Herramientas estadísticas aplicadas a la validación de métodos analíticos.
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- Juan Manuel José Luis Álvarez Campos
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1 Herramientas estadísticas aplicadas a la validación de métodos analíticos. Analítica Experimental III P. en F. Romero Martínez Marisol Revisión: Dra. Silvia Citlalli Gama González Analítica Experimental III. RMM 1
2 Validación Sensibilidad Linealidad Límites de detección y cuantificación Exactitud Recobro Robustez Curva de calibración Análisis de residuales Coeficientes de determinación y correlación Mediciones repetidas del blanco Precisión Veracidad Muestra fortificada Prueba de t Repetición de las curvas de calibración. Analítica Experimental III. RMM 2
3 Validación Un nuevo método desarrollado para un problema específico. Un nuevo método ya establecido revisado para incorporar mejoras o extenderlo a un nuevo problema. Es el proceso de definir una necesidad analítica y confirmar que el método en cuestión tiene capacidades de desempeño consistentes con las que requiere la aplicación. Cuando el control de calidad indica que un método ya establecido está cambiando con el tiempo. Un método establecido usado en un laboratorio diferente o con diferentes analistas o con diferente instrumentación. Analítica Experimental III. RMM 3
4 Respuesta Respuesta Sensibilidad del método Es la relación entre la señal obtenida de un sistema de medición y la correspondiente qué? concentración de analito. Qué gráfica representa a un método más sensible y por Concentración Concentración Analítica Experimental III. RMM 4
5 Sensibilidad del método Curvas de calibración Representación gráfica de la señal de medición como una función de la cantidad de analito. Forma algebraica donde b es la pendiente y a es la ordenada al origen La sensibilidad se reporta como la pendiente de la curva de calibrado. Analítica Experimental III. RMM 5
6 Linealidad Se refiere al intervalo de concentraciones del analito en el que la respuesta del sistema de medición es una función lineal de la concentración. Analítica Experimental III. RMM 6
7 Intervalo lineal Es el que comprende desde el límite de cuantificación hasta el límite de linealidad. Casi siempre, una desviación de 5% de la linealidad se considera como el límite superior. Analítica Experimental III. RMM 7
8 Evaluación de la linealidad (1)Análisis visual del gráfico de residuales Analítica Experimental III. RMM 8
9 Evaluación de la linealidad (II) Análisis visual de la curva de calibrado Analítica Experimental III. RMM 9
10 Evaluación de la linealidad (III)Coeficientes de correlación y determinación Coeficiente de correlación: Sirve para estimar la bondad con la que se ajustan los puntos experimentales a una línea recta. Coeficiente de determinación Es el cuadrado del coeficiente de correlación, nos proporciona el porcentaje de la variación expandida. Analítica Experimental III. RMM 10
11 Evaluación de la linealidad (III)Coeficientes de correlación y determinación Ejemplo: Si tenemos un coeficiente de correlación de 0.85, el coeficiente de determinación será de Por lo cual 72% de la variabilidad en y es explicada por la variabilidad en x. Analítica Experimental III. RMM 11
12 Límite de detección, LD Concentración mínima de un analito en la matriz de una muestra que puede ser detectada, pero no necesariamente cuantificada, bajo condiciones analíticas específicas. y LD x blancos demuestra 3* blancos demuestra LD = y LD expresado en unidades de x con ayuda la curva de calibración promedio. s Analítica Experimental III. RMM 12
13 Límite de cuantificación, LC Es aquel valor de concentración mínimo que puede obtenerse con una imprecisión aceptable. y LC x blancos demuestra 10* s blancos demuestra LC = y LC expresado en unidades de x con ayuda la curva de calibración promedio. Analítica Experimental III. RMM 13
14 Exactitud Es la proximidad de concordancia entre el resultado de una medición y el valor de referencia aceptado. Exactitud Precisión Veracidad Analítica Experimental III. RMM 14
15 Exactitud Veracidad Es una expresión de que tan cercana se encuentra la media de un número infinito de resultados (generados por el método) con un valor de referencia. Como no es posible hacer un número infinito de mediciones, entonces la veracidad no se puede medir. Sin embargo podemos tener una aproximación práctica a la veracidad. Esta aproximación se expresa normalmente en términos de sesgo Analítica Experimental III. RMM 15
16 Exactitud Veracidad Una determinación práctica del sesgo se obtiene comparando el promedio de una serie de resultados obtenidos con el método propuesto (x) contra un valor de referencia aceptado. El sesgo puede expresarse en términos absolutos b x x ref x xref En términos de porcentaje b(%) x100 x En términos del porcentaje de recobro de una adición xmuestraadi cionada xmuestranoa R' (%) x ref cantidadadicionada dicionada x100 Analítica Experimental III. RMM 16
17 Exactitud Precisión Es una medida de que tan cercanos están los resultados unos con respecto a los otros y por lo general se expresa mediante medidas tales como la desviación estándar (que describe la dispersión absoluta de los resultados) o el coeficiente de variación (que describe la dispersión relativa de los resultados) Analítica Experimental III. RMM 17
18 Recobro El porcentaje de recuperación (%R) entre las muestras fortificadas y sin fortificar se calcula como: Donde C F es la concentración de analito medida en la muestra fortificada; C U es la concentración de analito medida en la muestra sin fortificar; C A es la concentración del analito adicionado Analítica Experimental III. RMM 18
19 Robustez La robustez de un método analítico es la medida de su capacidad para permanecer inalterado por pequeñas variaciones deliberadas en el método y provee de un indicio de su veracidad durante su uso normal. Analítica Experimental III. RMM 19
20 Referencia The Fitness for Purpose of Analytical Methods, A laboratory Guide to Method Validation an Related Topics, Eurachem, Second Edition, Analítica Experimental III. RMM 20
Herramientas estadísticas aplicadas a la validación de métodos analíticos.
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