11 Número de publicación: Int. Cl. 7 : A61K 38/ Agente: Lehmann Novo, María Isabel

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1 19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 Número de publicación: Int. Cl. 7 : A61K 38/18 A61K 47/26 12 TRADUCCIÓN DE PATENTE EUROPEA T3 86 Número de solicitud europea: Fecha de presentación : Número de publicación de la solicitud: Fecha de publicación de la solicitud: Título: Composición liofilizada de MP2 humana de factor morfogenético óseo. Prioridad: JP Titular/es: Biopharm Gesellschaft zur biotechnologischen Entwicklung von Pharmaka mbh Czernyring, Heidelberg, DE 4 Fecha de publicación de la mención BOPI: Inventor/es: Inagaki, Mitsuko y Ichikawa, Hideki 4 Fecha de la publicación del folleto de la patente: Agente: Lehmann Novo, María Isabel ES T3 Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, Madrid

2 DESCRIPCIÓN Composición liofilizada de MP2 humana de factor morfogenético óseo. Campo de la invención La presente invención se refiere a una composición liofilizada de MP2 humana de factor morfogenético óseo, y a un procedimiento de preparación de la misma. Más específicamente, esta invención se refiere a una composición liofilizada que contiene MP2 humana de factor morfogenético óseo y manitol, y a un procedimiento para la preparación de la misma. Antecedentes de la invención El ADNc de MP2 humana de factor morfogenético óseo se aisló por primera vez en 1994 como un factor relacionado con la osteogénesis, clasificado como una superfamilia de TGF-β (Biochem. Biophy. Res. Comm., Vol. 4, nº 2, 1994). Entonces, una tecnología de ingeniería genética avanzada ha hecho posible preparar MP2 humana de factor morfogenético óseo sin menoscabar su actividad morfogenética ósea (documento WO96/3321). La MP2 humana de factor morfogenético óseo se almacena en estado liofilizado. Sin embargo, tiene como inconveniente que se produce una reducción del volumen (contracción) durante el almacenamiento, y se produce la cohesión de los polvos en el momento de la reconstitución. Con vistas a superar los problemas descritos anteriormente, se usan aminoácidos, sacáridos y alcoholes polihidroxilados para BMP-2, que es una proteína clasificada según la misma superfamilia TGF-β y que tiene propiedades muy cercanas a la MP2 humana de factor morfogenético óseo (documento JP-A nº HEI = US ). El documento EP describe un sistema de suministro de TGF-β biodegradable, para la regeneración ósea. Tal sistema contiene TGF-β estabilizado en una composición mediante un tampón de ácido orgánico, al que se le han añadido componentes adicionales. El documento EP-A-0971 describe una preparación de anticuerpo monoclonal humano estabilizada. El documento US describe una composición estabilizada de superóxido dismutasa (SOD), que contiene, como aditivos, ciclodextrina y un azúcar o un alcohol de azúcar. Por lo tanto, se intentó la aplicación de aditivos, conocidos de la técnica anterior, a la MP2 humana de factor morfogenético óseo, pero no se pudieron superar los problemas anteriores. Descrito específicamente, se observó cohesión en el momento de la reconstitución incluso si se añadió un aminoácido neutro o básico, tal como alanina, valina o lisina, a la MP2 humana de factor morfogenético óseo en una cantidad de 0, hasta 2,%, antes de la liofilización. Cuando se añadió un sacárido, tal como sacarosa o dextrano, en una cantidad de 0, hasta 1%, seguido de la liofilización, se observó desarrollo del color hasta verde amarillento pálido y una connotación del producto liofilizado. Cuando se añadió un alcohol polihidroxilado, tal como sorbitol, en una cantidad de 0, hasta 1%, seguido de la liofilización, la MP2 humana de factor morfogenético óseo se disolvió en el período de la liofilización, lo que hizo imposible preparar un producto liofilizado. Descripción de la invención Se ha realizado una intensa investigación con vistas a superar los problemas descritos anteriormente. Como resultado, se ha encontrado que cuando se añade manitol a MP2 humana de factor morfogenético óseo, seguido de la liofilizaición, no se observa ni la coloración ni la contracción durante el almacenamiento del producto liofilizado, y no se produce cohesión en el momento de la reconstitución, conduciendo a la realización de la presente invención. Por lo tanto, la presente invención proporciona una composición liofilizada de MP2 humana de factor morfogenético óseo, que contiene MP2 humana de factor morfogenético óseo y manitol. Como MP2 humana de factor morfogenético óseo, se usa preferiblemente, en la presente invención, MP2 humana de factor morfogenético óseo (que se puede denominar en lo sucesivo rhmp2 ) que se ha preparado mediante tecnología de ingeniería genérica descrita en el documento WO96/3321. Como manitol, se usa preferiblemente el prescrito como D-manitol en la Farmacopea Japonesa. La MP2 humana de factor morfogenético óseo y el manitol se mezclan preferiblemente en una relación en peso de 1:-0. La composición según la presente invención se puede preparar liofilizando una disolución de mezcla acuosa de MP2 humana de factor morfogenético óseo y manitol mediante un método convencional. Descrito específicamente, la composición de la presente invención está disponible añadiendo una cantidad predeterminada de manitol a una disolución acuosa de MP2 humana de factor morfogenético óseo purificada, mezclándolos, filtrando la disolución de mezcla acuosa resultante, rellenando un vial estéril con el filtrado, y llevando a cabo la liofilización. La composición de la presente invención se administra a un paciente en una cantidad eficaz para el tratamiento terapéutico, después de ser disuelta en agua destilada para inyección o en ácido débil (alrededor de ph 3), por ejemplo, una disolución de ácido clorhídrico o un tampón de ácido cítrico, cuando se use. La cantidad preferida de manitol incorporado en la composición de la presente invención se determinó mediante un ensayo de estabilidad. El ensayo de estabilidad se realizó según el método descrito en la instrucción para el procedimiento de operación estándar preparado basándose en la Farmacopea Japonesa XIII, en el que se observaron o se 2

3 midieron propiedades tales como el aspecto y la claridad de la disolución, la electroforesis y el contenido de agua al comienzo del ensayo y 3 meses más tarde, y la formación ósea ectópica después de 6 meses. 1 Como resultado, no se observaron cambios en las propiedades tales como el aspecto y la claridad de la disolución, al comienzo del ensayo y 3 meses más tarde. A partir de los resultados de la medida de la electroforesis y del contenido de agua, la preparación que contiene manitol, en la relación en peso descrita anteriormente, fue estable tanto al comienzo del ensayo como 3 meses más tarde. Se afirma que el contenido de agua preferido de un producto liofilizado es generalmente 2% o menor. A partir de los hallazgos anteriores, se juzgó que se prefiere como producto farmacéutico una composición de MP2 humana de factor morfogenético óseo que contiene manitol en una cantidad de hasta 0 mg, deseablemente mg, por 1 mg de MP2 humana de factor morfogenético óseo. Además, se midió la formación ósea ectópica de cada una de las composiciones liofilizadas de MP2 humana de factor morfogenético óseo, las cuales contienen, 2 y 0 mg de manitol, respectivamente, después de almacenarlas durante 6 meses. Como resultado, se observó formación ósea ectópica a partir de cualquier composición, independientemente de la temperatura de almacenamiento o de la cantidad de manitol. Basándose en los resultados de ensayo descritos anteriormente, se ha confirmado que la adición de manitol a MP2 humana de factor morfogenético óseo, antes de la liofilización, no tiene los efectos adversos sobre la MP2 humana de factor morfogenético óseo, y que la composición resultante permanece estable durante un período de tiempo prolongado. Mejor modo de llevar a cabo la invención 2 La presente invención se describirá en lo sucesivo de forma más específica mediante los siguientes ejemplos. Ejemplo 1 Preparación de una composición de rhmp2 3 A 1 mg/ml de una disolución acuosa de rhmp2 purificada, que se ha obtenido mediante el procedimiento de preparación descrito en el documento WO96/3321, se añadió D-manitol de la Farmacopea Japonesa, en una cantidad de, 2 y 0 mg, respectivamente, y se mezclaron. Después de que la mezcla resultante se filtró a través de un filtro de membrana de 0,22 µm, se llenaron viales de forma estéril con porciones de 1 ml del filtrado así obtenido. Se liofilizaron, con lo que se preparó una composición de la presente invención en forma de un producto farmacéutico. Ejemplo 2 Ensayo de estabilidad para la composición de rhmp Se rellenó una botella de vial (hermética al aire, transparente) con la composición liofilizada de rhmp2 obtenida en el Ejemplo 1, y se almacenó a 2-8ºC, 2ºC y ºC, respectivamente. Se evaluó la estabilidad basándose en los siguientes criterios, después de un almacenamiento de tres meses. Los criterios para la evaluación fueron los siguientes: Propiedades (Aspecto): La composición que permaneció en forma de una torta blanca y que no estaba coloreada se juzgó que no cambió. (Claridad de la disolución): Una disolución que tiene la composición disuelta en 1 ml de agua destilada para inyección se juzgó que no cambió cuando fue incolora, transparente y estaba libre de cohesión. (Electroforesis): Se calculó la pureza de una banda principal a partir de un porcentaje de área, después de introducir una foto mediante un escáner de película que adopta la transmisión usando una película roja, y después hallar el % de la densidad óptica integrada (IOD), de cada banda. (Contenido de agua): El contenido de agua de la composición se midió mediante un medidor de la microhumedad. Como resultado, con respecto a las propiedades, la composición de la presente invención permaneció sin cambio en el aspecto y en la claridad de la disolución, mientras que se observó cohesión en un producto liofilizado de rhmp2 solo. Como resultado de la electroforesis, cada composición mostró buena estabilidad (%). En la Tabla 1 se muestran los resultados de la medida del contenido de agua (%), tabla la cual muestra que no hay un gran cambio en el contenido de agua (%) entre las composiciones. La Tabla 1 muestra que, comparado con el producto compuesto solamente de rhmp2, el contenido de agua de cada una de las composiciones según la presente invención es menor en el momento de la preparación o después del almacenamiento y, por lo tanto, no se produce fácilmente la contracción. 3

4 TABLA 1 3 meses más tarde Composición Inicial 2-8ºC 2ºC ºC rhmp2 sola 9,7% 9,2% 7,6% 7,8% + Manitol, mg 1,6% 1,6% 1,4% 1,2% + Manitol, 2 mg 0,9% 0,7% 0,6% 0,% + Manitol, 0 mg 0,6% 0,% 0,4% 0,4% 1 2 Ejemplo 3 Formación ósea ectópica de rhmp2 Un vial (1 mg/vial), que contiene la composición de rhmp2 obtenida en el Ejemplo 1, se almacenó a 4ºC y a 2ºC durante 6 meses, respectivamente, y después se añadió al vial 1 ml de agua destilada para inyección, con lo que se preparó una disolución para administración. La disolución así preparada se administró intramuscularmente a un ratón ICR (adquirido de Nippon Crea Co., Ltd.), en una cantidad de µg/ µl. Dos semanas más tarde, se observó la presencia o ausencia de formación ósea ectópica mediante fotografía con rayos X blandos (n = 2). Los resultados se muestran en la Tabla 2. TABLA 2 Composición 4ºC 2ºC 3 rhmp2 sola Se observó foe* Se observó foe + Manitol, mg Se observó foe Se observó foe + Manitol, 2 mg Se observó foe Se observó foe + Manitol, 0 mg Se observó foe Se observó foe foe: formación ósea ectópica Aplicabilidad industrial 4 El producto liofilizado de MP2 humana de factor morfogenético óseo implica el problema de que está coloreado o de que se contrae durante el almacenamiento, y se cohesiona en el momento de la reconstitución. La composición liofilizada según la presente invención, sin embargo, está exenta de tales problemas. La MP2 humana de factor morfogenético óseo, en la composición liofilizada de la presente invención, permanece estable, y no se observa cambio sustancial en la pureza, en el contenido de agua y en la formación ósea ectópica, incluso después de un largo período de tiempo. De este modo, la presente invención es aplicable al campo del producto farmacéutico

5 REIVINDICACIONES 1 1. Una composición reconstituida de MP2 humana de factor morfogenético óseo derivada de una composición liofilizada, que comprende una mezcla de MP2 humana de factor morfogenético óseo con manitol en una relación de mezclamiento en el intervalo de 1:-0 (relación en peso). 2. La composición reconstituida según la reivindicación 1, en la que dicha MP2 humana de factor morfogenético óseo se ha producido mediante tecnología de ingeniería genética. 3. Un procedimiento para la preparación de una composición reconstituida de MP2 humana de factor morfogenético óseo derivada de una composición liofilizada, que comprende añadir manitol a una disolución acuosa de MP2 humana de factor morfogenético óseo purificada, en una cantidad para dar una relación de mezclamiento de MP2 humana de factor morfogenético óseo a manitol en el intervalo de 1:-0 (relación en peso), y después liofilizar la disolución mezclada resultante, y reconstituir la composición liofilizada. 4. El procedimiento según la reivindicación 3, en el que dicha MP2 humana de factor morfogenético óseo se ha producido mediante tecnología de ingeniería genética