INTRODUCCIÓN 1.1 FIBROSIS PULMONAR IDIOPÁTICA DEFINICIÓN EPIDEMIOLOGÍA PREVALENCIA E INCIDENCIA MORTALIDAD
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- Ángeles Aranda Padilla
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1 ÍNDICE 1. INTRODUCCIÓN FIBROSIS PULMONAR IDIOPÁTICA DEFINICIÓN EPIDEMIOLOGÍA PREVALENCIA E INCIDENCIA MORTALIDAD FACTORES ETIOLÓGICOS FISIOPATOLOGÍA DE FPI SISTEMA RESPIRATORIO ASPECTOS MACROSCÓPICOS DE FPI COMPLICACIONES ASOCIADAS A LA FPI (comorbilidades) ASPECTOS MICROSCÓPICOS MARCADORES MOLECULARES PAPEL DE LA RUTA METABÓLICA JAK2/STAT3 EN FPI TIROSINA QUINASAS ACTIVIDAD FUNCIONAL DE LAS JANUS QUINASAS (JAK) RUTA METABÓLICA JAK2/STAT MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO DIAGNÓSTICO POR IMÁGENES MARCADORES MOLECULARES MARCADORES GENÉTICOS APROXIMACIONES FARMACOLÓGICAS TRATAMIENTOS CONVENCIONALES NUEVAS DIANAS TERAPÉUTICAS HIPÓTESIS Y OBJETIVOS MATERIAL Y MÉTODOS MATERIAL FÁRMACOS ENSAYADOS REACTIVOS ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN MÉTODOS ESTUDIO I: EFECTO DE LA CUCURBITACINA I HYDRATE EN MODELO DE FIBROSIS PULMONAR ANIMAL... 77
2 MODELO ANIMAL PROTOCOLO EXPERIMENTAL PREPARACIÓN Y ADMINISTRACIÓN DE FÁRMACOS Y RADIOFÁRMACOS ENSAYOS DE PERFUSIÓN Y VENTILACIÓN PULMONAR ADQUISICIÓN Y RECONSTRUCCIÓN DE IMÁGENES ANÁLISIS DE IMÁGENES EXTRACCIÓN DE MUESTRAS ENSAYOS DE INFLAMACIÓN PULMONAR RECUENTO DE CÉLULAS TOTALES EN EL LBA DIFERENCIACIÓN CELULAR PROTEÍNAS TOTALES EN LBA ESTUDIO DE LA EXPRESIÓN PROTEICA MEDIANTE WESTERN BLOTT HISTOLOGÍA ESTUDIO DE LA EXPRESIÓN GÉNICA MEDIANTE PCR EN TIEMPO REAL ENSAYOS ELISA PARA IL 6 E IL 13 EN LBA Y TEJIDO PULMONAR DETERMINACIÓN DE LOS NIVELES DE PROPÉPTIDO AMINO TERMINAL INTACTO DE PROCOLÁGENO TIPO III (PIIINP) POR RADIOINMUNOANÁLISIS (RIA) ESTUDIO II: EXPRESIÓN Y DISTRIBUCIÓN DE JAK2 Y STAT3 EN TEJIDO DE PACIENTES CON FIBROSIS PULMONAR E HIPERTENSIÓN PULMONAR TEJIDO PULMONAR HUMANO ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS RESULTADOS ESTUDIO I: EFECTO DE LA CUCURBITACINA I HYDRATE EN MODELO DE FIBROSIS PULMONAR ANIMAL VALIDACIÓN DEL MODELO MURINO DE FIBROSIS PULMONAR INDUCIDA CON BLEOMICINA MODELO PREVENTIVO Efecto farmacológico de la Cucurbitacina I Hydrate 1mg/Kg/día vía intraperitoneal, en fibrosis pulmonar inducida con bleomicina en rata wistar La concentración de proteína total en homogenado pulmonar y en lavado broncoalveolar disminuye con el tratamiento de CuI 1mg/kg/día Incremento del recuento total de células en LBA y distribución de células inflamatorias en el grupo sin tratamiento. La cucurbitacina reduce los niveles de células inflamatorias Progresión de Fibrosis Pulmonar: Cuantificación de tejido fibrótico con la técnica de SPECT/CT. La Cucurbitacina reduce el área fibrótica aumentado la captación pulmonar de aire y de Tc99m frente al grupo de FPI inducido con BLM sin tratamiento
3 Histología La administración intraperitoneal de CuI 1mg/kg/día reduce la expresión proteica, expresión génica e inmunohistoquímica de Col1A, ET 1, TGF β1 y CTGF, marcadores implicados en la formación y progresión de FPI La administración intraperitoneal de CuI 1mg/kg/día inhibe la expresión de IL 6 e IL Determinación de los niveles de tropocolágeno III (PIIINP) en LBA como marcador molecular de Fibrosis Pulmonar. La CuI 1mg/kg/día inhibe los niveles de PIIINP liberados al medio extracelular MODELO CURATIVO Efecto farmacológico de la Cucurbitacina I 1 mg/kg/día vía intraperitoneal, a los 7 días de la inducción de fibrosis pulmonar con bleomicina en rata Wistar La administración de CuI 1mg/kg/día a los 7 días de inducción de FPI reduce la concentración de proteína total en homogenado pulmonar y en lavado broncoalveolar El modelo curativo desciende el número de células inflamatorias liberadas al medio extracelular La cucurbitacina I hydrate reduce el área fibrótica aumentado la captación pulmonar de aire y de Tc99m frente al grupo de FPI en el modelo curativo La cucurbitacina mejora el ratio de ventilación/perfusión pulmonar en el modelo de fibrosis pulmonar inducida con bleomicina Histología I. La administración intraperitoneal de CuI 1mg/kg/día reduce de áreas fibróticas, el remodelado vascular y la hipertrofia del ventrículo derecho II. El tratamiento farmacológico con CuI 1mg/kg/día reduce los depósitos de colágeno y el valor de Ashcroft del modelo curativo La administración intraperitoneal de CuI 1mg/kg/día en el modelo curativo reduce la expresión proteica, expresión génica de COL1A, ET 1, CTGF y TGF β1, marcadores implicados en la formación y progresión de FPI La expresión proteica e inmunohistoquímica de P JAK2 y P STAT3, posibles marcadores implicados en la formación y progresión de FPI, son inhibidos mediante la administración intraperitoneal de CuI 1mg/kg/día En el modelo curativo la sobreexpresión de IL 6 e IL 13 es inhibida mediante la administración intraperitoneal de CuI 1mg/kg/día Determinación de los niveles de tropocolágeno III (PIIINP) en LBA como marcador molecular de Fibrosis Pulmonar. La CuI 1mg/kg/día inhibe los niveles de PIIINP liberados al medio extracelular RESULTADOS ESTUDIO II: EXPRESIÓN Y DISTRIBUCIÓN DE JAK2 Y STAT3 EN TEJIDO DE PACIENTES CON FIBROSIS PULMONAR E HIPERTENSIÓN PULMONAR DISCUSIÓN:
4 6. CONCLUSIONES REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ÍNDICE DE ABREVIATURAS Anexo... Error! Marcador no definido. 9.1 DICTAMENES: COMISIÓN DE INVESTIGACIÓN Y COMITÉ ÉTICO DE INVESTIGACIÓN CLÍNICA CEIC... Error! Marcador no definido.
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