DETERMINACIÓN DEL PATRÓN DE APOPTOSIS EN EL CEREBRO DE RATÓN A DIFERENTES TIEMPOS DURANTE EL PRIMER AÑO DE VIDA

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Laura Bustos Torres
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2 DETERMINACIÓN DEL PATRÓN DE APOPTOSIS EN EL CEREBRO DE RATÓN A DIFERENTES TIEMPOS DURANTE EL PRIMER AÑO DE VIDA Romero Núñez Edgar Antonio 1, Fraga López Alejandra Berenice 1, Ancer Rodríguez Jesús 1, de la Garza González Carlos 2, Ortega Martínez Marta Graciela 1, Jaramillo Rangel Gilberto 1 1) Departamento de Patología, Facultad de Medicina, UANL 2) Departamento de Embriología, Facultad de Medicina, UANL Introducción Un evento característico que ocurre con la edad, es la pérdida de neuronas en el Sistema Nervioso Central (SNC). El mecanismo de muerte celular programada o apoptosis ha sido implicado en la muerte neuronal en varias enfermedades neurodegenerativas relacionadas con la edad (1). Evidencias obtenidas en estudios con modelos experimentales y con tejido cerebral de pacientes con la enfermedad de Alzheimer, demuestran que la neurodegeneración subyacente a esta enfermedad está asociada con características morfológicas y bioquímicas de apoptosis (2). Asimismo, en la enfermedad de Parkinson, se ha propuesto que los mecanismos patogénicos involucran estrés oxidativo, exotoxicidad, inflamación, disfunción mitocondrial y proteólisis alterada. Estos procesos forman una cascada compleja de eventos interrelacionados que dan lugar a la muerte neuronal por apoptosis (3). Así, resulta evidente que la información obtenida sobre el proceso de muerte celular en el cerebro, es importante para comprender los mecanismos subyacentes a las enfermedades neurodegenerativas. Sin embargo, en trabajos previos se ha analizado la apoptosis presente en el SNC en modelos animales alterados genéticamente, evaluando edades muy tempranas, o comparando individuos en edades muy distantes entre sí (4-6). Objetivo Evaluar el patrón de presentación de apoptosis en el cerebro en el proceso de envejecimiento en un modelo murino normal. 2

3 Materiales y Métodos Se obtuvo el cerebro de ratones machos de la cepa CD1 de 2, 6 y 12 meses de edad. Para cada edad se obtuvo el cerebro de seis ratones. Los tejidos se fijaron en formalina al 10% y se incluyeron en parafina. Se obtuvieron secciones de 5 µm, se desparafinizaron con xileno y se hidrataron en una seria graduada de alcoholes, para finalmente ser incubadas en una solución tampón de fosfatos (PBS). Las secciones se trataron con proteinasa K a 20 µg/ml por 15 minutos a temperatura ambiente, y posteriormente se incubaron con peróxido de hidrógeno al 3% en PBS por 5 minutos a temperatura ambiente para inhibir la peroxidasa endógena. Los cortes en las cadenas del ADN de las células apoptóticas se identificaron utilizando el sistema comercial ApopTag Peroxidase In Situ Apoptosis Detection Kit (Chemicon International, Temecula, CA). En este sistema, los fragmentos del ADN son marcados con nucleótidos enlazados a digoxigenina, para posteriormente enlazarse a un anticuerpo anti-digoxigenina conjugado con peroxidasa. La diaminobencidina (DAB) es utilizada como el cromógeno. Como control negativo, se omitió el paso de incubación con los nucleótidos enlazados a digoxigenina. Las secciones se contratiñeron con verde metilo al 0.5%. Las secciones se observaron en un microscopio de campo claro a diferentes aumentos. Las imágenes relevantes se capturaron con una cámara digital y posteriormente se digitalizaron con un programa de manejo de imágenes en la computadora (Adobe Photoshop CS3). Resultados y Discusión Se observó apoptosis en las células cúbicas de los plexos coroideos, las células endoteliales de los vasos sanguíneos, las células ependimarias, neuronas y células de la glía. No se observó diferencia en este patrón entre las diferentes edades analizadas (Figs. 1-4). 3

4 Figura 1. Detección de apoptosis (color café) en las células cúbicas de los plexos coroideos de ratón. Aumento original: 400x. Figura 2. Detección de apoptosis (color café) en las células ependimarias del cerebro de ratón. Aumento original: 400x. 4

5 Figura 3. Detección de apoptosis (color café) en las células endoteliales de los vasos sanguíneos en el cerebro de ratón. Aumento original: 400x. Figura 4. Detección de apoptosis (color café) en neuronas y células de la glía en el cerebro de ratón. Aumento original: 400x. 5

6 Conclusiones No existe diferencia en el patrón de apoptosis en el cerebro murino entre las edades analizadas. En trabajos posteriores se evaluarán individuos de edades mayores y se analizarán diferencias numéricas de presentación de apoptosis entre ellos. Referencias 1. Krantic S, Mechawar N, Reix S, Quirion R. Molecular basis of programmed cell death involved in neurodegeneration. Trends Neurosci. 2005; 28: Culmsee C, Landshamer S. Molecular insights into mechanisms of the cell death program: role in the progression of neurodegenerative disorders. Curr Alzheimer Res. 2006; 3: Jenner P, Olanow CW. The pathogenesis of cell death in Parkinson s disease. Neurology. 2006; 66: Markham JA, Morris JR, Juraska JM. Neuron number decreases in the rat ventral, but not dorsal, medial prefrontal cortex between adolescence and adulthood. Neuroscience. 2007; 144: Zhang L, Li Q, Wolff LT, Antonio GE, Yeung DK, Zhang A, Wu Y, Yew DT. Changes of brain activity in the aged SAMP mouse. Biogerontology. 2007; 8: Linnarsson S, Willson CA, Ernfors P. Cell death in regenerating populations of neurons in BDNF mutant mice. Brain Res Mol Brain Res. 2002; 75:

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