norma española UNE-EN 1189 Calidad del agua Determinación del fósforo Método espectrométrico con molibdato amónico Abril 1997 TÍTULO CORRESPONDENCIA

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1 norma española UNE-EN 1189 Abril 1997 TÍTULO Calidad del agua Determinación del fósforo Método espectrométrico con molibdato amónico Water quality. Determination of phosphorus. Ammonium molybdate spectrometric method. Qualité de l'eau. Dosage du phosphore. Dosage spectrométrique à l'aide du molybdate d'ammonium. CORRESPONDENCIA Esta norma es la versión oficial, en español, de la Norma Europea EN 1189 de octubre OBSERVACIONES ANTECEDENTES Esta norma ha sido elaborada por el comité técnico AEN/CTN 77 Medio Ambiente cuya Secretaría desempeña AENOR. Editada e impresa por AENOR Depósito legal: M 12880:1997 AENOR 1997 Reproducción prohibida LAS OBSERVACIONES A ESTE DOCUMENTO HAN DE DIRIGIRSE A: C Génova, 6 Teléfono (91) MADRID-España Fax (91) Páginas Grupo 17

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3 NORMA EUROPEA EUROPEAN STANDARD NORME EUROPÉENNE EUROPÄISCHE NORM EN 1189 Octubre 1996 ICS Descriptores: Ensayo de aguas, agua, calidad, análisis químico, determinación del contenido, fósforo, fosfato, método espectrofotométrico, molibdato amónico. Versión en español Calidad del agua Determinación del fósforo Método espectrométrico con molibdato amónico Water quality. Determination of phosphorus. Ammonium molybdate spectrometric method. Qualité de l'eau. Dosage du phosphore. Dosage spectrométrique à l'aide du molybdate d'ammonium. Wasserbeschaffenheit. Bestimmung von Phosphor. Photometrisches Verfahren mittels Ammoniummolybdat. Esta Norma Europea ha sido aprobada por CEN el Los miembros de CEN están sometidos al Reglamento Interior de CEN/CENELEC que define las condiciones dentro de las cuales debe adoptarse, sin modificación, la Norma Europea como norma nacional. Las correspondientes listas actualizadas y las referencias bibliográficas relativas a estas normas nacionales, pueden obtenerse en la Secretaría Central de CEN, o a través de sus miembros. Esta Norma Europea existe en tres versiones oficiales (alemán, francés e inglés). Una versión en otra lengua realizada bajo la responsabilidad de un miembro de CEN en su idioma nacional, y notificada a la Secretaría Central, tiene el mismo rango que aquéllas. Los miembros de CEN son los organismos nacionales de normalización de los países siguientes: Alemania, Austria, Bélgica, Dinamarca, España, Finlandia, Francia, Grecia, Irlanda, Islandia, Italia, Luxemburgo, Noruega, Países Bajos, Portugal, Reino Unido, Suecia y Suiza. CEN COMITÉ EUROPEO DE NORMALIZACIÓN European Committee for Standardization Comité Européen de Normalisation Europäisches Komitee für Normung SECRETARÍA CENTRAL: Rue de Stassart, 36 B-1050 Bruxelles 1996 Derechos de reproducción reservados a los Miembros de CEN.

4 EN 1189: ÍNDICE ANTECEDENTES... 6 INTRODUCCIÓN OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN FUNDAMENTO DETERMINACIÓN DE ORTOFOSFATO Reactivos Aparatos Muestreo y Muestras Procedimiento Expresión de resultados Informe del ensayo Página 4 DETERMINACIÓN DE ORTOFOSFATO TRAS EXTRACCIÓN CON DISOLVENTE Reactivos Muestreo y muestras Procedimiento Expresión de los resultados Informe del ensayo DETERMINACIÓN DE FOSFATO HIDROLIZABLE Y ORTOFOSFATO Reactivos Aparatos Muestras y Muestreo Procedimiento Expresión de resultados Informe del ensayo DETERMINACIÓN DEL FÓSFORO TOTAL TRAS OXIDACIÓN CON PEROXODISULFATO Reactivos Aparatos Muestreo y muestras Procedimiento operatorio Expresión de resultados Informe del ensayo... 18

5 - 5 - EN 1189:1996 Página 7 DETERMINACIÓN DEL FÓSFORO TOTAL TRAS DIGESTIÓN CON ÁCIDO NÍTRICO - ÁCIDO SULFÚRICO Reactivos Aparatos Muestreo y muestras Procedimiento operatorio Expresión de resultados Informe del ensayo ANEXO A (Informativo) DATOS DE PRECISIÓN ANEXO B (Informativo) INTERFERENCIAS ANEXO C (Informativo) BIBLIOGRAFÍA... 25

6 EN 1189: ANTECEDENTES Esta Norma Europea está basada en la Norma ISO :1986. Esta Norma Europea ha sido elaborada por el Comité Técnico CEN/TC 230 "Análisis del agua" cuya secretaría desempeña DIN. Esta Norma Europea deberá tener rango de Norma Nacional bien por publicación de un texto idéntico, bien por ratificación, lo más tarde en abril de 1997 y todas las normas nacionales en contradicción deberán retirarse, lo más tarde en abril de Conforme a las reglas comunes de CEN/CENELEC, los países siguientes deben adoptar esta Norma Europea: Alemania, Austria, Bélgica, Dinamarca, España, Finlandia, Francia, Grecia, Irlanda, Islandia, Italia, Luxemburgo, Noruega, Países Bajos, Portugal, Reino Unido, Suecia y Suiza. Los anexos denominados "informativos" se dan sólo a título informativo. En esta norma, los anexos A, B y C son informativos. INTRODUCCIÓN Esta Norma Europea especifica la determinación de diferentes formas de fósforo presentes en las aguas subterráneas, superficiales y residuales, en varios rangos de concentración, en estado disuelto y no disuelto.

7 - 7 - EN 1189: OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN Esta Norma Europea especifica métodos para la determinación de: ortofosfato (véase el capítulo 3); ortofosfato tras extracción con disolvente (véase el capítulo 4); fosfato hidrolizable más ortofosfato (véase el capítulo 5); fósforo soluble total y fósforo total previa descomposición (véanse los capítulos 6 y 7). Los métodos son aplicables a toda clase de aguas incluidos los efluentes y el agua de mar. Se puede determinar el contenido en fósforo de estas muestras, sin dilución, cuando su concentración esté comprendida entre 0,005 mg/l a 0,8 mg/l. El procedimiento de extracción con disolvente permite determinar concentraciones inferiores de fósforo con un límite de detección de, aproximadamente, 0,000 5 mg/l. Véanse en el anexo B algunas interferencias conocidas. Puede haber otras y se recomienda comprobar si existe alguna y, en tal caso, tomar medidas para su eliminación. 2 FUNDAMENTO Reacción de los iones ortofosfato con una solución ácida que contiene iones molibdato y antimonio para formar un complejo antimonil-fosfomolibdato. Reducción del complejo con ácido ascórbico para formar un complejo azul de molibdeno, intensamente coloreado. Medida de la absorbancia de este complejo para determinar la concentración de ortofosfato presente. Los polifosfatos y ciertos compuestos organofosforados se determinan tras su transformación, por hidrólisis con ácido sulfúrico, en ortofosfatos que reaccionan con el molibdato. Muchos compuestos organofosforados se transforman en ortofosfato por mineralización con persulfato. Cuando es preciso un tratamiento más enérgico, se utiliza la mineralización con mezcla de ácidos nítrico y sulfúrico. 3 DETERMINACIÓN DE ORTOFOSFATO 3.1 Reactivos Generalidades. Durante el análisis utilizar sólo reactivos de calidad analítica reconocida y agua destilada cuyo contenido en fosfato sea despreciable comparado con la concentración mínima a determinar en las muestras. Para contenidos muy bajos de fosfato se recomienda utilizar agua bidestilada en un aparato que sea totalmente de vidrio Ácido sulfúrico, solución, c (H 2 SO 4 ) = 9 mol/l. Se introducen 500 ml ± 5 ml de agua en un vaso de precipitados de 2 l. Se añaden cuidadosamente y con continua agitación y refrigeración 500 ml ± 5 ml de ácido sulfúrico, ρ = 1,84 g/ml. Se mezcla bien y se deja enfriar la solución a temperatura ambiente Ácido sulfúrico, solución, c (H 2 SO 4 ) = 4,5 mol/l. Se introducen 500 ml ± 5 ml de agua en un vaso de precipitados de 2 l. Se añaden cuidadosamente y con continua agitación y refrigeración 500 ml ± 5 ml de solución de ácido sulfúrico (véase 3.1.2). Se mezcla bien y se deja enfriar la solución a temperatura ambiente.

8 EN 1189: Ácido sulfúrico, solución, c (H 2 SO 4 ) = 2 mol/l. Se introducen 300 ml ± 3 ml de agua en un vaso de precipitados de 1 l. Se añaden cuidadosamente y con continua agitación y refrigeración 110 ml ± 2 ml de solución de ácido sulfúrico (véase 3.1.2). Se diluye a 500 ml ± 2 ml con agua y se mezcla bien Hidróxido de sodio, solución c(naoh) = 2 mol/l. Se disuelven 80 g ± 1 g de lentejas de hidróxido de sodio en agua, se deja enfriar y se diluye a 1 l con agua Ácido ascórbico, solución, ρ = 100 g/l. Se disuelven 10 g ± 0,5 g de ácido ascórbico (C 6 H 8 O 6 ) en 100 ml ± 5 ml de agua. NOTA La solución es estable durante dos semanas si se conserva en nevera, en un recipiente de vidrio de color topacio y puede utilizarse mientras se mantenga incolora Molibdato ácido, solución I. Se disuelven 13 g ± 0,5 g de heptamolibdato amónico tetrahidrato [(NH 4 ) 6 Mo - 7O 24 4 H 2 O] en 100 ml ± 5 ml de agua. Se disuelven 0,35 g ± 0,05 g de tartrato de antimonio y potasio hemihidratado [K(SbO)C 4 H 4 O 6 1/2H 2 O] en 100 ml ± 5 ml de agua. Se añade la solución de molibdato a 300 ml ± 5 ml de ácido sulfúrico (véase 3.1.2) con agitación constante. Se añade la solución de tartrato y se mezcla bien. NOTA El reactivo es estable al menos durante 2 meses si se conserva en un recipiente de vidrio de color topacio Molibdato ácido, solución II. Se añaden 230 ml ± 0,5 ml de ácido sulfúrico (véase 3.1.2) a 70 ml ± 5 ml de agua, se deja enfriar. Se disuelven 13 g ± 0,5 g de heptamolibdato amónico tetrahidratado [(NH 4 ) 6 Mo 7 O 24 4H 2 O] en 100 ml ± 5 ml de agua. Se añade a la solución de ácido y se mezcla bien. Se disuelven 0,35 g ± 0,05 g de tartrato de antimonio y potasio hemihidratado [K(SbO)C 4 H 4 O 6 1/2H 2 O] en 100 ml ± 5 ml de agua. Se añade a la solución de molibdato ácido y se mezcla bien. Este reactivo se utiliza cuando la muestra se ha acidificado con ácido sulfúrico (véase 3.1.3) (véanse los capítulos 5, 6 y 7). NOTA El reactivo es estable al menos durante 2 meses si se conserva en un recipiente de vidrio de color topacio Reactivo de compensación del color y la turbiedad. Se mezclan dos partes de ácido sulfúrico (véase 3.1.3), en volumen, con una parte, en volumen, de ácido ascórbico (véase 3.1.6). NOTA El reactivo es estable durante varias semanas si se conserva en nevera en un recipiente de vidrio de color topacio Tiosulfato sódico pentahidratado, solución, ρ = 12,0 g/l. Se disuelven 1,20 g ± 0,05 g de tiosulfato sódico pentahidratado (Na 2 S 2 O 3 5H 2 O) en 100 ml ± 5 ml de agua. Se añaden 0,05 g ± 0,005 g de carbonato sódico anhidro (Na 2 CO 3 ) como conservante. NOTA El reactivo es estable durante al menos 4 semanas si se conserva en un recipiente de vidrio de color topacio Ortofosfato, solución patrón madre, ρ = 50 mg/l. Se secan unos cuantos gramos de dihidrógenofosfato de potasio a 105 º C hasta peso constante. Se disuelven 0,2197 g ± 0,0002 g de KH 2 PO 4 en aproximadamente 800 ml ± 10 ml de agua en un matraz aforado de ml. Se añaden 10 ml ± 0,5 ml de ácido sulfúrico (véase 3.1.2) y enrasar con agua. NOTA La solución es estable durante al menos 3 meses si se conserva en un recipiente de vidrio bien tapado. Se recomienda refrigerar a una temperatura de aproximadamente 4 º C.

9 - 9 - EN 1189: Ortofosfato, solución patrón ρ = 2 mg/l. Se pipetean 20 ml ± 0,01 ml de solución patrón madre de ortofosfato (véase ) en un matraz aforado de 500 ml. Se enrasa con agua y se mezcla bien. Preparar esta solución el mismo día de su utilización. NOTA 1 ml de esta solución patrón contiene 2 µg de P Ácido clorhídrico, ρ(hcl) = 1,12 g/ml Ácido clorhídrico, c(hcl) = 2 mol/l. Se añaden 200 ml ± 10 ml de ácido clorhídrico (véase ) a 500 ml ± 10 ml de agua. Se mezcla y se deja enfriar a temperatura ambiente. Se enrasa con agua a ml. 3.2 Aparatos Espectrómetro de tipo, "prisma" o "red de difracción" o bien de filtros, capaz de alojar cubetas ópticas de espesor comprendido entre 10 mm y 50 mm. El espectrómetro elegido debe ser adecuado para medir la absorbancia en las regiones del visible e infrarrojo próximo del espectro. La longitud de onda más sensible es 880 nm, pero si se puede admitir cierta pérdida de sensibilidad, se puede medir la absorbancia a 700 nm. NOTA El límite de detección del método es más bajo si se dispone de un espectrómetro capaz de alojar cubetas ópticas de 100 mm Dispositivo de filtración adecuado para filtros de membrana de tamaño de poro de 0,45 µm Preparación del material de vidrio. Antes de su uso, debe lavarse todo el material de vidrio con ácido clorhídrico (véase ) a una temperatura aproximada de 40 º C a 50 º C y aclararse bien con agua. No se deben utilizar detergentes que contengan fosfatos. Es preferible que el material de vidrio se utilice solamente para la determinación de fósforo. Después de su uso se debe limpiar tal y como se indicó anteriormente y guardar tapado justo hasta el momento de su empleo. El material de vidrio utilizado para la etapa de desarrollo del color debe ser aclarado, de vez en cuando, con solución de hidróxido de sodio (véase 3.1.5) para eliminar los depósitos del complejo coloreado que tiene tendencia a adherirse en forma de película fina en las paredes del material de vidrio. 3.3 Muestreo y muestras Muestreo. Se recogen las muestras de laboratorio en recipientes de polietileno, policloruro de vinilo o preferentemente en recipientes de vidrio. En caso de bajas concentraciones de fosfato, se utilizan recipientes de vidrio Preparación de la muestra para el ensayo. La muestra de laboratorio (véase 3.3.1) debe filtrarse dentro de las 4 h siguientes al muestreo. Si en dicho intervalo la muestra se ha conservado refrigerada, se deja que alcance la temperatura ambiente antes de proceder a la filtración. Se lava un filtro de membrana de tamaño nominal de poro 0,45 µm para eliminar los fosfatos haciendo pasar a través de él 200 ml de agua, previamente calentada a una temperatura entre 30 º C y 40 º C. Se descartan las aguas de lavado. Se filtra la muestra y se rechazan los primeros 10 ml de filtrado. Se recoge el resto en un recipiente de vidrio limpio y seco para la determinación inmediata de ortofosfato (véase 3.4.4). Si el ph del filtrado no está comprendido en el rango de 3 a 10, se ajusta con solución de hidróxido de sodio (véase 3.1.5) o con ácido sulfúrico (véase 3.1.4). NOTAS 1 El tiempo de filtración no debería exceder de 10 minutos. Si es necesario se debería utilizar un filtro de diámetro mayor. 2 Es conveniente controlar el contenido en fósforo de la membrana filtrante o lavar ésta conforme al procedimiento descrito. Se comercializan membranas filtrantes libres de fósforo que deberían lavarse tal y como se ha descrito.

10 EN 1189: Procedimiento Porción de ensayo. Se toma una porción de ensayo no superior a 40 ml. Este volumen máximo es adecuado para la determinación de concentraciones de ortofosfato de hasta ρ P = 0,8 mg/l, cuando se utilizan cubetas ópticas de 10 mm de espesor. Deben tomarse porciones de ensayo más pequeñas para adaptarse a concentraciones mayores de fosfatos, tal y como se indica en la tabla 1. De la misma manera, se pueden determinar concentraciones de fosfato más bajas midiendo la absorbancia en una cubeta óptica de 40 mm o 50 mm de espesor. Concentración de ortofosfato mg/l de 0,0 a 0,8 de 0,0 a 1,6 de 0,0 a 3,2 de 0,0 a 6,4 Tabla 1 Volúmenes y concentraciones de muestra Volumen de porción de ensayo ml 40,0 20,0 10,0 5,0 Espesor de la cubeta óptica mm de 0,0 a 0,2 40,0 40 ó Ensayo en blanco. Se lleva a cabo un ensayo en blanco en paralelo con la determinación, siguiendo el mismo procedimiento y utilizando las mismas cantidades de todos los reactivos que en la determinación, pero utilizando el volumen correspondiente de agua en lugar de la porción de ensayo Calibrado Preparación de las soluciones de calibrado. Se transfieren con ayuda de una pipeta volumétrica los volúmenes apropiados, por ejemplo 1,0 ml; 2,0 ml; 3,0 ml; 4,0 ml; 5,0 ml; 6,0 ml; 7,0 ml; 8,0 ml; 9,0 ml y 10,0 ml de la solución patrón de ortofosfato (véase ) a distintos matraces volumétricos de 50 ml. Se diluye con agua hasta aproximadamente 40 ml. Estas soluciones tienen concentraciones de ortofosfato de ρ P = 0,05 mg/l a 0,5 mg/l. Se procede en consecuencia para los otros rangos de concentraciones de fosfatos que se indican en la tabla Desarrollo del color. Se añade a cada matraz, agitando, 1 ml de ácido ascórbico (véase 3.1.6) y a continuación 2 ml de solución de molibdato ácido I (véase 3.1.7). Se enrasa con agua y se mezcla bien Medidas espectrométricas. Se mide la absorbancia de cada solución en el espectrómetro (véase 3.2.1) después de transcurridos entre 10 min y 30 min a 880 nm, o a 700 nm si es admisible una pérdida de sensibilidad. Se pone agua en la cubeta de referencia Construcción de la curva de calibrado. Se traza una gráfica de absorbancia de las soluciones de calibrado (eje de ordenadas) en función de su concentración de fósforo, expresada en miligramos de fósforo por litro, (eje de abscisas). La relación entre la absorbancia y la concentración es lineal. Se determina la pendiente de la curva. Se controla periódicamente la linealidad de la curva, especialmente cuando se utilicen nuevos lotes de reactivos químicos. Se analiza una solución de calibrado preparada independientemente con cada serie de muestras Determinación Desarrollo del color. Se introduce con ayuda de una pipeta el volumen de porción de ensayo seleccionado en un matraz volumétrico de 50 ml y, si es necesario, se diluye a 40 ml ± 2 ml con agua. Se procede tal y como se indica en

11 EN 1189:1996 Si la muestra de ensayo contiene arseniato, conviene reducirlo a arsenito con tiosulfato en medio ácido. La reducción a arsenito es cuantitativa para concentraciones de arseniato de hasta, al menos 2 mg/l de As, tal y como se describe posteriormente. Se transfiere con ayuda de una pipeta volumétrica hasta un máximo de 40 ml de la muestra de ensayo a un matraz volumétrico de 50 ml. Se añade 1 ml de solución de ácido ascórbico (véase 3.1.6) y 1 ml de solución de tiosulfato (véase ). Se mezcla y se deja que se produzca la reducción durante 10 min ± 1 min. Se añaden 2 ml de la solución de molibdato ácido II (véase 3.1.8). Se enrasa con agua. Se mezcla bien. Se procede tal y como se describe en NOTA 1 Si la muestra de ensayo está turbia y/o tiene color, se recomienda utilizar el procedimiento que se describe a continuación. Se añaden 3 ml del reactivo de compensación de la turbiedad y del color (véase 3.1.9) al volumen de porción de ensayo seleccionado. Se diluye a 50 ml y se mide la absorbancia. Se resta la absorbancia de esta solución del valor medido conforme a NOTA 2 La absorbancia medida a 700 nm representa, aproximadamente, una pérdida de sensibilidad del 30 % con respecto a la obtenida a 880 nm Medidas espectrométricas. Véase Si, debido a la interferencia del arseniato, la porción de ensayo se ha tratado con tiosulfato, conviene realizar las medidas dentro de los 10 min siguientes; si no es así puede producirse decoloración. 3.5 Expresión de resultados Cálculo. Se calcula la concentración de ortofosfato, ρ P, expresada en miligramos por litro, según la ecuación: donde A A 0 f V máx. V s es la absorbancia de la porción de ensayo; es la absorbancia del blanco; es la pendiente de la curva de calibrado ( ), en litros por miligramo; es el volumen de referencia de la porción de ensayo (50 ml), en mililitros; es el volumen real de porción de ensayo, en mililitros. Se expresan las concentraciones másicas de fósforo de la manera siguiente, pero nunca con más de tres cifras significativas: ρp < 0,1 mg/l ± 0,001 mg/l; 0,1 mg/l ± 0,01 mg/l ρp < 10 mg/l ± 0,01 mg/l; ρp 10 mg/l ± 0,1 mg/l Precisión. Los datos de precisión que se dan en la Tabla A.1 proceden de un ensayo interlaboratorios en el que participaron 16 laboratorios. NOTA Para las interferencias, véase el anexo B.

12 EN 1189: Informe del ensayo El informe del ensayo debe contener la siguiente información a) toda la información necesaria para la identificación completa de la muestra; b) una referencia a esta Norma Europea; c) una referencia al método utilizado y el número del capítulo; d) los resultados obtenidos y; e) todos los detalles operativos no incluidos en esta sección o considerados como opcionales, junto con cualquier circunstancia que haya podido tener influencia sobre los resultados. 4 DETERMINACIÓN DE ORTOFOSFATO TRAS EXTRACCIÓN CON DISOLVENTE Este método no es aplicable más que cuando la concentración de fosfato en la muestra es inferior a 0,01 mg/l. El método es especialmente aplicable al agua de mar. 4.1 Reactivos Se utilizan los reactivos especificados en y y además: Hexanol (C 6 H 13 OH) Etanol (C 2 H 5 OH) Ortofosfato, solución patrón, ρ = 0,5 mg/l P. Se pipetean 5,0 ml ± 0,01 ml de la solución patrón madre de ortofosfato (véase ) en un matraz volumétrico de 500 ml. Se enrasa con agua y se mezcla bien. Se prepara esta solución el mismo día de su utilización. 4.2 Muestreo y muestras Véase Procedimiento Porción de ensayo. Con ayuda de una probeta graduada, se introducen 350 ml ± 5 ml de la muestra de ensayo (véase 3.3) a un embudo de decantación de 500 ml Ensayo en blanco. Se efectua un ensayo en blanco en paralelo con la determinación, utilizando el mismo procedimiento y las mismas cantidades de todos los reactivos que se utilizan en la determinación pero sustituyendo la porción de ensayo por 350 ml de agua Calibrado Preparación de las soluciones de calibrado. Se añaden 300 ml ± 10 ml de agua a cinco embudos de decantación individuales. Con ayuda de una microbureta se añaden 1,4 ml; 2,8 ml; 4,2 ml; 5,6 ml y 7,0 ml de solución patrón de ortofosfato (véase 4.1.3) a cada embudo de decantación de 500 ml. Se diluye cada solución a 350 ml ± 10 ml con agua, se tapa y se agita para mezclar. Estas soluciones corresponden a concentraciones de ortofosfato, ρ P, de 0,002 mg/l; 0,004 mg/l; 0,006 mg/l; 0,008 mg/l y 0,01 mg/l respectivamente.

13 EN 1189: Desarrollo del color. Se añaden, a cada embudo de decantación, agitando, 7,0 ml ± 0,1 ml de solución de ácido ascórbico (véase 3.1.6) y 14,0 ml ± 0,1 ml de solución de molibdato ácido I (véase 3.1.7). Transcurridos 15 min, se añaden 40,0 ml ± 0,1 ml de 1-hexanol (véase 4.1.1) a cada embudo de decantación y se tapa. Se agita vigorosamente durante 1 min. SE deja que se separen las fases y se pipetean 30 ml ± 0,01 ml de cada uno de los extractos superiores de 1-hexanol en una serie de matraces aforados de 50 ml, bien secos. Se añaden 1,0 ml ± 0,2 ml de etanol (véase 4.1.2) a cada matraz y enrasar con 1-hexanol Medidas espectrométricas. Sse mide la absorbancia de cada una de las soluciones de 1-hexanol a 680 nm en cubetas ópticas de 40 mm a 50 mm de espesor con respecto al 1-hexanol que contendrá la cubeta de referencia Construcción de la curva de calibrado. Se construye una curva representando la absorbancia (eje de ordenadas) frente a la concentración de fósforo de las soluciones de calibrado (eje de abscisas), expresada en miligramos por litro. Se determina la pendiente de la curva. Se comprueba periódicamente la linealidad de la curva de calibración, especialmente cuando se utilicen nuevos lotes de reactivos químicos Determinación Desarrollo del color. Se tratan las porciones de ensayo (véase 4.3.1) tal y como se especifica en para las soluciones de calibrado Medidas espectrométricas. Véase Expresión de los resultados Se calcula la concentración de ortofosfato ρ P, expresada en miligramos por litro, según la ecuación: donde A es la absorbancia de la porción de ensayo; A 0 es la absorbancia del blanco; f es la pendiente de la curva de calibrado ( ), en litros por miligramo; Se expresa el resultado con una precisión de 0,0001 mg/l; expresar los valores inferiores a 0,0005 mg/l como ρ P < 0,0005 mg/l. NOTA El anexo B trata el tema de las interferencias. 4.5 Informe del ensayo El informe del ensayo debe contener la siguiente información: a) toda la información necesaria para la completa identificación de la muestra; b) una referencia a esta Norma Europea; c) una referencia al método utilizado y el número del capítulo; d) los resultados obtenidos y e) todos los detalles operativos no incluidos en esta sección o considerados como opcionales, junto con cualquier incidente que haya podido tener influencia sobre los resultados.

14 EN 1189: DETERMINACIÓN DE FOSFATO HIDROLIZABLE Y ORTOFOSFATO 5.1 Reactivos Se utilizan los reactivos especificados en 3.1.3, 3.1.6, y Aparatos Véase Muestras y Muestreo Muestreo. Véase Preparación de la muestra de ensayo. Se filtra la muestra (véase 3.3.1) tal y como se describe en y se efectua el análisis lo antes posible después del muestreo. Si la muestra se ha conservado refrigerada, se deja que alcance la temperatura ambiente antes de filtrar. Se añade 1 ml de ácido sulfúrico (véase 3.1.3) por cada 100 ml de muestra de ensayo filtrada para alcanzar un ph aproximadamente de 1. Se mantiene el filtrado en la oscuridad y con refrigeración hasta el momento del análisis. 5.4 Procedimiento Porción de ensayo. Según la concentración de fosfato esperada en la muestra de ensayo (véase la Tabla 1), se transfieren, con ayuda de una pipeta volumétrica, hasta un máximo de 40 ml de muestra de ensayo (véase 5.3.2) a un matraz Erlenmeyer. Si es necesario, se diluye a 40 ml ± 2 ml con agua. Se acidifica con ácido sulfúrico (véase 3.1.3) hasta ph < 1 y se hierve suavemente durante aproximadamente 30 min. Añade, periódicamente, una cantidad suficiente de agua para que el volumen se mantenga entre 25 ml y 35 ml. Se deja enfriar; se ajusta a un ph comprendido entre 3 y 10 con solución de hidróxido sódico (véase 3.1.5) o ácido sulfúrico (véase 3.1.4) y se transfiere a un matraz volumétrico de 50 ml; se diluye con agua hasta aproximadamente 40 ml. Alternativamente, mineraliza el filtrado acidificado en un recipiente cerrado durante aproximadamente 30 min en un autoclave a una temperatura comprendida entre 115 º C y 120 º C Ensayo en blanco. Se efectua un ensayo en blanco en paralelo con la determinación utilizando el mismo procedimiento y las mismas cantidades de reactivos que en la determinación, pero usando agua acidificada en lugar de la porción de ensayo Calibrado Preparación de las soluciones de calibrado. Transfieren con ayuda de una pipeta volumétrica los volúmenes apropiados, por ejemplo, 1,0 ml; 2,0 ml; 3,0 ml; 4,0 ml; 5,0 ml; 6,0 ml; 7,0 ml; 8,0 ml; 9,0 ml y 10,0 ml de la solución patrón de ortofosfato (véase ) a matraces Erlenmeyer de 50 ml. Se diluye con agua a 40 ml ± 2 ml. Estas soluciones corresponden a concentraciones de ortofosfato comprendidas entre ρ P = 0,05 mg/l y 0,5 mg/l. Se procede en consecuencia para otros rangos de concentraciones de fosfato reflejados en la Tabla 1. Se trata cada solución según se indica en desde "Acidificar con ácido sulfúrico (véase 3.1.3) hasta ph < 1 y se hierve suavemente durante aproximadamente 30 min y se continua tal y como se indica en Desarrollo del color. Añade a cada matraz, mientras se agita, 1 ml de ácido ascórbico (véase 3.1.6) y a continuación, 2 ml de solución de molibdato ácido II (véase 3.1.8). Se enrasa con agua Medidas espectrométricas. Véase Construcción de la curva de calibrado. Véase

15 EN 1189: Determinación Desarrollo del color. Se procede según , utilizando la porción de ensayo (5.4.1) Medidas espectrométricas. Véase Expresión de resultados Cálculo. Se calcula la concentración de ortofosfato y de fosfato hidrolizable, ρ P, expresada en miligramos por litro, mediante la siguiente ecuación: donde A A 0 f V máx. V s es la absorbancia de la porción de ensayo; es la absorbancia del blanco; es la pendiente de la curva de calibrado (véase ), en litros por miligramo; es el volumen de referencia de la porción de ensayo (50 ml), en mililitros; es el volumen real de la porción de ensayo, en mililitros. Expresar las concentraciones en masa de fósforo como se indica a continuación, pero sin utilizar mas de tres cifras significativas: ρp < 0,1 mg/l ± 0,001 mg/l; 0,1 mg/l ± 0,01 mg/l ρp < 10 mg/l ± 0,01 mg/l; ρp 10 mg/l ± 0,1 mg/l Precisión. En un ensayo interlaboratorios, en el que intervinieron 15 laboratorios, se obtuvieron los valores de precisión reflejados en la tabla A.2 (véase también la Tabla A.1). NOTA Véase el anexo B para las interferencias. 5.6 Informe del ensayo El informe del ensayo debe contener la siguiente información: a) toda la información necesaria para la identificación precisa de la muestra; b) referencia a esta Norma Europea; c) referencia al método utilizado y el número del capítulo correspondiente; d) los resultados obtenidos, y e) descripción detallada de cualquier procedimiento no incluido en esta sección, o considerado como opcional, junto con cualquier circunstancia que pueda haber tenido influencia sobre los resultados.

16 EN 1189: DETERMINACIÓN DEL FÓSFORO TOTAL TRAS OXIDACIÓN CON PEROXODISULFATO 6.1 Reactivos Utilizar los reactivos especificados en 3.1.3, 3.1.6, y , y, además: Solución de peroxidisulfato de potasio. Se adicionan 5 g ± 0,1 g de peroxidisulfato de potasio (K 2 S 2 O 8 ) a 100 ml ± 5 ml de agua. Se agita hasta disolución. NOTA Si la solución sobresaturada se conserva a temperatura ambiente en un recipiente de vidrio borosilicatado color topacio y al abrigo de la luz solar directa, la solución es estable al menos durante 2 semanas. 6.2 Aparatos Véase 3.2 y, además: Matraces de vidrio borosilicatado, de 100 ml, con tapones de vidrio cerrados herméticamente con pinzas metálicas (para la determinación del fósforo total por el método del peroxidisulfato en autoclave). También son adecuados los recipientes o matraces cónicos de polipropileno (con tapón roscado). Se limpian los matraces o recipientes antes de su empleo mediante la adición de aproximadamente 50 ml de agua y 2 ml de ácido sulfúrico (véase 7.1.1). Se introducen en un autoclave durante 30 min a una temperatura de operación comprendida entre 115 º C y 120 º C, se enfrian y aclaran con agua. Se repite el procedimiento varias veces y se almacenan los recipientes cerrados. 6.3 Muestreo y muestras Muestreo. Véase Preparación de la muestra para el ensayo. Se añade 1 ml de ácido sulfúrico (véase 3.1.3) por cada 100 ml de muestra de ensayo no filtrada. Es conveniente que la muestra acidificada tenga un ph aproximadamente de 1. En caso contrario, se ajusta el ph con la solución de hidróxido de sodio (véase 3.1.5) o con ácido sulfúrico (véase 3.1.4). Se conserva la muestra refrigerada y en la oscuridad hasta proceder a su análisis. Si va a determinarse el fósforo total disuelto, se filtra la muestra de acuerdo a Procedimiento operatorio Porción de ensayo. La oxidación con peroxidisulfato no es efectiva en presencia de cantidades elevadas de materia orgánica; en este caso será necesario proceder a la oxidación con ácido sulfúrico-ácido nítrico (véase capítulo 7). Se pipetean 40 ml como máximo de la muestra de ensayo (véase 6.3.2) en un matraz cónico de 100 ml. Se diluye con agua, si fuera necesario, hasta un volumen de 40 ml ± 2 ml. Se añaden 4 ml de solución de peroxidisulfato de potasio (véase 6.1.1) y se mantiene en ebullición suave durante 30 minutos, aproximadamente. Periódicamente, se añade agua en cantidad suficiente para que el volumen se mantenga entre 25 ml y 35 ml. Se enfria, se ajusta el ph con una solución de hidróxido de sodio (véase 3.1.5) o de ácido sulfúrico (véase 3.1.4) hasta obtener un valor comprendido entre 3 y 10, y se transfiere a un matraz volumétrico de 50 ml; se diluye con agua hasta 40 ml aproximadamente. Asimismo, la mineralización es igualmente posible en un autoclave durante 30 minutos a una temperatura comprendida entre 115 º C y 120 º C.

17 EN 1189:1996 NOTAS 1 Una duración de 30 min es generalmente suficiente para mineralizar los compuestos de fósforo; algunos ácidos polifosfóricos precisan hasta 90 min para su hidrólisis. 2 El arseniato presente produce interferencias. El arsénico presente en origen será oxidado a arseniato bajo las condiciones descritas en y, por tanto, también producirá interferencias. Si se conoce o sospecha de la presencia de arsénico en la muestra, es necesario eliminar la interferencia. Se trata la solución con solución de tiosulfato de sodio (véase ) inmediatamente después de la etapa de mineralización. En el caso de agua de mar mineralizada en autoclave, se elimina el cloro libre por ebullición antes de la reducción del arseniato con tiosulfato Ensayo en blanco. Se realiza, paralelamente a la determinación, un ensayo en blanco siguiendo el mismo procedimiento operatorio y utilizando las mismas cantidades de reactivos que en la determinación pero sustituyendo la porción de ensayo por agua Calibrado Preparación de las soluciones de calibrado. Se transfiere mediante una pipeta volumétrica los volúmenes apropiados, por ejemplo 1,0 ml; 2,0 ml; 3,0 ml; 4,0 ml; 5,0 ml; 6,0 ml; 7,0 ml; 8,0 ml; 9,0 ml y 10,0 ml de la solución patrón de ortofosfato (véase ) a una serie de matraces cónicos de 100 ml y se diluye con agua hasta aproximadamente 40 ml ± 2 ml con agua. Estas soluciones presentan concentraciones de ortofosfato de ρ P = 0,05 mg/l a 0,5 mg/l. Se procede tal y como se especifica en desde " Se añaden 4 ml de solución de peroxidisulfato de potasio (véase 6.1.1) y se mantiene en ebullición suave durante 30 min aproximadamente" y se continua de acuerdo a Se procede en consecuencia para los otros rangos de concentración de fosfato que figuran en la tabla Desarrollo del color. Se añade a cada matraz de 50 ml, mientras se agita, 1 ml de ácido ascórbico (véase 3.1.6) y transcurridos 30 s, 2 ml de solución II de molibdato ácido (véase 3.1.8). Se enrasa con agua y se mezcla bien Medidas espectrométricas. Véase Construcción de la curva de calibrado. Véase Determinación Desarrollo del color. Se prepara la porción de ensayo conforme a y proceder según Medidas espectrométricas. Véase Expresión de resultados Cálculo. Se calcula la concentración de fósforo total, ρ P, expresada en miligramos por litro, mediante la siguiente ecuación: donde A es la absorbancia de la porción de ensayo; A 0 es la absorbancia del blanco; f es la pendiente de la curva de calibrado (véase ), en litros por miligramo; V máx. es el volumen de referencia de la porción de ensayo (50 ml), en mililitros; es el volumen real de la porción de ensayo, en mililitros. V s

18 EN 1189: se expresan las concentraciones en masa de fósforo como se indica a continuación, pero sin utilizar mas de tres cifras significativas: ρp < 0,1 mg/l ± 0,001 mg/l; 0,1 mg/l ± 0,01 mg/l ρp < 10 mg/l ± 0,01 mg/l; ρp 10 mg/l ± 0,1 mg/l Precisión. En un ensayo interlaboratorios, en el que intervinieron 16 laboratorios, se obtuvieron los valores de precisión reflejados en la tabla A.3. NOTA Véase el anexo B para las interferencias. 6.6 Informe del ensayo El informe del ensayo debe contener la siguiente información: a) toda la información necesaria para la identificación precisa de la muestra; b) referencia a esta Norma Europea; c) referencia al método utilizado y el número del capítulo correspondiente; d) los resultados obtenidos, y e) descripción detallada de cualquier procedimiento no incluido en este capítulo o considerado como opcional, junto con cualquier circunstancia que pueda haber tenido influencia sobre los resultados. 7 DETERMINACIÓN DEL FÓSFORO TOTAL TRAS DIGESTIÓN CON ÁCIDO NÍTRICO - ÁCIDO SUL- FÚRICO 7.1 Reactivos Se utiliza los reactivos especificados en 3.1.3, 3.1.6, 3.1.7, y además: Ácido sulfúrico, ρ (H 2 SO 4 ) = 1,84 g/ml Ácido nítrico, ρ (HNO 3 ) = 1,40 g/ml Hidróxido de sodio, c (NaOH) 8 mol/l. Se disuelven 64 g ± 1 g de lentejas de hidróxido de sodio en 150 ml ± 10 ml de agua, se enfria y se diluye con agua hasta 200 ml ± 10 ml. Se conserva en un recipiente de polietileno. 7.2 Aparatos Véase 3.2 y además: Matraces Kjeldahl, de 200 ml 7.3 Muestreo y muestras Muestreo. Véase

19 EN 1189: Preparación de la muestra para el ensayo. Se añade 1 ml de ácido sulfúrico (véase 3.1.3) por cada 100 ml de muestra de ensayo no filtrada. Es conveniente que la muestra acidificada tenga un ph aproximadamente de 1. En caso contrario, se ajusta el ph con la solución de hidróxido de sodio (véase 3.1.5) o con ácido sulfúrico (véase 3.1.4). Se conserva hasta su análisis en un lugar frío al abrigo de la luz. Si va a determinarse el fósforo total disuelto, se filtra la muestra de acuerdo a Procedimiento operatorio Porción de ensayo ATENCIÓN: Es necesario llevar a cabo este procedimiento en una vitrina de gases bien ventilada. Se pipetea un volumen de muestra de 40 ml como máximo (véase 7.3.2) en un matraz kjeldahl (véase 7.2.1). Se añaden cuidadosamente 2 ml de ácido sulfúrico (véase 7.1.1) y se agitan para su mezcla. Se añaden reguladores de ebullición y se calienta suavemente hasta la aparición de humos blancos. Después de dejar enfriar, se añaden gota a gota y con precaución 0,5 ml de ácido nítrico mientras se agita (véase 7.1.2). Se calienta hasta que cese la formación de humos marrones. Después de enfriar se continua el tratamiento, si fuera necesario, con la adición de ácido nítrico gota a gota hasta que se obtenga una solución incolora y transparente. Se enfria y añaden cuidadosamente 10 ml de agua con agitación constante y se calienta hasta la aparición de humos blancos. Después de enfriar, se añaden con precaución 20 ml de agua mientras se agita constantemente. Se añade cuidadosamente y enfriando, la solución de hidróxido de sodio (véase 7.1.3), con agitación constante, a fin de ajustar el ph de la solución entre 3 y 10. Después de enfriar, se transfiere la solución a un matraz volumétrico de 50 ml. Se aclara el matraz kjeldahl varias veces con pequeños volúmenes de agua, añadiendo las aguas de lavado al contenido del matraz. Para las interferencias por arsénico: véase Ensayo en blanco. Se realizan, paralelamente a la determinación, un ensayo en blanco siguiendo el mismo procedimiento operatorio y utilizando las mismas cantidades de todos los reactivos que en la determinación pero sustituyendo la porción de ensayo por agua Calibrado Preparación de las soluciones de calibrado. Se transfieren mediante una pipeta volumétrica los volúmenes apropiados, por ejemplo 1,0 ml; 2,0 ml; 3,0 ml; 4,0 ml; 5,0 ml; 6,0 ml; 7,0 ml; 8,0 ml; 9,0 ml y 10,0 ml de la solución patrón de ortofosfato (véase ) a una serie de matraces kjeldahl de 200 ml. Estas soluciones presentan concentraciones de ortofosfato de ρ P = 0,05 mg/l a 0,5 mg/l. Se procede tal y como se especifica en desde " Se añaden cuidadosamente 2 ml de ácido sulfúrico (véase 7.1.1) y agitan para su mezcla" y se continua de acuerdo a Se procede en consecuencia para los otros rangos de concentración de fosfato que figuran en la tabla Desarrollo del color. Se añade a cada matraz de 50 ml, mientras se agita, 1 ml de ácido ascórbico (véase 3.1.6) y transcurridos 30 s, 2 ml de solución I de molibdato ácido (véase 3.1.7). Se enrasa con agua y se mezcla bien Medidas espectrométricas. Véase Construcción de la curva de calibrado. Véase Determinación Desarrollo del color. Se procede de acuerdo a utilizando la porción de ensayo descrita en

20 EN 1189: Medidas espectrométricas. Véase Expresión de resultados Cálculo. Se calcula la concentración de fósforo total, ρ P, expresada en miligramos por litro, mediante la siguiente ecuación: donde A A 0 f V máx. V s es la absorbancia de la porción de ensayo; es la absorbancia del blanco; es la pendiente de la curva de calibrado (véase ), en litros por miligramo; es el volumen de referencia de la porción de ensayo (50 ml), en mililitros; es el volumen real de la porción de ensayo, en mililitros. Se expresan las concentraciones en masa de fósforo como se indica a continuación, pero sin utilizar mas de tres cifras significativas: ρp < 0,1 mg/l ± 0,001 mg/l; 0,1 mg/l ± 0,01 mg/l ρp < 10 mg/l ± 0,01 mg/l; ρp 10 mg/l ± 0,1 mg/l Precisión. En un ensayo interlaboratorios, en el que intervinieron 16 laboratorios, se obtuvieron los valores de precisión reflejados en la tabla A.3. NOTA Véase el anexo B para las interferencias. 7.6 Informe del ensayo El informe del ensayo debe contener la siguiente información: a) toda la información necesaria para la identificación precisa de la muestra; b) referencia a esta Norma Europea; c) referencia al método utilizado y el número del capítulo correspondiente; d) los resultados obtenidos, y e) descripción detallada de cualquier procedimiento no incluido en este capítulo o considerado como opcional, junto con cualquier circunstancia que pueda haber tenido influencia sobre los resultados.

21 EN 1189:1996 ANEXO A (Informativo) DATOS DE PRECISIÓN Los datos de precisión reflejados en la tabla A.1 se obtuvieron en un ensayo interlaboratorios en el que intervinieron 16 laboratorios, siguiendo el método especificado en el capítulo 3. Tabla A.1 Datos de precisión para el método del capítulo 3 Descripción de las muestras Ortofosfato en presencia de polifosfato Número de muestras n Media mg/l Repetibilidad Absoluta mg/l Desviación estándar Reproducibilidad Absoluta mg/l Relativa % 70 0,0576 0,0022 0, ,8 Ortofosfato 69 0,3127 0, , ,4 Ortofosfato en presencia de arseniato y de polifosfato 78 0,192 0, , ,6 Ortofosfato en presencia de arseniato 78 0,1013 0, , ,8 Los datos de precisión reflejados en la tabla A.2 se obtuvieron en un ensayo interlaboratorios en el que intervinieron 15 laboratorios, siguiendo el método especificado en el capítulo 5. Descripción de las muestras Tabla A.2 Datos de precisión para el método del capítulo 5 Número de muestras n Media mg/l Repetibilidad Absoluta mg/l Desviación estándar Reproducibilidad Absoluta mg/l Relativa % Polifosfato 79 0,1792 0, , ,8 Polifosfato en presencia de fósforo enlazado orgánicamente 65 0,1749 0, , ,8 Los datos de precisión reflejados en la Tabla A.3 se obtuvieron en un ensayo interlaboratorios en el que intervinieron 16 laboratorios. Se han seguido los métodos de oxidación con peroxodisulfato y de digestión con ácido sulfúrico-ácido nítrico, sin observarse diferencias significativas para las muestras analizadas.

22 EN 1189: Tabla A.3 Datos de precisión para el método de los capítulos 6 y 7 Descripción de las muestras Fósforo enlazado orgánicamente y sulfonato de indigo Fósforo enlazado orgánicamente y floroglucina Número de muestras n Media mg/l Repetibilidad Absoluta mg/l Desviación estándar Reproducibilidad Absoluta mg/l Relativa % 70 0,0687 0, , ,0 58 0,4381 0, ,0369 9,0

23 EN 1189:1996 ANEXO B (Informativo) INTERFERENCIAS B.1 Silicato Concentraciones de silicato de hasta 5 mg/l de Si no interfieren. Sin embargo, concentraciones más elevadas producen un incremento en la absorbancia. Después de un tiempo de reacción de 30 min, se obtienen los valores reflejados en la tabla B.1. Tabla B.1 Influencia de los iones silicato en el resultado del análisis Concentración de silicato, expresada en Si mg/l Concentración equivalente de fosfato expresada en P mg/l 0,005 0,015 0,025 B.2 Arseniato El arseniato produce una coloración similar a la producida por el ortofosfato. Esta interferencia puede eliminarse por reducción del arseniato a arseniato con tiosulfato de sodio (véase y ). B.3 Sulfuro de hidrógeno El sulfuro de hidrógeno es tolerable en concentraciones de hasta 2 mg/l. Concentraciones más elevadas pueden reducirse a un nivel aceptable haciendo pasar nitrógeno gas a través de la muestra acidificada (acidificación según se indica en 5.4.1). B.4 Fluoruro Son tolerables concentraciones de fluoruro de hasta 70 mg/l. Las concentraciones superiores a 200 mg/l inhiben totalmente el desarrollo del color. B.5 Metales de transición B.5.1 El hierro influye en la intensidad del color, pero el efecto de una concentración de 10 mg/l Fe es inferior al 5%. El incremento en la coloración provocado por el vanadato es lineal y tiene un valor aproximado de un 5% para una concentración de 10 mg/l de vanadio. B.5.2 El cromo (III) y el cromo (VI), en concentraciones de hasta 10 mg/l no interfieren, pero una concentración de, aproximadamente, 50 mg/l de Cr aumenta la absorbancia en un 5%, aproximadamente. B.5.3 El cobre en concentraciones de hasta 10 mg/l no interfiere.

24 EN 1189: B.6 Agua de mar Las variaciones en la salinidad tienen una influencia despreciable en la intensidad del color. B.7 Nitrito Si la concentración de nitrito supera los 3,29 mg/l, puede producirse decoloración. Un ligero exceso de ácido sulfámico descompone eficazmente los nitritos; 100 mg de ácido son suficientes para tratar una concentración de nitritos de 32,9 mg/l.

25 EN 1189:1996 ANEXO C (Informativo) BIBLIOGRAFÍA [1] Schouwenberg, J. C. and Walings, I.; Anal. Chem. Acta 37, 1967: [2] Koroleff, F., Determination of phosphorus. In: Methods on Seawater Analysis. Weinheim, Verlag Chemie GmbH, 1977, and in the 2nd edition, 1983.

26 Dirección C Génova, 6 Teléfono (91) Fax (91) MADRID-España