Revista Iberoamericana de Tecnología Postcosecha ISSN: Asociación Iberoamericana de Tecnología Postcosecha, S.C.

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1 Revista Iberoamericana de Tecnología Postcosecha ISSN: Asociación Iberoamericana de Tecnología Postcosecha, S.C. México Suárez- Quiroz, Mirna L.; Mendoza- Bautista, Irma; Monroy- Rivera, J. Alberto; de la Cruz- Medina, Javier; Angulo- Guerrero, Ofelia; González- Ríos, Oscar AISLAMIENTO, IDENTIFICACIÓN Y SENSIBILIDAD A ANTIFÚNGICOS DE HONGOS FITOPATÓGENOS DE PAPAYA CV. MARADOL (Carica papaya L.) Revista Iberoamericana de Tecnología Postcosecha, vol. 14, núm. 2, 2013, pp Asociación Iberoamericana de Tecnología Postcosecha, S.C. Hermosillo, México Disponible en: Cómo citar el artículo Número completo Más información del artículo Página de la revista en redalyc.org Sistema de Información Científica Red de Revistas Científicas de América Latina, el Caribe, España y Portugal Proyecto académico sin fines de lucro, desarrollado bajo la iniciativa de acceso abierto

2 AISLAMIENTO, IDENTIFICACIÓN Y SENSIBILIDAD A ANTIFÚNGICOS DE HONGOS FITOPATÓGENOS DE PAPAYA CV. MARADOL (Carica papaya L.) Mirna L. Suárez- Quiroz*, Irma Mendoza- Bautista, J. Alberto Monroy- Rivera, Javier de la Cruz- Medina, Ofelia Angulo- Guerrero, Oscar González- Ríos. Unidad de Investigación y Desarrollo en Alimentos, Instituto Tecnológico de Veracruz, Av. M. A. de Quevedo # 2779, C.P , Veracruz, Ver. México. Teléfono: ext. 210 fax 201, Veracruz, Ver. México. E- mail: mirnasq@itver.edu.mx *Autor para correspondencia (mirnasq@itver.edu.mx) Palabras clave: Carica papaya, hongos fitopatógenos, antifúngicos. RESUMEN La producción de papaya (Carica papaya L.) tiene gran importancia económica, México ocupa el quinto lugar como productor mundial y el primer lugar como país exportador al producir más de 638 mil toneladas, el estado de Veracruz destacó por su producción alrededor de 194 mil toneladas en Este fruto es sensible al manejo postcosecha requiriendo cuidados especiales para evitar daños mecánicos; por frío; por calor y el ataque por hongos. Las pérdidas postcosecha de papaya en Veracruz oscilan entre % dependiendo de la época y de los tratamientos aplicados en el campo, las enfermedades fúngicas son una de las principales causas, siendo la aplicación de productos químicos el único método utilizado contra estas enfermedades. El objetivo de este trabajo fue aislar, identificar y estudiar in vitro la sensibilidad a los antifúngicos de los hongos fitopatógenos que atacan durante la postcosecha a la papaya maradol en el estado de Veracruz. Se aislaron e identificaron doce cepas fitopatógenas: Fusarium crookwellense, Rhizopus stolonifer, Stachybotrys chartarum, Alternaria alternata, Fusarium oxysporum, Chrysonilia sitophila, Colletotrichum gloeosporioides, Aspergillus fumigatus, Mucor hiemalis, Penicillum chrysogenum, Mucor circinelloides, Geotrichum candidum y una antagonista: Trichoderma harzianum. Las cepas fueron probadas contra ocho fungicidas y dos combinaciones de los mismos. Las pruebas in vitro mostraron que las cepas aisladas tienen resistencia a los antifúngicos: Captan (2000 mg L - 1 ), Benomilo (1250 mg L - 1 ), Tiabendazol (900 mg L - 1 ), Metalaxil (346.5 mg L - 1 ) y Metalaxil- Mancozeb (3500 mg L - 1 ). Las concentraciones de los fungicidas Mancozeb (4500 mg L - 1 ), Oxicloruro de Cu (4500 mg L - 1 ) y Oxicloruro de Cu- Mancozeb (3250 mg L - 1 ) que presentan efecto inhibitorio fueron superiores en un 50, 12.5 y 30 % respectivamente, a las concentraciones recomendadas por los fabricantes, lo cual conlleva al riesgo de desarrollar una resistencia secundaria y un riesgo a la salud. ISOLATION, IDENTIFICATION AND ANTIFUNGAL SUSCEPTIBILITY OF PHYTOPATHOGENIC FUNGI IN PAPAYA CV. MARADOL (Carica papaya L.) Key words: Carica papaya, phytopathogenic fungi, fungicides. ABSTRACT The production of papaya (Carica papaya L.) in Mexico has great economic importance. In 2009, Mexico was the fifth largest world producer and the first national exporter, producing more than tons; of these about 194 thousand tons were produced in Veracruz, México. This fruit is sensitive to postharvest handling and they require special care to avoid losses with a high economic cost. The main fruit damage is caused by mechanical damage, temperature damage (cold and heat), and especially damage cause by fungi attack. In Veracruz, post- harvest handling causes 10 to 50 % of papaya losses, depending on the time of the year and the treatments applied in the field, where fungal diseases are the main contributors. In fact, fungal attack losses, estimated by the producers of the region of Cotaxtla, Veracruz, affects about 80 % of the total production in which the use of chemicals is the only method used against these diseases. The aim of this study was to isolate, to Rev. Iber. Tecnología Postcosecha Vol 14(2):

3 identify and to study the in vitro antifungal susceptibility of pathogenic fungi that attack Papaya Maradol (Carica papaya L.) after harvesting in the region of Cotaxtla, Ver. Fungi isolates, eight antifungal agents and two combinations of both (fungi isolates and antifungal agents) were tested against pathogenic fungi. Thirteen fungi strains were identified and isolated while twelve were identified as phytopathogenic: Fusarium crookwellense, Rhizopus stolonifer, Stachybotrys chartarum, Alternaria alternata, Fusarium oxysporum, Chrysonilia sitophila, Colletotrichum gloeosporioides, Aspergillus fumigatus, Mucor hiemalis, Penicillium chrysogenum, Mucor circinelloides, Geotrichum candidum and an antagonist: Trichoderma harzianum. In vitro tests showed that the isolates are resistant to the following antifungal agents: Captan (2000 mg L - 1 ), benomyl (1250 mg L - 1 ), Thiabendazole (900 mg L - 1 ), Metalaxyl (346.5 mg L - 1 ) and Metalaxyl- Mancozeb ( 3500 mg L - 1 ). Mancozeb tested at 4500 mg L - 1, Cu oxychloride (4500 mg L - 1 ) and Cu oxychloride- Mancozeb (3250 mg L - 1 ) presented higher inhibitory effects on the strains by 50, 12.5 and 30 %, respectively, compared to the concentrations recommended by manufacturers. INTRODUCCION La papaya (C. papaya L.) es un fruto originario de zonas tropicales de México y Centroamérica, tiene gran importancia económica por su alto valor nutritivo, propiedades sensoriales y medicinales, características que han contribuido a incrementar su cultivo. México ocupa el quinto lugar como productor de papaya a nivel mundial con una producción de 634,000 ton (FAO, 2011). El estado de Veracruz aporta alrededor del 50% de la producción nacional siendo el municipio de Cotaxtla el primer productor con 49 mil toneladas por año (SAGARPA, 2011). La papaya es una fruta susceptible al manejo postcosecha por lo que requiere cuidados para evitar pérdidas y mermas de un alto costo económico. Las enfermedades postcosecha pueden iniciarse durante la ontogenia del fruto o después de la cosecha con la maduración fisiológica. Después de cosechados, los frutos pasan por una serie de transformaciones endógenas resultantes del metabolismo celular. El aumento de los azucares solubles, de agua libre y de las pectinas es acompañado por la reducción de alguno componentes fenólicos y protopectínicos, que tornan los frutos más sensibles al daño mecánico y al ataque de diversos microorganismos, principalmente de hongos causantes de pudrición. (Silva et al., 2002). Las enfermedades fúngicas constituyen la principal causa de pérdida de papaya durante la comercialización debido a la falta de controles fitosanitarios durante el cultivo y a un manejo inadecuado de almacenamiento (Flórez et al., 2009). La naturaleza y frecuencia de estas enfermedades depende de un completo conocimiento del agente patógeno, la planta hospedera, el medio ambiente y sus interacciones (Ventura et al., 2004). Las enfermedades fúngicas de mayor frecuencia reportadas en este fruto son la antracnosis causada por C. gloeosporioides (Hernández- Albiter et al., 2005), las pudriciones pedunculares causadas por Lasiodiplodia theobromae, y Phoma caricae- papayae y la pudrición acuosa causada por R. stolonifer. Aunque la infección por los hongos se puede producir en el estado inmaduro, permanece latente y se desarrolla hasta que la fruta madura. Existen estrategias de control para evitar el daño causado por hongos: el manejo cuidadoso para minimizar el daño mecánico y evitar vías de penetración del inóculo fúngico; mantener la temperatura y humedad relativa óptimas durante las operaciones de postcosecha; la inmersión en agua caliente a 49 C y la aplicación de fungicidas. El uso de fungicidas para el control de enfermedades que afectan los frutos de 116 Rev. Iber. Tecnología Postcosecha Vol 14(2):

4 papaya ha sido ineficiente debido a que ciertas especies han presentado resistencia a los principios activos utilizados en el campo y durante la postcosecha. Esto puede ser consecuencia del uso excesivo de estos compuestos o por utilizar dosis inadecuadas (Saborío et al., 2000). Se han encontrado altos niveles de resistencia a benzimidazoles por cepas de C. gloeosporioides asociados al cultivo de la papaya en diversas zonas de Costa Rica (Astúa- Monge et al., 1994). En México, se ha observado poca eficiencia del benomilo en frutos de papaya (Zavala- León et al., 2005), lo que crea la necesidad de buscar otras opciones de combate químico. Debido a lo anterior, el uso de altas dosis de fungicidas o el uso de la combinación de dos o más productos químicos es una práctica común entre los productores de este fruto. Lo anterior provoca que los fitopatógenos desarrollen resistencia secundaria o adquirida como consecuencia de una exposición prolongada a los antifúngicos y un riesgo para la salud humana. El propósito del presente trabajo fue aislar e identificar los hongos fitopatógenos que atacan a la Papaya (C. papaya L.) cv. Maradol durante la postcosecha y determinar la susceptibilidad de las cepas a los fungicidas usados en la región para controlar las enfermedades fúngicas y determinar las concentraciones óptimas para su aplicación. MATERIALES Y METODOS Los frutos de papaya (Carica papaya) cultivar Maradol en estado de madurez fisiológica fueron recolectados de plantaciones del municipio de Cotaxtla, Veracruz, México. Los frutos presentaban daño fúngico como pudriciones basales, pudriciones blandas, moho superficial y otras lesiones. Aislamiento de hongos filamentos: A partir de frutos con síntomas de daño fúngico se realizó un corte triangular de aproximadamente 1-2 mm, y se realizo siembra directa en medio PDA acidificado. Los cultivos fueron incubados a C por 5 días y reaislados hasta obtener un cultivo monospórico en el mismo medio. Identificación de las cepas aisladas: La identificación se realizó en medios PDA (Bioxon), Agar Czapec (Dibico S.A. de C.V.) y CYA (Agar Czapek y extracto de levadura). Se determinaron las características culturales macroscópicas y morfológicas por microcultivo y la observación directa en preparaciones teñidas con azul de algodón lactofenol utilizando un microscopio Motic BA200 provisto de un procesador de imágenes Motic Images Plus 2.0 ML (Motic Co. LTD, China). Para la identificación de cada cepa se utilizaron las claves propuestas por Samson et al. (2004) Pruebas de sensibilidad a los antifúngicos y determinación de la CMI (Concentración Mínima Inhibitoria) Preparación de las placas. El método de microdilución en caldo para hongos filamentosos fue realizado de acuerdo al protocolo M38- P de la NCCLS (NCCLS, 2002) (Espinel- Ingroff y Cantón, 2007). Los antifúngicos mas utilizados por los productores de papaya de la región fueron seleccionados en el presente estudio. Se estudiaron tres fungicidas de contacto: Mancozeb (Manganese ethylene bisdithiocarbonate + Zinc); Oxicloruro de Cobre y Captan (N (trichloromethylthio) Cyclohix- 4 ere- 1,2 dicarbozimide), que actúan directamente sobre la superficie del fruto evitando la germinación y penetración del patógeno y tres fungicidas sistémicos:tiabendazole (1H- Benzimidazole, 2- (4- thiazolyl)- ); Metalaxil (Alanine,N- (2,6- dimethylphenyl)- N- (methoxyacetyl) metil- ester) y Benomilo (Methyl1- (butyl carbamamoyl)- 2- benzimidazole carbaonate) que actúan al ser absorbidos a través del follaje y las raíces, todos fueron adquiridos en Sigma- Aldrich Co. Se prepararon soluciones stock de cada producto utilizando DMS (Dimetil Sulfoxido) (Sigma- Aldrich Co.) y agua Rev. Iber. Tecnología Postcosecha Vol 14(2):

5 destilada estéril. Se realizó una dilución 100 veces mayor a la recomendada y posteriormente se diluyó 10 veces superior a la concentración final deseada en caldo RPMI 1640 con glutamina y sin bicarbonato sódico (Gibco, ICN, Oxoid, Sigma), ajustado a ph 7± 0.1 con MOPS (ácido morfolino propano sulfónico) M (ICN, Sigma). Finalmente, se realizó una dilución con caldo RPMI hasta obtener una concentración dos veces mayor que la concentración final deseada. Con 100 µl de esta solución se llenó una placa estéril con 96 pocillos. La columna 12 se llenó con 100 µl de RPMI (control de crecimiento) y la columna 1 con 200 µl de caldo RPMI (control de esterilidad). La concentración final de cada antifúngico se mantuvo en los rangos siguientes: Mancozeb (1500 a 4500 mg L - 1 ); Oxicloruro de cobre ( mg L - 1 ); Tiabendazol ( mg L - 1 ); Metalaxil ( mg L - 1 ); Captan ( mg L - 1 ); Benomilo ( mg L - 1 ); también fueron probadas la combinación de dos antifúngicos Mancozeb/Metalaxil ( mg L - 1 ) y Oxicloruro de Cobre/Mancoceb ( mg L - 1 ). Inoculación de las placas. A partir de cultivos en medio PDA de siete días de incubación, se preparó una suspensión conidial utilizando agua peptonada adicionada con Tween 80 al 0.04 %. La suspensión fue ajustada a una concentración de 1-5*10 6 conidias/ml. El conteo se realizó en una cámara de recuento Neubauer (BLAUBRAND, Alemania). Las placas fueron inoculadas con 100 µl de la suspensión e incubadas sin agitación a 25 C hasta que se observó crecimiento en el control. Las lecturas se realizaron dependiendo de la especie de hongo, (Rhizopus spp) entre h y otras especies como Aspergillus y Fusarium entre h. Las lecturas se realizaron en un lector de microplacas (Biorad, Benchmark USA) a 655 nm. Todos los ensayos fueron realizados por duplicado. RESULTADOS Y DISCUSIÓN A partir de la siembra directa de frutos de papaya que presentaron daño fúngico como pudriciones basales, pudriciones blandas, moho superficial y otras lesiones se aislaron 26 cepas que fueron identificadas en 13 especies de hongos; 10 fitopatógenos: F. crookwellense, R. stolonifer, S. chartarum, A. alternata, F. oxysporum, C. sitophila, C. gloeosporioides, A. fumigatus, M. hiemalis, P. chrysogenum, M. circinelloides y un antagonista: Trichoderma harzianum.; además fue aislada una levadura filamentosa: G. candidum. Las lesiones provocadas sobre frutos de papaya por cada una de las especies identificadas se describen a continuación: A. alternata produce en los frutos pequeñas lesiones superficiales circulares de color negro, que no causaron un daño significativo a la pulpa; las lesiones aparecieron por todo el fruto, sin alcanzar a cubrirlo. Este hongo es de gran importancia para la papaya debido a que la refrigeración aumenta el desarrollo de la enfermedad (Durán Quirós y Mora, 1989). A. fumigatus comenzó su crecimiento desde el pedúnculo hasta rodearlo al inicio se observó un color blanquecino que con el tiempo se tornó de un verde oscuro. A. fumigatus ha sido asociado a la contaminación de semillas oleaginosas, granos de café, cacao arroz y cereales. Pocos reportes han sido publicados de su aislamiento en frutos, sin embargo por su carácter termofílico los productos tropicales almacenados son susceptibles de contaminación por este microorganismo (Pitt y Hocking, 2009). Con C. sitophila se observaron pudriciones pardas en forma de anillos concéntricos los cuales al transcurrir el tiempo se tornaron de color negro, este hongo presenta importancia en algunas frutas de cascara blanda como el melocotón debido a que ataca con facilidad y ocasiona pérdidas en el rendimiento, sin embargo no existen datos que indiquen que este hongo sea de importancia para el fruto de papaya. La antracnosis causada por C. gloeosporoides 118 Rev. Iber. Tecnología Postcosecha Vol 14(2):

6 (Penz.) es uno de los principales problemas fitosanitario que afectan a la papaya Maradol, lo cual ocasiona que su valor en el mercado disminuya. Los frutos presentaron manchas acuosas, hundidas y de color marrón oscuro en la superficie, afectando la calidad externa así como la interna del fruto, Páez (2003) describe que si la afectación es severa puede observarse daño en el mesocarpio como una continuación del daño inicial en el epicarpio. Los síntomas en la papaya por F. crookwellense y F. oxysporum iniciaron con una pequeña lesión de tamaño variable, sin forma, muy acuosa y suave, que con el tiempo abarcó la mayor parte del fruto. Estos fitopatógenos son el causantes de grandes pérdidas económicas en plántulas de papaya (González Cárdenas et al., 2005), algunos autores coinciden en afirmar que junto con la antracnosis las pudriciones causadas por Fusarium son las de mayor incidencia en frutos de papaya (Albornett y Sanabria, 1994). G. candidum es una levadura filamentosa que ha sido muy poco reportada en papaya sin embargo fue aislada en este trabajo (Fatima et al., 2009), este fitopatógeno provocó en los frutos lesiones blandas, de color blanco, las cuales no tenían un tamaño uniforme, al transcurrir los días las lesiones comenzaron a gotear; esta situación es de gran importancia debido a que con un solo fruto que esté enfermo se puede llegar a contaminar una parte importante de la producción. Los frutos dañados por M. circinelloides presentaron lesiones blandas y acuosas; en las zonas que presentaron rupturas se observó crecimiento del hongo, el cual en un corto tiempo se cubrieron de esporas negras mientras que con M. hiemalis los frutos afectados se caracterizaron por manchas de color marrón las cuales se desprendían con facilidad de las zonas sanas. Las pudriciones en los frutos por P. chrysogenum inicialmente presentaron manchas blandas, aguanosas, ligeramente decoloradas y de tamaño variable, aparecieron en toda la superficie de este, posteriormente se hundieron. Después un moho blanco comenzó a crecer sobre la superficie del fruto cerca de la parte central de la mancha. R. stolonifer en frutos de papaya produce una frecuente y severa enfermedad postcosecha, el hongo invade a los frutos a través de heridas y de manera rápida pudre los frutos. Cuando el hongo rompe la cutícula de la papaya llegando hasta las semillas, el fruto enfermo se cubre con un micelio aéreo de color blanco grisáceo de textura áspera, este hongo es uno de los de mayor incidencia en frutos de papaya, un solo fruto infectado es capaz de contaminar toda la producción, de ahí su gran importancia (Velázquez- del Valle et al., 2008). Sensibilidad in vitro de las cepas a los antifúngicos utilizados por los productores de papaya de la región de Cotaxtla, Ver. Los seis fungicidas fueron probados a diferentes concentraciones en contra de las 13 cepas aisladas. La Figura No. 1 presenta el efecto del Benomilo (a) y del Oxicloruro de Cobre (b). Para el Benomilo se recomienda una concentración de 750 mg L - 1, sin embargo a esta concentración solo se inhibió el crecimiento de A. alternata y de M. hiemalis. A la máxima concentración probada (1250 mg L - 1 ), no se inhibió el crecimiento de C. gloeosporioides, R. stolonifer, M. circinelloides y F. crookwellense lo que nos indica que este antifúngico es ineficiente para controlar la antracnosis del fruto y las pudriciones suave y acuosa causadas por estas especies y que son consideradas las enfermedades postcosecha de mayor incidencia en frutos de papaya. Zavala- León et al. (2005) evaluaron la eficacia in vitro del Benomilo en la germinación conidial y el crecimiento micelial del C. gloeosporioides encontrando que los conidios pudieron germinar, a pesar de que los benzimidazoles actúan en el proceso de mitosis y meiosis. En contraste, el Oxicloruro de Cobre Figura 1 (b) presentó un efecto inhibitorio sobre F. crookwellense, A. alternata, C. sitophila, C. gloeosporioides, A. Rev. Iber. Tecnología Postcosecha Vol 14(2):

7 fumigatus, P. chrysogenum, M. circinelloides y G. candidum a la máxima concentración permitida de 3500 mg L - 1. Este compuesto actúa formando complejos que penetran a la célula fúngica y reacciona con las proteínas formando quelatos y desalojando metales esenciales e hidrógeno (Pemán et al., 2009). La diferencia en eficacia de ambos compuestos puede ser debida a su modo de acción ya que mientras el benomilo es un fungicida sistémico, el Oxicloruro de Cobre lo es de contacto, siendo más efectivo para controlar los fitopatógenos que atacan el fruto. Figura 1 Sensibilidad in vitro de las cepas aisladas a los antifúngicos (a) Benomilo y (b) Oxicloruro de Cu utilizados por los productores de la región de Cotaxtla, Ver. La Tabla 1 presenta la susceptibilidad a los antifúngicos probados en contra de las principales cepas que atacan a la papaya en la Región de Cotaxtla, Ver., en la tabla se indica sí el fitopatógeno es resistente (R) o sensible (S) a las dosis máximas recomendadas. Así mismo se determinó su Concentración Miníma Inhibitoria (CMI), considerando ésta como la concentración más baja de antifúngico que produjo una inhibición en el crecimiento del 100% del crecimiento del hongo (Espinel- Ingroff y Cantón, 2007). La concentración recomendada de aplicación del Captan es de 1,250 mg/l, a esta concentración presentó un efecto de inhibición sobre F. crookwellense, R. stolonifer y M. Hiemalis. Este compuesto no fue capaz de inhibir el crecimiento de M. circinelloides a la máxima concentración probada de 2000 mg L - 1. El Tiabendazol no fue capaz de inhibir el crecimiento de cepas de gran incidencia en frutos de papaya como el F. crookwellense, F. oxysporum, C. gloeosporioides, M. hiemalis y M. circinelloides en la concentración recomendada de 600 mg L - 1. La CMI requerida para inactivar estos fitopatógenos está por arriba de las dosis recomendadas, incluso no fue posible determinarla debido a que estos presentaron resistencia a la máxima concentración probada de 900 mg L - 1. Astúa- Monge et al. (1994) reportaron que existe una marcada reducción en la sensibilidad al Tiabendazol. Asimismo, la resistencia cruzada a los benzimidazoles en aislamientos de C. gloeosporioides provenientes de papaya. Aular et al. (2001), encontraron que el Tiabendazol no afectó la incidencia de frutos con pudrición y el número de frutos afectados por la antracnosis en parchita maracuyá. Las pruebas realizadas con Metalaxil indican que F. crookwellense y R. stolonifer son sensibles al antifúngico a 231 mg L - 1. Sin embargo, no fue capaz de inhibir a C. gloeosporioides a la mayor concentración probada de mg L- 1, contrariamente a lo publicado por Gwary y Asala (2006), quienes reportaron que este producto presentó una eficacia del 70-80% en la inhibición del género Colletotrichum. En lo referente al Mancozeb a una concentración de 3,000 mg L - 1 se inhibió el crecimiento de R. stolonifer, S. chartarum, F. 120 Rev. Iber. Tecnología Postcosecha Vol 14(2):

8 oxysporum, M. hiemalis, P. chrysogenum, G. candidum y T. harzianum, sin embargo, todavía se presentó crecimiento de cepas importantes como A. alternata, C. gloeosporioides, M. circinelloides. Al aumentar la concentración a 3,750 mg L - 1 se inhibió a A. alternata no obstante C. gloeosporioides persistía. Se determinó que la CMI para inhibir este importante fitopatógeno fue de 4,500 mg L - 1, siendo esta mayor a la reportada por González et al. (2006), que determinaron una inhibición del 100% in vitro en C. gloeosporioides con concentraciones de 1600 y 3200 mg L - 1 y Solano y Arauz (1995) reportaron que a una concentración de 4000 mg L - 1 encontraron reducción en la incidencia y severidad de la antracnosis. Tabla 1. Susceptibilidad a los antifúngicos y CMI (Concentración Mínima Inhibitoria) de cepas de hongos filamentosos aisladas de papaya cv. Maradol (Carica papaya L.). También fueron probadas las combinaciones de dos fungicidas tal y como se presenta en los productos comerciales, como es el caso del Metalaxil y el Mancozeb esperando un efecto sinérgico sobre el control del ataque fúngico. La Tabla 1 y la Figura 2, muestran que el Mancozeb usado individualmente tiene mayor eficacia sobre el control de C. gloeosporioides, A. alternata, F. oxysporum, P. chrysogenum, S. chartarum que al combinarse con el Metalaxil, el uso de la mezcla solo tuvo un efecto inhibitorio sobre M. circinelloides, lo que indica que esta especie es sensible al Metalaxil. El uso de la mezcla Oxicloruro de cobre + Mancozeb, inhibió el crecimiento de R. stolonifer, S. chartarum, A. alternata, C. sitophila, C. gloeosporioides, A. fumigatus, M. hiemalis, M. circinelloides, G. candidum y T. harzianum a una concentración de 1750 mg L - 1, controlando el hongo fitopatógeno de mayor importancia para la papaya, C. gloeosporioides, sin embargo, se observó crecimiento de F. crookwellense, F. oxysporum, y P. chrysogenum. El uso de fungicidas para evitar el ataque por hongos no ha sido eficaz en algunos casos debido a que ciertas especies han desarrollado resistencia secundaria a los principales productos fungicidas utilizados en el campo y durante la postcosecha (Saborío et al., 2000). Dicha resistencia puede deberse al uso inadecuado de las concentraciones de los fungicidas en el momento de aplicarse a los frutos. Los resultados obtenidos en el presente trabajo podrían ayudar a los productores de Papaya Maradol a determinar la mejor concentración y el más efectivo antifúngico o mezcla de antifúngicos para ser usados y evitar el abuso de los mismos, sin embargo es Rev. Iber. Tecnología Postcosecha Vol 14(2):

9 recomendable que el uso de estos productos sea más eficiente con la aplicación de Buenas Prácticas de Agrícolas, así como evaluar el uso de otros tratamientos físicos como el ozono que permitan implementar un tratamiento eficaz para su control (Ong et al., 2012). Existen varias alternativas de tratamiento de frutos de papaya con demostrada eficacia como el uso de quitosanos para evitar la actracnosis debido a que este compuesto disminuye la velocidad de respiración y evita la pérdida de agua del fruto con la consecuente mejorar la vida media de este fruto (Bautista- Baños et al., 2006), (Hewajulige et al., 2008). Otros estudios reportan que el tratamiento con quitosano induce la actividad enzimática de peroxidasas, quitinasas y β 1,3 glucanasas, enzimas relacinadas con la actividad de defensa de frutos (Ali et al., 2012) Figura 2 Sensibilidad in vitro de las cepas aisladas a la combinación de antifúngicos (a) Mancozeb y Metalaxil y (b) Oxicloruro de Cu y Mancozeb utilizados por los productores de la región de Cotaxtla, Ver. CONCLUSIONES El ataque por hongos fitopatógenos es un problema que produce grandes pérdidas económicas y de disponibilidad de papaya en la Región de Cotaxtla,Ver. El presente estudio permitió poner de manifiesto nuevas especies fitopatógenas y la presencia de resistencia secundaria en cepas asociadas a este fruto; esto probablemente es consecuencia del uso no controlado e inadecuado de antifúngicos químicos. En las pruebas in vitro las cepas de hongos aislados de la región de Cotaxtla, Ver., presentaron resistencia a los fungicidas: Captan, Tiabendazol, Benomilo, Metalaxil y Metalaxil- Mancozeb. Las concentraciones de los productos que presentaron efecto de inhibición fueron superiores a las dosis recomendadas para su uso en campo. Los resultados del presente estudio permitirán seleccionar las estrategias de control postcosecha más adecuado en donde deben incluirse el uso de tratamientos solos o combinados con métodos físicos o biológicos que no pongan en riesgo la seguridad del medio ambiente y la salud humana. LITERATURA CITADA Albornett, Y. J. and A. Sanabria (1994). Diagnóstico de las enfermedades fúngicas en frutos de lechosa (Carica papaya) y melón (Cucumis melo) para exportación. Rev. Fac. Agron 20: Ali, A., M. T. M. Mohamed and Y. Siddiqui (2012). Control of Anthracnose by Chitosan through Stimulation of Defence- Related Enzymes in Eksotika II Papaya (Carica papaya L.) Fruit. Journal of Biology and Life Science 3(1). Astúa- Monge, G. A., L. F. Arauz- Cavallini and G. Umaña- Rojas (1994). Sensibilidad reducida al tiabendazole en Colletotrichum gloeosporioides aislado de papaya. 18 (1): Aular, J., C. Ruggiero and J. Durigan (2001). Efecto de la aplicación de thiabendazole y del tratamiento térmico sobre la 122 Rev. Iber. Tecnología Postcosecha Vol 14(2):

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