Fusarium oxisporum, Phythopthora sp, Pythium sp y Rizoctonia solani. Este

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1 AISLAMIENTO DE Spongospora subterránea y HONGOS PATOGENOS DE LA PAPA EN CULTIVOS AGRICOLAS DE LA REGION DE HUAMANTLA, TLAXCALA INTRODUCCION La Sarna polvorienta es causada por Spongospora subterránea, el cual es un patógeno importante en el cultivo de papa, debido a que afecta la calidad de los tubérculos y es vector del Potato Mop Top Virus (PMTV). El objetivo de este trabajo fue es aislar Spongospora subterránea y hongos patógenos de papa en cultivos activos y en cuarentena previamente tratados con M-sodio. El lugar que fue seleccionado para la investigación es el Rancho San Cristóbal en Huamantla Tlaxcala, propiedad de el Ing. Abraham Bretón y Bretón ya que este lugar, fue previamente reportado en cuarentena por infestación de Sarna pulverulenta y hongos patógenos de papas como Fusarium oxisporum, Phythopthora sp, Pythium sp y Rizoctonia solani. Este análisis e realizó durante la temporada , utilizando la variedad de papa Alpha. ANTECEDENTES Debido a la importancia que empieza a representar la roña o sarna pulverulenta de la papa en México, afectando variedades de gran valor comercial y en zonas de tradición en el cultivo, es necesario conocer el comportamiento del patógeno en las condiciones de México, ya que los procesos infectivos se ven afectados por variables ambientales que hacen necesario comprender en cuáles condiciones se presentan en las regiones productoras del país. Por otra parte, la papa además de presentar a la roña como una de sus enfermedades principales tiene variedades de hongos que la parasitan generando perdidas de cultivos completos lo cual se ve reflejado en grandes pérdidas económicas para los agricultores, siendo este el caso del Rancho San

2 Cristóbal en Huamantla Tlaxcala, ubicado en el kilómetro 15 de la carretera federal a Huamantla. El Rancho San Cristóbal en Huamantla Tlaxcala, ubicado en el kilómetro 15 de la carretera federal a Huamantla se mantuvo en cuarentena durante 4 años y se estuvo tratando con M-sodio para eliminar la roña y la fungosis adquirida por semilla contaminada. Los hongos que fueron detectados en el 2002 en esa zona fueron Fusarium oxisporum, Phythopthora sp, Pythium sp y Rizoctonia solana. OBJETIVO GENERAL Generar una colección de hongos patógenos y S. subterranea de cultivos en cuarentena de la Region de Huamantla Tlaxcala cuyo suelo ha sido tratado químicamente con M-sodio. OBJETIVOS PARTICULARES Aislar S. subterranea a partir de cultivos de papa tratados con Metan Sodio. Aislar Fusarium sp. a partir de cultivos de papa tratados con Metan Sodio. Aislar Phythopthora sp a partir de cultivos de papa tratados con Metan Sodio. Aislar Pythium sp a partir de cultivos de papa tratados con Metan Sodio. JUSTIFICACION El presente trabajo surge a solicitud del Ing. Bretón quien se acerca a solicitar apoyo para la solución del problema de contaminación que tienen, y que le ha causado enormes perdidas económicas en los últimos 4 años ya que la producción de papa que a obtenido a sido baja por la contaminación que presenta, así como la calidad de la papa ya que se trató con M-sodio. Y es parte de un proyecto para la solución de este problema, la colección de hongos

3 y S. subterranea de los cultivos nos permite contar con herramientas para la evaluación y solución del problema. METODOLOGIA Obtención y reconocimiento de zoosporas Para obtener y hacer el reconocimiento inicial de las zoosporas primarias, se recuperaron quistosoros de tubérculos con síntomas de sarna polvosa. Se raspó la superficie de los tubérculos, las partículas se pasaron por un tamiz de 80 mesh; en el que se retuvieron las partículas de mayor tamaño y de ésta manera los quistosoros se pudieron recuperar limpiamente. Con los quistosoros se montaron bioensayos para estimular la producción de zoosporas siguiendo la metodología propuesta por Merz, Se emplearon plántulas de tomate de la variedad tropic, con tres semanas a partir de la germinación para estimular el pulso primario de zoosporas. Se dejaron 60 mg de quistosoros en un litro de solución nutritiva KNOP incubando durante 10 días encondiciones de oscuridad a 16 ºC, al cabo de éste período; el inóculo se separó. Para evaluar la incidencia de la sarna polvorienta en los tubérculos se utilizó la escala adaptada del Manual of Plant Growth Stage Diseases Assessment Keys, Ministry of Agriculture (1976). Para el aislamiento de los Hongos se realizaron medios de cultivos selectivos para cada uno de los géneros de Fusarium sp, Pythium sp, Verticillium sp., Phytophthora sp. y Rizoctonia Fusarium SPP. Medio (1962) Nash & Snyder s Peptona 15 g KH 2 PO 4 1 g MgSO 4.7H g Agar 20 g (Quintozona, quitanaza) 1 g quitina Agua destilada 1,000 ml

4 ph Sulfato de Streptomicina 5g Agua destilada estéril 100ml Sulfato de neomicina 1g Agua destilada estéril 100ml Phythoptora sp. Medio (1962) Eckert &Tsao 3P Después de esterilizar 1L de agar de harina de maíz, agregue al medio caliente: (Piramicina) (cloruro de sodio) 100 mg Penicilina G 50 mg Polimixina B 50 mg Rhizoctonia sp. MEDIO Ko & Hora s (1971) K 2 HPO 4 1g MgSO 4.7H g KCl 0.5g FeSO 4.7H mg NaNO 2 200mg Agar 20g Agua destilada 1,000 ml Después de esterilizar, agregue al medio caliente Acido galico 400mg Fenaminosulfato 90mg cloromfenicol 50mg sulfato de streptomicina 50mg Flowers (1976) plantea el sustituir el acido galico por el ácido tánico (120 mg/l), que es tolerado mejor por Rhizoctonia solani.

5 Método Boosalis & scharen s (1959) 1. Realice una suspensión de 100g del suelo para ser analizado en 2.5 litros de agua 2. dejar por 30 seg y después verter el sobrenadante en un tamiz de 250 µm; 3. realizar una suspensión del depósito en 1 litro de agua, para colocar para 30 seg. y para vertir el sobrenadante nuevo sobre el tamiz, 4. Repita este paso hasta que el sobrenadante llega a estar claro (5 a 8 veces) 5. retirar el excedente de agua en el tamiz dando golpecitos por dos minutos 6. remueva el remanente del tamizado y adicionarle 35 ml de agua esteril 7. distribuya este remanente en el agar. Nota: el inoculo puede ser cuantificado por microscopia. Pythium sp. Medio (1971) Mircetich s Quintozona 100 mg Rosa de bengala 10 mg Sacarosa 20 g ZnCl 2 1mg de (Zn) CuSO 4.5H 2 O 0.02 mg de (Cu) MoO mg de (Mo) MnCl mg de (Mn) FeSO4.7H2O 0.02 mg de (Fe) MgSO4.7H2O 10 mg Tiamina HCl 0.1mg Agar 23 g

6 Agua destilada 1000 ml Esterilizar por 30 min a C. Por separado esterilizar una solución de CaCl 2, y agrega 10mg del CaCl 2 al medio anterior que se ha refrescado a 50 0 C. También agregue los antibióticos siguientes: Piramicina 5 mg Vancomycina HCl 300 mg Utilice el medio el mismo día e incube en la oscuridad. Si la temperatura de la incubación se levanta a 38 0 C, ayudas a este medio selectivamente al Pythium appanidermaturm del aislamiento entre muchas otras especies de Pythium (Lumsden et al., 1975) Verticillium Sp. Hay literatura que confunde al Verticillium alboatrum del V. dahliae. Algunos autores los consideran similares, mientras que otros prefieren referirlos solo como Verticillium. Hemos conservado la nomenclatura usada en las publicaciones originales MEDIO Nadakavukaren & horner s (1959) Agar 7.5 g Sulfato de streptomicina 100 mg Agua destilada 1,000 ml Adicione el medio en un frasco enlenmeyer de 200ml en base de 90 ml por frasco, esterilizar. Adicione antes de preparar las placas al medio caliente lo siguiente: Etanol absoluto 0.5 g Suspensión del suelo a ser analizado 10 ml Las placas se guardan para incubación a C por 10 días

7 RESULTADOS El aislamiento de S. subterranea, no fue logrado, además de que los cultivos de papa no presentaron ningún tipo de sintomatología durante el procesos de cultivo, ni en la cosecha y tampoco mientras se mantuvo la vida de anaquel. Con respecto al crecimiento de hongos obtenidos se recuperaron las siguientes cepas. Phythoptora S. Fusarium sp. Pythium Verticillium sp. subterranea 1P 0 F1 PY1 V1A 2P F2 PY2 V2A 3P F3 PY3 V3A 4P F4 PY4 V4A 5P F5 PY5 V5A F6 F7 F8 F9 F10 En la siguiente tabla se puede apreciar la cuenta viable de los hongos que se presentaron durante el proceso de cultivo y su cinética de crecimiento..

8 100 CUENTA VIABLE EXP TIEMPO 0 30 DIAS 60 DIAS 90 DIAS DIAS TESTIGO C/METAM TESTIGO S/METAM C49D C/METAM C49D S/METAM B4M6a C/METAM B4M6a S/METAM 5a C/METAM 5a S/METAM Grafica 8. CONCLUSIONES Es posible que S. subterranea no se encuentre en los cultivos después de los años que se ha estado fumigando con M-Sodio, por los tanto afortunadamente para el productor ya no hay problema de roña. El encontrar las cepas de los diversos hongos, no necesariamente quiere decir que todas las cepas sean patógenas, se realizaran pruebas de antagonismo para determinar las cepas patógenas que se deban tratar. Se realizaran aislamiento y selección de cepas de actinomicetos que tengan efecto antagónico a hongos patógenos de papa ya asilados, para generar pruebas de antagonismo en campo.