CASOS PRACTICOS EN MICROBIOLOGIA CLINICA JUAN CARLOS RODRIGUEZ DIAZ S. MICROBIOLOGIA HOSPITAL GENERAL UNIVERSITARIO DE ELCHE
CASO CLINICO 1: Paciente joven con sospecha de tuberculosis Datos clínicos Hombre 27 años Fumador Tos de 20 días de evolución Febrícula vespertina Pérdida de peso de 8 kg Lesión radiológica en pulmón
CASO CLINICO 1: Paciente joven con sospecha de tuberculosis Muestras a procesar Tres muestras de esputo de días diferentes Aspirado bronquial Lavado bronquial Cepillado bronquial Biopsia pulmonar
Patogenia de la tuberculosis Entrada del microorganismo Respuesta del sistema inmune Diseminación hematógena Infección tuberculosa o Tuberculosis latente Enfermedad tuberculosa
Métodos clásicos de diagnóstico de la infección tuberculosa Prueba del Mantoux o de la tuberculina Basada en: Inoculación de una mezcla de antígenos obtenidos de un cultivo inactivado Lectura de la induración a las 48-72h PRINCIPALES VENTAJAS Existen consensos internacionales para su interpretación Amplia experiencia clínica INCONVENIENTES Reacción cruzada con: BCG Micobacterias no tuberculosas Falta de sensibilidad (anergia)
Nuevos métodos de diagnóstico de la infección tuberculosa IGRAs (interferon gamma release assay) Basada en: Detección de la producción de interferon en leucocitos estimulados in vitro con antígenos específicos de M. tuberculosis (ES AT-6 y CFP-10) PRINCIPALES VENTAJAS Evita las reacciones cruzadas con la vacuna y con muchas de las micobacterias no tuberculosas Útil en vacunados e inmunodeprimidos INCONVENIENTES Coste No está evaluado en profundidad su verdadero significado en algunos casos
Métodos de diagnóstico de la enfermedad tuberculosa Tinciones Ziehl Neelsen Auramina PRINCIPALES VENTAJAS Rapidez Bajo coste INCONVENIENTES Falta de sensibilidad No diferencia entre M. tuberculosis y micobacterias no tuberculosas
Métodos de diagnóstico de la enfermedad tuberculosa Cultivos Sólidos: Lowenstein, Coletsos Líquidos automatizados: MGIT PRINCIPALES VENTAJAS Sensibilidad Aislamiento de la cepa para estudios posteriores: sensibilidad, etc Permite diferenciar entre M. tuberculosis y micobacterias no tuberculosas INCONVENIENTES Lentitud: 2-4 semanas
Métodos de diagnóstico de la enfermedad tuberculosa Sistemas de biología molecular PCR a tiempo real Amplificación e hibridación con sondas específicas PRINCIPALES VENTAJAS Sensibilidad, aunque menor que el cultivo Permite diferenciar entre M. tuberculosis y micobacterias no tuberculosas Rapidez Permite conocer la resistencia antibiótica INCONVENIENTES Coste No permite obtener la cepa No sustituye a los métodos clásicos sino que los complementa
Métodos moleculares de diagnóstico de la enfermedad tuberculosa
Métodos moleculares de detección de resistencias en Mycobacterium tuberculosis
Caso clínico 2: Mujer joven con infección urinaria Cistitis (infección de vías bajas) Micción dolorosa: Disuria Micción frecuente: Polaquiuria Sensación continua de necesidad de orinar: Tenesmo Escasa sintomatología Pielonefritis (infección de uréteres y riñones) Fiebre Dolor lumbar Afectación general Síntomas de cistitis
Muestras a tomar Caso clínico 2: Mujer joven con infección urinaria Cistitis Muestra de orina para cultivo cuantitativo Pielonefritis Muestra de orina para cultivo cuantitativo Hemocultivos para bacterias aerobias y anaerobias
Caso clínico 2: Mujer joven con infección urinaria Cultivo cuantitativo Para diferenciar infección y colonización uretral: 100.000 colonias/ml de orina Principales patógenos: Escherichia coli Proteus mirabilis Enterococcus faecalis Se realiza en varios medios: CLED Agar sangre Agar mac Conkey
Caso clínico 3: Viajero que regresa de Méjico con diarrea Causas Bacterianas Salmonella Campylobacter Shigella Vibrio Virus Rotavirus Adenovirus Norovirus
Parásitos: clasificación Protozoos: Amebas Ciliados Flagelados Apicomplexa Microspora Helmintos Platelmintos P. cestodos P. trematodos Nemátodos
Protozoos: Amebas
Protozoos ciliados
Protozoos: flagelados Trichomona vaginalis
Protozoos: flagelados II Leishmania spp Tripanosoma spp
Protozoos: Apicomplexa Pasmodium Toxoplasma gondii
Protozoos: Apicomplexa II Cryptosporidium spp Isospora belli Cyclospora cayetanenesis
Enterocytozoon spp Protozoos: Microspora
Platelmintos: cestodos Tenia spp. Ecchinococcus ssp.
Platelmintos: tremátodos Fasciola hepatica Schistosoma mansoni
Nemátodos I Trichuris trichiura Trichinella spiralis
Nemátodos II Enterobius vermicularis Ascaris lumbricoides
Nematodos III Toxocara canis Strongyloides stercoralis
Nemátodos III Necator americanus Anylostoma duodenale
Nemátodos IV Filarias sp
Identificación de los microorganismos Se utilizan pruebas bioquímicas, sensibilidad a algunos compuestos, secuenciación y espectrometría de masas Pruebas bioquímicas: Fermentación de azúcares: glucosa, lactosa, etc Hidrólisis de la urea Sensibilidad a: Optoquina Bacitracina
Identificación de los microorganismos Secuenciación de algunos genes Bacterias: Gen 16S rrna Hongos: Genes ITS 1 y ITS4 Espectrometría de masas (Malditof)
Estudio de la sensibilidad antibiótica Concentración mínima inhibitoria (CMI): Mínima concentración del antibiótico que inhibe el crecimiento bacteriano in vitro Métodos Sistema disco placa: Utiliza discos impregnados que se ponen en un medio sólido Sistema microdilución: Utiliza concentraciones seriadas de antibióticos en cultivos líquidos E-test: Tiras con un gradiente de antibióticos que se ponen sobre un cultivo sólido Detección molecular de genes de resistencia
Estudio de la sensibilidad antibiótica
Datos clínicos Caso clínico 4: Paciente con sospecha clínica de HIV Varón 25 años Antecedentes de uso de drogas por vía parenteral hace 5 años Asintomático
Caso clínico 4: Paciente con sospecha clínica de HIV Detección de anticuerpos Cribado mediante enzimoinmunoensayo (ELISA) Su negatividad descarta la infección salvo en primoinfección (infección muy reciente) Si es positivo siempre hay que confirmar por western Blot y PCR
Interpretación de resultados serológicos Exposición al microorganismo Presencia de anticuerpos en el suero del paciente Diagnóstico de infección aguda: Detección de IgM Seroconversión Al cuantificar dos sueros del paciente separados 3-4 semanas se observa un incremento importante de la cantidad total de anticuerpos El suero en fase aguda puede ser negativo
Interpretación resultados serológicos