INSTRUCCIONES DE USO.

Transcripción

1 TEST RÁPIDO DETECCIÓN ENFERMEDAD CELIACA. Test Rápido para la detección de anticuerpos IgA/IgG/IgM contra la transglutaminasa tisular humana en sangre humana. Para diagnostico in vitro. Almacenar entre 2-8ºC. INSTRUCCIONES DE USO.

2 1. USO La Prueba Rápida para la detección de enfermedad celíaca es una prueba inmunocromatográfica diseñado para la detección cualitativa de anticuerpos (IgA / IgG / IgM) contra la transglutaminasa tisular humana en la sangre humana. 2. RESUMEN Y EXPLICACIÓN La enfermedad celíaca (EC) es una enteropatía causada por una intolerancia permanente al gluten y, específicamente, a su fragmento de la proteína llamada gliadina. La ingestión de proteínas, en personas con predisposición genética induce una lesión severa de la mucosa intestinal que se caracteriza histológicamente por una hiperplasia de las criptas, con un total o atrofia subtotal de las vellosidades intestinales. Aunque el diagnóstico definitivo de enfermedad celíaca se basa en cambios histológicos característicos observados en biopsias intestinales, las pruebas serológicas, como la detección de anticuerpos anti-gliadina, anti ttg y anticuerpos anti-endomisio, ofrece costo efectivo y un método menos invasivo de detección de la enfermedad. Transglutaminasa es el principal auto-antígenos reconocidos por los anticuerpos anti-endomisial. Es particularmente útil para pacientes pediátricos (hasta 16 años de edad). 3. PRINCIPIO DEL TEST RÁPIDO. Anticuerpos anti-ttg presentes en una muestra de sangre reaccionan con partículas de látex de color que están recubiertos con ttg humana recombinante. Estas partículas del complejo látex-ttg-anti-ttg llega a la zona de reacción a través de un proceso cromatográfico, donde la transglutaminasa tisular humana inmovilizada captura el complejo, formando una línea roja. 4. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES Para uso diagnóstico in vitro. PRECAUCIÓN: Manipule las muestras de sangre entera como material de riesgo biológico potencial. Todas las muestras de sangre deben ser consideradas como potencialmente contaminados y tratados como si fueran infecciosos. Por favor, consulte con los EE.UU. Departamento de Salud y Servicios Humanos (Bethesda, MD., EE.UU.), la publicación de Bioseguridad en laboratorios microbiológicos y biomédicos, 1999, 4 ª ed. (CDC / NIH) y N º de Enfermedades (CDC) en los informes de los procedimientos de seguridad en el laboratorio sobre diferentes enfermedades o cualquier otra norma nacional o local.

3 Siempre utilice guantes protectores cuando manipule muestras de pacientes. Lea todas las instrucciones antes de realizar la prueba rápida. No utilice las placas de prueba más allá de la fecha de caducidad. Deseche las placas de prueba utilizados para residuos biológicos peligrosos según la normativa local y nacional. 5. CONTENIDO DEL JUEGO Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS Cada kit de prueba rápida celíaca contiene reactivos para 20 pruebas. Almacenar los componentes del kit refrigerado (2-8 C) hasta su uso Dispositivos de prueba Contenido: 20 paquetes individuales dispositivos de prueba. Preparación: Listo para su uso. Estabilidad: Estable hasta la fecha de vencimiento. Deseche las cintas de prueba después de su uso Buffer Contenido: Diluyente buffer 5 ml. Preparación: Listo para su uso. Estabilidad: Estable hasta la fecha de vencimiento Lancetas: Contenido: 20 lancetas. Preparación: Listo para su uso. Estabilidad: Estable hasta la fecha de vencimiento. Deseche la lanceta después de su uso Micropipetas Contenido: 20 pipetas. Preparación: Listo para su uso. Estabilidad: Estable hasta la fecha de vencimiento. Deseche las micropipetas después de su uso Instrucciones de uso

4 6. MATERIALES NECESARIOS, PERO NO INCLUIDOS. Temporizador Toallitas de alcohol Guantes 7. ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Almacenar el kit de prueba rápida celíaco refrigerado (2-8 C). Cuando se almacena a estas temperaturas el kit es estable hasta la fecha de caducidad impresa en la etiqueta del envase y la etiqueta de las bolsas de la placa de prueba. No congelar o exponer el equipo a altas temperaturas o almacenar por encima de 8 C cuando no se usa. No utilice cintas de prueba, el tampón diluyente, lancetas o micropipetas después de la fecha de caducidad impresa en la etiqueta. 8. PROCEDIMIENTO DE PRUEBA Lea el procedimiento de ensayo completo antes de comenzar. PREPARACIÓN PRELIMINAR Coloque una cinta de prueba y el buffer diluyente a temperatura ambiente. Sacar la placa de su bolsa sellada antes de usar y colocar sobre una superficie plana. PASO 1: TOMA DE MUESTRAS Y APLICACIÓN A. La sangre debe ser extraída utilizando las lancetas y micropipetas incluidas. Una muestra de sangre es recogida por punción en el dedo, el dedo índice, medio o anular se pueden utilizar. Limpie el dedo con alcohol y deje secar al aire. La posición de la palma de la mano hacia arriba y con una nueva lanceta estéril, pinchar la yema del dedo. Para operar la lanceta: 1. Empuje la tapa amarilla en el cuerpo de la lanceta hasta que haga clic. 2. Desenrosque la tapa de la lanceta hasta que sienta que lo separan del dispositivo, se activa la lanceta. No tire de la tapa, sólo giro. 3. Presione el extremo abierto de la lanceta en la yema del dedo del paciente y pulse el botón de liberación.

5 4. Deseche inmediatamente la lanceta en un recipiente adecuado. Sostenga el dedo debajo del codo para aplicar una suave presión intermitente en la base del dedo pinchado varias veces. Limpie la primera gota de sangre (con una gasa estéril o algodón). Sostenga el micropipeta de recogida de sangre en posición horizontal, con la salida de aire libre, y el tacto de la muestra de sangre con la punta del tubo. No toque o raspe la piel. Llene la micro pipeta a la línea de llenado, evitando las burbujas de aire. No apriete la micropipeta durante la recolección. Prueba de la muestra de inmediato para evitar la coagulación de la sangre. Poco a poco agregar la muestra de sangre en el casete de prueba. Con cuidado, coloque la pipeta en la ventana redonda (indicada con una flecha), y apriete la perilla de la micropipeta en forma suave. B. muestra de sangre recogida por otro tipo de pipeta Utilizando una micropipeta y la punta desechable estéril poco a poco sacar 20 microlitros de muestra de sangre directamente de la punción en el dedo o de una muestra de sangre venosa entera, y se distribuye en la ventana redonda (indicada con una flecha) del dispositivo de prueba. ATENCIÓN: Colección y la aplicación de la muestra debe ser rápida, con el fin de evitar la coagulación de la muestra en la micropipeta.

6 PASO 2: Solución buffer. Espere segundos hasta que la sangre ha sido absorbida, y añadir dos gotas de tampón de dilución en la misma ventana. Añadir una gota a la vez, manteniendo el frasco gotario en posición vertical. Evitar la contaminación del gotario con la muestra. Si el gotario no se utiliza, añadir 80 microlitros de tampón de dilución. PASO 3: lectura de los resultados Lectura visual de los resultados 10 minutos después de añadir el tampón de dilución, y no más tarde de 15 minutos. 9. RESULTADOS Los resultados de las pruebas se han de interpretar de la siguiente manera (Figura 1): NEGATIVO: Sólo aparece una banda azul en la ventana de resultados cerca de la letra "C" (línea control) del cassette de prueba. Esta banda siempre debe aparecer. POSITIVO: Además de la banda de control azul, una banda color rosa-rojo también aparece en la ventana de resultados bajo la letra "T" (la línea de prueba) de la cinta de prueba. La intensidad de la línea depende de la concentración de anticuerpos en la muestra. Si no hay banda azul en el área de control, la prueba no es válida y debe repetirse con otra cinta de prueba. Cualquier línea de color que aparezca después de 15 minutos no tiene valor diagnóstico. El diagnóstico definitivo no debe basarse únicamente en el resultado obtenido con una prueba, sino que debe estar basada en una correlación de los resultados con los típicos signos y síntomas clínicos.

7 Figura 1. Interpretación de los resultados de la prueba rápida celíaca. 10. LIMITACIONES La Prueba Rápida celíaca es cualitativa, y la interpretación cuantitativa de la magnitud de los resultados no debe hacerse con respecto a la intensidad de una línea positiva. Como con cualquier procedimiento de diagnóstico, el resultado prueba rápida de enfermedad celíaca debe ser interpretada conjuntamente con la presentación clínica del paciente y cualquier otra información disponible para el médico. Es muy importante agregar la cantidad correcta de la muestra. Volumen de muestra insuficiente, no puede llegar a la zona de reacción, y la prueba no puede funcionar correctamente. Si el volumen de la muestra es demasiado grande, la mezcla de reacción en el dispositivo se diluye, lo que puede provocar un resultado falso negativo. Es muy importante controlar el tiempo de reacción. Si el tiempo de reacción es más corto de lo recomendado, esto puede conducir a resultados falsos negativos. Si el tiempo de reacción es más de lo recomendado, esto puede conducir a un resultado falso.

8 11. CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO 1. Desempeño contra ELISA y biopsia intestinal en pacientes pediátricos Un estudio prospectivo se llevó a cabo con 123 pacientes pediátricos (1). Estos pacientes fueron sometidos a una biopsia intestinal para fines diagnósticos. Dentro de los 123 pacientes 10 pacientes tenían serología normal (controles), 111 tenían lesiones Marsh 3, y 2 pacientes tenían una lesión Marsh 2. Los marcadores séricos de la enfermedad celíaca se determinaron simultáneamente por la Prueba Rápida celíaca y examen ELISA. En este estudio, prueba rápida celíaca tenía 94,3% de resultados conforme con el método ELISA. Dos pacientes con deficiencia de IgA fueron positivos con la prueba rápida celíaca y todos los controles fueron negativos. El diagnóstico con el test rápido de enfermedad celíaca, se realizó con una sensibilidad del 90,0%, una especificidad del 90,0%, y la eficacia de 90,2%. 2. Prueba de rendimiento contra Inmunodot ALPHADIA gliadina-t- Transglutaminasa Sensibilidad y especificidad de la prueba rápida celíaca se compararon con 101 muestras (sangre) de los pacientes celíacos (con o sin una dieta sin gluten, y nuevos pacientes celíacos), familiares celíacos y pacientes con problemas digestivos (diarreas, desnutrición, dolor de estómago). Estas muestras de sangre fueron analizadas con la prueba rápida celíaca, y los sueros derivados de las muestras de sangre entera con la inmuno-gliadina ALPHADIA ttransglutaminase KIT DOT. Los resultados se muestran en la Tabla 1. Table 1. Performance of the Celiac Quick Test against Immunodot ALPHADIA gliadin-ttransglutaminase DOT KIT. Celiac Quick Test Immunodot ALPHADIA Positive Negative Positive 11 1 Negative 0 89 Agreement: 99% Sensitivity: >99% Specificity: 98.9% 3. Desempeño contra Test de varilla CD1 El rendimiento de la Prueba Rápida celíaca se comparó con el CD1 Stick (Operon SA, Zaragoza) prueba por medio del análisis de 106 muestras de sangre (prueba rápida celíaca) y sus correspondientes muestras de suero

9 (Stick CD1). Estas muestras procedían de pacientes celíacos (con o sin una dieta sin gluten, y nuevos pacientes celíacos), familiares de celíacos y pacientes con problemas digestivos (diarreas, desnutrición, dolor de estómago). Los resultados se muestran en la Tabla 2. Table 2. Performance of the Celiac Quick Test against the Stick CD1 test. Celiac Quick Test Stick CD1 Positive Negative Positive 11 1 Negative 0 94 Agreement: 99% Sensitivity: >99% Specificity: 98.9% 12. REFERENCIAS. 1. Zhang J. etal. "Modulation of the in situ activity of tissue transglutaminase by calcium and GTP". The Journal of Biological Chemistry (1998) 273 (4): Sardy M. et al. "Recombinant human tissue transglutaminase ELISA for the diagnosis of gluten-sensitive enteropathy". Clinical Chemistry (1999) 45(12): Sorell L. et al. "One-step immunochromatographic assay for screening of celiac disease". Lancet (2002) 359: Drago S. et al. "Recent developments in the pathogenesis, diagnosis and treatment of celiac disease". Expert Opinion in Therapy Patents (2002) 12(1): Hansson T. et al. "Recombinant human tissue transglutaminase for diagnosis and follow-up of childhood coeliac disease". Pediatric Research (2002) 51 (6): Ferre-Lopez, S. et al. "A reliable generation of immunochromatographic sticks for both t-tg and AGA screening in Coeliac Disease". Clinical Gastroenterology and Hepatology (in press) 7. Jennings J. et al. "New developments in celiac disease". Current Opinion in Gastroenterology (2003) 19 (2):