Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2014
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- Samuel Hidalgo Alcaraz
- hace 7 años
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1 EL COACTIVADOR DE CREB 3 (CRTC3) EN SANGRE: NUEVO MARCADOR ASOCIADO CON OBESIDAD Y ALTERACIONES METABOLICAS EN EDAD PEDIATRICA. Pilar Soriano Rodríguez, Anna Prats Puig, Carme Mora Maruny, Neus Bassa Camps, Paula Gassiot Cordomí, Dolors Ragolta Martí, Judit Bassols y Abel López Bermejo.
2 El CRTC3 es: INTRODUCCIÓN El coactivador del factor de transcripción CREB más abundante en adipocitos
3 INTRODUCCIÓN Los ratones con silenciamiento del gen CRTC3: Son resistentes a la obesidad inducida por dieta hipercalórica. Tienen mayor gasto energético Protegidos contra la esteatosis hepática Atenuación de la actividad de la vía de las catecolaminas. Resultado disminuir la lipólisis y la beta oxidación de ácidos grasos en el adipocito. El gen de CRTC3 es un gen obesogénico genotipo ahorrador
4 INTRODUCCIÓN Hasta el momento no se ha demostrado la presencia de la proteína CRTC3 en sangre ni su utilidad como marcador de obesidad en humanos.
5 OBJETIVOS Nuestros objetivos fueron: 1) Determinar si el CRTC3 es secretado por el tejido adiposo 2) Detectar y cuantificar la proteína en suero de niños 3) Estudiar su relación con variables metabólicas y de obesidad
6 DISEÑO Y POBLACIÓN Estudio clínico observacional en la población pediátrica de l Alt Empordà y Girona. Identificación de CRTC3 Estudio transversal Estudio longitudinal
7 IDENTIFICACIÓN DE CRTC3 12 Biopsias tejido adiposo visceral y subcutáneo abdominal 12 Extracciones de sangre venosa
8 CULTIVO TEJIDO ADIPOSO 300 mg tejido/pocillo 1 ml DMEM 48h a 37ºC en 5% CO2 Tejido adiposo Extracción de proteínas totales Medio de cultivo Extracción de proteínas totales Concentración de CRTC3 fue ajustada por las proteínas totales Lowry Proteínas totales Lactato deshidrogenasa Viabilidad
9 IDENTIFICACIÓN DE CRTC3 INMUNOBLOT ELISA
10 211 niños caucásicos prepuberales sanos 102 niños y 109 niñas 7.0 ± 0.1 años 19.4 sobrepeso y obesidad 3 años ESTUDIO TRANSVERSAL Examen clínico Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2014 Extracción de sangre venosa 115 niños caucásicos 57 niños y 58 niñas 10.0 ± 0.1 años 6% pubertad Ecografía de alta resolución ESTUDIO LONGITUDINAL
11 Resultados Identificación de CRTC3 Estudio transversal Estudio longitudinal
12 IDENTIFICACIÓN: INMUNOBLOT CRTC3 Anticuerpo policlonal kda 1) Lisado de MCF-7 2) Lisado tejido adiposo visceral 3) Lisado tejido adiposo subcutáneo 4) Medio cultivo tejido adiposo visceral 5) Medio cultivo tejido adiposo subcutáneo 6) Suero
13 CRTC3 (ng/ml) Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2014 IDENTIFICACIÓN: ELISA Tejido adiposotejido adiposotejido adiposotejido adiposo visceral subcutaneo visceral subcutaneo Biopsia Medio de cultivo Suero
14 ESTUDIO TRANSVERSAL Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2014 Características antropométricas y metabólicas de los niños incluidos en el estudio divididos por tertiles de CRTC3 (n=211) CRTC3 tertiles (ng/ml) P N Niñas (%) Edad (años) 6.7 (6.4;7.0) 6.8 (6.6;7.1) 7.1 (6.8;7.3) Valor Z-IMC (-0.39;0.01) 0.35(0.08;0.63) 0.23 (-0.02;0.49) Perímetro abdominal (cm) 53.9 (52.3;55.5) 57.0 (55.0;58.9) 57.5 (55.5;59.5) TAS (mmhg) 98 (97;101) 103 (101;106) 102 (100;104) GIMC (cm) (0.038;0.041) (0.037;0.041) (0.038;0.043) HOMA-IR 0.53 (0.39;0.68) 0.71 (0.54;0.89) 0.63 (0.53;0.73) Adiponectina APM (mg/l) 9.56 (8.56;10.55) 7.91 (7.00;8.81) 7.51 (6.55;8.47) PCRus (mg/l) 1.53 (0.84;2.21) 1.90 (1.04;2.76) 1.36 (0.85;1.87) 0.444
15 ESTUDIO TRANSVERSAL Análisis de correlación de Pearson entre la concentración de CRTC3 y las variables antropométricas y metabólicas en relación al IMC. Muestra total n= 211 Niños delgados (IMC Z score < 1; n= 167) Niños sobrepeso (IMC Z score 1; n= 44) r p r p r p Edad IMC Valor Z-IMC Masa grasa Perímetro abdominal TAS TAD GIMC HOMA-IR Adiponectina APM PCRus
16 β p R2 Muestra total (n= 211) Adiponectina de APM Niños sobrepeso y obesidad (n= 44) Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2014 ESTUDIO TRANSVERSAL Estudio multivariante. Regresión lineal múltiple Variable dependiente: CRTC3 Adiponectina de APM Valor Z-IMC
17 Cambio en las variables Antropométricas y metabólicas Transversal Longitudinal n Niñas (%) Edad (años) 6.8 (6.7;7.0) 10.3 (10.3; 10.7) Valor Z IMC 0.13 (-0.01;0.28) 0.12 (-0.10;0.0.33) Perímetro Abdominal (cm) 56.1 (55.0;57.1) 69.9 (67.7;72.1) TAS (mmhg) 101 (100;103) 103 (101;105) GIMC (cm) (0.039;0.041) (0.044;0.050) HOMA-IR 0.62 (0.53;0.73) 0.94 (0.73;1.16) Adiponectina APM (mg/l) 8.33 (7.81;8.92) (11.64;17.87) PCR us(mg/l) 1.60 (1.20;2.03) 1.56 (1.04;1.95)
18 Cambio valor z-imc Cambio adiponectina APM (mg/l) Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2014 Estudio longitudinal Se estudió el cambio del valor de Z-IMC y adiponectina de APM en los niños tras 3 años de seguimiento (n=115) respecto a los tertiles de la concentración basal de CRTC3. Análisis ANOVA de un factor * p<0.01 * * Tertiles CRTC3 Basal Tertiles CRTC3 Basal
19 Estudio longitudinal Regresión lineal múltiple del cambio del valor Z-IMC y la adiponectina de APM como variable dependiente en el estudio longitudinal (n=115) Cambio valor Z-IMC Valor Z-IMC basal Pubertad Años seguimiento CRTC3 basal β p R Cambio adiponectina de APM Adipo APM basal Pubertad Años seguimiento CRTC3 basal Sexo (niñas)
20 Conclusiones: En niños prepuberales, el CRTC3 es detectable en suero, en parte, por la secreción por el tejido adiposo. Mayores concentraciones de CRTC3 se asocian con un perfil metabólico desfavorable. Mayores concentraciones de CRTC3 predicen más ganancia de peso y menor incremento de adiponectina de APM en el seguimiento de estos pacientes.
21 Nuestros resultados sugieren que el CRTC3 detectado en suero es una nueva adipocina asociada a la obesidad infantil. Receptor β-adrenérgico Adenil Ciclasa Catecolaminas ATP AMPc SIK2 PKA CREB CRTC3-P CRTC3 RGS2 Mecanismo regulador de la vía de las catecolaminas Feedback negativo de CRTC3.
22 GRACIAS POR SU ATENCIÓN Los autores estamos agradecidos a las familias y los colaboradores que participaron en el estudio
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