11 Número de publicación: Int. Cl. 7 : A23J 3/ Inventor/es: Nielsen, Per Munk. 74 Agente: Tomás Gil, Tesifonte-Enrique

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1 19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 Número de publicación: Int. Cl. 7 : A23J 3/34 12 TRADUCCIÓN DE PATENTE EUROPEA T3 86 Número de solicitud europea: Fecha de presentación: Número de publicación de la solicitud: Fecha de publicación de la solicitud: Título: Método de producción de un hidrolizado de proteína de leche. Prioridad: DK Titular/es: Novozymes A/S Krogshoejvej, Bagsvaerd, DK 4 Fecha de publicación de la mención BOPI: Inventor/es: Nielsen, Per Munk 4 Fecha de la publicación del folleto de la patente: Agente: Tomás Gil, Tesifonte-Enrique ES T3 Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, Madrid

2 DESCRIPCIÓN Método de producción de un hidrolizado de proteína de leche La invención comprende un método de producción de un hidrolizado de proteína de leche. Según la técnica precedente, la hidrólisis de las proteínas de leche reduce la tendencia de las proteína de leche a provocar reacciones alérgicas en la alimentación infantil con proteínas de leche. La posibilidad de provocar reacciones alérgicas en niños está relacionada con el tamaño de los péptidos, y con la composición y la secuencia de los aminoácidos de dichos péptidos. Debido a las buenas propiedades nutritivas, a la similitud con la proteína de la leche humana y a su fácil disponibilidad, las proteínas obtenidas de la leche de vaca son a menudo las preferidas como materia prima en los productos sustitutivos de la leche materna. El método tradicional para conseguir una alergenicidad muy baja consiste en una importante hidrólisis de las proteínas. El grado de hidrólisis se selecciona de tal manera que, en el producto final, sólo se mantiene un bajo contenido de proteínas, que se puede detectar mediante la técnica ELISA. Existen algunas desventajas en cuanto a una importante hidrólisis, principalmente relacionadas con las propiedades sensoriales del producto y con un gran contenido de aminoácidos libres que causan una alta osmolalidad en el hidrolizado de proteínas. Además, con una hidrólisis importante que requiere un tiempo de hidrólisis muy largo y/o una dosificación enzimática muy alta, los costos de producción son relativamente altos. No obstante, la reducción del contenido proteínico detectable mediante la técnica ELISA, en combinación con un grado de hidrólisis relativamente bajo y unas buenas propiedades organolépticas, son susceptibles de mejora. En consecuencia, el propósito de la invención es proporcionar un método para la producción de un hidrolizado de proteína de leche con un contenido extremadamente bajo de proteínas detectable mediante la técnica ELISA y en combinación con un grado relativamente bajo de hidrólisis, con un bajo contenido de aminoácidos y unas propiedades organolépticas excelentes. El método de producción de un hidrolizado de proteína de leche según la invención está caracterizado por el hecho de que, en una primera fase, la proteína de leche es hidrolizada con una combinación de cualquier proteasa alcalina o neutra de Bacillus junto con un complejo proteánico de Aspergillus oryzae que incluye tanto endoproteasas como exopeptidasas con un grado de hidrólisis entre el 3% y el %, y por el hecho de que en una segunda fase la mezcla producida en la primera fase es ultrafiltrada, y el producto filtrado contiene el hidrolizado de proteína de leche. Se debe entender que los términos cualquier proteasa alcalina y/o neutra derivada de Bacillus incluye cualquier proteasa neutra y/o alcalina producida a partir de una bacteria Bacillus, así como proteasas idénticas a este grupo de enzimas, las cuales han sido producidas por clonación en otros huéspedes. Esta interpretación también se utiliza en referencia a términos similares referidos a un complejo proteásico de Aspergillus orizae. Según esta especificación el término proteína de lecha define cualquier tipo de leche como materia prima que contiene proteínas de leche, por ejemplo leche desnatada, caseína, caseinato, o un concentrado proteínico de suero de leche. Una proteasa neutra es una proteasa cuyo PH óptimo está entre 6 y 7, y una proteasa alcalina es una proteasa cuyo PH óptimo es superior a 7. El grado de hidrólisis (GH) se define en el documento US 4,0,024, columna 2, líneas 29 a 37. Además se entenderá que la proteína de leche utilizada como materia prima en este método de invención, puede presentarse en forma de solución o de suspensión con una concentración de proteínas que no supere el 2%, preferiblemente entre el 4 y el 1%. Se debe entender también que las condiciones de hidrólisis, es decir, la temperatura, el PH, el tiempo de reacción y la dosificación enzimática deben establecerse como condiciones de procesamiento reales, por ejemplo con una temperatura situada entre y 6 C, un PH entre y 9 y un tiempo de reacción de menos de horas. Además, se debe tener en cuenta que la fase del proceso de desactivación de las enzimas efectuado antes de la ultrafiltración, también se considera una fase habitual para la finalización los procesos enzimáticos. Las condiciones para la desactivación de las enzimas deben ser establecidas en función de cada caso y según el calor que puedan aguantar las enzimas empleadas. Se ha descubierto que las propiedades organolépticas del hidrolizado de proteína de leche mejoran cuando se utiliza un tratamiento térmico instantáneo para la desactivación de las enzimas. También resulta evidente que el equipo de ultrafiltración puede ser de cualquier tipo y que el valor de corte de la membrana molecular no es fundamental, por ejemplo se pueden aplicar membranas con valores de corte de.000 a Dalton. No obstante, se prefiere una membrana con un valor de corte situado entre.000 y Dalton. Se ha descubierto que durante el proceso se puede conseguir tanto un flujo elevado como un hidrolizado de proteína de leche apropiado, con cualquier membrana con un valor de corte situado en el intervalo mencionado. Sorprendentemente, se ha descubierto que el hidrolizado de proteína de leche producido mediante el método según la invención posee un contenido de proteínas extremadamente bajo, que se puede detectar con la técnica ELISA empleando anticuerpos en contra de las proteínas de la leche de vaca, y también que posee un grado relativamente bajo de hidrólisis, un contenido relativamente bajo de aminoácidos libres y unas buenas propiedades sensoriales. Además, se ha descubierto sorprendentemente que el hidrolizado de proteína de leche, después de la hidrólisis, puede ser aislado en forma de un producto filtrado mediante el uso de un equipo de ultrafiltración con una membrana con un valor de corte importante, por lo que el hidrolizado de proteína de leche posee solamente un bajo contenido de proteínas detectable. 2

3 En algunos textos, por ejemplo, en la revista Australian Journal of Nutrition and Dietetics, (1992) 49:2, páginas 4-49, Charol Wham se da a conocer que el sustituto de la leche materna Nutramigen basado en caseína altamente hidrolizada, se ha sometido a importantes exámenes mediante ensayos clínicos y está disponible en el mercado desde hace más de años. El producto es conocido por el hecho de tener un escaso fracaso en el tratamiento de niños con intolerancia a la proteína de leche de vaca. Según esta información resulta conveniente establecer el contenido proteínico detectable en el Nutramigen como estándar que debe ser alcanzado para asegurar un buen hidrolizado de proteína para su aplicación en productos de sustitución de la leche materna. Mediante la determinación de la distribución del peso molecular, se considera que el grado de hidrólisis del ingrediente proteínico en el Nutramigen es de más del %. Lee, Y.-H., en la revista Journal of Pediatrics, 1992, páginas 47 a 0, declara que existe una necesidad de desarrollar aún más los ingredientes proteínicos altamente hidrolizados, puesto que algunos informes revelan que existen pacientes alérgicos que reaccionan gravemente a dicha proteína. También se indica que es deseable un contenido inferior de aminoácidos libres. Tal deseo se consigue con el hidrolizado de proteína de leche según la invención. La patente EP321,3 describe un método de producción de un hidrolizado de proteína de leche en dos fases producido por una hidrólisis enzimática combinada con tratamientos térmicos. En dicha técnica precedente se expone el uso de unas enzimas proteolíticas diferentes de las enzimas proteolíticas usadas en la invención. El alto grado de hidrólisis que se puede conseguir según la invención, no se consigue con el método descrito en esta técnica precedente. El documento US 4,0,88 describe un hidrolizado de proteína de leche producido mediante otra combinación de enzimas proteolíticas distinta a la combinación de enzimas proteolíticas utilizada por el método según la invención. Además, el hidrolizado de proteína de leche de la técnica precedente es utilizado como un emulgente, mientras que el hidrolizado de proteína de leche según la invención es utilizado en productos de sustitución de la leche materna y en alimentos dietéticos. El documento US3,761,33 describe un hidrolizado proteínico, con el que se puede usar la proteína de leche como materia prima. En esta técnica precedente no se utiliza la misma combinación de enzimas proteolíticas que en el método presente según la invención. El documento PCT/DK92/00326 describe un hidrolizado de caseína y un método de producción de dicho hidrolizado. No obstante, dicha técnica precedente describe un hidrolizado cuya distribución del peso molecular es muy diferente de la distribución del peso molecular del hidrolizado de proteína de leche según la invención, por haber sido hidrolizado en un grado máximo de un 3% de hidrólisis y porque posee un contenido de aminoácidos libres bajo (< %). También se describe la enzima Aspergillus como una exopeptidasa, mientras que según la invención se utiliza un complejo proteásico de Aspergillus oryzae que también incluye actividad endoproteasa. Los productos hechos según dicha técnica precedente también muestran un alto contenido proteínico detectable que no está incluido en el margen de la presente invención. En la solicitud de la patente PCT/DK94/0016 (cuya publicación está pendiente) se sugiere el uso de un complejo proteásico de Aspergillus oryzae (Flavourzime ) para producir un ingrediente de sustitución de la leche materna mediante hidrólisis con un grado muy alto de hidrólisis. El grado de hidrólisis obtenido debe ser superior a un 3%, preferiblemente a un %, más preferiblemente a un 70%, y especialmente superior al 80%. No obstante, no se indica que se pueda seleccionar una combinación de Flavourzime con otras proteasas con el fin de obtener un producto de calidad superior con una hidrólisis de grado relativamente bajo, y tampoco se dan detalles sobre las condiciones de tratamiento para la producción de un hidrolizado proteínico de este tipo, lo cual según la presente invención se considera muy importante. En una forma de realización preferida del método según la invención la leche, como materia prima, se selecciona de la caseína o de la proteína de suero de leche obtenida a partir de la leche de vaca. De esta forma, la materia prima utilizada es un producto de consumo de buena calidad comercializado que se puede conseguir a un precio relativamente bajo. La caseína de leche se produce como proteína ácida coagulada o caseína coagulada de cuajo. La caseína ácida coagulada se vende también como caseinatos, que es una caseína neutralizada por una base (por ejemplo NaOH, Ca (OH) 2 o KOH). La proteína de suero de leche se vende en forma de proteína concentrada obtenida por ultrafiltración del suero de leche obtenido en la producción de queso o de cuajo coagulado o de caseína ácida coagulada. Se pueden obtener concentrados proteínicos de suero de leche con diferentes contenidos de proteína. También se conoce la existencia de productos proteínicos obtenidos a partir de la leche entera, que contienen tanto caseína como proteína de suero de leche, así como productos proteínicos que contienen únicamente fracciones de proteína de suero de leche o caseína. En una forma de realización preferida del método según la invención, la proteína de leche es caseinato de leche de vaca. Se trata de una materia prima de coste muy económico y que posee un contenido proteínico muy alto calculado con respecto a una sustancia seca, lo que facilita la formación y recuperación del hidrolizado de proteína de leche. En una forma de realización preferida del método según la invención, la proteasa neutra se selecciona de Bacillus subtilis. De esta forma se utiliza una proteasa conocida y eficaz. En una forma de realización preferida del método según la invención la proteasa neutra es Neutrase de Novo 3

4 Nordisk NS, Dinamarca. De esta forma se puede usar una proteasa neutra de coste relativamente económico En las formas de realización preferidas del método según la invención, la proteasa alcalina de tipo Bacillus es la proteasa alcalina de Bacillus licheniformis, preferiblemente Alcalase, o Esperase de Novo Nordisk A/S, Dinamarca. Estos productos son proteasas alcalinas conocidas, eficaces y de coste relativamente económico. En una forma de realización preferida del método según la invención, el complejo proteásico de Aspergillus oryzae es Flavourzyme de Novo Nordisk NS, Dinamarca. Este complejo proteásico de Aspergillus oryzae tiene un coste relativamente económico y es muy eficaz. En una forma de realización preferida del método según la invención, el grado de hidrólisis se sitúa entre el 3% y el 0%, preferiblemente entre el % y el 0%. Con estos intervalos de grado de la hidrólisis, se han descubierto que se obtienen unas propiedades óptimas del hidrolizado proteínico con respecto al bajo contenido proteínico detectable, unas propiedades sensoriales buenas, un contenido relativamente bajo de aminoácidos libres y una osmolalidad baja. En una forma de realización preferida del método según la invención, la ultrafiltración se realiza con un valor de corte situado entre.000 y Dalton, preferiblemente entre y Dalton. En cuanto al flujo, el hecho de usar una unidad de ultrafiltración con un valor de corte lo más grande posible representa una ventaja. Sorprendentemente, se ha descubierto que además de un flujo más elevado, también se puede obtener un producto más satisfactorio con un valor de corte de Dalton. En una forma de realización preferida del método según la invención, el producto filtrado es tratado térmicamente de forma instantánea, preferiblemente calentándolo a una temperatura de 12 a 1 C, durante menos de segundos y mediante un tratamiento de evaporación instantánea al vacío, preferiblemente entre y 80 C. De esta forma la actividad enzimática que penetra la membrana de manera accidental será desactivada y también se producirá una mejora de las propiedades sensoriales del hidrolizado de proteína de leche gracias a la eliminación de compuestos volátiles durante la evaporación instantánea. Debe entenderse de que el tratamiento térmico instantáneo puede efectuarse antes del proceso de ultrafiltración si se desea. La ventaja podría consistir en un control más preciso del grado de hidrólisis y un mejor control del crecimiento microbiano en el hidrolizado. En una forma de realización preferida del método según la invención, el producto filtrado obtenido en la segunda fase es tratado con carbón activado, preferiblemente con cantidades de carbón activado inferiores al % respecto a la cantidad de sustancia seca, y dicho producto se filtra con el fin de eliminar el carbón. De esta forma, se producirá una mejora de las propiedades sensoriales, y también el contenido proteínico detectable disminuirá ligeramente pero de forma significativa. Debe entenderse de que el tratamiento con carbón puede efectuarse antes de los procesos de ultrafiltración o después de los procesos de nanofiltración/concentración. En una forma de realización preferida del método según la invención, el producto filtrado obtenido en la segunda fase, o el producto filtrado obtenido según la forma de realización que se indica arriba, es concentrado mediante nanofiltración/ósmosis inversa y/o por evaporación seguida de secado. De esta forma el hidrolizado de proteína de leche se convierte en un producto estable que puede ser conservado durante un periodo de tiempo largo, cuyas fases de producción presentan un coste relativamente bajo. Además, la aplicación de técnicas de filtración se puede elegir para obtener una desalinización durante la concentración. En una forma de realización preferida, el hidrolizado de proteína de leche producido mediante el método según la invención, tiene un contenido proteínico detectable con la técnica ELISA en relación con el contenido total N inferior al contenido de proteína de leche detectable en Nutramigen en relación con el contenido total N. De esta forma, el producto se caracteriza por presentar propiedades óptimas con respecto a la reducción de las posibilidades de causar reacciones alérgicas en su utilización como alimento nutritivo para niños. El hidrolizado de proteína de leche producido mediante el método según la invención se puede utilizar como un ingrediente proteínico en productos de sustitución de la leche materna. Hay que subrayar que el hidrolizado de proteína de leche se utiliza como un ingrediente proteínico en los productos de sustitución de la leche materna, y puede estar presente como único ingrediente proteínico o estar mezclado con otros ingredientes proteínicos, por ejemplo con aminoácidos, si se considera necesario. El hidrolizado de proteína de leche según la invención se puede utilizar en productos de sustitución de la leche materna, tanto en formulaciones líquidas como en productos secos. El hidrolizado de proteína de leche producido mediante el método según la invención se puede utilizar como un ingrediente proteínico para alimentos dietéticos. Se entiende por alimentos dietéticos cualquier producto alimenticio elaborado para un uso dietético, por ejemplo para la alimentación de personas hospitalizadas, para pacientes con necesidades específicas o para deportistas. El hidrolizado de proteína de leche se puede utilizar como único ingrediente proteínico o puede ser mezclado con otros ingredientes proteínicos. El método según la invención se ilustrará en los ejemplos siguientes. Ejemplo 1 Se utilizaron 2kg de caseinato Na (Miprodan de MD Foods, Dinamarca) como materia prima. El caseinato fue 4

5 dispersado en 23 litros de agua caliente a 70 C y enfriado a una temperatura de hidrólisis de 0 C. La concentración proteínica fue de 7,9% (Nx6,38). La osmolalidad fue de mosm/kg antes de la adición de enzimas. Después de la hidrólisis, se debería obtener una osmolalidad de 443mOsm/kg, correspondiente a un grado de hidrólisis del 4%. Adición de enzimas 1,46 g de Alcalase en 2,4L (Novo Nordisk NS, Dinamarca) 2,114 g de Flavourzyme con una actividad de 3,38 AU/g (Novo Nordisk NS, Dinamarca) 3,44 g de Neutrase en 0,L (Novo Nordisk NS, Dinamarca) La duración de la hidrólisis fue de 9 horas. 1 2 La mezcla fue dividida en dos partes iguales, una de ellas fue tratada térmicamente en una planta piloto UHT (Pasilac, Dinamarca) a 12 C por calentamiento indirecto con vapor en un intercambiador térmico de placas, y la segunda parte de la mezcla fue tratada térmicamente dentro de un equipo de tratamiento térmico instantáneo piloto (APV Anhydro, Dinamarca) a 12 C con un tiempo de permanencia de 3 segundos, y finalmente fue enfriada a 70 C en una cámara de evaporación instantánea. Ambas partes fueron procesadas de la misma manera: Ultrafiltración a 0 C en un módulo PCI de 2,6 m 2 con membranas FP0 (valor de corte Dalton, PCI Membrane Systems, Inglaterra) mediante la concentración en un volumen mínimo y la adición de agua correspondiente a un 0% del volumen introducido al inicio. La filtración terminó con una concentración hasta el vaciado del tanque de introducción. El producto filtrado obtenido en la ultrafiltración se concentró mediante nanofiltración (PCI, membranas AFC90, 2,6 m 2 a 0 C). La concentración se llevó a cabo hasta conseguir una sustancia seca con una medida en Brix de 2 Brix. El concentrado obtenido en la nanofiltración fue secado por pulverización. La evaluación de los hidrolizados de proteína de leche muestran: 3 Se evaluaron las propiedades sensoriales como un 2% de proteínas en agua según 6 jueces: Producto tratado instantáneamente: - sabor muy aceptable no amargo. Nada de color y casi nada de olor. 4 Producto tratado con UHT: - sabor más intenso que el producto tratado instantáneamente. No se detectó ninguna diferencia de olor, ni de color entre el producto de tratado instantáneamente y el producto tratado con UHT. El contenido proteínico, medido mediante la técnica ELISA, en % del contenido presente en el Nutramigen, (corregido en función de la diferencia con el contenido de nitrógeno) fue de un 80% de la cantidad presente en el Nutramigen, tanto para el producto tratado con UHT como para el producto tratado instantáneamente. Ejemplo 2 0 Se trata exactamente del mismo experimento que en el Ejemplo 1 excepto porque el producto concentrado obtenido por nanofiltración fue tratado con un 3% de carbón activado, calculado en relación con la sustancia seca (Picatif FGV1EW, Pica, Francia) durante minutos a 0 C. El carbón activado fue eliminado por filtración y el filtrado fue liofilizado. La evaluación sensorial mostró que el sabor mejoraba ligeramente en la muestra tratada con UHT, pero no se detectó ninguna diferencia en la muestra tratada instantáneamente. El contenido proteínico, medido según la técnica ELISA, en % del contenido presente en el Nutramigen (corregido en función de la diferencia con el contenido de nitrógeno) fue de un 6% de la cantidad presente en el Nutramigen tanto en la muestra tratada con UHT como en la tratada instantáneamente. El tratamiento con carbón provocó la reducción del contenido proteínico detectable con la técnica ELISA. Ejemplo 3 6 Un experimento con una hidrólisis de 00 ml de mezcla proteínica como se describe en el ejemplo 1 con distintos grados de hidrólisis entre un 13% y un 48%, mostró que la cantidad de proteína detectable era igual para un grado de hidrólisis de 42%, 4,% y 48%, lo que significa que no se debe esperar ninguna mejora debida a un aumento del grado de hidrólisis por encima del 42% con las condiciones usadas.

6 Con un grado de hidrólisis del 13% hubo veces más cantidad de proteína detectable en comparación con un grado de hidrólisis del 42%, quedando en 9 veces más con un 22%, y hasta 4 veces más con un % y 2.4 veces más con un 34%. 1 Ejemplo 4 Se efectuó un experimento con una hidrólisis de 00 ml de mezcla proteínica como se describe en el ejemplo 1 con un grado de hidrólisis del 4%, con el fin de evaluar el proceso de ultrafiltración. Después del tratamiento térmico a 8 C durante 3 minutos para desactivar las enzimas, la mezcla fue dividida en dos. Se liofilizó una muestra y la otra fue ultrafiltrada en una célula de ultrafiltración Amicon 80 (corte de la membrana Dalton) y el producto filtrado fue liofilizado. Una prueba estadística para determinar la cantidad de proteínas contenidas en las muestras reveló, con más del 99,99% de significación, que la ultrafiltración tiene un impacto positivo en la reducción del contenido proteínico medido con la técnica ELISA. Ejemplo 2 Se efectuó un experimento de hidrólisis de 2x00 ml de mezcla proteínica como se describe en el ejemplo 1 con un grado de hidrólisis del 47% comparando una hidrólisis en la que se utilizó enzimas Alcalase, Neutrase y Flavourzyme (con la misma dosificación que en el ejemplo 1) con otra hidrólisis en la que la mitad de la cantidad de Alcalase fue sustituida por Esperase 7,FG. La dosificación de Esperase fue del 0.09% calculada como un porcentaje de las proteínas. Después de la hidrólisis, las mezclas fueron desactivadas durante 3 minutos a 8 C. Las medición del contenido proteínico determinada mediante la técnica ELISA no presentó ninguna diferencia entre los dos hidrolizados

7 REIVINDICACIONES Método de producción de un hidrolizado de proteína de leche caracterizado por el hecho de que: a) la proteína de leche es hidrolizada con una combinación de cualquier proteasa alcalina y/o neutra derivada de Bacillus y un complejo proteásico de Aspergillus oryzae que comprende tanto endoproteasas como exopeptidasas, con un grado de hidrólisis situado entre el % y el %, y b) la mezcla obtenida en la fase a) es ultrafiltrada, y el producto filtrado incluye el hidrolizado de proteína de leche. 2. Método según la reivindicación 1, caracterizado por el hecho de que la proteína de leche es caseína o proteína de suero de leche de vaca. 3. Método según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado por el hecho de que la proteína de leche es caseinato de leche de vaca. 4. Método según las reivindicaciones 1-3, caracterizado por el hecho de que la proteasa neutra es de Bacillus subtilis.. Método según las reivindicaciones 1-4, caracterizado por el hecho de que la proteasa alcalina es de Bacillus licheniformis. 6. Método según las reivindicaciones 1 -, caracterizado por el hecho de que el grado de hidrólisis está situado entre el % y el 0%. 7. Método según las reivindicaciones 1-6, caracterizado por el hecho de que la ultrafiltración se lleva a cabo con un valor de corte entre.000 y Dalton, preferiblemente entre y Dalton. 8. Método según las reivindicaciones 1-7, caracterizado por el hecho de que la mezcla obtenida en la fase b) es sometida a un tratamiento térmico instantáneo, preferiblemente por calentamiento a una temperatura de 12 a 1 C durante al menos segundos, y a un tratamiento de evaporación instantánea al vacío, preferiblemente entre y 80 C. 9. Método según las reivindicaciones 1-8, caracterizado por el hecho de que el producto filtrado obtenido en la fase b) es tratado con carbón activado, preferiblemente en una cantidad inferior al % de carbón activado respecto a la cantidad de sustancia seca, y después es filtrado para eliminar el carbón.. Método según las reivindicaciones 1-9, caracterizado por el hecho de que el producto filtrado obtenido en la fase b) o el filtrado según la reivindicación 9, es concentrado por nanofiltración/ósmosis inversa y/o por evaporación seguida de secado NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposición Transitoria del RD 2424/1986, de de octubre, relativo a la aplicación del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a España y solicitadas antes del , no producirán ningún efecto en España en la medida en que confieran protección a productos químicos y farmacéuticos como tales. Esta información no prejuzga que la patente esté o no incluida en la mencionada reserva. 7