1. OBJETIVO: Desarrollar la clasificación de Grupo y Rh a los usuarios del Hospital Regional de Arica Dr. Juan Noé Crevani, de acuerdo con los antígenos y anticuerpos presentes en la sangre, esto con el fin de evitar reacciones transfusionales (como la incompatibilidad de grupo y Rh), en el caso de que estos usuarios necesiten algún tipo de componente sanguíneo como terapia a futuro. 2. RESPONSABILIDADES: Responsable ejecución. Tecnólogo Médico de la Sección de Inmunohematología tiene la responsabilidad de ejecutar las actividades descritas en el documento. Responsabilidad del encargado. Tecnólogo Médico de la Sección de Inmunohematología es el responsable de velar por el estricto cumplimiento del documento, como también, de efectuar y proponer las modificaciones que en la práctica se precise. Responsable del monitoreo y evaluación: Encargado de Calidad del SCR Banco de Sangre es responsable de revisar los registros, el logro de indicadores (si corresponde) y la evaluación periódica. 3. TERMINOS Y DEFINICIONES Antígeno: ("anti", del griego αντι- que significa 'opuesto' o 'con propiedades contrarias' y "geno", de la raíz griega γεν, generar, producir [que genera o crea oposición]) es una sustancia que desencadena la formación de anticuerpos y puede causar una respuesta inmunitaria. Anticuerpo: son moléculas de naturaleza proteica, cuya función es identificar a las sustancias extrañas y microorganismos que invaden nuestro cuerpo y eliminarlas a través de la acción de otras moléculas proteicas conocidas como Complemento. Autoanticuerpo: es un anticuerpo desarrollado por el sistema inmunitario que actúa directamente en contra de uno o más antígenos del propio individuo. Glóbulos rojos testigos: son aquellos glóbulos rojos que ya fueron fenotipificados y sirven para corroborar el grupo sanguíneo del usuario por medio de la prueba indirecta. Versiones impresas de este documento, son No Controladas y sólo para usarse como referencia. Pág. 1 de 9
Sensibilización: contacto de antígeno con el organismo humano de los cuales producen anticuerpos específicos frente a ese antígeno que hizo contacto. TM: Tecnólogo Médico. TPM: Técnico Paramédico. SCR: Sub Centro de Responsabilidad. GR: Glóbulos Rojos. PBS: (phosphate buffer saline) = Buffer fosfato salino. RN: Recién Nacido. 4. REFERENCIAS. Manual de Técnicas de Laboratorio Banco de Sangre Universidad de Tarapacá 5. DESARROLLO. 5.1 Descripción. DETERMINACIÓN EN USUARIO NO RECIÉN NACIDO a) Tecnólogo Médico de la Sección de Inmunohematología realiza la clasificación sanguínea de los usuarios de la siguiente manera, incluyendo determinación de Crioaglutininas con el fin de pesquisar autoanticuerpos que reaccionen con los propios glóbulos rojos del usuario. NOTA: para cada determinación de grupo y rh se necesitan de seis tubos marcados con la letra que está en paréntesis identificados por el TPM de acuerdo al número de solicitud del examen. Tubo 1) Tubo 2) Tubo 3) Tubo 4) Tubo 5) Tubo 6) Anti A (A) Anti B (B) Anti RH (D) Glóbulos A (GA) Glóbulos B (GB) Prueba autóloga (PA) b) Agregar solución de PBS al tubo 1 (A). c) Agregar dos B en el tubo 2 (B). d) Agregar dos D en el tubo 3 (D). Versiones impresas de este documento, son No Controladas y sólo para usarse como referencia. Pág. 2 de 9
e) Del tubo del usuario, sacar con pipeta plástica dos gotas de suero para el tubo 4 (GA), dos gotas de suero para el tubo 5 (GB) y dos gotas de suero para el tubo 6 (PA). f) Del mismo tubo del usuario y con la misma pipeta de plástica, extraer dos gotas de sangre y mezclar en la solución de PBS que tiene el tubo 1 (A) para obtener una dilución aproximada al 10%. g) De la mezcla obtenida del tubo 1 (A), extraer una gota y depositar en tubo 2 (B), otra gota en tubo 3 (D) y otra gota en tubo 6 (PA). h) Eliminar todo el sobrenadante del tubo 1 (A). i) Colocar dos gotas del antisuero A en el tubo 1 (A). j) Luego, colocar una gota de glóbulos testigos A1 en el tubo 4 (GA). k) Colocar una gota de glóbulos testigos B en el tubo 5 (GB). l) Se centrifugan las muestras con el suero a 3500 rpm/min. por 15 segundos. m) Leer cada tubo. - Negativo (-) no se observa aglutinación en el fondo del tubo. - Positivo + se observa aglutinación en el fondo del tubo n) Interpretar según reactividad de cada tubo. Tubo 1) (-): ausencia de antígeno Tubo 2) (-): ausencia de antígeno Tubo 3) (-): ausencia de antígeno Tubo 4) (-): ausencia de anticuerpo Tubo 5) (-): ausencia de anticuerpo Tubo 6) (-): ausencia de autoanticuerpos +: presencia de anticuerpo +: presencia de anticuerpo +: presencia de autoanticuerpos NOTA: Para realizar la determinación de clasificación sanguínea, podemos adicionar el test de crioaglutininas de la siguiente forma. Una vez leído el tubo 6 (PA), éste se almacena a temperatura de refrigeración por un lapso de 2 horas, posteriormente se centrifuga por 1 min/1000 rpm. Leer e interpretar. DETERMINACIÓN EN USUARIO RECIÉN NACIDO Versiones impresas de este documento, son No Controladas y sólo para usarse como referencia. Pág. 3 de 9
a) Tecnólogo Médico de la Sección de Inmunohematología realiza la clasificación sanguínea de los usuarios de la siguiente manera, incluyendo determinación de Coombs Directo con el fin de pesquisar sensibilización por anticuerpos maternos. NOTA: para cada determinación de grupo y rh se necesitan de seis tubos marcados con la letra que está en paréntesis identificados por el TPM de acuerdo al número de solicitud del examen. Tubo 1) Tubo 2) Tubo 3) Tubo 4) Tubo 5) Tubo 6) Anti A (A) Anti B (B) Anti AB (AB) Anti RH (D) Antisuero de Coombs (CD) Tubo para lavar GR del RN (Nº de acuerdo a la solicitud de examen) b) Agregar dos A en el tubo 1 (A). c) Agregar dos B en el tubo 2 (B). d) Agregar dos AB en el tubo 3 (AB). d) Agregar dos D en el tubo 4 (D). e) Agregar dos de Coombs en el tubo 5 (CD). f) Del mismo tubo del usuario extraer dos gotas de sangre y mezclar en la solución de PBS que tiene el tubo 6. g) Centrifugar un minuto a 3500 rpm. Eliminar el sobrenadante y rellenar nuevamente con solución PBS (hacer tres veces este mismo punto). h) Rellenar en el tercer lavado con PBS hasta obtener una concentración aproximada del 10%. i) Del tubo 6, sacar con pipeta plástica una gota de GR para el tubo 1 (A), una gota para el tubo 2 (B), una gota para el tubo 3 (AB), una gota para el tubo 4 (D) y una para el tubo 5 (CD). i) Se centrifugan las muestras a 3500 rpm/min por 15 segundos. j) Leer cada tubo. - Negativo (-) no se observa aglutinación en el fondo del tubo. - Positivo + se observa aglutinación en el fondo del tubo Versiones impresas de este documento, son No Controladas y sólo para usarse como referencia. Pág. 4 de 9
k) Interpretar según reactividad de cada tubo Tubo 1) (-): ausencia de antígeno Tubo 2) (-): ausencia de antígeno Tubo 3) (-): ausencia de antígeno Tubo 4) (-): ausencia de antígeno Tubo 5) (-): ausencia de sensibilización +: presencia de sensibilización NOTA: el registro de ambos tipos de determinación de grupo ABO y rh se realizan en el Libro de Grupo y Rh (SGC HJNC AT BS R Nº007) y em El Sistema Informático UMT.BAT. 5.2 Materiales y equipamiento. Antisueros A, B, AB y Rh(D). Antisuero de Coombs. Gradillas. Tubos de Khan. Piscetas con solución de PBS. Pipetas plásticas Pasteur. Guantes. Centrífuga. 5.3 Indicadores de Monitoreo y Evaluación. Nombre: Porcentaje de usuarios con clasificación de grupo ABO y Rh informadas correctamente Indicador: Fuente: Periodicidad: Mensual Número de clasificación de grupo ABO y Rh informadas correctamente Número de clasificaciones de grupo ABO y Rh solicitadas en mismo período Libro de grupo y Rh (SGC HJNC AT BS R Nº007). Umbral de cumplimiento : 100% 5.4 Flujograma: X 100 Versiones impresas de este documento, son No Controladas y sólo para usarse como referencia. Pág. 5 de 9
Identificación de grupo y Rh (NO RECIÉN NACIDO) B a tubo 2 D a tubo 3 TM agrega solución PBS a tubo 1 TPM ya identificó gradilla con tubos: Tubo 1) A Tubo 2) B Tubo 3) D Tubo 4) GA Tubo 5) GB Tubo 6) PA Una vez que la muestra está centrifugada, el TM saca dos gotas de suero del tubo del usuario para el tubo 4, dos para el tubo 5 y dos para el tubo 6 Del mismo tubo del usuario el TM extrae dos gotas de GR y mezcla con tubo 1 TM extrae del tubo 1 una gota para tubo 2, una para tubo 3 y otra para tubo 6 TM coloca una gota de GR testigos A1 en tubo 4 A en tubo 1 TM elimina sobrenadante de tubo 1 TM coloca una gota de GR testigos B en tubo 5 TPM centrifuga los 6 tubos a 3500 rpm por 15 segundos TM lee Interpretar Versiones impresas de este documento, son No Controladas y sólo para usarse como referencia. Pág. 6 de 9
Identificación de grupo y Rh (RECIÉN NACIDO) B a tubo 2 AB a tubo 3 A a tubo 1 TPM ya identificó gradilla con tubos: Tubo 1) A Tubo 2) B Tubo 3) AB Tubo 4) D Tubo 5) CD Tubo 6) Para lavar contiene PBS gotas de antisuero D a tubo 4 gotas de antisuero de Coombs a tubo 5 TM agrega solución PBS al tubo 6 y del tubo del usuario extrae dos gotas de sangre completa y mezcla TM rellena nuevamente con PBS Realizar el proceso anterior dos veces TM centrifuga un minuto a 3500 rpm y elimina sobrenadante Mezclar TM de la mezcla agrega una gota para el tubo 1 (A), una gota para el tubo 2 (B), una gota para el tubo 3 (AB), una gota para el tubo 4 (D) y una para el tubo 5 (CD). TPM centrifuga a 3500 rpm por 15 segundos Interpretar TM lee Versiones impresas de este documento, son No Controladas y sólo para usarse como referencia. Pág. 7 de 9
6. REGISTROS. Nombre del Registro Libro de Grupo y RH Identificación SGC HJNC AT BS R Nº007 Llenado TM, TPM Acceso Personal del SCR Banco de Sangre Mantención 3 años Almacenamiento Sección de Inmunohematología. 7. DISTRIBUCIÓN. Dirección. SCR Banco de Sangre. Oficina de Asesoría Jurídica. Oficina de Calidad y Seguridad del Paciente. 8. MODIFICACIONES. Párrafo que se modifica Página Fecha Descripción 3 Junio 2013 Versiones impresas de este documento, son No Controladas y sólo para usarse como referencia. Pág. 8 de 9
Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Versiones impresas de este documento, son No Controladas y sólo para usarse como referencia. Pág. 9 de 9