Prof. Adjunta Dra. Natalia Rodríguez Inmunología del Laboratorio de Patología Clínica Hospital de Clínicas
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- Amparo Robles López
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1 Prof. Adjunta Dra. Natalia Rodríguez Inmunología del Laboratorio de Patología Clínica Hospital de Clínicas
2 El Dr. M. Hargraves, A finales de la década de 1940, período de intensa investigación citológica en el área de la hematopoyesis que coincide con la implementación en la Clínica Mayo de la biopsia de Médula ósea, rodeado de interés por el conocimiento del lupus, describe el fenómeno LE en el aspirado de médula ósea de un niño con una enfermedad incierta, y que serían llamadas Células LE, constituyéndose en la primera evidencia de reactividad antinuclear. Este fenómeno se debe a la fagocitosis del núcleo intacto de una célula por un Leucocito Polimorfonuclear. La detección de las células LE fue durante mucho tiempo una prueba utilizada para confirmar el diagnóstico de LES.
3 Posteriormente, el mismo Hargraves describiría el Factor sérico al incubar plasma de un paciente con LES en un material tomado de la médula ósea de un enfermo sin lupus, logrando observar así no sólo las células LE, sino también el resto del fenómeno LE. De esta manera se da inicio al conocimiento de un Factor Anti-Nuclear.
4 en 1950 Coons y col., Desarrolla la técnica de Inmunofluorescencia. En 1959,H. Holman y H. Kunkel del Rockefeller Institute de Nueva York demostraron la afinidad del factor sérico al núcleo celular y a la nucleoproteína ; este reporte es un descubrimiento crucial para los futuros hallazgos en el campo de los autoanticuerpos.
5 Todas estas observaciones inmunológicas permitieron a George Friou en 1957 en la Universidad de Yale implementar las técnicas de Inmunofluorescencia Cuatro artículos de este investigador publicados en cuatro diferentes revistas en 1958 permitieron estandarizar el uso de la Inmunofluorescencia indirecta para demostrar que en el suero de los pacientes con LES, existían inmunoglobulinas que se unían al núcleo de las células de los tejidos. Este método sirvió de patrón de oro para la búsqueda de anticuerpos en las enfermedades autoinmunes y como patrón comparativo de otras tecnologías
6 Henry Kunkel, organiza el laboratorio de inmunología en la década de 1950 en el Rockefeller Institute e inicia las investigaciones sobre las inmunoglobulinas en pacientes con mieloma múltiple. Tiene contactos con investigadores suecos, especialmente Arne Tiselius (premio Nobel de Química) y a su regreso se dedica al estudio de la caracterización inmunoquímica del Factor Reumatoide.
7 Ya establecida la técnica de IFI, Beck y Cols. de la Universidad de Aberdeen en Escocia empezaron a observar diferentes patrones de tinción del núcleo, utilizando para ello una técnica bien estandarizada con sustrato de hígado de ratón, estableciendo las bases de los patrones nucleares que se observan actualmente.
8 En 1966 Kunkel y Tan (discípulo) descubren los Ac. anti-sm y muestran evidencia definitiva de que los Ac. en el lupus reconocen también otras estructuras nucleares diferentes a los nucleosomas, marcando el comienzo de un período de 30 años en el cual los mayores sistemas Ag-Ac asociados a las Enf. Autoimmunes Sistémicas fueron identificados y caracterisados. El antígeno Sm lleva el nombre de una joven paciente con lupus llamada Stephanie Smith quien tenía talento para la pintura.
9 Tan, modifica la técnica de IFI, que empleaba como sustratos cortes de hígado o riñón de ratón. Diez años mas tarde, publican resultados de la estandarización para la detección de los Ac. Anti tisulares en pacientes con padecimientos reumáticos.
10 Reseña Histórica Posteriormente, la utilización de distintas líneas celulares humanas se impusieron a los cortes de tejidos y los trabajos de Eng Tan en las décadas de los 70 y 80, con el uso de las HEp-2, llevaron a la descripción de un gran número de patrones (más de cuarenta) consecuencia de distintos Autoanticuerpos contra diferentes estructuras celulares. Desde esos años hasta el día de hoy, la detección de los ANA en células HEp-2 es el sustrato recomendado.
11 A la edad de noventa años, Dr. Eng Meng Tan ha tenido un impacto notable en los conocimientos acumulados de enfermedades autoinmunes, incluyendo resultados importantes en LES y una amplia gama de otras enfermedades autoinmunes, que datan de la primera descripción de los autoanticuerpos Sm (Smith). Su enfoque ha sido el uso de autoanticuerpos como sondas para identificar y dilucidar nuevas moléculas celulares y luego traducir estos descubrimientos en biomarcadores e inmunoensayos para una amplia gama de enfermedades, incluso el cáncer. El dirigió los esfuerzos para estandarizar la nomenclatura de autoanticuerpos y protocolos de estudios
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13 Son Autoanticuerpos no órgano, ni especie específicos, dirigidos contra antígenos de localización intracelular.
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15 Cómo Denominamos a estos Anticuerpos? Factor Anti nuclear (FAN) Ac. Anti nucleares (ANA) Ac. Anti núcleo citoplasmáticos
16 Los Anticuerpos Anti-Nucleares (ANA) por Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) sobre sustrato de una línea celular tumoral derivada del carcinoma laríngeo humano : (HEp-2 American Type Culture Collection [ATCC] CCL-23), es recomendada por la American College of Rheumatology. Gold Standard: Es la técnica diagnóstica que define la presencia de una condición con la máxima certeza conocida.
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18 Con esta técnica podemos poner en evidencia la presencia de: Ac. Anti Antígenos Extraíbles del Núcleo(ENA): - SSA/Ro - SSB/La Asociados a RNP nucleares - Sm - U1-RNP - SCL70 (DNA topoisomerasa-i) - CENP-B
19 DNAds Histonas Nucleosomas DNAss
20 ARN polimerasa I: Encargado de la síntesis de ARN ribosomal. NOR 90: Proteínas de la reg. organizadora de los nucléolos Fibrilarina (U3-nRNP, 34 kda) PM/Scl: complejo macromolecular de proteínas 110 y 75 Kd.
21 Ag. PCNA: El antígeno nuclear de proliferación celular es una proteína nuclear de 36 kd involucrada en la replicación del ADN celular (proteína auxiliar de la ADN polimerasa).
22 Sp100 P80 coilina
23 LEDGFp75/DFS 70: lens epithelium-derived growth factor p75 Rol de promover la supervivencia celular frente a circunstancias generadoras de estrés (radiaciones UV, virus, drogas citotóxicas, etc)
24 Anti P-Ribosomal Anti Mitocondrial Anti Lisosomal Anti golgi Anti Fibras del Citoesqueleto Anti Envoltura Nuclear
25 Aminoacyl trna sintetasas: enzimas que unen el aminoácido al trna. Jo-1 PL7/PL12 Inosina monofosfato deshidrogenasa (IMPDH): enzima que interviene en la biosíntesis de GTP.
26 Centríolo Puente intercelular NuMa (nuclear mitotic apparatus)
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29 Hasta un 3% de los pacientes con ANA negativo (Hep-2) pueden presentar Ac. contra el Ag SSA/Ro En los últimos años han surgido alternativas, como es el caso de las células Hep-2000, las cuales están constituidas por células Hep-2 transfectadas con el antígeno Ro de 60 KDa, confiriendo así una mayor expresión antigénica.
30 La prevalencia de ANA positivos entre individuos sanos varía según el sexo y edad: las personas mayores de 65 años, especialmente en mujeres. El Título es importante La prevalencia de la Enfermedad es importante: Debido a la baja prevalencia de LES (40-50 casos de personas) en la población general, la mayoría de las personas al azar con un resultado positivo de ANA no tienen LES. Una prueba de ANA bien guiada por síntomas y signos sugestivos de EAS aumenta la probabilidad Pretest.
31 GRACIAS!
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