INFORME ESTUDIO DE RESIDUOS DE MEDICAMENTOS VETERINARIOS EN ALIMENTOS
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- Luis Miguel Casado Torregrosa
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1 INFORME ESTUDIO DE RESIDUOS DE MEDICAMENTOS VETERINARIOS EN ALIMENTOS Subsecretaria de Salud Pública- Ministerio de Salud Instituto de Salud Pública de Chile SEREMI de Salud Región Metropolitana SEREMI de Salud O Higgins AÑO 2009
2 Informe preparado por: Q. A Luis Roa Marín, Laboratorios Residuos de Medicamentos Veterinarios, Instituto de Salud Pública de Chile
3 I. ANTECEDENTES Desde la ejecución del proyecto fortalecimiento del programa de inocuidad de los alimentos en el año 2006 hasta la fecha se han estudiado y caracterizado la presencia de residuos de medicamentos veterinarios en alimentos de origen animal destinados al consumo humano, tal proyecto involucró al Instituto de Salud Pública de Chile, Ministerio de Salud, JICA ( Japan International Cooperation Agency) y SEREMIs. El proyecto se extendió por tres años, proporcionando equipamiento de punta y capacitaciones específicas en algunas metodologías de análisis de residuos de medicamentos veterinarios Consecuente con esta línea de investigación aplicada, el Laboratorio de Residuos de Medicamentos Veterinarios se acreditó el año 2009 en dos metodologías analíticas que comprendieron cuatro analitos, y este año ampliará esta acreditación a 17 nuevos analitos. Tal acreditación bajo la norma ISO permite emitir resultados con la debida confiabilidad analítica y ser reconocidos validos a nivel mundial. Actualmente el laboratorio de residuos de medicamentos veterinarios tiene implementados cuarenta analitos que comprenden diversos grupos terapéuticos tales como: antibióticos, beta-agonistas, antiparasitarios, hormonas, y colorantes triarilmetanos. Los ensayos se realizan en tejido animal tales como músculo, corazón, riñón e hígado de diversas especies que comprenden: porcino, bovino, pollo, pescado, camarón y conejo. La detección de niveles residuales de medicamentos en alimentos cobra una vital importancia en la salud publica, tal exposición crónica puede ejercer diversos efectos nocivos en la salud humana, dichos efectos pueden generar alergias, efectos teratogénicos, efectos mutagénicos y resistencia bacteriana. El fenómeno de la resistencia bacteriana es reciente y está caracterizado por una refractariedad total y parcial de los microorganismos al efecto antibiótico. Las causas de la aparición de dicho fenómeno son variadas, dentro de ellas se encuentra el uso y duración inadecuada de los tratamientos con antimicrobianos.
4 Desde este punto de vista se hace necesario estudiar la presencia de residuos de medicamentos veterinarios en alimentos, la exposición crónica a niveles residuales puede generar una serie de efectos en la salud pública de la población en especial de grupos vulnerables como los niños y adultos mayores. A continuación se presentan los resultados del programa de residuos de medicamentos veterinarios en alimentos desarrollado en el año 2009, realizado en conjunto entre el MINSAL, SEREMI de la Región Metropolitana, SEREMI de la Región de O Higgins y el Instituto de Salud Pública de Chile.
5 ESTUDIO DE RESIDUOS DE MEDICAMENTOS VETERINARIOS EN ALIMENTOS MINSAL INSTITUTO DE SALUD PÚBLICA DE CHILE SEREMI RM SEREMI O HIGGINS 1. Generalidades 1.1. Muestreo El estudio contempló el análisis de 120 muestras de cuatro especies animales correspondientes a porcinos, bovinos, pollos y salmón. En la Tabla N 1 se observa la distribución de especies por cada uno de los SEREMIs involucrados. Las muestras de porcinos, bovinos y pollos fueron tomadas en mataderos y faenadoras, en el caso de las muestras de salmón fueron tomadas en faenadoras, expendios, terminal pesquero, envasadoras y procesadoras, pertenecientes a la Región Metropolitana y Región de O Higgins por las SEREMIs de Salud respectivas, de acuerdo a las pautas y recomendaciones establecidas en el Codex Alimentarius. Las muestras fueron tomadas entre septiembre y diciembre del año 2009, la procedencia de las muestras queda reflejada en la Tabla N 2. Tabla N 1 Distribución de muestras por especie Especie RM SEREMI DE SALUD REGIÓN LIB. B. O HIGGINS TOTAL MUESTRAS ANALIZADAS Porcino Bovino Pollos Salmón TOTAL MUESTRAS Fuente: Laboratorio de Residuos de Medicamentos Veterinarios. Instituto de Salud Pública de Chile.
6 Tabla N 2 Distribución de muestras según origen de toma de muestras Especie Mataderos Faenadoras Expendio Terminal Pesquer o Envasadora Procesadora Total Porcino Bovino Pollos Salmón TOTAL Fuente: Laboratorio de Residuos de Medicamentos Veterinarios. Instituto de Salud Pública de Chile Métodos de Análisis Para la realización de este estudio, se utilizaron los métodos validados por el Laboratorio de Residuos de Medicamentos Veterinarios, cuyas referencias bibliográficas son las siguientes: Determination of chloramphenicol residues in shirimps tissues by liquid chromatography mass spectrometry. P. Muñoz,, M. Ramos, A. Aranda, I. Rodriguez, R. Diaz, J. Blanca. Journal of Chromatography B 791 (2003) Simultaneous determination of residual hormonal chemicals in meat, kidney, live tissues and milk by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. B. Shao, R. Zhao, J. Meng, Y. Xue, G. Wu, J. Hu. X, Tu. Analityca Chimica Acta 548 (2003) Multiresidues determination of triarylmethane and phenothiazine dyes in fish tissues by LC-MS/MS. J Tarbin, D.Chan, G. Stubbings, M. Sharman, G. Analytica Chimica Acta 625 (2008)
7 .Validation of a liquid chromatography tandem mass spectrometric method for the quantification of eight quinolones in bovine muscle, milk and aquacultured products. N. Van Hoof, K. De Wasch, L. Okerman, W. Reybroeck, S. Poelmans, H. Noppe., H. De Brabander. Analytica Chimica Acta 529 (2005) B 791 (2003) Efficient HPLC method for the determination of nicarbazin, as dinitrocarbanilide in broler liver. E, Capurro, M. Danaher, A. Anastasio, ML, Cortesi, M, O keeffe. Journal of Chromatography B 822 (2005) Para la detección instrumental, se utilizó Cromatógrafo liquido Agilent 1200 acoplado un detector selectivo de masas/masas (LC-MS/MS), marca Applied Biosystems, modelo 3200 QTrap. Equipado con bomba cuaternaria, Desgasificador por vacío, muestreador automático con control de temperatura, termostatizador de columna y Detector DAD Los resultados se expresan en µg/kg (microgramos de medicamento encontrado por kilogramo de muestra), de acuerdo a la legislación vigente. Para la cuantificación y confirmación de los residuos de medicamentos de uso veterinario se utilizaron criterios establecidos en la Decisión de la Comisión (2002/657/CE). Funcionamiento de los métodos analíticos e interpretación de los resultados de la Comunidad Europea. Para cada analito fueron monitoreadas dos transiciones, una con fines de cuantificación y otra con fines de confirmación, cumpliendo con los cuatro puntos de identificación exigidos con este propósito. Los criterios de confirmación para las metodologías analíticas realizadas por LC-MS-MS fueron: 1. Tiempo de retención analito: El tiempo de retención entre el analito y el control no debió superar un ± 2.5 % 2. Tiempo de relativo: El cuociente entre el tiempo de retención del analito y el estándar interno no debió superar un ± 2.5 % 3. Ratios: El cuociente entre la transición minoritaria y la mayoritaria debió estar comprendido entre las tolerancias establecidas según su intensidad relativa
8 4. Señal:ruido : Igual o superior a tres en la transición minoritaria. Luego, una muestra analizada resulta ser positiva si supera el límite de detección y cumple con los cuatro criterios de confirmación en forma simultánea, los límites de detección y método instrumental utilizado se observa en la Tabla N 3 Tabla N 3 Límites de detección y métodos instrumen tales ANALITO LIMITE DE DETECCIÓN (µg/kg) MÉTODO Cloranfenicol 0.05 LC-MSMS Enrofloxacino 2.5 LC-MSMS Ciprofloxacino 2.5 LC-MSMS Acido oxolinico 2.5 LC-MSMS Flumequina 2.5 LC-MSMS Difloxacino 2.5 LC-MSMS Danofloxacino 2.5 LC-MSMS Sarafloxacino 2.5 LC-MSMS Acido Nalidixico 2.5 LC-MSMS Norfloxacino 2.5 LC-MSMS Marbofloxacino 2.5 LC-MSMS Trembolona 0.05 LC-MSMS α-zeranol 0.2 LC-MSMS β-zeranol 0.2 LC-MSMS Nicarbazina 20 LC-DAD Cristal violeta 0.1 LC-MSMS Verde malaquita 0.1 LC-MSMS Verde leucomalaquita 0.1 LC-MSMS
9 2. Resultados 2.1 Muestras con Residuos de Medicamentos Veterinarios Detectados. Con respecto al cumplimento del Reglamento Sanitario de los Alimentos Decreto Supremo Nº 977/96 Articulo 280 podemos mencionar que siete muestras resultaron no conformes (5,8 %) Tabla N 4. Es importante destacar que en estas muestras se detectaron residuos de medicamentos veterinarios que se encuentran prohibidos como cloranfenicol (6 muestras) y verde malaquita (1 muestra). El cloranfenicol fue detectado en un intervalo de concentraciones entre 0,14-0,29 ppb en muestras de cerdo y bovino, verde malaquita fue detectado a una concentración de 0,27 ppb en una muestra de salmón. Además se detectó en tres muestras de salmón la presencia de otro agente de uso prohibido cristal violeta, el cual esta legislado internacionalmente en normativas como el Codex Alimentarius. De acuerdo a los resultados obtenidos, se detectaron 29 (24.2 %) muestras de tejido animal de las 120 analizadas, con presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario. De éstas 16 provienen de Región Metropolitana y 27 de la Región de O Higgins. Tabla N 4. Tabla N 4 Cantidad de muestras con niveles de resi duos de medicamentos detectados MUESTRAS REGIÓN METROPOLITANA REGIÓN LIB. B. O HIGGINS TOTAL (%) CONFORMES (94.2) NO CONFORMES (5.8) DETECTABLES (24.2) NO DETECTABLES (75.8) Fuente: Laboratorio de Residuos de Plaguicidas. Instituto de Salud Pública de Chile.
10 Se detectaron 11 tipos de residuos de medicamentos de uso veterinario, los analitos detectados son: nicarbacina, flumequina, cristal violeta, acido oxolinico, acido nalidixico, verde malaquita, cloranfenicol, norfloxacino, ciprofloxacino, enrofloxacino y sarafloxacino. En nueve muestras se encontró más de un residuo, que corresponden a 7 muestras de bovino y 2 de salmón. El grupo terapeútico de las quinolonas fue detectado en un 74,4 %, cloranfenicol en un 14 %, colorantes triarylmetanos en un 9,3 % y nicarbazina en un 2,3 % de las muestras positivas. No se detectaron muestras con presencia de hormonas tales como trembolona, α-zeranol y β-zeranol, ni con presencia de verde leocomalaquita, difloxacino, danofloxacino y marbofloxaxino (Tabla N 5) Tabla N 5 Analitos detectados según origen ANALITO REGIÓN METROPOLITANA REGIÓN LIB. B. O HIGGINS TOTAL Nicarbazina Cristal violeta Flumequina Acido oxolinico Acido nalidixico Verde malaquita Cloranfenicol Norfloxacino Ciprofloxacino Enrofloxacino Saraflocaxino TOTAL Fuente: Laboratorio de Residuos de Medicamentos. Instituto de Salud Pública de Chile. El análisis del porcentaje de muestras detectadas con respecto a la especie reveló que las muestras de bovino presentaron un 56 %, seguido muestras de cerdo con un 20 %,
11 salmón con un 18 y finalmente las muestras de pollo con un 6 %. En el grafico Nº 1 se observa la distribución por especies de las muestras detectadas y no detectadas respecto al total de muestras analizadas. Este resultado es atribuible al lugar de toma de las muestras de las especies estudiadas. Los porcentajes mas altos de detecciones corresponden a las muestras de bovino y cerdo, tales muestras fueron tomadas en mataderos, donde el procesamiento y lavados son menores a los efectuados en las faenadoras donde se realizan en forma mas exhaustiva, previos al envasado y comercialización, en este ultimo lugar fueron tomadas las muestras de pollo y cerdo que tuvieron los menores porcentajes de detecciones. Figura N 1: Muestras detectadas según especie Distribución de muestras detectadas por especie detectadas no detectadas Total Total 0 no detectadas cerdo pollo salmón bovino detectadas
12 Como se dijo en párrafos anteriores se detectó la presencia de 11 analitos en las muestras, de los cuales solo 6 se encuentran reglamentados en la legislación vigente. Los medicamentos que fueron detectados y no se encuentran reglamentados son los siguientes: cristal violeta, ácido nalidixico, norfloxaxino, sarafloxacino y ciprofloxacino. Nuestra legislación tiene actualmente reglamentados 60 medicamentos de uso veterinario en diversas especies y tejidos. Cabe destacar que fue detectada la presencia de acido oxolínico en 14 muestras de bovino, cerdo y salmón, este analito posee un Límite máximo de residuos de 100 µg/ Kg en el Reglamento Sanitario de los Alimentos Decreto Supremo Nº 977/96, pero el alcance de este limite es solo para músculo con piel de peces no haciéndose extensible a otras especies ni matrices, esta situación también ocurre con flumequina. Si bien un 94,2 % de las muestras analizadas están conformes con nuestra legislación, se detectaron niveles residuales de algunos antibióticos, siendo estos niveles de vital importancia en los análisis de riesgos respecto a los posibles efectos crónicos en la salud, con especial énfasis en los grupos mas vulnerables de nuestra población.
13 CONCLUSIONES 1. Un 5,8 % de las muestras analizadas no están conforme con el Reglamento Sanitario de los Alimentos Decreto Supremo Nº 977/96 Articulo De un total de 120 muestras analizadas de tejido de bovino, porcino, pollo y salmón, el 24,2% reveló la presencia de residuos de medicamentos, 3. Se detectaron 11 tipos de residuos de medicamentos de uso veterinario, los analitos detectados son: nicarbacina, flumequina, cristal violeta, acido oxolínico, acido nalidixico, verde malaquita, cloranfenicol, norfloxacino, ciprofloxacino, enrofloxacino y sarafloxacino 4. No se detectó la presencia de hormonas en muestras de cerdo y bovino. 5. Un total de 9 muestras (7,5 %) reveló poseer más de un residuo de medicamento. 6. Las muestras detectadas de bovino fueron un 56 %, seguido muestras de cerdo con un 20 %, salmón con un 18 y finalmente las muestras de pollo con un 6 %. 7. En las muestras no conformes se detectó la presencia de compuestos de uso prohibido como cloranfenicol y verde malaquit
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