada por una infección por Candida o Aspergillus

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