LIAISON VCA IgG (310510)

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1 DiaSorin S.p.A. Via Crescentino snc Saluggia (Vercelli) - Italy Atención a las modificaciones! LIAISON VCA IgG (310510) 1. FINALIDAD DEL ENSAYO El ensayo LIAISON VCA IgG emplea la tecnología de la quimioluminiscencia (CLIA) en un ensayo inmunológico para la determinación cuantitativa de anticuerpos específicos de clase IgG dirigidos contra antígenos de la cápside del virus de Epstein-Barr (VCA) en muestras de suero o plasma humano. El ensayo debe realizarse en la serie de instrumentos LIAISON. 2. SUMARIO Y EXPLICACIÓN DEL TEST El virus de Epstein-Barr (EBV) es el agente patógeno responsable de la mononucleosis infecciosa (IM) e implicado en el linfoma de Burkitt (BL), en el carcinoma nasofaríngeo (NPC) y en el síndrome linfoproliferativo ligado al cromosoma X (XLP). El virus EBV es un herpesvirus patógeno para el hombre. Dado que tiene una difusión ubicua, infecta aproximadamente al 95% de los individuos en el transcurso de la vida en todo el mundo. El DNA de EBV está compuesto por una doble hélice de unos 172 kbases de longitud. La vía principal de transmisión de EBV es la oral. El virus EBV se replica en el epitelio orofaríngeo y viene liberado en la saliva por los linfocitos B infectados. Durante la infancia, la infección primaria con EBV a menudo es asintomática. Durante la adolescencia o la edad adulta, se contrae generalmente mononucleosis infecciosa sintomática. Después de la infección primaria, el virus queda latente para toda la vida. El diagnóstico de la mononucleosis infecciosa se basa en la sintomatología (caracterizada por dolor de garganta, fiebre, linfadenopatía y malestar general), asociada a pruebas hematológicas (linfocitosis) y serológicas (presencia de anticuerpos heterófilos circulantes y/o anticuerpos dirigidos contra proteínas específicas de EBV). Numerosos agentes patógenos de enfermedades infecciosas pueden provocar una sintomatología parecida a la de la mononucleosis infecciosa, por ejemplo citomegalovirus, Toxoplasma gondii, virus de la hepatitis, virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) y otros. El término de síndrome de mononucleosis se emplea a menudo hasta que se identifica el agente etiológico específico. Generalmente se confirma el diagnóstico de mononucleosis infecciosa aguda por EBV con un test para anticuerpos heterófilos (aglutinación de hematíes ovinas o equinas por el suero del paciente). Sin embargo, pueden surgir dificultades en el diagnóstico cuando el test para anticuerpos heterófilos es negativo o cuando la sintomatología es atípica. La mononucleosis infecciosa negativa al test para anticuerpos heterófilos se encuentra en el 10-20% de los adultos y en un porcentaje aún mayor en los niños afectados por mononucleosis infecciosa aguda. En estos sujetos el diagnóstico de mononucleosis infecciosa se puede confirmar detectando los anticuerpos dirigidos contra proteínas específicas de EBV, como el antígeno de la cápside viral (viral capsid antigen, VCA) y el antígeno precoz difundido [early antigen-diffuse, EA(D)]. La presencia de anticuerpos de clase IgM anti-vca es importante para formular un diagnóstico de mononucleosis infecciosa aguda. Sin embargo, se aconseja la comprobación mediante la presencia de anticuerpos auxiliares por ejemplo IgG anti- EA(D) o bien IgG o IgM anti-ebna-1 predominantes y con informaciones clínicas adicionales. La presencia de IgM anti- VCA y de niveles transitorios de IgG anti-ea(d) en muestras negativas para anticuerpos heterófilos se considera suficiente para formular un diagnóstico de mononucleosis infecciosa aguda. Los test serológicos para las infecciones por EBV permiten detectar respuestas inmunes características dependientes del tiempo. Desde un punto de vista serológico, la infección primaria por EBV está definida por la aparición precoz de IgM anti- VCA en la circulación y por su disminución hasta niveles no detectables. Casi contemporáneamente, se observa un aumento de la IgG anti-vca. La mayoría (> 80%) de los pacientes sintomáticos afectados por mononucleosis infecciosa presenta niveles muy elevados de IgG e IgM anti-vca en el primer test. La IgM anti-vca desaparece de la circulación en el transcurso de dos o tres meses después del inicio de la enfermedad, mientras que la IgG persiste indefinidamente en los individuos normales. La mayoría de los pacientes desarrolla anticuerpos anti-ea(d) en modo transitorio, pero la IgG anti-antígeno nuclear del virus de Epstein-Barr (Epstein-Barr nuclear antigen, EBNA-1) aparece en la circulación varias semanas o varios meses después del inicio de la enfermedad y persiste por años o incluso por toda la vida. En los pacientes sintomáticos afectados por mononucleosis infecciosa, la detección de la IgG anti-ebna-1, en paralelo con la de IgM e IgG anti- VCA, es útil para distinguir la fase precoz de la convalecencia de la fase aguda de la enfermedad. Un aumento de los niveles de IgG anti-ebna-1 puede indicar progresión de la mononucleosis infecciosa de convalecencia precoz a avanzada. Un aumento de los niveles de IgG anti-vca indica fase aguda de la infección, mientras que un aumento de los niveles de IgM anti-vca puede indicar progresión de la fase de incubación a la fase de enfermedad aguda. Del mismo modo una disminución de los niveles de IgM anti-vca puede indicar progresión de la infección de la fase aguda a la fase de remisión. La presencia de IgG anti-ebna en los sujetos adultos sanos indica que ha tenido lugar la exposición a EBV; la presencia de la IgG anti-vca indica exposición al virus EBV, bajo forma de infección primaria silenciosa y de exposición real. A causa de la compleja relación existente entre reacción del huésped al virus EBV y sintomatología, el seguimiento de la evolución de los niveles de anticuerpos anti-ebv puede ser útil para el diagnóstico de infección por EBV. Los niveles individuales de los anticuerpos específicos no son con seguridad indicativos de enfermedad, pero pueden tener un significado diagnóstico cuando se siguen los perfiles de las respuestas inmunes. Los perfiles de las respuestas inmunes para los diferentes antígenos de EBV demuestran una evolución característica para la infección primaria silenciosa, para la infección latente persistente y para todas las infecciones asociadas a EBV. 36 / 44 ES - 200/ , L- 10/2011

2 3. PRINCIPIO DEL ENSAYO El método para la determinación cuantitativa de IgG específica anti-antígenos de la cápside del virus de Epstein-Barr (VCA) es un ensayo indirecto basado en el principio de la quimioluminiscencia (CLIA). El péptido sintético p18 es el componente principal que se emplea para recubrir las partículas magnéticas (fase sólida) y un anticuerpo monoclonal de ratón está enlazado a un derivado del isoluminol (conjugado anticuerpo-isoluminol). Durante la primera incubación, los anticuerpos anti- VCA presentes en los calibradores, en las muestras o en los controles enlazan la fase sólida. Durante la segunda incubación, el anticuerpo conjugado reacciona con la IgG anti-vca ya enlazada a la fase sólida. Después de cada incubación, se elimina el material no enlazado mediante un ciclo de lavado. A continuación, se añaden los reactivos starter que inducen una reacción de quimioluminiscencia. La señal luminosa, y por lo tanto la cantidad de conjugado anticuerpo-isoluminol, se mide con un fotomultiplicador en unidades relativas de luz (RLU, relative light units) e indica la concentración de IgG anti-vca presente en los calibradores, en las muestras o en los controles. 4. MATERIALES SUMINISTRADOS Integral de reactivos Partículas magnéticas (2,3 ml) Calibrador 1 (3,2 ml) Calibrador 2 (3,2 ml) Diluyente de muestras (2 x 28 ml) Conjugado (23 ml) Partículas magnéticas recubiertas con antígenos de la cápside del virus de Epstein-Barr, albúmina sérica bovina, tampón fosfato, < 0,1% azida sódica. Suero/plasma humano que contiene niveles bajos de IgG anti-vca, albúmina sérica bovina, tampón fosfato, 0,2% ProClin 300 y un colorante amarillo inactivo. Las concentraciones de los calibradores (U/mL) son calibradas contra una preparación interna de anticuerpos. Suero/plasma humano que contiene niveles altos de IgG anti-vca, albúmina sérica bovina, tampón fosfato, 0,2% ProClin 300 y un colorante azul inactivo. Las concentraciones de los calibradores (U/ ml) son calibradas contra una preparación interna de anticuerpos. Albúmina sérica bovina, tampón fosfato, 0,2% ProClin 300 y un colorante amarillo inactivo. Anticuerpos monoclonales de ratón anti-igg humana conjugados con un derivado del isoluminol, albúmina sérica bovina, tampón fosfato, 0,2% ProClin 300, conservantes. Número de ensayos 100 Todos los reactivos se suministran listos para su uso. El orden de los reactivos refleja el orden con el que se han ensamblado los contenedores en el integral de reactivos. Materiales requeridos, pero no suministrados Instrumentos LIAISON XL Instrumentos LIAISON LIAISON XL Cuvettes (código X0016). LIAISON Module (código ). LIAISON XL Disposable Tips (código X0015). LIAISON XL Starter Kit (código ). LIAISON Starter Kit (código ) o LIAISON XL Starter Kit (código ). LIAISON Light Check (código ). LIAISON Wash/System Liquid (código ). LIAISON Wash/System Liquid (código ). LIAISON XL Waste Bags (código X0025). LIAISON Waste Bags (código ). LIAISON Cleaning Kit (código ). Otros materiales requeridos es LIAISON VCA IgG (negativo y positivo) (código ). 5. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES Sólo para uso diagnóstico in vitro. Todas las unidades de suero y plasma utilizadas para la fabricación de los componentes de este kit se han analizado y se han encontrado no reactivas para la presencia de HBsAg, anti-hcv, anti-hiv-1 y anti-hiv-2. Sin embargo, visto que ningún método de análisis puede asegurar que los agentes patógenos estén ausentes, todo el material de origen humano se deberá considerar potencialmente infeccioso y manipularlo como tal. 37 / 44 ES - 200/ , L- 10/2011

3 6. NORMAS DE SEGURIDAD No coma, beba, fume o se maquille durante la ejecución del ensayo. No pipetee las soluciones con la boca. Evite el contacto directo con el material potencialmente infeccioso usando batas de laboratorio, gafas de protección y guantes desechables. Lávese cuidadosamente las manos al terminar el ensayo. Evite salpicaduras o formación de aerosoles. En caso de que esto sucediera, cada gota de reactivo se debe eliminar con una solución de hipoclorito sódico al 5% y el medio utilizado se deberá tratar como material residuo potencialmente infeccioso. Todas las muestras, los reactivos biológicos del kit y los materiales usados para efectuar el ensayo se deben considerar capaces de transmitir agentes infecciosos; por lo tanto los residuos se deberán eliminar de acuerdo con las reglamentaciones de las agencias autorizadas que tengan jurisdicción sobre el laboratorio, y con las normativas de cada país. El material desechable deberá ser incinerado; los residuos líquidos deberán ser descontaminados con una solución de hipoclorito sódico a una concentración final del 5% durante media hora como mínimo. Cualquier material que pueda ser reutilizado deberá ser tratado en autoclave con un tratamiento de exceso (overkill) (USP 24, 2000, p. 2143). Generalmente se considera que una hora a 121 C es un tiempo de esterilización adecuado; sin embargo se recomienda a cada usuario que verifique la eficacia del ciclo de descontaminación mediante una validación inicial y el uso rutinario de indicadores biológicos. Los reactivos que contienen ProClin 300 se clasifican como irritantes según las Directivas Europeas aplicables: R 43 - Posibilidad de sensibilización en contacto con la piel. S 24 - Evítese el contacto con la piel. S 37 - Úsense guantes adecuados. S 60 - Elimínense el producto y su recipiente como residuos peligrosos. 7. PREPARACIÓN DEL INTEGRAL DE REACTIVOS Observe escrupulosamente las siguientes precauciones importantes para manipular los reactivos: Resuspensión de las partículas magnéticas Las partículas magnéticas deben estar completamente resuspendidas antes de colocar el integral en el instrumento. Siga los pasos indicados a continuación para garantizar la suspensión completa de las partículas: Antes de quitar la protección de los contenedores, gire hacia adelante y hacia atrás la ruedecilla dentada situada por debajo del contenedor de las partículas magnéticas hasta que la suspensión adopte una coloración morena. Agite horizontalmente el integral de reactivos con delicadeza y sumo cuidado para favorecer la suspensión de las partículas magnéticas (evite la formación de espuma). e visualmente el fondo del contenedor de las partículas magnéticas para cerciorarse de que no hayan quedado partículas magnéticas sedimentadas. Seque con sumo cuidado la superficie de cada pared para eliminar el líquido residual. Si es necesario, repita el procedimiento hasta la completa resuspensión de las partículas magnéticas. Formación de espuma en los reactivos Para garantizar las mejores prestaciones del integral, se recomienda evitar la formación de espuma en los reactivos. Observe las recomendaciones siguientes para evitarla: Antes de usar el integral, controle visualmente los reactivos, especialmente los calibradores (situados en la segunda y tercera posición del integral, después del contenedor de las partículas magnéticas) para excluir la presencia de espuma. Si se observa la presencia de espuma después de la resuspensión de las partículas magnéticas, coloque el integral en el instrumento y deje que se disuelva la espuma. El integral está listo para el uso cuando se ha dejado descansar en el instrumento, las partículas magnéticas han sido mantenidas en agitación automática y se ha disuelto la espuma. Cargar el integral en el área de los reactivos del instrumento Instrumentos LIAISON Coloque el integral de reactivos en el área de los reactivos del instrumento con la etiqueta de los códigos de barras situada a la izquierda y déjelo agitar durante 30 minutos antes del uso. Durante este tiempo las partículas magnéticas serán mantenidas en agitación automáticamente para garantizar una resuspensión completa. Hágase referencia al manual operativo del instrumento para cargar las muestras e iniciar el ensayo. Instrumentos LIAISON XL El instrumento LIAISON XL está dotado de un dispositivo magnético interno que favorece la dispersión de las micropartículas antes de colocar un integral de reactivos en el área de los reactivos del instrumento. Hágase referencia al manual operativo del instrumento para los detalles técnicos. a. Coloque el integral de reactivos en la ranura específica. b. Deje descansar el integral de reactivos en el dispositivo magnético por al menos 30 segundos (hasta varios minutos). Si es necesario, repita la operación. Luego coloque el integral de reactivos en el área de los reactivos del instrumento con la etiqueta situada a la izquierda y déjelo agitar durante 15 minutos antes del uso. Durante este tiempo las partículas magnéticas serán mantenidas en agitación automáticamente para garantizar una resuspensión completa. Hágase referencia al manual operativo del instrumento para cargar las muestras e iniciar el ensayo. 8. CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD DEL INTEGRAL DE REACTIVOS En el momento de su llegada, el integral de reactivos se debe mantener en posición vertical para facilitar la resuspensión de las partículas magnéticas. Si el integral se conserva sellado y se mantiene en posición vertical, los reactivos son estables a 2-8 C hasta la fecha de caducidad. No congele. El integral de reactivos no se debe usar pasada la fecha de caducidad indicada en las etiquetas del kit y del integral. Después de la eliminación de la protección, el integral de reactivos es estable durante ocho semanas si se conserva refrigerado a 2-8 C o bien en el área de los reactivos del instrumento. 38 / 44 ES - 200/ , L- 10/2011

4 9. RECOGIDA Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS El ensayo se puede efectuar en muestras de suero o plasma humano. Se pueden utilizar anticoagulantes como el citrato, el EDTA y la heparina. Recoja la sangre mediante punción venosa, déjela coagular y separe el suero del coágulo lo antes posible. Clarifique por filtración o centrifugación antes del ensayo las muestras que presenten material en suspensión, opalescencia, lipemia o residuos eritrocitarios. No use muestras fuertemente hemolizadas o lipémicas, ni muestras que presenten material suspendido o evidente contaminación microbiana. Elimine las eventuales burbujas de aire que pueda haber antes del ensayo. Si el ensayo se lleva a cabo dentro de los siete días sucesivos a la recogida, las muestras se pueden conservar a 2-8 C. En caso contrario, se deben subdividir en alícuotas congeladas a 20 C o a temperaturas inferiores. Si las muestras han sido descongeladas, agítelas con cuidado antes de realizar el ensayo. Cinco muestras de diferente reactividad se han conservado durante siete días a 2-8 C y se han sometido a seis ciclos de congelación y descongelación. Los resultados no han presentado diferencias significativas. El volumen mínimo de muestra necesario es 170 L (20 L de muestra L de volumen muerto). 10. CALIBRACIÓN El ensayo de los calibradores específicos contenidos en el integral de reactivos permite ajustar la curva predefinida memorizada por el fabricante en las unidades relativas de luz (RLU = relative light units) detectadas. Con una solución de los calibradores es posible realizar cuatro calibraciones. La calibración debe realizarse en triplicado cada vez que se verifique al menos una de las siguientes condiciones: Se usa un nuevo lote de integral de reactivos o un nuevo lote de reactivos starter. La calibración anterior fue realizada más de cuatro semanas antes. El instrumento ha sufrido una intervención de asistencia técnica. Los valores de los controles están fuera de los rangos esperados. Instrumentos LIAISON : Los valores de los calibradores están almacenados en los códigos de barras de la etiqueta del integral. Instrumentos LIAISON XL: Los valores de los calibradores están almacenados en el Tag para identificación de radiofrecuencia (Radio Frequency IDentification transponder, RFID Tag). 11. PROCEDIMIENTO OPERATIVO Para obtener unas prestaciones analíticas ideales hay que respetar estrictamente las instrucciones del manual operativo del instrumento. Analizadores LIAISON. Cada parámetro del test se identifica mediante el código de barras incluido en la etiqueta del integral de reactivos. Si el código de barras no se puede leer, no será posible usar el integral y tendrá que desecharse. Para obtener información detallada, consulte el manual del analizador. Analizadores LIAISON XL. Cada parámetro del test se identifica mediante la información codificada en la etiqueta de identificación por radiofrecuencia (RFID) del integral de reactivos. Si la etiqueta no se puede leer, no será posible usar el integral y tendrá que desecharse. Para obtener información detallada, consulte el manual del analizador. El instrumento realiza las operaciones siguientes: 1. Distribuye calibradores, controles o muestras en el módulo de reacción. 2. Distribuye las partículas magnéticas recubiertas. 3. Distribuye el diluyente de muestras. 4. Incuba. 5. Lava con el líquido de lavado. 6. Distribuye el conjugado en el módulo de reacción. 7. Incuba. 8. Lava con el líquido de lavado. 9. Añade los reactivos starter y mide la luz emitida. 12. CONTROL DE CALIDAD Los controles LIAISON se deben analizar individualmente para evaluar las prestaciones del test. El control de calidad se debe realizar analizando los controles LIAISON VCA IgG (a) por lo menos una vez por cada día de trabajo, (b) cuando se usa un nuevo integral de reactivos, (c) cuando se calibra el kit, (d) cuando se usa un nuevo lote de reactivos starter, (e) cuando se determina la adecuación de las prestaciones del integral de reactivos abierto con más de ocho semanas de anterioridad, o según las disposiciones legislativas y las reglamentaciones vigentes en cada país. Los valores de los controles tienen que estar comprendidos entre los rangos esperados: cada vez que uno o ambos valores estén fuera de los rangos esperados habrá que volver a efectuar la calibración y probar de nuevo los controles. Si los valores experimentales de los controles estén de nuevo fuera de los rangos predefinidos después de la calibración, habrá que repetir el test usando un frasco de control no abierto. Si los valores de los controles estén fuera de los rangos esperados, los resultados de las muestras no deben ser notificados. Las prestaciones de otros controles se deben evaluar para asegurar su compatibilidad con este test antes del uso. Por lo tanto es indispensable establecer los intervalos de los valores de los materiales usados para el control de calidad. 39 / 44 ES - 200/ , L- 10/2011

5 13. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS El instrumento calcula automáticamente las concentraciones de IgG anti-vca expresadas en U/mL y clasifica los resultados. Hágase referencia al manual operativo del instrumento para una información más detallada. Los calibradores y los controles pueden dar unos resultados de concentración o de unidades relativas de luz (RLU) distintos en LIAISON y LIAISON XL, pero los resultados de los pacientes son equivalentes. Intervalo de ensayo U/mL de IgG anti-vca. Las muestras que contengan concentraciones de anticuerpo superiores al intervalo de ensayo pueden ser pre-diluidas mediante la función Dilute del instrumento y reanalizadas (el factor de dilución aconsejado es 1:20). Los resultados se multiplicarán automáticamente por el factor de dilución para obtener los niveles de anticuerpos de las muestras no diluidas. El diluyente de muestras disponible en exceso en el integral de reactivos permite realizar la pre-dilución de 100 muestras. El valor límite que discrimina entre la presencia y la ausencia de IgG anti-vca es 20 U/mL. Los resultados de las muestras deben ser interpretados como sigue: Las muestras con concentraciones de IgG anti-vca por debajo de 20 U/mL se deben clasificar negativas. Las muestras con concentraciones de IgG anti-vca iguales o por encima de 20 U/mL se deben clasificar positivas. Un resultado negativo normalmente excluye que el paciente haya estado expuesto al virus de Epstein-Barr. Sin embargo, no se puede ignorar la posibilidad de una infección aguda, porque la muestra puede haberse recogido en una fase demasiado precoz de la fase aguda, cuando los niveles de IgG anti-vca no se pueden determinar todavía. Si se sospecha que el paciente ha estado expuesto al virus de Epstein-Barr aunque el ensayo de la IgG sea negativo, habrá que recoger y ensayar una segunda muestra días más tarde para detectar una seroconversión. Un resultado positivo indica que el sujeto ha estado expuesto al virus de Epstein-Barr. En este caso, habrá que detectar la presencia de IgM anti-ebv y de IgG anti-ebna, para determinar exactamente la fase de la infección (fase aguda, convalecencia, infección pasada). Los resultados del test se muestran de manera cuantitativa como positivos o negativos para la presencia de anticuerpos IgG anti-vca. Sin embargo, el diagnóstico de una enfermedad infecciosa no se debe formular en base al resultado de un solo ensayo, sino que éste se debe validar con otras pruebas clínicas, procedimientos diagnósticos y con la opinión del médico. 14. LIMITACIONES DEL ENSAYO Las prestaciones metodológicas del kit no se definen si los test LIAISON EBV se utilizan para la detección de los marcadores serológicos de EBV junto con los ensayos de otros fabricantes. En este caso, los usuarios son responsables de establecer sus prestaciones metodológicas. Para obtener resultados fiables es necesario atenerse estrictamente a las instrucciones de utilización y poseer una adecuada técnica manual. La contaminación bacteriana de las muestras o la inactivación mediante calentamiento pueden modificar los resultados del análisis. Los integrales no deben utilizarse con los dos tipos de instrumentos (LIAISON y LIAISON XL). Cuando se ha usado un integral con un tipo de instrumento éste debe continuar a usarse siempre en dicho instrumento hasta que se termine. Por cuestiones de posibilidad de rastreo que derivan de esta declaración, es necesario terminar el seguimiento de los pacientes con el mismo tipo de instrumento (LIAISON o LIAISON XL), sin efectuar intercambios ni desplazamientos. 15. PRESTACIONES METODOLÓGICAS DEL KIT Especificidad analítica La especificidad analítica se define como la capacidad que tiene el test para detectar exactamente el analito ante la presencia de factores potencialmente interferentes en la matriz de la muestra (por ejemplo, anticoagulantes, hemolisis, efectos de tratamientos de la muestra) o de reacciones cruzadas con anticuerpos potencialmente interferentes. Interferencias. Estudios controlados sobre los factores potencialmente interferentes han demostrado que las prestaciones del test no están influenciadas por anticoagulantes (citrato sódico, EDTA, heparina), hemolisis (hasta 1000 mg/dl de hemoglobina), lipemia (hasta 3000 mg/dl de triglicéridos), bilirrubinemia (hasta 20 mg/dl de bilirrubina) o por los ciclos de congelación y descongelación de las muestras. Reacciones cruzadas. Por norma, la presencia de anticuerpos potencialmente interferentes no interfiere en el ensayo. Los anticuerpos estudiados han sido: (a) inmunoglobulinas dirigidas contra varios agentes etiológicos como hcmv, HSV, hhv 6, VZV, parvovirus B19, HAV, Toxoplasma gondii, Mycoplasma pneumoniae (b) anticuerpos anti-nucleares (ANA) y factor reumatoide (inmunoglobulinas anti-fc) Precisión con los instrumentos LIAISON La repetibilidad y la reproducibilidad del ensayo (es decir las variaciones intra-ensayo e inter-ensayo) han sido determinadas utilizando las muestras de referencia en diferentes concentraciones de analito. La variabilidad observada no ha dado lugar a una clasificación errónea de las muestras. Repetibilidad A B C D E F G negativo positivo Número de determinaciones Media (U/mL) 29,2 36,5 40,8 68,3 78,9 88, ,71 75,9 Desviación estándar 2,43 1,77 1,39 4,88 3,76 3,97 21,16 0,13 3,12 Coeficiente de variación (%) 8,3 4,9 3,4 7,1 4,8 4,5 10,0 7,6 4,1 Valor mínimo 25,1 32,3 38,5 58,4 70,8 82, ,52 71,2 Valor máximo 34,2 39,2 43,6 77,2 86,3 94, ,99 81,6 Reproducibilidad B C D E H I G negativo positivo Número de determinaciones Media (U/mL) 35,9 39,4 61,4 70,4 96, ,12 74,2 Desviación estándar 3,45 3,74 8,14 9,96 11,68 34,43 42,21 1,02 10,35 Coeficiente de variación (%) 9,6 9,5 13,3 14,2 12,0 18,0 20,9 47,8 14,0 Valor mínimo 30,2 33,7 50,2 51,7 77, ,0 0,893 59,2 Valor máximo 42,0 46,4 77,4 86, , / 44 ES - 200/ , L- 10/2011

6 15.3. Precisión con los instrumentos LIAISON XL La repetibilidad y la reproducibilidad del ensayo (es decir las variaciones intra-ensayo e inter-ensayo) han sido determinadas utilizando las muestras de referencia en diferentes concentraciones de analito. La variabilidad observada no ha dado lugar a una clasificación errónea de las muestras. Repetibilidad. Para evaluar la repetibilidad se han analizado veinte replicados en la misma sesión analítica. Repetibilidad negativo positivo Número de determinaciones Media (U/mL) 26,3 27,7 35,1 40,3 78,8 90, ,00 80,3 Desviación estándar 1,16 0,95 1,17 1,14 3,14 3,96 9,03 0,00 2,67 Coeficiente de variación (%) 4,4 3,4 3,3 2,8 4,0 4,4 4,1 3,3 Valor mínimo 23,7 25,5 33,0 36,8 73,0 84, ,00 74,9 Valor máximo 27,9 29,1 37,2 41,8 84, ,00 85,0 Reproducibilidad. Para evaluar la reproducibilidad se han analizado veinte replicados en días diferentes (una o dos sesiones analíticas al día). Reproducibilidad negativo positivo Número de determinaciones Media (U/mL) 33,4 41,6 47,2 98, ,00 95,9 Desviación estándar 3,59 2,97 4,60 14,30 11,84 21,85 30,64 0,00 9,51 Coeficiente de variación (%) 10,7 7,1 9,8 14,6 9,5 9,7 11,1 9,9 Valor mínimo 27,4 37,4 40,7 77, ,00 79,8 Valor máximo 40,2 47,0 55, , Veracidad La veracidad del ensayo ha sido controlada mediante el test de dilución. Test de dilución. Se han analizado diluciones en serie de cuatro sueros de concentración elevada de IgG anti-vca realizadas con el diluyente de muestras. Las concentraciones medidas de IgG anti-vca obtenidas en función de las concentraciones esperadas han sido analizadas con la regresión lineal. Los coeficientes de correlación (r) estaban comprendidos entre 0,991 y 0,999. Dilución Concentración esperada, U/mL Concentración medida, U/mL % Recuperación Dilución Concentración esperada, U/mL Concentración medida, U/mL % Recuperación no diluido 311,0 no diluido 662,0 1:2 155,5 150,0 96,5 1:2 331,0 313,0 94,6 1:4 77,8 78,0 100,3 1:4 165,5 140,0 84,6 1:8 38,9 36,0 92,5 1:8 82,8 78,0 94,2 1:16 19,4 16,0 82,5 1:16 41,4 34,0 82,1 1:32 9,7 8,0 82,5 1:32 20,7 13,0 62,8 no diluido 669,0 no diluido 894,0 1:2 334,5 251,0 75,0 1:2 447,0 521,0 116,5 1:4 167,3 118,0 70,5 1:4 223,5 193,0 86,5 1:8 83,6 61,0 73,0 1:8 111,8 111,0 99,3 1:16 41,8 33,0 78,9 1:16 55,9 54,0 96,6 1:32 20,9 19,0 90,9 1:32 27,9 26,0 93, Efecto saturación con altas concentraciones Cuando se ensayen muestras que contengan unas concentraciones de anticuerpos sumamente elevadas, se pueden obtener unos niveles aparentes de anticuerpo inferiores al nivel real por efecto de la saturación. Sin embargo, un sistema bien optimizado con dos incubaciones excluye que se obtengan resultados subestimados, porque la señal analítica permanece siempre elevada (curva a saturación). La presencia de un efecto saturación ha sido evaluada analizando tres muestras positivas para IgG anti-vca con alto título. Todas las muestras han presentado unos valores de concentración por encima del intervalo de ensayo, como se espera de las muestras con alto título, indicando que la clasificación de las muestras es correcta Especificidad y sensibilidad diagnósticas La especificidad y la sensibilidad diagnósticas han sido evaluadas analizando 2139 muestras provenientes de diversas poblaciones (sujetos nunca infectados por EBV, sujetos aparentemente sanos, sujetos afectados por enfermedades autoinmunes, pacientes afectados por otras enfermedades infecciosas de sintomatología similar, pacientes infectados por infección primaria por EBV, sujetos con infección pasada por EBV, pacientes afectados por supuesta infección crónica por EBV, pacientes afectados por infección reactivada por EBV). Las muestras han sido examinadas con diferentes métodos de comparación y se ha empleado la regla del consenso general y los datos clínicos y serológicos para establecer los resultados esperados. 54 muestras han sido clasificadas dudosas tanto con el método en examen como con los métodos de referencia y por lo tanto han sido excluidas del análisis de los resultados. En la población presumiblemente negativa estudiada nueve muestras han resultado positivas y 227 muestras han resultado negativas - especificidad diagnóstica: 96,19% (intervalo de confianza al 95%: 92,89-98,24%). En la población presumiblemente positiva estudiada 27 muestras han resultado negativas y 1822 muestras han resultado positivas - sensibilidad diagnóstica: 98,54% (intervalo de confianza al 95%: 97,89-99,03%). 41 / 44 ES - 200/ , L- 10/2011

7 15.7. Esquema de reactividad para EBV La determinación paralela de la IgG anti-vca, de la IgG anti-ebna y de la IgM anti-ebv permite una discriminación mejor entre las diferentes fases de la infección por EBV. Cuando se realizan test LIAISON EBV múltiples se puede usar un valor límite diferente para interpretar de modo más correcto los resultados de la IgG anti-ebna y de la IgM anti-ebv. Se sugiere la siguiente interpretación de los resultados. Resultado de la IgM anti-ebv Resultado de la IgG anti-vca Resultado de la IgG anti-ebna Interpretación < 20 U/mL < 20 U/mL < 20 U/mL Negativo para EBV. 20 U/mL < 20 U/mL < 20 U/mL Infección primaria supuesta por EBV (fase precoz). 20 U/mL 20 U/mL < 20 U/mL Infección primaria por EBV (fase aguda). 40 U/mL 20 U/mL 20 U/mL Infección primaria por EBV (fase de transición). 40 U/mL 20 U/mL 20 U/mL Infección pasada o reactivada por EBV. 20 U/mL 20 U/mL 5 U/mL Infección pasada o reactivada por EBV. 20 U/mL 20 U/mL 5 U/mL Resultado dudoso (sólo la IgG anti-vca es positiva). Otros resultados Reactividad desconocida para EBV. Durante los estudios de evaluación clínica, se han analizado 2343 muestras provenientes de unas diversas poblaciones: sujetos nunca infectados por EBV, sujetos adultos aparentemente sanos, sujetos afectados por enfermedades autoinmunes, pacientes afectados por otras enfermedades infecciosas, pacientes infectados por infección primaria por EBV, sujetos con infección pasada por EBV, pacientes afectados por supuesta infección crónica por EBV, pacientes afectados por infección reactivada por EBV. Los resultados de los tres test LIAISON EBV han sido combinados para identificar la fase de la infección por EBV desde un punto de vista serológico y para evaluar la capacidad de los test LIAISON EBV múltiples de clasificar correctamente las muestras. El diagnóstico serológico que deriva de los test LIAISON EBV múltiples ha sido comparado con los resultados obtenidos con los test de comparación para las categorías de sujetos más representativas, es decir, sujetos negativos para EBV, pacientes infectados por infección primaria por EBV y sujetos con infección pasada por EBV. De las 210 muestras de sujetos presumiblemente negativos para EBV, 181 muestras han mostrado un esquema de reactividad negativo con los test LIAISON EBV múltiples. La concordancia con el esquema de reactividad de comparación ha sido, por consiguiente, de 86,20% (intervalo de confianza al 95%: 80,77-90,56%). De las 282 muestras de sujetos con presunta infección primaria por EBV, 255 muestras han mostrado un esquema de reactividad de acuerdo con la infección primaria con los test LIAISON EBV múltiples. La concordancia con el esquema de reactividad de comparación ha sido, por consiguiente, de 90,43% (intervalo de confianza al 95%: 86,37-93,59%). De las 1616 muestras de sujetos con presunta infección pasada por EBV, 1479 muestras han mostrado un esquema de reactividad de acuerdo con la infección pasada con los test LIAISON EBV múltiples. La concordancia con el esquema de reactividad de comparación ha sido, por consiguiente de 91,52% (intervalo de confianza al 95%: 90,05-92,84%). La interpretación de los resultados obtenidos con los test LIAISON EBV múltiples se puede realizar directamente desde el instrumento trámite el software DiaLink. Esquema de reactividad para LIAISON EBV IgM anti-ebv IgG anti-vca IgG anti-ebna Número de sujetos Porcentaje Sujetos negativos para EBV negativa negativa negativa 202 8,6% Infección primaria por EBV. fase precoz positiva negativa negativa 113 4,8%. fase aguda positiva positiva negativa 221 9,4%. fase de transición positiva positiva positiva 132 5,6% Infección pasada por EBV negativa positiva positiva ,1% Reactividad dudosa para EBV negativa positiva negativa 32 1,4% Reactividad desconocida para EBV negativa negativa positiva 49 2,1% TOTAL % 42 / 44 ES - 200/ , L- 10/2011

8 LIAISON VCA IgG (310511) 1. FINALIDAD DEL ENSAYO Los controles LIAISON VCA IgG (negativo y positivo) deben ser usados en los ensayos de quimioluminiscencia (CLIA) LIAISON para verificar la fiabilidad de los ensayos. Las prestaciones metodológicas de los controles LIAISON VCA IgG no son definidas con otros ensayos o instrumentos automáticos diferentes que LIAISON y LIAISON XL. Instrumentos LIAISON. El certificado de análisis contiene informaciones específicas sobre el lote de los controles, que debe introducirse manualmente en el software del instrumento antes de cargar los frascos de los controles en el instrumento. Hágase referencia al manual operativo del instrumento para una información más detallada. Instrumentos LIAISON XL. Los códigos de barras del certificado de análisis contienen informaciones específicas sobre el lote de los controles y deben ser leídos por el lector manual de los códigos de barras del instrumento LIAISON XL antes de cargar los frascos de los controles en el instrumento. Hágase referencia al manual operativo del instrumento para una información más detallada. 2. MATERIALES SUMINISTRADOS negativo (2 x 0,9 ml) Suero/plasma humano no reactivo para IgG anti-vca, estabilizado en tampón PBS, albúmina sérica bovina y 0,2% ProClin 300. positivo (2 x 0,9 ml) Suero/plasma humano reactivo para IgG anti-vca, estabilizado en tampón PBS, albúmina sérica bovina, 0,2% ProClin 300 y un colorante amarillo inactivo. Todos los reactivos se suministran listos para su uso. El intervalo de las concentraciones para cada control está impreso en el certificado de análisis e indica los límites definidos por DiaSorin para los valores de los controles obtenidos con test fiables. Cada laboratorio es responsable de adoptar límites diferentes para cumplir exigencias específicas. 3. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES Sólo para uso diagnóstico in vitro. Los controles no son específicos para lote de kit. Se pueden intercambiar también con lotes diferentes de integral de reactivos. Todos los materiales utilizados para la fabricación de los componentes de este kit se han analizado y se han encontrado no reactivos para la presencia de HBsAg, anti-hcv, anti-hiv-1 y anti-hiv-2. Sin embargo, visto que ningún método de análisis puede asegurar que los agentes patógenos estén ausentes, todo el material de origen humano se deberá considerar potencialmente infeccioso y manipularlo como tal. Observe las precauciones necesarias para la manipulación de los reactivos de laboratorio. Los residuos deben eliminarse de acuerdo con la reglamentación local. 4. NORMAS DE SEGURIDAD No coma, beba, fume o se maquille durante la ejecución del ensayo. No pipetee las soluciones con la boca. Evite el contacto directo con el material potencialmente infeccioso usando batas de laboratorio, gafas de protección y guantes desechables. Lávese cuidadosamente las manos al terminar el ensayo. Evite salpicaduras o formación de aerosoles. En caso de que esto sucediera, cada gota de reactivo se debe eliminar con una solución de hipoclorito sódico al 5% y el medio utilizado se deberá tratar como material residuo potencialmente infeccioso. Todas las muestras, los reactivos biológicos del kit y los materiales usados para efectuar el ensayo se deben considerar capaces de transmitir agentes infecciosos; por lo tanto los residuos se deberán eliminar de acuerdo con las reglamentaciones de las agencias autorizadas que tengan jurisdicción sobre el laboratorio, y con las normativas de cada país. Los reactivos que contienen ProClin 300 se clasifican como irritantes según las Directivas Europeas aplicables: R 43 - Posibilidad de sensibilización en contacto con la piel. S 24 - Evítese el contacto con la piel. S 37 - Úsense guantes adecuados. S 60 - Elimínense el producto y su recipiente como residuos peligrosos. 5. CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD En el momento de su llegada, los controles se deben mantener a 2-8 C en posición vertical para evitar el contacto de la solución con la tapa del frasco. No congele. Si los controles se conservan sellados y en posición vertical, ellos son estables a 2-8 C hasta la fecha de caducidad. Después de la apertura, los controles son estables durante ocho semanas si se conservan refrigerados a 2-8 C entre dos usos sucesivos. Evite la contaminación bacteriana de los controles. Los controles no se deben usar pasada la fecha de caducidad indicada en las etiquetas de los frascos. 6. PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS Coloque los frascos de los controles en las gradillas C del instrumento LIAISON. Con una solución de control es posible realizar por lo menos 20 test. El volumen mínimo de control necesario es 420 L (20 L de control L de volumen muerto). En el momento del uso, acondicione los controles a temperatura ambiente (20-25 C) antes de la apertura de los frascos y déjelos en el área de las muestras del instrumento sólo durante el tiempo requerido para realizar el test de control de calidad. Después del uso, tape los frascos lo antes posible y manténgalos a 2-8 C en posición vertical. Durante la manipulación de los controles, adopte las precauciones necesarias para evitar la contaminación microbiana. vca-g-es.fm LIAISON VCA IgG (310511) 43 / 44 ES - 200/ , L- 10/2011

9 7. MANIPULACIÓN Hágase referencia al manual operativo del instrumento para la manipulación correcta. 8. VALORES ESPERADOS Los valores esperados y los intervalos de las concentraciones de IgG anti-vca de los controles están indicados en el certificado de análisis. Estos se han establecido considerando la variabilidad de las sesiones analíticas respecto a la curva predefinida memorizada por el fabricante, a fines de garantizar la precisión de los resultados analíticos y obtener indicaciones sobre la estabilidad y el deterioro de los reactivos. Si los valores experimentales de los controles están repetidamente fuera de los intervalos predefinidos, con mucha probabilidad, el ensayo se ha llevado a cabo de forma incorrecta. vca-g-es.fm LIAISON VCA IgG (310511) 44 / 44 ES - 200/ , L- 10/2011