VIGILANCIA VIROLOGICA DEL DENGUE EN COLOMBIA ANDRES PAEZ MARTINEZ GRUPO DE VIROLOGIA INSTITUTO NACIONAL DE SALUD BOGOTA D.C. - COLOMBIA
DIAGNOSTICO Y VIGILANCIA POR LABORATORIO DEL DENGUE COLOMBIA 1) Es una vigilancia rutinaria basada en UPGDs de todos los departamentos 2) Las UPGDs son centros de salud, clínicas, hospitales, IPSs. 3) El Laboratorio de Virología del INS es el Laboratorio Nacional de Referencia
Laboratorios Departamentales de Salud Pública Diagnóstico y vigilancia de Dengue IgM Aislamiento Viral RT-PCR NS1 - IgG IgM
UPGDs: RESPONSABILIDADES POR NIVEL JERARQUICO 1) Clasificación del caso en Dengue o Dengue Grave 2) Toma de las muestras. 3) Toma de muestra en el laboratorio de IPS ELISA NS1 (opcional) 4) Realización de IgM (ELISA) (opcional dependiendo del nivel) 5) Manejo clínico del paciente. 6) Llenado de las fichas de notificación. 7) Ingreso de los casos a SIVIGILA 8) Envío de las muestras y las fichas al LDSP. 9) Recepción de los resultados del LDSP. 10( Ajustar el SIVIGILA de acuerdo a los resultados del INS y LSPD. * En Rojo las responsabilidades que se cumplen parcialmente.
RESPONSABILIDADES POR NIVEL JERÁRQUICO LDSP: 1) Recepción de la muestra y ficha procedente de las UPGDs. 2) Complementar información en el SIVIGILA 3) Procesamiento de la muestra por ELISA IgM (Unicamente si la UPGD no lo hizo) 4) Procesamiento de la muestra por ELISA NS1 y envío al INS del 100% (+) 5) Envío al INS de todas las muestras de dengue grave y casos fatales. 6) Envío al INS de 5% de los casos de Dengue con y sin signos de alarma en caso de no procesar muestras por ELISA NS1 (MUESTRAS DE PACIENTES CON MENOS DE 5 DIAS DE INICIO DE SINTOMAS) 7) Recibir los resultados del INS y re-enviarlos a las UPGDs. 8) Realizar la evaluación externa del desempeño directa (semestral) e 9) Indirecta (semestral) para IgM. 10) Realizar evaluación indirecta del desempeño a su red interna de laboratorios. * En Rojo las responsabilidades que se cumplen parcialmente.
RESPONSABILIDADES POR NIVEL JERÁRQUICO INS: Caracterización y monitoreo de la co-circulación del Dengue. 1) Recepción de las muestras procedentes de los LDSP. 2) Procesamiento por RT-PCR, ELISA NS1 y Aislamiento viral de las muestras de suero en pacientes con menos de 5 días de inicio de síntomas 3) Procesamiento por IgM de las muestras de suero con más de 5 días de inicio de síntomas. 4) Procesamiento por RT-PCR de tejidos y sueros de pacientes fallecidos. 5) Serotipificación de virus Dengue por RT-PCR y aislamiento viral 6) Emitir y enviar los resultados a los LDSP. 7) Realización semestral Evaluación Externa del Desempeño a los LDSP 8) Consolidación semanalmente la información de la virus Dengue circulantes en Colombia. 9) Publicación de resultados en revistas científicas indexadas nacionales e internacionales. 10) Publicación de manuales de laboratorio y documentos técnicos. 11) Apoyo a Ministerio de Salud en la toma de decisiones a nivel nacional. 12) Emisión de circulares a los entes territoriales
Paciente con sospecha de Dengue Primeros 5 días de evolución LDSP LABS IPS Más de 5 días de evolución ELISA IgM INS Laboratorio de Virología NS1 Aislamiento Viral ELISA IgM / IgG RT-PCR Pacientes Vivos Pacientes Fallecidos
FLUJO DE MUESTRAS LABS IPS (IgM ELISA- NS1*) DENGUE DENGUE GRAVE CASOS FATALES LDSP (Elisa IgM NS1) 5% DENGUE DENGUE GRAVE CASOS FATALES INS (RT-PCR Aislamiento viral NS1 IgM IgG Estudios de seroprevalencia) ANTIOQUIA IgM Aislamiento Viral RT - PCR
FLUJO DE INFORMACION INS LDSP UPGD SIVIGILA
FORMATO PARA ENVIO DE INFORMACION POR PERIODO AL INS
EVALUACION EXTERNA DEL DESEMPEñO INSTITUTO ROBERT KOCH - ALEMANIA INSTITUTO PEDRO KOURI - CUBA INS LDSP ANTIOQUIA LABORATORIOS DEPARTAMENTALES DE SALUD PUBLICA IPSs
Dinámicas de la viremia y la respuesta Inmune contra el Dengue 2010 Nature Publishing Group Guzman, M. G. et al. Dengue: A continuing global threat. Nature Reviews Microbiology 8, S7 S16 (2010). doi:10.1038/nrmicro2460 All rights reserved.
Diagnóstico Virológico Viremia IgM 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Día inicio de síntomas Para el momento en que se desarrolla fiebre, el virus ya esta diseminado; se debe tener en cuenta para hacer la mejor prueba diagnóstica
Diagnóstico Virológico Es aquel basado en la detección del virus o de alguna molécula viral (ácido nucléico o proteína). Es aquel por el cual podemos llegar a investigar serotipo y genotipo. Es el diagnóstico definitivo. No es posible discriminar entre una infección primaria y una secundaria. DETECCION DE VIRUS Muestra de suero o tejidos Inoculación en mosquitos 1975-1997 Inoculación en ratones lactantes 1960-2005 Inoculación en cultivos celulares 1980 - Replicación viral IFI RT-PCR + Secuenciación Serotipo Serotipo + Genotipo
Diagnóstico Virológico Es aquel basado en la detección del virus o de alguna molécula viral (ácido nucléico o proteína). Es aquel por el cual podemos llegar a investigar serotipo y genotipo. Detección de moléculas virales Muestra de suero o tejidos Detección de RNA viral C-PrM/M 2002 Muestra de suero Detección de Proteínas NS1 2012 RT-PCR Secueciación ELISA Replicación viral -Serotipo + Genotipo Replicación viral
Diagnóstico Virológico Detección de RNA viral Extracción del RNA viral Transcripción reversa del RNA viral Resultados en pocas horas. Equipos y reactivos costosos Personal altamente capacitad Se pueden utilizar diferentes tipos de muestra: Suero - Sobrenadante de cultivo Plasma - Tejido fresco Células. C- MW Muestras 500pb
RT-PCR y PCR semi-anidada para serotipificación Lanciotti et al., 1992 RT-PCR y PCR semi-anidada en dos pasos Muchas cepas escapan a la detección Harris et al., 1998 RT-PCR y PCR semi-anidada en un solo paso Muchas cepas escapan a la detección Usme-Ciro et al., 2012 RT-PCR y PCR semi-anidada en uno ó dos pasos Primers mejorados cubren variabilidad existente En evaluación
RT-PCR multiplex en tiempo real para serotipificación Johnson et al., 2005 Mayor sensibilidad Resultados en corto tiempo Reduce riesgo de contaminación cruzada
RT-PCR y PCR semi-anidada para genotipificación y análisis filogenético SLA chp SLB PK2 PK1 3 SL E E/NS1 Domingo et al., 2011 Envoltura/NS1 C- MW Muestras Envoltura Méndez et al. 2010. Virology Journal 7:226
PROPORCION DE SEROTIPOS DEL DENGUE EN COLOMBIA 2010 2013. PROPORCION DE SEROTIPOS DEL DENGUE Y DENGUE GRAVE EN COLOMBIA 2010 2013.
DISTRIBUCION DE SEROTIPOS DEL DENGUE POR RANGO DE EDAD 2010 2011 2012 2013
DISTRIBUCION DE SEROTIPOS DEL DENGUE POR RANGO DE EDAD 2014
MONITOREO GROGRAFICO DE LA CIRCULACION DE SEROTIPOS DE DENV EN COLOMBIA 2013 Número de casos Serotipos Fallecidos
PORCENTAJE DE POSITIVIDAD LABORATORIO DE VIROLOGIA INS 2013
PROPORCION DE SEROTIPOS DE DENGUE EN COLOMBIA 2013 PROPORCION DE SEROTIPOS DE DENGUE EN COLOMBIA 2014 PACIENTES FALLECIDOS
Proporción de serotipos del DENV clasificado por evento Colombia 2010 a 2013.
EVALUACION EXTERNA DEL DESEMPEñO: PORCENTAJE DE CONCORDANCIA EN EL DIAGNOSTICO DE DENGUE POR IgM DE LOS LSP 2013 1) EEDI 24/33 LSP participaron en la EEDI. los LSP participantes alcanzaron el 99.48 % de concordancia. 2) EEDI 17 LSP participaron en la EEDD. los LSP participantes alcanzaron el 100% de concordancia.
CONCLUSIONES 1) La vigilancia por laboratorio del DENV constituye una poderosa herramienta que complementa la vigilancia epidemiológica, ya que permite rastrear el origen geográfico serotipos, genotipos y linajes y establecer su relación filogenética y geográficotemporal. 2) A medida que aumenta el conocimiento acerca de la virulencia y patogénesis viral, la vigilancia de serotipos, genotipos y linajes se convierte en una herramienta para el pronóstico a nivel poblacional del potencial epidémico y de severidad de la enfermedad. 3) Reconocer los serotipos, genotipos y linajes circulantes podría tener repercusiones en el desarrollo de una vacuna que garantice protección frente a la diversidad antigénicay genética del virus en Colombia.
CONCLUSIONES 2) El serotipo 4 de DENV ha sido minoritario en Colombia en el periodo 2010 2014. Pese a lo anterior se nota una tendencia al incremento relativo de casos de dengue causados por serotipo 4 en los últimos dos años 3) El porcentaje de casos de mortalidad por dengue causados por serotipo 4 ha sido significativamente superior al de la morbilidad. Lo anterior apoyaría la hipótesis de dengue grave asociado a una segunda infección por un serotipo de virus dengue distinto al causante de la primera infección. 5) El grupo etareo más afectado por dengue en Colombia es el comprendido entre los 5 y los 9 años de edad, seguido por el comprendido entre los 10 y los 14 años de edad. A partir de esas edad la morbilidad disminuye gradualmente
CONCLUSIONES 6) Se evidencia una tendencia hacia un patrón bianual de predominio de serotipos. En2010 2011 el DENV2 fue predominante seguido por DENV1 y DENV3. En 2012-2013 DENV1 fue predominante seguido por el DENV3 y DENV2. En 2014 DENV3 ha sido predominante. De continuarse esta tendencia se espera que DENV3 sea predominante en 2014-2015, y un repunte importante de la incidencia de DENV4 en 2015 y 2016. 7) En 2013 24/33 LSP participaron en la EEDI (prueba dengue ELISA IgM) El promedio de concordancia de los participantes fue satisfactorio alcanzando el 99.48%. En contraste únicamente 17 LSP participaron en la EEDD. los LSP participantes alcanzaron el 100% de concordancia.
Gracias Dirección Redes en Salud Pública Subdirección Laboratorio Nacional de Referencia Grupo Virología Andrés Páez Martínez apaezm@ins.gov.co Lissethe Pardo lpardo@ins.gov.co Instituto Nacional de Salud Correo electrónico: apaezm@ins.gov.co Teléfono (57-1) 220 77 00 Extensión 1426 Bogotá, COLOMBIA Línea gratuita nacional: 01 8000 113 400