11 Número de publicación: Int. Cl. 7 : A61K 39/ Inventor/es: Davelaar, Frans, Gerrit. 74 Agente: Curell Suñol, Marcelino

Transcripción

1 19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 Número de publicación: Int. Cl. 7 : A61K 39/17 12 TRADUCCIÓN DE PATENTE EUROPEA T3 86 Número de solicitud europea: Fecha de presentación: Número de publicación de la solicitud: Fecha de publicación de la solicitud: Título: Vacunación in ovo contra la enfermedad de Newcastle. Prioridad: EP Titular/es: DIMMINACO AG. Zürichstrasse Adliswil, CH 4 Fecha de publicación de la mención BOPI: Inventor/es: Davelaar, Frans, Gerrit 4 Fecha de la publicación del folleto de la patente: Agente: Curell Suñol, Marcelino ES T3 Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, Madrid

2 Vacunación in ovo contra la enfermedad de Newcastle. DESCRIPCIÓN 1 2 La presente invención se refiere a la utilización de una cepa del virus de la enfermedad de Newcastle en la preparación de una vacuna para la vacunación in ovo de aves de corral contra la infección de la enfermedad de Newcastle. La vacunación in ovo con vacunas que contienen virus fue descrita extensamente por Sharma et al. (patente US nº ). En particular, dicha patente describe que se puede inyectar el virus vivo de la enfermedad de Marek en el líquido amniótico del huevo, con lo cual el embrión se infecta y el virus de la vacuna se replica hasta alcanzar un título elevado, lo cual induce la formación de anticuerpos protectores en el embrión tratado (Sharma; Avian Diseases 29, (198)). En la patente US nº , Ahmad et al. describen la vacunación embrionaria contra la enfermedad de Newcastle. En dicha patente, los virus se modificaron mediante la utilización de etil metano sulfonato (EMS) con el propósito de proporcionar una atenuación apatogénica del virus vivo de la enfermedad de Newcastle (cepa NDV-B1). Una desventaja de este tipo de modificación es el hecho de que el EMS es un mutágeno y la vacuna también es susceptible de actuar como mutágeno, lo cual resulta indeseable para la administración regular de la vacuna. Por otra parte, el NDV-B1 sin tratar no puede ser aplicado para la vacunación in ovo ya que la inyección de este virus sin modificar en los huevos causaría la muerte de casi todos los embriones. Además, se ha observado que el margen entre la dosis eficaz mínima y la dosis máxima segura para estos virus modificados es inferior a (por lo tanto inferior a log1). En la práctica, y en vista de los errores resultantes de la producción y debido a las pérdidas durante el almacenaje, este margen resulta demasiado pequeño. Sorprendentemente, se ha observado que las vacunas que contienen virus de la enfermedad de Newcastle de la cepa NDW, resultan particularmente apropiados para la aplicación in ovo. Por lo tanto, la presente invención se refiere a la utilización de la cepa NDW del virus de la enfermedad de Newcastle en la preparación de una vacuna apropiada para la administración in ovo a aves de corral. Se depositaron muestras del virus de la enfermedad de Newcastle de la cepa NDW en el CNCM del Institut Pasteur bajo el nº 781. Ver el documento EP Ventajosamente, la cepa NDW se administra en una cantidad comprendida entre 1 y 3 y más particularmente en una cantidad comprendida entre 0,7 y 2,2 por huevo. Para obtener los mejores resultados en la inmunización se observó que la vacuna que contiene NDW se puede administrar in ovo al cabo de entre 17 y 19 días de incubación, preferentemente al cabo de 18 días de incubación. Ejemplo 1 Preparación de la vacuna NDW para la administración in ovo 4 0 Se preparó un stock de virus semilla de trabajo a partir de un virus semilla original (depositado en el CNCM, Institut Pasteur bajo el nº I-781) mediante la inoculación en la cavidad alantoidea de huevos embrionados de pollos SPF. Del mismo modo, la vacuna se prepara mediante la inoculación del virus semilla de trabajo en la cavidad alantoidea de huevos SPF embrionados. Al finalizar la incubación, se recoge el fluido alantoideo que contiene el virus de la vacuna. El fluido alantoideo se diluye, se congela y se guarda a -0ºC. Antes de cargar, el fluido alantoideo se descongela, se diluye adicionalmente hasta la concentración requerida del virus de la vacuna, se mezcla con un estabilizante, se introduce en viales y se liofiliza. Ejemplo 2 Seguridad de la vacuna NDW in ovo en huevos SPF Se vacunaron huevos SPF en el amnion a los 18 días de incubación mediante el procedimiento descrito por Sharma y Burmester (Avian Diseases 26 (1), ) con la vacuna descrita en el Ejemplo 1. Se vacunaron seis grupos de huevos de acuerdo con el esquema expuesto en la tabla siguiente. 6 2

3 TABLA 1 Seguridad de la vacunación in ovo de huevos SPF con la vacuna NDW 1 2 Conclusión: La vacunación in ovo de huevos SPF a los 18 días de desarrollo embrionario con la vacuna NDV resulta segura con una dosis máxima comprendida entre 1,2 y 2,2 EID 0 por huevo. Ejemplo 3 3 Seguridad de la vacuna NDW in ovo en huevos comerciales de pollos de engorde con anticuerpos maternos Se vacunaron huevos comerciales de pollos de engorde en el amnion a los 18 días de incubación mediante el procedimiento descrito por Sharma y Burmester (Avian Diseases 26(1), ) con la vacuna descrita en el Ejemplo 1. Se vacunaron ocho grupos de huevos de acuerdo con el esquema expuesto en la tabla siguiente. TABLA 2 Seguridad de la vacunación in ovo de huevos comerciales de pollos de engorde con la vacuna NDW Conclusión: La vacunación in ovo de huevos de pollos de engorde con anticuerpos maternos resulta segura (sin efecto en la eclosión de los huevos) hasta una dosis de por lo menos 2 EID 0 por huevo. 3

4 Ejemplo 4 Eficacia de la vacunación in ovo de huevos SPF con la vacuna NDV La eficacia de la vacuna NDV preparada de acuerdo con en Ejemplo 1 se examinó en huevos SPF. Los parámetros para la protección fueron la respuesta de anticuerpos después de la vacunación (prueba de la inhibición de la hemoaglutinación = prueba HI) y el porcentaje de mortalidad después del desafío. El virus de desafío era la cepa Hertz 33/6 del virus de la enfermedad de Newcastle, el cual se administró a cada uno de los pollos en una cantidad de,0 EID 0. Se vacunaron cinco grupos de huevos de acuerdo con el esquema expuesto en la tabla siguiente. 1 TABLA 3 Eficacia de la vacunación in ovo de huevos SPF 2 3 Conclusión: La vacunación in ovo de huevos SPF a los 18 días de desarrollo embrionario con la vacuna NDV resulta eficaz. Una dosis de vacuna de aproximadamente 0,7 por huevo es la dosis eficaz mínima para la vacunación NDV in ovo. Ejemplo 4 Eficacia de la vacunación in ovo de huevos comerciales de pollos de engorde con anticuerpos maternos con la vacuna NDV La eficacia de la vacuna NDV preparada de acuerdo con en Ejemplo 1 se examinó en huevos comerciales de pollos de engorde con anticuerpos maternos (título HI de,1 a la edad de un día). 0 Los parámetros para la protección fueron la respuesta de anticuerpos después de la vacunación (prueba HI) y el porcentaje de mortalidad después del desafío. El virus de desafío era la cepa Hertz 33/6 del virus de la enfermedad de Newcastle, el cual se administró a cada uno de los pollos en una cantidad de,0 EID 0. Se vacunaron tres grupos de huevos de acuerdo con el esquema expuesto en la tabla siguiente: 6 4

5 TABLA 4 Eficacia de la vacunación in ovo de huevos comerciales de pollos de engorde 1 Conclusión: La vacunación in ovo de huevos comerciales de pollos de engorde a los 18 días de desarrollo embrionario con la vacuna NDV resulta eficaz. Lo anterior no resulta influenciado por la presencia de anticuerpos maternos

6 REIVINDICACIONES 1 1. Utilización de la cepa NDW del virus de la enfermedad de Newcastle, depositada en el CNCM (Institut Pasteur) bajo el número I-781, para la preparación de una vacuna para la vacunación in ovo. 2. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque los virus de la cepa NDW se encuentran presentes en una cantidad comprendida entre 1 y 3 por huevo. 3. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque los virus de la cepa NDW se encuentran presentes en una cantidad comprendida entre 0,7 y 2,2 por huevo. 4. Utilización según cualquiera de la reivindicaciones 1 a 3, caracterizada porque los virus de la cepa NDW se administran en fluido alantoideo.. Utilización según cualquiera de la reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque los virus de la cepa NDW se administran in ovo al cabo de entre 17 y 19 días de incubación. 6. Utilización según la reivindicación, caracterizada porque los virus de la cepa NDW se administran in ovo al cabo de 18 días de incubación