N Latex IgM. Procedure

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1 N Latex IgM Intended Use In vitro diagnostic reagents for the quantitative determination of IgM in human cerebrospinal fluid (CSF) and in paired CSF/serum samples by means of particle-enhanced immunonephelometry using the BN* Systems. The determination of IgM aids in the evaluation of the patient's immune system. Summary and Explanation The concentration of serum proteins in the CSF represents a steady state, the most important parameters being the diffusion between blood and CSF (permeability) and the individual flow rate of the CSF. Age-dependent variations also play a role. Besides these physiological variables, inflammatory processes cause an increase in the levels of serum proteins in the CSF. Furthermore, immunoglobulins can be released into the CSF as a result of antibody synthesis within the central nervous system (CNS) 1, 2. Reliable CSF protein testing therefore requires the use of methods, which permit differentiation in terms of the portion of CSF proteins derived from the serum and the portion derived from intrathecal synthesis. Here, the most important diagnostic aid is provided by calculating suitable concentration ratios. In these evaluations, albumin is used as the reference protein for the blood/csf barrier function as it is synthesized exclusively in the liver. Even under pathological conditions the CSF albumin content originates solely from the blood. This means that the CSF/serum albumin ratio is a measure of the individual barrier function under both normal and pathological conditions. By using the Reiber and Felgenhauer quotient scheme for IgG, IgA and IgM it is possible to diagnose barrier function disorders and/or the presence of intrathecal immunoglobulin synthesis by reference to the CSF/ serum concentration ratio for albumin. A local synthesis of IgM within the CNS is most prominent in patients with neuroborreliosis or mumps-meningoencephalitis 1, 2. Principle of the Method Polystyrene particles coated with antibodies specific to human IgM are aggregated when mixed with samples containing human IgM. These aggregates scatter a beam of light passed through the sample. The intensity of the scattered light is proportional to the concentration of the relevant protein in the sample. The result is evaluated by comparison with a standard of known concentration. Reagents Materials provided N Latex IgM, Code No. OQAC N IgM Reagent, 3 vials for 2 ml each N IgM Standard (human), 3 vials for 1 ml each N IgM Control (human), 3 vials for 1 ml each N IgM Supplementary Reagent A, 3 vials with 1 ml each N IgM Supplementary Reagent B, 1 vial with 0.5 ml each Composition and Standardization N IgM Reagent consists of freeze-dried polystyrene particles coated with 0.03 g/l rabbit antihuman IgM. N IgM Standard (human) consists of a freeze-dried mixture of human sera. After reconstitution the standard contains the IgM concentration as indicated on the label. N IgM Control (human) consists of a freeze-dried mixture of human sera. After reconstitution the control contains the IgM concentration as indicated on the label. The concentration of N IgM Standard and N IgM Control has been calibrated against the reference preparation CRM 470 3, 4. N IgM Supplementary Reagent A consists of an aqueous solution of polyoxyethylene sorbitan monolaureate (1 g/l). N IgM Supplementary Reagent B consists of antiserum to human IgG from sheep (500 g/l) and human gamma globulin (50 g/l). Preservative N IgM Reagent, N IgM Standard, N IgM Control after reconstitution as well as N IgM Supplementary Reagents: sodium azide < 1 g/l. Warnings and Precautions 1. For in vitro diagnostic use. 2. Reagents containing sodium azide must be handled with due caution: Do not ingest or allow to contact skin or mucous membranes. Sodium azide can form explosive azides when contacting heavy metals such as copper or lead. 3. Each individual blood donation for use in the manufacture of the N IgM Reagent, N IgM Standard (human), N IgM Control (human) and N IgM Supplementary Reagent B was tested for HBsAg, anti- HCV, anti-hiv1 and anti-hiv2 by FDA required testing. Only donations with negative findings are used for manufacture. Nevertheless, since absence of infectious agents cannot be proven, all samples (e.g. patient samples) and products (e. g. standard and control sera) obtained from human blood should always be handled with due care, observing the precautions recommended for biohazardous material 5. Preparation of Reagents N IgM Reagent: Resuspend the lyophilized content of a vial with 2.0 ml distilled water and allow to stand for 15 minutes before use. Shake carefully to mix before the first use. N IgM Standard (human): Dissolve the lyophilized content of a vial in 1 ml distilled water. Shake carefully to mix. The standard is ready for use 15 minutes after reconstitution. N IgM Control (human): Dissolve the lyophilized content of a vial in 1 ml distilled water. Shake carefully to mix. The control is ready for use 15 minutes after reconstitution. N IgM Supplementary Reagents: Pipette 25 µl N IgM Supplementary Reagent B into one vial of N IgM Supplementary Reagent A and mix gently. Storage and Stability Shelf life at +2 to +8 C: see expiry date on label; Stability once opened: 4 weeks (reconstituted N IgM Reagent, reconstituted N IgM Standard, reconstituted N IgM Control and mixture of the N IgM Supplementary Reagents), if stored at +2 to +8 C securely capped immediately after each use. Do not freeze. Standards and/or control sera which have become turbid must not be used. On-board Stability: On-board stability of N IgM Reagent and the mixture of N IgM Supplementary Reagent may vary, depending on BN* System used and laboratory conditions. The reagents should not be left open on the BN* 100 or BN* II System, but stored at +2 to +8 C securely capped immediately after use. Further details are enclosed in the BN ProSpec System Instruction Manual. On-board stability of the N IgM Control on the BN ProSpec System is stated in the Instruction Manual of the system. Materials required but not provided BN* System N/T Protein Control LC (optional), Code No. OQLW N Diluent, Code No. OUMT BN* II Evaporation Stoppers (optional), Code No. OVLE Additional materials and supplies as described in your BN* System Instruction Manual. OQAC G11 E0541 (738) Specimens Suitable samples are human CSF and paired CSF/serum, as fresh as possible (stored for no more than 8 days at +2 to +8 C) or stored frozen at below -20 C for up to 6 months 6. CSF and serum pairs should be drawn simultaneously. Each CSF sample must be centrifuged prior to testing. Serum samples must be completely coagulated and, after centrifugation, must not contain any particles or traces of fibrin. Lipemic serum samples must be clarified by centrifugation (10 minutes at approximately 15,000 x g) prior to testing. Procedure Notes 1. Consult your BN* System Instruction Manual for details regarding operation of the instrument. 2. Only components of testkits displaying the same lot number may be used together. 3. The lyophilized reagents must not be used until properly reconstituted (at least 15 minutes after the addition of distilled water). 4. Allow reagents and samples to equilibrate to room temperature (+15 to +25 C) before use on a BN* 100 System. No room temperature equilibration is required with a BN* II or BN ProSpec System, reagents and samples stored at +2 to +8 C can be used immediately. 5. On a BN* 100 System, samples should be run at approximately the same ambient temperature (maximum 2 C deviation) as the measurements used for recording the reference curve. Assay Protocol for BN* Systems The assay protocol for CSF and serum is given in the BN* System Instruction Manual and software of the instrument. For serum samples the initial sample dilution has to be selected manually, the remaining steps are performed automatically by the system. Establishment of the Reference Curve Reference curves are constructed by multi-point calibration. Serial dilutions of the N IgM Standard are automatically prepared by the instrument using N Diluent. The standard dilutions are to be used within 4 hours. The analytical value is given on the respective vial label. For the BN ProSpec System a lotdata CD (Code No. OVLP) can be used to enter the analytical value. The reference curve is valid for one week and can be used beyond this period, as long as controls with corresponding method-dependent target values, e. g., N IgM Control or N/T Protein Control LC, is reproduced within the respective confidence interval. The reference curve can be used for IgM determination in CSF as well as in serum. If a different lot of reagent is used, a new reference curve must be recorded. The exact measuring range depends upon the concentration of the protein in each lot of N IgM Standard. For typical figures refer to the respective BN* System Instruction Manual. Assay of Specimens CSF samples are analyzed undiluted. For serum samples a 1:2,000 dilution must be selected. The diluted samples must be measured within 4 hours. If the results obtained are outside the measuring range, the assay can be repeated using a higher or lower (only for serum samples, respectively) dilution of the sample; for IgM determinations in serum a minimum sample dilution of 1:400 is allowed. Refer to your BN* System Instruction Manual for information on repeat measurements using other dilutions. For calculation of the IgM CSF/serum ratio it is recommended also to perform the IgM determination in serum with N Latex IgM and to analyze these samples in the same run as the CSF samples. Internal Quality Control Assay N IgM Control or N/T Protein Control LC after each establishment of a reference curve, the first use of a reagent vial as well as with each run of samples. The controls are to be assayed and evaluated as for patient samples. The assigned value of the N IgM Control is printed on its vial label. The confidence range is the assigned value ±20%. The assigned value and the confidence range of the N/T Protein Control LC are listed in the respective Table of Assigned Values. For the BN ProSpec System a lot-data CD (code no. OVLP) can be used to enter the assigned values. The stated assigned values are intended for use as an assayed intralaboratory quality control for assessment of precision and analytical deviation. If used for precision control, the user should establish the target concentration and confidence limits during a preliminary phase. If a result of the controls is outside the confidence interval, the determination must be repeated. If the repeated determination confirms the deviation, a new reference curve should be established. Do not release patient results until the cause of the deviation has been identified and corrected. Results The results are evaluated automatically by means of a logit-log function. Limitations of the Procedure No interference was detected for concentrations of triglycerides up to 20 g/l, bilirubin at 600 mg/l, and free hemoglobin at 10 g/l. Turbidity and particles in the samples may interfere with the determination. Therefore, samples containing particles must be centrifuged prior to testing. Lipemic specimens, which cannot be clarified by centrifugation (10 minutes at approximately 15,000 x g) must not be used. N Latex IgM has been designed to minimize antigen excess in the initial sample dilutions. However, it cannot be completely eliminated and in rare cases very high IgM concentrations may produce falsely-low results. Especially monoclonal immunoglobulins may show reactivity different from the polyclonal standard, which in isolated cases may lead to artificially decreased or non-linear results. A check of IgM results in CSF should be performed by means of ratio diagrams 1, 2. In case of questionable results, the determinations should be repeated using the next higher sample dilution. If on a BN* 100 or BN* II Sytem CSF tests are preceded by tests on samples containing very high levels of IgM (e.g. from Waldenström s macroglobulinemia) the results obtained for IgM in CSF may be falsely high under unfavorable conditions (e.g. frequently used cuvettes). Therefore, where possible, determinations of IgM in CSF should be run before serum determinations. Results of this test should always be interpreted in conjunction with the patient s medical history, clinical presentation and other findings. Due to matrix effects, inter-laboratory survey samples and control samples may yield results that differ from those obtained with other methods. It may therefore be necessary to assess these results in relation to method-specific target values. Reference Intervals Based on 220 patients from Central Europe with normal albumin CSF/serum ratio and with no evidence of an inflammatory process, an upper limit of the reference range (95 th percentile) for IgM in CSF of 1.3 mg/l (7, after conversion to CRM 470) was obtained. This value is intended only for orientation. Reference intervals in the strict sense exist only for the CSF/serum ratios in dependence from the albumin CSF/serum ratio 1, 2. Nevertheless, each facility should determine its own reference intervals since values may vary depending on the population studied. Specific Performance Characteristics Assay Range and Sensitivity The N Latex IgM kit is designed to measure IgM concentrations within a range of approximately 0.13 to 4.2 mg/l for neat samples in case of CSF, and within a range of approximately 0.27 to 8.6 g/l for a sample dilution of 1:2,000 in case of serum. The analytical sensitivity is given by the lower limit of the reference curve and depends therefore on the concentration of the protein in N IgM Standard. A typical detection limit for IgM in CSF is 0.13 mg/l. Linearity A linearity study with a dilution series of a CSF pool with decreasing concentrations between 3.64 and 0.15 mg/l resulted in a slope of (r = 0.999) and a mean recovery of 94%. A linearity study with a dilution series of a serum pool with decreasing concentrations between 8.2 and 0.34 g/l resulted in a slope of (r = 1.0) and a mean recovery of 103%. OQAC G11 E0541 (738) S/R 1

2 Specificity No cross-reactivity of the applied antibodies is known. Precision Precision was determined by using N Latex IgM to measure various concentrations of IgM in both serum and CSF and the coefficients of variation (CV) calculated. Precision (n= 40) Type of Specimen mean value within run between run Total CSF assay (mg/l) CV (%) CV (%) CV (%) Control CSF Pool CSF Pool Serum assay (g/l) CV (%) CV (%) CV (%) Serum sample Serum sample Serum sample Method Comparison The N Latex IgM assay was compared to a commercially available immunonephelometric assay by evaluating 50 CSF samples ranging from 0.19 to 5.5 mg/l and 50 paired serum samples ranging from 0.13 to 2.4 g/l. Regression analysis of the results yielded the following equations: Method Comparison Studies Assay Sample n Slope Intercept Correlation Type Coefficient N Latex IgM CSF 24** mg/l Serum g/l CSF/Serum Ratio 24** ** Samples within the measuring range for both methods Note The values cited for specific performance characteristics of the assay represedarnt typical values and are not to be regarded as specifications for N Latex IgM. Bibliography 1. Reiber H, Peter JB. Cerebrospinal fluid analysis: disease-related data patterns and evaluation programs. J Neurol Sci 2001;184: Felgenhauer K. Laboratory diagnosis of neurological diseases. In: Thomas L (Ed.) Clinical Laboratory Diagnostics, TH-Books, Frankfurt/Main 1998; Baudner S, Bienvenu J, Blirup-Jensen S, et al. The certification of a matrix reference material for immunochemical measurement of 14 human serum proteins. CRM 470. Brussels: Community Bureau of Reference, Commision of the European Communities. BCR Information, Reference Materials report EUR EN (ISSN ): Whicher JT, Ritchie RF, Johnson AM, et al. New international reference preparation for proteins in human serum (RPPHS). Clin Chem 1994; 40: U.S. Department of Health and Human Services CDC, Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, HHS Publication (CDC) ; 1999; Section II; Tietz NW, ed. Clinical guide to laboratory tests, 3rd ed. Philadelphia: W.B. Saunders Company, 1995: Reiber H. Die diagnostische Bedeutung neuroimmunologischer Reaktionsmuster im Liquor cerebrospinalis. Lab med 1995; 19: BN ProSpec is a registered trademark of in the USA, Germany and other countries. * BN is a trademark of in the USA. USA Distributor: Dade Behring Inc. Newark, DE U.S.A. Edition February 2004 N Latex IgM Anwendungsbereich In vitro Diagnostika zur quantitativen Bestimmung von IgM in humanem Liquor cerebrospinalis und Liquor/Serum-Paaren mittels partikelverstärkter Immun-Nephelometrie mit den BN* Systemen. Die Bestimmung von IgM erlaubt Rückschlüsse auf das Immunsystem des Patienten. Diagnostische Bedeutung Die Liquorkonzentration von Serumproteinen repräsentiert ein Fließgleichgewicht, dessen wichtigste Parameter die Diffusion zwischen Blut und Liquor (Permeabilität) und die individuelle Liquorflussgeschwindigkeit sind. Zusätzlich bestehen altersabhängige Variationen. Über diese Variablen hinaus gelangen beim gesunden Menschen im Falle eines entzündlichen Prozesses vermehrt Serumproteine in den Liquor. Darüber hinaus können Immunglobuline, die lokal im Zentralnervensystem (ZNS) synthetisiert wurden, in den Liquor abgegeben werden 1, 2. Zur zuverlässigen Liquorproteindiagnostik müssen Verfahren eingesetzt werden, die unter Berücksichtigung individueller Variabler eine Differenzierung von Liquorproteinen nach Anteilen aus dem Serum und Anteilen aus intrathekaler Synthese zulassen. Wichtigstes Hilfsmittel ist die Bildung geeigneter Konzentrationsquotienten. Albumin dient in diesen Auswertungen als Referenzprotein für die Blut/Liquor-Schrankenfunktion, da es nur in der Leber synthetisiert wird. Auch unter pathologischen Umständen stammt der Liquor- Albumingehalt ausschließlich aus dem Blut, d. h. der Liquor/Serum-Albuminquotient ist ein Maß für die individuelle Schrankenfunktion im normalen wie im pathologischen Fall. Durch Anwendung des Quotientenschemas für IgG, IgM und IgA nach Reiber und Felgenhauer ist es unter Bezug auf den Liquor/Serum-Quotienten für Albumin möglich, Schrankenfunktionsstörungen und/oder das Vorliegen einer lokalen Immunglobulinsynthese im ZNS zu ermitteln. Eine lokale IgM-Synthese im ZNS erfolgt besonders bei Neuroborreliose und Mumps-Meningoenzephalitis 1, 2. Prinzip der Methode Polystyrol-Partikel, die mit spezifischen Antikörpern gegen humanes IgM beladen sind, bilden bei Mischung mit IgM enthaltenden Proben Aggregate, an denen eingestrahltes Licht gestreut wird. Die Intensität des Streulichts ist abhängig von der Konzentration des jeweiligen Proteins in der Probe. Die Auswertung erfolgt durch Vergleich mit einem Standard bekannter Konzentration. Reagenzien Inhalt der Handelspackung N Latex IgM, Bestell-Nr. OQAC N IgM-Reagenz, 3 Flaschen für je 2 ml N IgM-Standard (human), 3 Flaschen für je 1 ml N IgM-Kontrolle (human), 3 Flaschen für je 1 ml N IgM-Zusatzreagenz A, 3 Flaschen mit je 1 ml N IgM-Zusatzreagenz B, 1 Flasche mit 0,5 ml Zusammensetzung und Standardisierung N IgM-Reagenz besteht aus einem Lyophilisat von Polystyrol-Partikeln, die mit 0,03 g/l Anti-Human-IgM vom Kaninchen beladen sind. N IgM-Standard (human) besteht aus einer Mischung von Human-Sera. Die IgM-Konzentration nach Rekonstitution des Standards ist auf dem Flaschenetikett angegeben. N IgM-Kontrolle (human) besteht aus einer Mischung von Human-Sera. Die IgM-Konzentration nach Rekonstitution der Kontrolle ist auf dem Flaschenetikett angegeben. Die Konzentration von N IgM-Standard und N IgM-Kontrolle wurde unter Bezug auf die Referenzpräparation CRM 470 3, 4 kalibriert. N IgM-Zusatzreagenz A besteht aus einer wässrigen Lösung von Polyethylenglycolsorbitanmonolaureat (1 g/l). N IgM-Zusatzreagenz B besteht aus Antiserum gegen Human-IgG vom Schaf (500 g/l) und humanes Gammaglobulin (50 g/l). Konservierungsmittel: N IgM-Reagenz, N IgM-Standard und N IgM-Kontrolle nach Rekonstitution sowie N IgM-Zusatzreagenzien: Natriumazid < 1 g/l Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen 1. Nur zur in vitro diagnostischen Anwendung. 2. Beim Umgang mit Natriumazid-haltigen in vitro Diagnostika ist zu beachten: Verschlucken und Berührung mit Haut oder Schleimhäuten vermeiden. Natriumazid kann mit Schwermetallen, wie Kupfer oder Blei, explosive Azide bilden. 3. Jede individuelle Blutspende, die zur Herstellung von N IgM-Reagenz, N IgM-Standard (human), N IgM-Kontrolle (human) und N IgM-Zusatzreagenz B vorgesehen war, wurde auf HBsAg, Anti-HCV, Anti-HIV1 und Anti-HIV2 untersucht. Für die Herstellung wurden nur Spenden mit negativem Befund verwendet. Unabhängig davon sollten alle aus menschlichem Blut gewonnenen Proben (z.b. Patientenproben) und Produkte (z.b. Standard- und Kontrollseren) wegen nie völlig auszuschließender Gefährdung durch Krankheitserreger mit angemessener Sorgfalt unter Einhaltung der bei Biogefährdung empfohlenen Sicherheitsmaßnahmen gehandhabt werden 5. Vorbereitung der Reagenzien N IgM-Reagenz: Der lyophilisierte Inhalt einer Flasche ist mit 2,0 ml destilliertem Wasser zu rekonstituieren. Das Reagenz ist 15 min nach Rekonstitution einsetzbar. Es ist vor dem ersten Gebrauch behutsam zu durchmischen. N IgM-Standard (human): Der lyophilisierte Inhalt einer Flasche ist mit 1,0 ml destilliertem Wasser zu lösen. Die Lösung ist behutsam zu durchmischen. 15 min nach Rekonstitution ist der Standard gebrauchsfertig. N IgM-Kontrolle (human): Der lyophilisierte Inhalt einer Flasche ist mit 1,0 ml destilliertem Wasser zu lösen. Die Lösung ist behutsam zu durchmischen.15 min nach Rekonstitution ist die Kontrolle gebrauchsfertig. N IgM-Zusatzreagenzien: In eine Flasche N IgM-Zusatzreagenz A sind 25 µl N IgM-Zusatzreagenz B zu pipettieren und durch leichtes Schütteln zu mischen. Haltbarkeit und Lagerungsbedingungen Lagerung bei +2 bis +8 C: das Verfallsdatum ist auf dem Etikett angegeben; Stabilität nach Rekonstitution: 4 Wochen (rekonstituiertes N IgM-Reagenz, rekonstituierter N IgM-Standard und rekonstituierte N IgM-Kontrolle sowie die Mischung der N IgM-Zusatzreagenzien), sofern unmittelbar nach Gebrauch wieder dicht verschlossen bei +2 bis +8 C gelagert. Die Reagenzien dürfen nicht eingefroren werden. Trüb gewordene Standards oder Kontrollen sollen nicht mehr verwendet werden. Stabilität auf den BN* Systemen: Die "on-board" Stabilität von N IgM-Reagenz und N IgM-Zusatzreagenz hängt von dem verwendeten BN* System sowie den Laborbedingungen ab. Die Reagenzien sollen nicht offen auf dem BN* 100 oder BN* II System verbleiben, sondern unmittelbar nach Gebrauch wieder dicht verschlossen bei +2 bis +8 C gelagert werden. Weiterführende Angaben sind in der Bedienungsanleitung des BN ProSpec Systems enthalten. Die "on-board" Stabilität der N IgM-Kontrolle auf dem BN ProSpec System ist in der Bedienungsanleitung des Systems angegeben. Zusätzlich benötigte Materialien BN* System N/T Protein-Kontrolle LC (wahlweise), Bestell-Nr. OQLW N Diluens, Bestell-Nr. OUMT BN* II Evaporation Stoppers (wahlweise), Bestell-Nr. OVLE Verbrauchsmaterial und Ausrüstung wie in den Bedienungsanleitungen der BN* Systeme beschrieben. Untersuchungsmaterial Zur Messung sollen möglichst frische (max. 8 Tage bei +2 bis +8 C aufbewahrte) oder max. 6 Monate bei -20 C gelagerte humane Liquorproben oder Liquor/Serum-Paare eingesetzt werden 6, wobei Liquor- und Serumprobe möglichst zeitgleich abgenommen werden sollten. Jede Liquorprobe ist vor der Analyse zu zentrifugieren. Serumproben müssen vollständig geronnen sein und dürfen nach Zentrifugation keine Partikel oder Spuren von Fibrin enthalten. Lipämische Serumproben müssen vor der Bestimmung durch Zentrifugation (10 min bei ca x g) geklärt werden. Testdurchführung Hinweise 1. Einzelheiten zur Bedienung der BN* Systeme sind der entsprechenden Bedienungsanleitung zu entnehmen. 2. Nur Bestandteile von Testkits mit gleicher Chargenbezeichnung dürfen miteinander kombiniert werden. 3. Die angegebene Rekonstitutionszeit lyophilisierter Reagenzien (mind. 15 min nach Zugabe von destilliertem Wasser) ist einzuhalten. 4. Reagenzien und Proben sollen vor der Messung am BN* 100 System Raumtemperatur (+15 bis +25 C) erreicht haben. Am BN* II und BN ProSpec System können bei +2 bis +8 C gelagerte Reagenzien und Proben direkt eingesetzt werden. 5. Am BN* 100 System soll die Messung von Proben bei der Umgebungstemperatur durchgeführt werden, die auch bei der Aufnahme der Referenzkurve herrschte (max. Abweichung 2 C). Assay-Protokoll an den BN* Systemen Das Assay-Protokoll für Liquor und Serum ist in der Bedienungsanleitung sowie der Software des jeweiligen Gerätes enthalten. Für Serumproben ist die Probenverdünnung manuell anzuwählen, alle übrigen Schritte werden automatisch vom System durchgeführt. Erstellung der Referenzkurve Referenzkurven werden über Mehrpunktkalibrierung aufgenommen. Für die Erstellung werden automatisch Verdünnungsreihen des N IgM-Standards mit N-Diluens hergestellt. Die Standard-Verdünnungen müssen innerhalb von 4 Stunden verwendet werden. Der Sollwert ist auf dem entsprechenden Flaschenetikett angegeben. Am BN ProSpec System kann er per Chargenangaben-CD (Bestell-Nr. OVLP) eingelesen werden. Die Referenzkurve ist eine Woche lang gültig. Sie kann über diesen Zeitraum hinaus verwendet werden, solange Kontrollen mit verfahrensabhängigen Sollwerten wie z. B. die N IgM-Kontrolle oder die N/T Protein-Kontrolle LC, innerhalb des jeweiligen Vertrauensbereichs wiedergefunden werden. Die Referenzkurve kann sowohl für die IgM-Bestimmung im Liquor als auch im Serum verwendet werden. Bei Verwendung einer anderen Reagenzcharge muß eine neue Referenzkurve aufgenommen werden. Die exakten Messbereiche hängen von der Proteinkonzentration jeder N IgM-Standard Charge ab. Typische Messbereiche sind in der jeweiligen BN* System Bedienungsanleitung angegeben. OQAC G11 E0541 (738) S/R 2

3 Messung der Patientenproben Liquorproben werden unverdünnt analysiert. Für Serumproben muss eine 1:2.000 Verdünnung angewählt werden. Die Verdünnungen müssen innerhalb von 4 Stunden gemessen werden. Bei Messwerten, die außerhalb des Messbereichs liegen, kann die Messung aus einer höheren oder niedrigeren (nur Serumproben) Probenverdünnung wiederholt werden, wobei für IgM-Bestimmungen im Serum als minimale Probenverdünnung 1:400 zulässig ist. Wiederholungsmessungen aus weiteren Probenverdünnungen sind in den Bedienungsanleitungen der BN* Systeme beschrieben. Zur Bildung des IgM-Liquor/Serum-Quotienten wird empfohlen, auch die Bestimmung von IgM im Serum mit N Latex IgM durchzuführen und die Seren im selben Analysengang wie die Liquorproben zu analysieren. Interne Qualitätskontrolle Die N IgM-Kontrolle oder N/T Protein-Kontrolle LC sollte nach jeder Erstellung einer Referenzkurve, nach erstmaliger Verwendung einer Reagenzabfüllung sowie bei jeder Serie von Proben eingesetzt werden. Die Kontrollen werden im Ansatz und bei der Auswertung wie Patientenproben behandelt. Der Sollwert der N IgM-Kontrolle ist auf dem Flaschenetikett angegeben. Als Vertrauensbereich gilt der Sollwert ± 20%. Der Sollwert sowie der Vertrauensbereich der N/T Protein-Kontrolle LC ist der entsprechenden Tabelle der Sollwerte zu entnehmen. Am BN ProSpec System können die Sollwerte per Chargenangaben-CD (Bestell-Nr. OVLP) eingelesen werden. Die angegebenen Sollwerte dienen zur Qualitätskontrolle innerhalb eines Labors zur Bewertung der Präzision und analytischen Abweichung. Bei der Verwendung als Präzisionskontrolle sollten in einer Vorperiode Kontrollwert und Kontrollgrenzen vom Anwender ermittelt werden. Wenn das Ergebnis der Kontrollmessungen außerhalb des Vertrauensbereichs liegt, ist die Kontrollbestimmung zu wiederholen. Wird die Abweichung durch die Wiederholungsmessung bestätigt, sollte eine neue Referenzkurve aufgenommen werden. Patientenergebnisse dürfen erst dann wieder freigegeben werden, wenn die Ursache der Abweichung identifiziert und behoben wurde. Berechnung der Analysenergebnisse Die Auswertung erfolgt automatisch mittels einer Logit-Log-Funktion. Einschränkungen der Testdurchführung Folgende Substanzen führten zu keiner Interferenz im N Latex IgM Assay: Triglyceride bis zu 20 g/l, Bilirubin bis zu 600 mg/l und freies Hämoglobin bis zu 10 g/l. Trübungen und Partikel in den Proben können die Bestimmung stören. Deshalb müssen Proben, die Partikel enthalten, vor der Bestimmung zentrifugiert werden. Lipämische Proben, die durch Zentrifugation (10 min bei ca x g) nicht zu klären sind, sind von der Bestimmung auszuschließen. N Latex IgM ist so ausgelegt, dass ein Antigenüberschuss in der initialen Probenverdünnung minimiert wird. Dennoch kann er nicht ganz ausgeschlossen werden und in seltenen Fällen können sehr hohe IgM-Konzentrationen möglicherweise zu zu niedrigen Resultaten führen. Insbesondere monoklonale Immunglobuline können abweichend vom polyklonalen Standard reagiern, was in einzelnen Fällen zu falsch-niedrigen oder nicht-linearen Resultaten führen kann. IgM-Resultate im Liquor sollten anhand der Auswertung im Quotientendiagramm 1, 2 überprüft werden. Bei Unplausibilitäten sollte die Bestimmung von IgM im Liquor aus einer höheren Probenverdünnung wiederholt werden. Bei vorangegangener Bestimmung von Serum- bzw. Plasmaproben mit stark erhöhtem IgM (z. B. Makroglobulinämie Waldenström) können am BN* 100 und BN* II System unter ungünstigen Bedingungen (z. B. häufig benutzte Küvetten) im Liquor falsch zu hohe IgM-Konzentrationen gemessen werden. Liquor-IgM-Bestimmungen sollten deshalb möglichst vor Serum-Bestimmungen durchgeführt werden. Resultate dieses Tests sollten stets in Verbindung mit der Vorgeschichte des Patienten, dem klinischen Bild und anderen Untersuchungsergebnissen interpretiert werden. Aufgrund von Matrixeffekten können für Kontroll- und Ringversuchsproben unterschiedliche Ergebnisse in Abhängigkeit von der verwendeten Bestimmungsmethode resultieren. Es kann daher notwendig sein, die Bewertung dieser Ergebnisse an methoden-spezifischen Zielwerten vorzunehmen. Referenzbereiche Bei 220 Patienten aus Mitteleuropa mit normalem Albuminquotienten und ohne Hinweis auf einen entzündlichen Prozess wurde eine Referenzbereichsobergrenze (95. Perzentile) für IgM im Liquor auf 1,3 mg/l erhalten (7, nach Umrechnung auf CRM 470). Dieser Wert dient nur zur Orientierung. Referenzbereiche im strengen Sinn gibt es nur für die Liquor/Serum-Quotienten in Abhängigkeit vom Albumin Liquor-Serum-Quotienten 1, 2. Darüber hinaus sollte jedes Labor seine eigenen Referenzbereiche ermitteln, da diese vielen Einflußgrößen unterliegen, die für jedes untersuchte Kollektiv verschieden sein können. Leistungsmerkmale der Bestimmung Messbereich und Empfindlichkeit Der Messbereich des N Latex IgM Assays umfasst etwa 0,13 bis 4,2 mg/l bei unverdünnten Proben (Liquor), bzw. etwa 0,27 bis 8,6 g/l bei einer Probenverdünnung von 1:2.000 (Serum). Die Empfindlichkeit der Bestimmung wird durch die untere Grenze der Referenzkurve festgelegt und hängt damit von der Konzentration des Proteins im N IgM-Standard ab. Eine typische Bestimmungsgrenze für IgM im Liquor beträgt 0,13 mg/l. Linearität Eine Linearitätsstudie mit einer Verdünnungsreihe eines Liquor-Pools mit abnehmender Konzentration zwischen 3,64 und 0,15 mg/l resultierte in einer Steigung von 1,000 (r = 0,999) und einer mittleren Wiederfindung von 94%. Eine Linearitätsstudie mit einer Verdünnungsreihe eines Serum-Pools mit abnehmender Konzentration zwischen 8,2 und 0,34 g/l resultierte in einer Steigung von 0,996 (r = 1,0) und einer mittleren Wiederfindung von 103%. Spezifität Es sind keine Kreuzreaktionen der verwendeten Antikörper bekannt. Präzision Die Präzision von N Latex IgM wurde ermittelt, indem Liquor- und Serumproben mit unterschiedlicher IgM-Konzentration bestimmt und die Variationskoeffizienten (VK) berechnet wurden: Präzision (n= 40) Probenart Mittelwert Intra-Assay Inter-Assay Total Liquor Assay (mg/l) VK (%) VK (%) VK (%) Kontrolle 2,5 2,1 1,5 2,4 Liquor Pool 1 0,56 5,5 2,3 5,3 Liquor Pool 2 3,0 2,0 1,9 2,6 Serum Assay (g/l) VK (%) VK (%) VK (%) Serum Probe 1 0,81 4,9 2,7 5,0 Serum Probe 2 1,5 3,8 2,3 4,0 Serum Probe 3 7,7 2,4 2,0 3,0 Methodenvergleich N Latex IgM (y) wurde mit einem kommerziell erhältlichen immunnephelometrischen IgM Assay (x) durch Bestimmung von 50 Liquor/Serum-Probenpaaren im Bereich von 0,19 bis 5,5 mg/l (Liquor) und 0,13 bis 2,4 g/l (Serum) verglichen. Die Regressionsanalyse der Ergebnisse ergab die folgenden Gleichungen: Methodenvergleich Assay Probenart n Steigung Achsen- Korrelationsabschnitt Koeffizient N Latex IgM Liquor 24** 1,04-0,02 mg/l 0,995 Serum 50 0,91 +0,02 g/l 0,979 Liquor/Serum Quotient 24** 1,03-0,01 0,989 ** Proben innerhalb des Messbereichs beider Methoden Anmerkung: Die angegebenen Werte für die Leistungsmerkmale der Bestimmung stellen typische Ergebnisse dar und sind nicht als Spezifikationen für N Latex IgM anzusehen. OQAC G11 E0541 (738) S/R 3 Literatur Siehe englische Packungsbeilage. BN ProSpec ist eine eingetragene Marke der in den USA, Deutschland und anderen Ländern. * BN ist eine Marke der in den USA. N Latex IgM Ausgabe Februar 2004 Domaine d utilisation Réactifs in vitro pour le dosage quantitatif des IgM dans le liquide céphalo-rachidien humain ou des paires d échantillons LCR/sérum, par immunonéphélémétrie sensibilisée avec des particules, à l aide des systèmes BN*. Le dosage des IgM permet de tirer des conclusions sur le système immunitaire du patient. Intérêt diagnostique La concentration en protéines sériques du liquide céphalo-rachidien représente un équilibre dynamique, dont les principaux paramètres sont la diffusion entre le sang et le LCR (perméabilité), et la vitesse individuelle du flux du LCR. D autres variations sont fonction de l âge. Outre ces variables que l on trouve chez le sujet sain, on observe une augmentation des protéines sériques dans le LCR en cas de processus inflammatoire. Par ailleurs, des immunoglobulines qui ont été localement synthétisées dans le système nerveux central (SNC), peuvent être retrouvées dans le LCR 1,2. Pour une exploration fiable des protéines dans le LCR, il faut utiliser des techniques qui permettent, en tenant compte des variables individuelles, de différencier les protéines du LCR qui proviennent du sérum de celles qui sont synthétisées au niveau intrathécal. Le point le plus important est de pouvoir obtenir des rapports de concentrations appropriés. Dans ces analyses, l albumine sert de protéine de référence pour la fonction de barrière sang/lcr, dans la mesure où elle n est synthétisée que dans le foie. Même dans des conditions pathologiques, le taux d albumine dans le LCR ne provient qu exclusivement du sang, ce qui signifie que le rapport d albumine LCR/sérum sert de référence pour évaluer la fonction de barrière du patient, aussi bien en situation normale qu en situation pathologique. En utilisant le schéma des rapports pour IgG, IgM et IgA selon Reiber et Felgenhauer, il est possible, en prenant comme référence le rapport LCR/sérum de l albumine, de révéler des troubles de la fonction barrière et/ou la présence d une synthèse locale d immunoglobulines dans le SNC. La synthèse d IgM locales dans le SNC est surtout observée en cas de neuroborréliose ou de méningo-encéphalite ourlienne 1,2. Principe de la méthode Les particules de polystyrène recouvertes d anticorps anti-igm humaine spécifiques s agglutinent lorsqu elles sont mélangées à un échantillon de patient contenant des IgM. L intensité de la lumière dispersée est proportionnelle à la concentration d IgM de l échantillon. Celle-ci est mesurée par rapport à la concentration connue d un standard. Réactifs Conditionnement N Latex IgM, code OPAC N IgM Réactif, 3 flacons pour 2 ml N IgM Standard (humain), 3 flacons pour 1 ml N IgM Contrôle (humain), 3 flacons pour 1 ml N IgM Réactif complémentaire A, 3 flacons pour 1 ml N IgM Réactif complémentaire B, 1 flacon pour 0,5 ml Composition et standardisation N IgM Réactif est composé d un lyophilisat de particules de polystyrène recouvertes de 0,03 g/l d anticorps de lapin anti-igm humaine. N IgM Standard (humain) est composé d un mélange de sérums humains. La concentration en IgM après reconstitution est indiquée sur l étiquette du flacon. N IgM Contrôle (humain) est composé d un mélange de sérums humains. La concentration en IgM après reconstitution est indiquée sur l étiquette du flacon. Les concentrations du N IgM Standard et du N IgM Contrôle ont été étalonnées d après la préparation de référence CRM 470 3,4. N IgM Réactif complémentaire A est composé d une solution aqueuse de polyéthylène glycol monolauréate de sorbitan (1 g/l). N IgM Réactif complémentaire B est composé d'un antisérum de mouton anti-igg humaine (500 g/l) et de gammaglobuline humaine (50 g/l). Agent de conservation : N IgM Réactif, N IgM Standard et N IgM Contrôle après reconstitués, ainsi que N IgM Réactifs complémentaires : azide de sodium < 1 g/l. Mises en garde et précautions d emploi 1. Réactifs réservés à un usage de diagnostic in vitro. 2. Les réactifs in vitro contenant de l azide de sodium doivent être manipulés avec précaution : ne pas avaler et éviter tout contact avec la peau et les muqueuses. L azide de sodium peut devenir explosif au contact de métaux lourds comme le cuivre ou le plomb. 3. Tout don de sang individuel prévu pour la préparation du N IgM Réactif, du N IgM Standard (humain) ou du N IgM Contrôle (humain) a été testé vis-à-vis de l anticorps AgHBs, de l anticorps anti-vhc, de l anticorps anti-vih1 et de l anticorps anti-vih2. Seuls les dons trouvés négatifs ont été utilisés. Néanmoins, toutes les préparations obtenues à partir de sang humain (echantillons de patients) ou produit (par ex. sérum standard ou de contrôle) doivent être manipulées avec les précautions nécessaires en cas de risque biologique, dans la mesure où l on ne peut exclure totalement un risque d infection 5. Préparation des réactifs N IgM Réactif : reconstituer le contenu lyophilisé du flacon avec 2,0 ml d eau distillée. Le Réactif est prêt à l emploi 15 min plus tard. L agiter avec précaution avant son premier emploi. N IgM Standard (humain) : reconstituer le contenu lyophilisé du flacon avec 1,0 ml d eau distillée. Bien mélanger la solution. Le Standard est prêt à l emploi 15 min plus tard. N IgM Contrôle (humain) : reconstituer le contenu lyophilisé du flacon avec 1,0 ml d eau distillée. Bien mélanger la solution. Le Contrôle est prêt à l emploi 15 min plus tard. N IgM Réactifs complémentaires : dans un flacon de N IgM Réactif complémentaire A, distribuer 25 µl de N IgM Réactif complémentaire B, et mélanger en agitant avec précaution. Stabilités et conditions de conservation Conservation à +2/+8 C : la date de péremption est indiquée sur l étiquette. Stabilité après reconstitution : 4 semaines (N IgM Réactif reconstitué, N IgM Standard reconstitué, N IgM Contrôle reconstitué, et mélange des N IgM Réactifs complémentaires), à condition de refermer les flacons immédiatement après emploi et de les replacer à +2/+8 C. Ne pas congeler les réactifs. Un Standard ou un Contrôle qui devient trouble ne doit plus être utilisé. Stabilité sur les systèmes BN* : La stabilité «on board» du N IgM Réactif et du N IgM Réactif complémentaire dépend du système BN* utilisé ainsi que des conditions d analyse du laboratoire. Ne pas laisser les réactifs ouverts sur le BN* 100 ni sur le BN* II, mais refermer les flacons immédiatement après emploi et les replacer à +2/+8 C. Pour plus de détails, se reporter au manuel d utilisation du système BN ProSpec. La stabilité «on board» du N IgM Contrôle sur le système BN ProSpec est indiquée dans le manuel d utilisation du système.

4 Matériel et autres réactifs nécessaires Système BN* N/T Contrôle Protéines LC (utilisation optionnelle), code OQLW N-Diluant, code OUMT BN* II Bouchons anti-évaporation (utilisation optionnelle), code OVLE Consommable et équipement selon les instructions des manuels d utilisation des systèmes BN*. Echantillons à tester Utiliser des échantillons de liquide céphalo-rachidien ou des paires LCR/sérum humains, de préférence frais (conservés 8 jours maximum à +2/+8 C), sinon conservés maximum 6 mois à -20 C 6. Si on utiliser des paires LCR/sérums, ils doivent dans la mesure du possible avoir été prélevés au même moment. Centrifuger chaque échantillon de LCR avant l analyse. Les échantillons sériques doivent être totalement coagulés et ne plus contenir aucune particule ni trace de fibrine après centrifugation. Les échantillons sériques lipémiques doivent être centrifugés (10 min à env g) avant le test. Réalisation du test Remarques 1. Pour plus de détails sur l utilisation des systèmes BN*, se reporter au manuel d utilisation de chaque système. 2. Seuls des réactifs provenant de coffrets portant le même numéro de lot peuvent être utilisés ensemble. 3. Les temps de reconstitution indiqués pour les réactifs lyophilisé (au moins 15 min après l addition de l eau distillée) doivent être respectés. 4. Porter réactifs et échantillons à la température ambiante (+15/+25 C) avant une analyse sur le système BN* 100. Sur les systèmes BN* II et BN ProSpec, ils peuvent être directement utilisés à +2/+8 C. 5. Sur le BN* 100, l analyse des échantillons de patients doit se faire dans les mêmes conditions d environnement que pour l établissement de la courbe d étalonnage (déviation maximale de 2 C). Protocole opératoire sur les systèmes BN* Le protocole opératoire pour LCR et sérum est indiqué dans le manuel d utilisation ainsi que dans le logiciel de chaque système. Pour les échantillons sériques, le choix de la dilution est manuel ; toutes les étapes ultérieures sont effectuées automatiquement par le système. Etablissement de la courbe d étalonnage La courbe d étalonnage est établie automatiquement selon une calibration en plusieurs points, à partir d une série de dilutions du N IgM Standard avec le N Diluant. Une fois préparées, les dilutions du standard doivent être utilisées dans les 4 heures. La valeur théorique est indiquée sur l étiquette du flacon. Sur le BN ProSpec, elle peut être lue à l aide du CD des données du lot (code OVLP). La courbe d étalonnage est valable 1 semaine, tant que le contrôle dont la valeur théorique est spécifique à la technique, par ex. le N IgM Contrôle ou le N/T Contrôle Protéines LC, est retrouvé à l intérieur de son domaine de confiance. La courbe d étalonnage est valable aussi bien pour le dosage des IgM dans le LCR que dans le sérum. Etablir une nouvelle courbe d étalonnage à chaque changement de lot de réactif. Le domaine de mesure exact dépend de la concentration en IgM de chaque lot de N IgM Standard. Des domaines de mesure types sont indiqués dans les manuels d utilisation des systèmes BN*. Mesure des échantillons de patients Les échantillons de LCR sont analysés non dilués. Pour les échantillons sériques, choisir une dilution au 1/2000. Les dilutions doivent être testées dans les 4 heures. Si on obtient des valeurs qui sortent du domaine de mesure, refaire le dosage à une dilution plus élevée ou plus basse des échantillons (uniquement pour les échantillons sériques). La dilution la plus basse possible pour le dosage des IgM dans le sérum est 1/400. Pour le retest des échantillons à d autres dilutions, se reporter aux manuels d utilisation des systèmes BN*. Pour obtenir les quotients d IgM LCR/sérum, il est recommandé d utiliser également le test N Latex IgM pour le dosage des IgM dans le sérum, et de tester sérum et LCR dans la même série d analyses. Contrôle de qualité interne Introduire le N IgM Contrôle ou le N/T Contrôle Protéines LC à chaque nouvelle courbe d étalonnage, à chaque changement de flacon de réactif, ainsi qu à chaque nouvelle série d échantillons. Traiter les contrôles comme des échantillons de patients, aussi bien dans le test que pour l exploitation des résultats. La valeur théorique du N IgM Contrôle est indiquée sur l étiquette du flacon. Le domaine de confiance correspond à la valeur théorique ± 20%. La valeur théorique ainsi que le domaine de confiance du N/T Contrôle Protéines LC sont indiqués dans le tableau des valeurs théoriques. Sur le BN ProSpec, les valeurs théoriques peuvent être lues à l aide du CD des données du lot (code OVLP). Les valeurs théoriques indiquées permettent à chaque laboratoire d effectuer un contrôle de qualité en déterminant la précision et la déviation analytique. Pour une utilisation comme contrôle de précision, le laboratoire devra préalablement déterminer une valeur de contrôle et des valeurs-limites de contrôle. Si la valeur du contrôle sort du domaine de confiance déterminé, le contrôle doit être recommencé. Si la déviation est confirmée, établir une nouvelle courbe d étalonnage. Les résultats des patients ne peuvent être rendus qu après avoir identifié et éliminé la cause de la déviation permettent à chaque laboratoire d effectuer un contrôle de qualité en déterminant la précision et la déviation analytique. Calcul des résultats d analyse L exploitation se fait automatiquement à l aide d une fonction log-logit. Limites du test Les substances suivantes ne provoquent aucune interférence avec le test N Latex IgM : triglycérides jusqu à 20 g/l, bilirubine jusqu à 600 mg/l, et hémoglobine libre jusqu à 10 g/l. Les échantillons troubles ou contenant des particules peuvent perturber le test. Aussi les échantillons contenant des particules doivent-ils être centrifugés avant le test. Les échantillons lipémiques qui ne peuvent être clarifiés par centrifugation (10 min à env x g) doivent être exclus du test. Le test N Latex IgM a été mis au point de façon à minimiser tout excès d antigène à la dilution initiale de l échantillon. Le phénomène ne peut cependant être totalement exclu, et dans des cas rares il est possible que des concentrations d IgM extrêmement élevées entraînent des résultats trop bas. Les immunoglobulines monoclonales en particulier peuvent réagir différemment du standard polyclonal, entraînant ainsi des résultats faussement bas ou non-linéaires. La plausibilité des résultats d IgM dans le LCR doit être vérifiée à l aide de l exploitation selon le diagramme du quotient 1,2. Si le résultat ne semble pas plausible, refaire le dosage des IgM dans le LCR à partir d une dilution plus élevée. Des analyses d IgM dans le LCR effectuées juste après des analyses d échantillons sériques ou plasmatiques à taux d IgM fortement augmenté (par ex. en cas de macroglobulinémie de Waldenström) peuvent, dans certaines conditions défavorables (par ex. utilisation de cuvettes déjà utilisées plusieurs fois), donner des concentrations d IgM augmentées à tort sur les systèmes BN* 100 et BN* II. Aussi les dosages sur LCR doivent-ils dans le mesure du possible être effectués avant ceux sur sérum. Les résultats de ce test doivent toujours être interprétés en rapport avec les antécédents médicaux du patient, les signes cliniques et autres constatations. Du fait d effets matriciels, les résultats obtenus dans le cadre de contrôles nationaux peuvent diverger selon la méthode de dosage utilisée. Il peut dans ces cas-là être nécessaire d évaluer les résultats selon des valeurs-cibles spécifiques à chaque méthode. Domaines de référence Sur un collectif de 220 patients originaires d Europe centrale, avec un quotient d albumine normal et sans indication d un processus inflammatoire, la valeur-limite supérieure du domaine de référence (95 ème percentile) pour les IgM dans le LCR a été trouvée à 1,3 mg/l (7, après conversion avec le CRM 470). Cette valeur n est qu indicative. Il n existe un domaine de référence au sens strict du terme que pour le quotient LCR/sérum, par rapport au quotient d albumine LCR/sérum 1,2. Néanmoins, chaque laboratoire doit déterminer son propre domaine de référence dans la mesure où celui-ci peut varier considérablement en fonction du collectif et des échantillons étudiés. Caractéristiques du dosage Domaine de mesure et sensibilité Le domaine de mesure du test N Latex IgM s étend de 0,13 à 4,2 mg/l pour des échantillons non dilué (LCR), et d env. 0,27 à 8,6 g/l pour une dilution au 1/2000 de l échantillon (sérum). OQAC G11 E0541 (738) S/R 4 La sensibilité du dosage est déterminée par la limite inférieure de la courbe d étalonnage, et dépend donc de la concentration en IgM du N IgM Standard. Le seuil typique de mise en évidence des IgM dans le LCR est de 0,13 mg/l. Linéarité Une étude de linéarité effectuée sur une série de dilutions d un pool d échantillons de LCR avec des concentrations décroissantes comprises entre 3,64 et 0,15 mg/l a donné une pente de 1,000 (r = 0,999) et une restitution moyenne de 94%. Une étude de linéarité effectuée sur une série de dilutions d un pool de sérums avec des concentrations décroissantes comprises entre 8,2 et 0,34 g/l a donné une pente de 0,996 (r = 1,0) et une restitution moyenne de 103%. Spécificité Aucune réaction croisée de l anticorps utilisé n a été observée. Précision Pour déterminer la précision du test N Latex IgM, on a testé des échantillons sériques et de LCR ayant des concentrations différentes d IgM, puis calculé les coefficients de variation (CV) : Précision (n=40) Type d échantillon Valeur moyenne Répétabilité Reproductibilité Total LCR (mg/l) CV (%) CV (%) CV (%) Contrôle 2,5 2,1 1,5 2,4 Pool de LCR 1 0,56 5,5 2,3 5,3 Pool de LCR 2 3,0 2,0 1,9 2,6 Sérum (g/l) CV (%) CV (%) CV (%) Echantillon sérique 1 0,81 4,9 2,7 5,0 Echantillon sérique 2 1,5 3,8 2,3 4,0 Echantillon sérique 3 7,7 2,4 2,0 3,0 Comparaison avec une autre méthode Le test N Latex IgM (y) a été comparé avec un autre test immunonéphélémétrique du commerce (x), en testant comparativement 50 paires d échantillons LCR/sérum dans un domaine de concentrations allant de 0,19 à 5,5 mg/l pour le LCR, et de 0,13 à 2,4 g/l pour le sérum. L analyse de régression des résultats a donné les équations suivantes : Comparaison avec une autre méthode Test Type d échantillon n Pente Intersection Coefficient de l axe de corrélation N Latex IgM LCR 24** 1,04-0,02 mg/l 0,995 Sérum 50 0,91 +0,02 g/l 0,979 Quotient LCR/sérum 24** 1,03-0,01 0,989 ** échantillons se trouvant à l intérieur du domaine de mesure des deux méthodes Remarque : Les valeurs indiquées comme caractéristiques du dosage représentent des résultats types et ne doivent pas être considérées comme des spécifications du test N Latex IgM. Littérature Cf. texte anglais. BN ProSpec est une marque déposée de aux USA, en Allemagne et dans d autres pays. * BN est une marque de aux USA. N Latex-IgM Edition Février 2004 Settore d impiego Diagnostici in vitro per la determinazione quantitativa delle IgM nel liquido cerebrospinale umano (CSF) e nelle coppie di campioni liquor/siero mediante immunonefelometria amplificata con particelle con i sistemi BN*. La determinazione delle IgM contribuisce alla valutazione della situazione immunitaria dei pazienti. Significato diagnostico La concentrazione delle proteine seriche nel liquor rappresenta un equilibrio di flusso, i cui parametri più importanti sono la diffusione tra sangue e liquor (permeabilità) e la velocità di scorrimento del liquor. Si verificano inoltre delle variazioni dovute all età. Oltre a queste variabili individuali del soggetto sano, si aggiunge, in un processo infiammatorio, l aumento delle proteine seriche nel liquor. Inoltre le immunoglobuline, sintetizzate localmente nel sistema nervoso centrale (SNC), possono essere secrete direttamente nel liquor 1,2. Per poter quantificare in maniera attendibile le proteine liquorali, occorre impiegare metodi che, tenendo conto delle variabili individuali, consentano una differenziazione fra la frazione di proteine liquorali proveniente dal siero e la frazione proveniente da sintesi intratecale. Di particolare aiuto a questo scopo è il calcolo di opportuni quozienti di concentrazione. In queste valutazioni l albumina serve quale proteina di riferimento della funzionalità della barriera ematoliquorale, in quanto viene sintetizzata solo nel fegato. Anche in condizioni patologiche l albumina nel liquor proviene esclusivamente dal sangue, quindi il quoziente liquor/siero per l albumina è il parametro di valutazione della funzione individuale di barriera sia in condizioni normali che patologiche. Se si utilizza lo schema dei quozienti per IgG, IgM e IgA di Reiber e Felgenhauer, in riferimento al quoziente liquor/siero dell albumina, è possibile diagnosticare una disfunzione della barriera e/o evidenziare la presenza di una sintesi locale di immunoglobuline nel SNC. Una sintesi locale di IgM nel SNC si verifica, soprattutto, nei pazienti affetti da neuroborreliosi o meningoencefalite da morbillo 1,2. Principio del metodo Le particelle di polistirerene rivestite con anticorpi umani specifici per le IgM formano degli aggregati quando sono miscelate con campioni contenenti IgM umane. Questi aggregati diffondono un fascio di luce dopo aver attraversato il campione. L intensità della luce dispersa è proporzionale alla concentrazione della proteina contenuta nel campione. Il risultato può essere valutato mediante confronto con uno standard a concentrazione nota. Reagenti Contenuto della confezione: N Latex-IgM, codice OQAC N IgM Reagente, 3 flaconi da 2 ml ciascuno N IgM Standard (umano), 3 flaconi da 1 ml ciascuno N IgM Controllo (umano), 3 flaconi da 1 ml ciascuno N IgM Reagente supplementare A, 3 flaconi da 1 ml ciascuno N IgM Reagente supplementare B, 1 flacone da 0,5 ml

5 Composizione e standardizzazione L N IgM Reagente è costituito da particelle di polistirene liofilizzate rivestite con 0,03 g/l anti IgM umane da coniglio. L N IgM Standard (umano) è costituito da una miscela di sieri umani. Dopo ricostituzione, lo standard contiene la concentrazione di IgM indicata in etichetta. L N IgM Controllo (umano) è costituito da una miscela di sieri umani. Dopo ricostituzione, il controllo contiene la concentrazione di IgM indicata in etichetta. La concentrazione dell N IgM Standard ed N IgM Controllo è stata calibrata con riferimento al preparato di riferimento CRM 470 3,4. L N IgM Reagente supplementare A consiste di una soluzione acquosa di poliossietilene sorbitan monolaureato (1 g/l). L N IgM Reagente supplementare B consiste di antisiero anti-igg umane da pecora (500 g/l) e anti-gammaglobuline umane (50 g/l). Conservante N IgM Reagente, N IgM Standard, N IgM Controllo dopo ricostituzione e N IgM Reagenti supplementari: sodio azide (< 1 g/l). Avvertenze e precauzioni 1. Solo per uso diagnostico in vitro. 2. Quando si impiegano diagnostici in vitro contenenti sodio azide osservare le seguenti precauzioni: non ingerire ed evitare contatti con la cute e le mucose! La sodio azide a contatto con metalli pesanti, come rame e/o piombo, può formare azidi esplosive! 3. Ogni donazione di sangue utilizzata per la produzione dell N IgM Reagente, N IgM Standard (umano) ed N IgM Controllo (umano) ed N IgM Reagente supplementare è stata esaminata per la ricerca dell HBsAg e degli anticorpi anti-hcv, anti-hiv1 e anti-hiv2. Solo i campioni risultati negativi sono stati impiegati per la produzione. Tuttavia, poiché non è possibile escludere con assoluta certezza il pericolo di agenti patogeni tutti i campioni (ad es. campioni dei pazienti) e i prodotti (ad es. standard e sieri di controllo) derivati da sangue umano devono essere trattati con le necessarie precauzioni rispettando le norme di sicurezza sul rischio biologico 5. Preparazione dei reagenti N IgM Reagente: ricostituire il contenuto liofilizzato di un flacone con 2,0 ml di acqua distillata. Attendere 15 minuti prima dell uso. Agitare cautamente il flacone quotidianamente prima dell uso. N IgM Standard (umano): ricostituire il contenuto liofilizzato di un flacone con 1,0 ml di acqua distillata. Agitare cautamente per mescolare. Attendere 15 minuti prima dell uso. N IgM Controllo (umano): ricostituire il contenuto liofilizzato di un flacone con 1 ml di acqua distillata. Agitare cautamente per mescolare. Attendere 15 minuti prima dell uso. N IgM Reagenti supplementari: pipettare 25 µl di N IgM Reagente supplementare B in un flacone con l N IgM Reagente supplementare A e mescolare agitando delicatamente. Conservazione e stabilità Stabilità a +2/+8 C: la data di scadenza è indicata sull etichetta. Stabilità dopo apertura: 4 settimane (N IgM Reagente ricostituito, N IgM Standard ricostituito, N IgM Controllo ricostituito e miscela degli N IgM Reagenti supplementari), se conservati a +2/+8 C ben chiusi subito dopo l uso. Non congelare. Gli standard e/o i sieri di controllo diventati torbidi, non devono essere utilizzati. Stabilità sui sistemi BN*: La stabilità on-board dell N IgM Reagente ed N IgM Reagente supplementare dipende dal sistema BN* utilizzato e dalle condizioni del laboratorio. Non lasciare i reagenti aperti sul sistema BN* 100 o BN* II, ma conservarli a +2/+8 C, ben chiusi subito dopo l uso. Per maggiori informazioni, fare riferimento al manuale d uso del sistema BN ProSpec. La stabilità on-board dell N IgM Controllo sul sistema BN ProSpec è indicata nel manuale d uso del sistema. Altro materiale necessario ma non fornito Sistema BN* N/T Controllo proteine LC (facoltativo), codice OQLW N Diluente, codice OUMT Tappi anti-evaporazione per BN* II (facoltativo), codice OVLE Altro materiale ed attrezzature come descritto nel manuale d uso del sistema BN*. Campioni in esame Per il test si impiegano campioni di liquor o coppie di liquor/siero possibilmente freschi (conservati per un massimo di 8 giorni a + 2/+ 8 C) o conservati congelati a -20 C o inferiore per un massimo di 6 mesi 6. La coppia liquor/siero deve essere prelevata contemporaneamente. Ogni campione di liquor deve essere centrifugato prima del test. I campioni di siero devono essere completamente coagulati e, dopo centrifugazione, non devono presentare particelle o tracce di fibrina. I campioni di siero lipemici devono essere chiarificati mediante centrifugazione (10 minuti a ca x g) prima del test. Esecuzione del test Note 1. Per istruzioni più dettagliate consultare i manuali d uso dei sistema BN*. 2. Impiegare soltanto componenti di kit contrassegnati dallo stesso numero di lotto. 3. Per i reagenti liofilizzati rispettare un tempo di ricostituzione sufficiente (almeno 15 minuti dopo l aggiunta di acqua distillata). 4. Prima dell uso sul sistema BN* 100 portare i reagenti ed i campioni a temperatura ambiente (+15/+25 C). Sul sistema BN*II e BN ProSpec, i reagenti e i campioni conservati a +2/+8 C possono essere utilizzati direttamente. 5. Sul sistema BN* 100, la valutazione dei campioni deve essere eseguita alla stessa temperatura ambiente (mass. 2 C di differenza) usata per registrare le curve di calibrazione. Protocollo analitico per i sistemi BN* Il protocollo analitico per il liquor e il siero è riportato nel manuale d uso del sistema BN* e nel software dello strumento. Per i campioni di siero, la diluizione iniziale del campione deve essere selezionata manualmente; le fasi successive sono eseguito in automatico dallo strumento. Preparazione della curva di calibrazione Le curve di calibrazione vengono costruite con una calibrazione multi-punto. La serie di diluizioni dell N IgM Standard viene preparata automaticamente dallo strumento con N Diluente. Le diluizioni dello standard devono essere utilizzate entro 4 ore. Il valore teorico è indicato sull etichetta del flacone. Sul sistema BN ProSpec, il valore teorico può essere inserito tramite CD con i dati del lotto (codice OVLP). La curva di calibrazione è valida per una settimana e può essere utilizzata oltre tale periodo finché i controlli con i relativi valori dichiarati metodo-dipendenti, es. N IgM Control oppure N/T Protein Control LC, risultano riproducibili entro i rispettivi intervalli di accettabilità.la curva di calibrazione può essere utilizzata per determinare le IgM nel liquor e nel siero. Se si utilizza un lotto diverso di reagente, occorre registrare una nuova curva di calibrazione. L intervallo di misura esatto dipende dalla concentrazione della proteine in ogni lotto di N IgM Standard. Per intervalli di misura tipici, fare riferimento al manuale d uso del sistema BN*. Misurazione dei campioni I campioni di liquor vengono analizzati indiluiti. Per campioni di siero occorre selezionare una diluizione 1 : Le diluizioni devono essere misurate entro 4 ore. Se i risultati ottenuti si trovano al di fuori dell intervallo di misura, la misurazione deve essere ripetuta, utilizzando una diluizioni più alta o più bassa (solo per i campioni di siero) del campione; per la determinazione delle IgM nel siero, è ammessa una diluizione minima del campione di 1:400. Per maggiori informazioni sulla ripetizione della misurazione con altre diluizioni, consultare il manuale d uso del sistema BN*. Per il calcolo del quoziente liquor/siero, si consiglia di eseguire anche una determinazione delle IgM nel siero con N Latex IgM e di analizzare questi campioni insieme ai campioni di liquor. Controllo di qualità interno Impiegare l N IgM Controllo o l N/T Controllo proteine LC dopo la preparazione di ogni curva di calibrazione, al primo impiego di un flacone di reagente e con ogni serie di campioni. I controlli devono essere analizzati e valutati come i campioni dei pazienti. Il valore teorico è indicato sull etichetta del flacone. L intervallo di accettabilità è il valore teorico ± 20%. Il valore teorico e l intervallo di accettabilità dell N/T Controllo proteine LC sono riportati nelle rispettive tabella dei valori teorici. Per il Sistema BN ProSpec è possibile utilizzare un CD con i dati di lotto (codice OVLP) per l inserimento dei valori dichiarati. I valori dichiarati devono essere utilizzati come controllo di qualità intralaboratorio a titolo noto per la valutazione della precisione e della deviazione analitica. In una fase precedente, determinare la concentrazione e i limiti di accettabilità. Se il risultato del controllo si trova al di fuori dell intervallo di accettabilità, la determinazione deve essere ripetuta. Se anche questa seconda determinazione conferma la deviazione, occorre preparare una nuova curva di calibrazione. Rilasciare i risultati dei pazienti solo dopo aver identificato e rimosso le cause della deviazione. Risultati La valutazione dei risultati avviene in automatico mediante una funzione logit-log. Limitazioni della esecuzione del test Nessuna interferenza è stata rilevato con concentrazioni di trigliceridi fino a 20 g/l, bilirubina fino a 600 g/l e emoglobina libera fino a 10 g/l. I campioni torbidi o contenenti particelle possono interferire sulla determinazione. Pertanto i campioni torbidi o contenenti particelle devono essere centrifugati prima del test. I campioni lipemici che non possono essere chiarificati mediante centrifugazione (10 minuti a ca x g) non devono essere utilizzati. N Latex IgM è stato concepito in modo tale da minimizzare l eccesso di antigene nelle diluizioni iniziali dei campioni. Tuttavia, tale fenomeno non può essere completamente eliminato e in rari casi concentrazioni di IgM molto elevate possono generare risultati falsamente bassi. In particolare, immunoglobuline monoclonali possono mostrare reattività diversa dagli standard policlonali, che in casi sporadici possono portare a risultati artificiosamente ridotti o non lineari. Una verifica dei risultati per le IgM su CSF dovrebbe essere eseguita mediante i diagrammi dei valori di ratio 1,2. In caso di risultati discutibili, le determinazioni dovrebbero essere ripetute utilizzando la successiva diluizione del campione. Se su un sistema BN* 100 o BN* II i test CSF vengono preceduti da analisi su campioni contenenti livelli molto elevati di IgM (es. macroglobulinemia di Waldenstrom), i risultati ottenuti per le IgM su CSF possono risultare falsamente elevati in condizioni sfavorevoli (es. cuvette utilizzate da lungo tempo). Pertanto, le determinazioni delle IgM nel liquor dovrebbero essere eseguite prima delle determinazioni su siero. I risultati di questo test devono essere sempre interpretati alla luce della anamnesi del paziente, della presentazione clinica e valutando contestualmente l esito di altri accertamenti. A causa dell effetto matrice, i campioni delle indagini inter-laboratori e i campioni di controllo possono dare risultati diversi da quelli ottenuti con altri metodi. Potrebbe essere necessario valutare questi risultati in relazione ai valori di target specifici del metodo. Intervalli di riferimento Su 220 pazienti dell Europa centrale con quoziente liquor/siero per albumina normale e nessuna evidenza di processi infiammatori, è stato riscontrato un limite superiore dell intervallo di riferimento (95 percentile) per IgM nel liquor di 1,3 mg/l (7, dopo conversione in CRM 470). Questo valore serve solamente a titolo orientativo. Intervalli di riferimento in senso stretto, sono disponibili solo per il quoziente liquor/siero in relazione al quoziente liquor/siero per albumina 1,2. Tuttavia, ogni laboratorio dovrebbe determinare il proprio intervallo di riferimento, poiché i valori possono differire a seconda della popolazione studiata. Caratteristiche specifiche del test Intervallo di misura e sensibilità Il test N Latex IgM è concepito per misurare le concentrazioni di IgM all interno di un intervallo di misura compreso tra 0,13 e 4,2 mg/l ca. per i campioni indiluiti (liquor) e tra 0,27 e 8,6 g/l ca. per le diluizioni dei campioni di 1:2000 (siero). La sensibilità analitica è determinata dal limite superiore della curva di calibrazione e dipende, perciò, dalla concentrazione della proteina nell N IgM Standard. Una determinazione tipica per le IgM nel liquor è di 0,13 mg/l. Linearità Uno studio della linearità con una serie di diluizioni di un pool di liquor a concentrazione decrescente compresa tra 3,64 e 0,15 mg/l ha dato una pendenza di 1,000 (r=0,999) ed una riproducibilità media del 94%. Uno studio della linearità con una serie di diluizioni di un pool di sieri a concentrazione decrescente compresa tra 8,2 e 0,34 g/l ha dato una pendenza di 0,996 (r=1,0) ed una riproducibilità media del 103%. Specificità Non si conoscono cross-reazioni dell anticorpo utilizzato. Precisione La precisione dell N Latex IgM è stata determinata, analizzando campioni di siero e liquor a diversa concentrazione di IgM e determinando il coefficiente di variazione (CV). Precisione (n=40) Tipo di campione Valore medio Intra-serie Inter-serie Totale Test del liquor (mg/l) CV (%) CV (%) CV (%) Controllo 2,5 2,1 1,5 2,4 Liquor pool 1 0,56 5,5 2,3 5,3 Liquor pool 2 3,0 2,0 1,9 2,6 Test del siero (g/l) CV (%) CV (%) CV (%) Campione di siero 1 0,81 4,9 2,7 5,0 Campione di siero 2 1,5 3,8 2,3 4,0 Campione di siero 3 7,7 2,4 2,0 3,0 Confronto tra metodi Il test N Latex IgM è stato confrontato con un test immunonefelometrico del commercio analizzando 50 campioni di CSF con valori compresi tra 0,19 e 5,5 mg/l e 50 campioni di siero con valori tra 0,13 e 2,4 g/l. L analisi della regressione dei risultati ha prodotto le seguenti equazioni: Studi di Confronto dei Metodi Test Tipo di Campione n Slope Intercetta Coefficiente di Correlazione N Latex IgM CSF 24** ,02 mg/l 0,995 Siero ,02 g/l 0,979 Ratio CSF/Siero 24** ,01 0,989 ** Campioni entro l intervallo di misurazione per entrambi i metodi Nota I valori indicati per le caratteristiche specifiche del test rappresentano valori tipici e non devono essere considerati quali specifiche per l N Latex IgM. Bibliografia Vedi testo Inglese. BN ProSpec è un marchio registrato della negli USA, in Germania e negli altri Paesi. * BN è un marchio registrato della negli USA. Edizione Febbraio 2004 OQAC G11 E0541 (738) S/R 5

6 N Látex-IgM Campos de aplicación Reactivos de diagnóstico in-vitro para la determinación cuantitativa de IgM en líquido cefalorraquídeo (LCR) y en pares LCR/suero, mediante el uso de nefelometría con partículas intensificadoras en los sistemas BN*. La determinación de IgM permite sacar conclusiones sobre el sistema inmunológico del paciente. Significado diagnóstico La concentración de proteínas séricas en el LCR representa un equilibrio de flujo, cuyos parámetros más importantes son la difusión entre la sangre y el LCR (permeabilidad) y la velocidad de flujo propia del LCR. Adicionalmente a esto, existen también variaciones dependientes de la edad. En personas sanas se presenta, en el caso de procesos inflamatorios, un aumento de proteínas séricas en el LCR. Además pueden aparecer también en el LCR inmunoglobulinas que han sido sintetizadas, localmente, en el sistema nervioso central (SNC) 1, 2. Para un diagnóstico seguro de las proteínas del LCR se deben utilizar métodos, que teniendo en cuenta las variables individuales, permitan una diferenciación de las proteínas del LCR entre la porción procedente del suero y la porción procedente de la síntesis intratecal. El establecimiento de adecuados cocientes de concentración es un medio de ayuda muy importante. La albúmina se usa en este cálculo como proteína de referencia para la función límite sangre/lcr, ya que ésta es sintetizada únicamente en el hígado. Aún bajo estados patológicos el contenido de albúmina en el LCR proviene exclusivamente de la sangre, es decir, el cociente de albúmina LCR/ suero es un medida de la función límite individual, tanto en casos normales como en casos patológicos. Utilizando los esquemas de cocientes para IgG, IgM e IgA de Reiber y Felgenhauer es posible, con respecto al cociente LCR/suero para albúmina, determinar alteraciones en la función límite y/o la existencia de una síntesis local de inmunoglobulinas en el SNC. Una síntesis local de IgM en el SNC ocurre especialmente en neuroborriliosis y en la meningoencefalitis de la parotiditis 1,2. Principio del método Las partículas de poliestireno recubiertas con anticuerpos específicos contra IgM humana, al mezclarse con la IgM humana presente en las muestras forman agregados, en los cuales se va dispersar el rayo de luz incidente. La intensidad de la luz dispersada depende de la concentración de la proteína respectiva en la muestra. La valoración se hace que por comparación con patrones de concentración conocida. Reactivos Contenido del envase comercial: N Látex-IgM, N de pedido OQAC Reactivo N IgM, 3 frascos para 2 ml Estándar N IgM (humano), 3 frascos para 1 ml Control N IgM (humano), 3 frascos para 1 ml Reactivo adicional N IgM A, 3 frascos para 1 ml Reactivo adicional N IgM B, 1 frasco para 0,5 ml Composición y estandarización: El Reactivo N IgM es un liofilizado de partículas de poliestireno recubiertas con 0,03 g/l anti-igm humana de conejo. El Estándar N IgM (humano) es una mezcla de sueros humanos. La concentración de IgM, después de reconstituido el estándar, viene dada en la etiqueta del frasco. El Control N IgM (humano) es una mezcla de sueros humanos. La concentración de IgM, después de reconstituido el control, viene dada en la etiqueta del frasco. Las concentraciones del estándar N IgM y del control N IgM fueron calibradas en relación con la preparación de referencia CRM 470 3,4. El Reactivo adicional N IgM A está formado por una solución acuosa de polietilenglicol sorbitan monolaureato (1 g/l). El Reactivo adicional N IgM B está formado por un antisuero de oveja contra IgG humana (500 g/l) y gamaglobulina humana (50 g/l). Medio de conservación Reactivo N IgM, estándar N IgM y control N IgM después de reconstituidos, así como los reactivos adicionales N IgM: azida sódica (< 1 g/l). Advertencias y medidas de seguridad 1. Sólo para ser utilizado en diagnósticos in-vitro. 2. En el manejo de diagnósticos in-vitro que contengan azida sódica debe observarse la siguiente regla: No ingerir y evitar contacto con la piel y mucosas. La azida sódica puede formar azidas explosivas con metales como cobre y plomo. 3. Cada donación individual de sangre, destinada a la preparación del estándar N IgM (humano), del control N IgM (humano) y del reactivo adicional N IgM B, ha sido sometida a pruebas para detectar la presencia de HBsAg, anti-hcv, anti-hiv1 y anti-hiv2. Para la elaboración sólo se utilizan donaciones con resultados negativos. Independientemente de esto, todas las muestras obtenidas a partir de sangre humana (por ej. sueros de pacientes) y productos (por ej. sueros estándar y de control) deben ser manipuladas con las precauciones necesarias, siguiendo las medidas de seguridad recomendadas en caso de riesgo biológico, puesto que nunca se puede excluir completamente la existencia de agentes patógenos 5. Preparación de reactivos Reactivo N IgM: Resuspender el liofilizado contenido en un frasco en 2,0 ml de agua dest. El reactivo se puede utilizar 15 min. después de reconstituido y se debe agitar con precaución antes de usarse por primera vez Estándar N IgM (humano): Disolver el liofilizado contenido en un frasco con 1,0 ml de agua dest.. Mezclar la solución cuidadosamente por agitación. El estándar está listo para ser usado 15 min. después de la reconstitución. Control N IgM (humano): Disolver el liofilizado contenido en un frasco con 1 ml de agua dest.. Mezclar la solución cuidadosamente por agitación. El control está listo para ser usado 15 min. después de la reconstitución. Reactivos adicionales N IgM: Pipetear 25µl del reactivo adicional N IgM B en un frasco del reactivo adicional N IgM A; mezclar por medio de agitación suave. Estabilidad y condiciones de almacenamiento Almacenamiento entre +2 y +8 C: La fecha de vencimiento viene indicada en la etiqueta; Estabilidad después de reconstituido 4 semanas, (reactivo N IgM reconstituido, estándar N IgM reconstituido y control N IgM reconstituido, así como la mezcla de los reactivos adicionales N IgM), siempre que después de usarse, se mantengan perfectamente cerrados y almacenados entre +2 y +8 C. Los reactivos no se deben congelar. Los estándar o los controles que presenten turbidez no deben ser utilizados. Estabilidad en los sistema BN*: La estabilidad on board del reactivo N IgM y de los reactivos adicionales N IgM depende del sistema BN* utilizado, así como de las condiciones del laboratorio. Los reactivos no deben permanecer abiertos en los sistemas BN* 100 o BN* II, sino que deben ser almacenados entre +2 y +8 C directamente después de ser usados. Para más información consultar los manuales de operación de los sistemas BN* II y BN ProSpec. La estabilidad on board del control N IgM en el sistema BN ProSpec viene dada en el manual de operaciones del sistema. Materiales adicionales necesarios Sistemas BN* N/T Controles de proteína LC (opcional), N de pedido OQLW N Diluyente, N de pedido OUMT Tapón protector de evaporación para el BN* II (opcional), N de pedido OVLE Los materiales y equipos necesarios vienen descritos en los manuales de operación de los sistemas BN*. OQAC G11 E0541 (738) S/R 6 Material a investigar Como material de investigación se deben usar, en lo posible, muestras frescas de LCR humano o de pares de LCR/suero (conservadas máx. 8 días entre +2 y +8 C) o máx. 6 meses a -20 C6. Las muestras de LCR y de suero se deben tomar, si es posible, al mismo tiempo. Cada muestra de LCR debe ser centrifugada antes del análisis. Las muestras de suero deben estar completamente coaguladas y no deben presentar ni partículas ni trazas de fibrina después de la centrifugación. Muestras de sueros lipémicas deben ser aclaradas antes de empezar la determinación, por centrifugación (10 min. a aproximadamente x g). Procedimiento Advertencias: 1. Para una detallada información sobre el manejo de los sistemas BN* consultar el manual de operaciones del sistema correspondiente. 2. Sólo componentes del testkit con el mismo número de lote se deben combinar unos con otros. 3. Debe cumplirse con el tiempo de reconstitución (mínimo 15 min. después de agregar el agua destilada). 4. Antes de iniciar el test en los sistemas BN* A y BN* 100, los reactivos y las muestras tienen que haber alcanzado la temperatura ambiente (entre +15 y +25 C). En los sistemas BN* II y BN ProSpec se pueden utilizar los reactivos almacenados entre +2 y +8 C directamente en la determinación. 5. La medida de las muestras en el sistema BN* 100 se debe efectuar a la misma temperatura ambiente (máx. 2 C de desviación) a la que se realizó la curva de calibración. Protocolo del ensayo en los sistemas BN* Los protocolos de ensayo para LCR y suero vienen descritos en los manuales de operación, así como también, en el software del aparato correspondiente. Para las muestras de suero se debe escoger la forma manual de dilución de muestras; todas las otras etapas van a ser realizadas por el sistema de forma automática. Preparación de la curva de referencia Las curvas de referencia se hacen sobre una calibración de varios puntos. Para su elaboración se preparan automáticamente una serie de diluciones del estándar N IgM con el N diluyente. Las diluciones del estándar deben ser usadas dentro de las 4 horas siguiente. Los valores teóricos vienen dados en la etiqueta del frasco correspondiente. En el sistema BN ProSpec se pueden medir directamente los datos usando el CD de datos sobre el lote (N de pedido OVLP). La curva de referencia es válida una semana. Esta curva puede ser utilizada por más tiempo, siempre que los controles con valores teóricos dependientes del proceso por ej., el control N IgM o los N/T controles de proteína LC se vuelvan a encontrar dentro de su rango de confianza al repetir la medida. La curva de referencia se puede utilizar para la determinación de IgM tanto en LCR como en suero. Al utilizar un nuevo lote de reactivos se debe hacer una nueva curva de referencia. El rango exacto de medida depende de la concentración del proteína en cada lote del estándar N IgM. Rangos de referencia típicos vienen descritos en el respectivo manual de operaciones del sistema BN*. Medida de las muestras de pacientes Las muestras de LCR se analizan sin diluir. Para las muestras de suero se debe escoger una dilución 1: Las diluciones deben ser medidas dentro de las 4 horas siguientes. Para los valores medidos que se encuentren por fuera del rango de medida, se puede repetir la medida utilizando diluciones mayores o menores (solamente muestras de suero) de las muestras, teniendo en cuenta que para las determinaciones de IgM en sueros la mínima dilución permitida es 1:400. La repetición de las medidas a otras diluciones de las muestras vienen descritas en los manuales de operación de los sistemas BN*. Para formar los coeficientes IgM LCR/suero se recomienda realizar la determinación de IgM en sueros con el N Látex IgM y analizar los sueros en la misma marcha analítica que las muestras de LCR. Control de calidad interno El control N IgM o los N/T Proteína controles LC se deben usar después de cada elaboración de una curva de referencia, después de abrir un frasco de reactivo por primera vez, así como, con cada serie de muestras. Los controles se deben tratar en su preparación y medida como las muestras de pacientes. El valor teórico del control N IgM viene dado en la etiqueta del frasco correspondiente. Como rango de confianza se toma el valor teórico + 20%. El valor teórico, así como el rango de confianza del N/T Proteína control LC se deben tomar de la Tabla de valores teóricos correspondiente. En el sistema BN ProSpec los valores teóricos pueden ser leídos en el CD sobre datos del lote (N de pedido OVLP). Los valores teóricos dados sirven como controles de calidad dentro del laboratorio, para la valoración de la precisión y de la desviación analítica. Para utilizarlos como controles de la precisión el usuario deberá en un tiempo previo determinar los valores de control y los límites de control. Si los resultados de las medidas de los controles se encuentran por fuera de su rango de confianza, se debe repetir la determinación del control. Si después de la repetición, se comprueba la desviación, se debe realizar una nueva curva de referencia. Los resultados de los pacientes deben ser entregados únicamente cuando la causa de esta desviación sea reconocida y eliminada. Cálculo de los resultados del análisis Los resultados se calculan automáticamente mediante una función log-logit. Limitaciones del Procedimiento Las siguientes sustancias ocasionan interferencias en el ensayo N Látex IgM: Triglicérido hasta 20 g/l, bilirrubina hasta 600 mg/l y hemoglobina libre hasta 10 g/l. La presencia de turbidez o partículas en la muestra puede alterar la determinación, por lo cual, las muestras que contengan partículas deben ser centrifugadas antes de la determinación. Muestras lipémicas que no se puedan aclarar por centrifugación (10 min. a x g), deben ser eliminadas de la determinación. El N Látex IgM está diseñado de tal forma que puede minimizar un exceso de antígeno en la dilución inicial de la muestra. Sin embargo, no se puede excluir totalmente y en casos raros, concentraciones muy altas de IgM pueden conducir a resultados bajos. En especial, las inmunoglobulinas monoclonales pueden reaccionar diferente a los estándares policlonales lo que, en casos aislados, puede llevar a resultados bajos falsos o no lineales. Un resultado de IgM en el LCR se debe comprobar en base a la valoración de los diagramas de coeficientes 1,2. En el caso de no ser plausible la determinación de IgM en el LCR se debe repetir a una dilución mayor de la muestra. Debido a determinaciones anteriores de muestras de sueros o plasmas con IgM altamente elevada (por ej., Macroglobulinemia de Waldenström) se pueden medir en los sistemas BN* 100 y BN* II, bajo condiciones inapropiadas (por ej. uso frecuente de las cubetas), concentraciones elevadas falsas de IgM en el LCR. Por lo tanto, las determinaciones de IgM en el LCR se deben realizar, en lo posible, antes de las determinaciones en sueros. Los resultados de esta prueba deberán interpretarse siempre de acuerdo con la historia clínica del paciente, la sintomatologia clínica y otras observaciones. Debido a los efectos matriz, las muestras para analizar inter-laboratorios y las muestras control pueden producir resultados diferentes, dependiendo del método utilizado para la determinación. Por esta razón, puede ser necesario evaluar estos resultados en relación con valores objetivo específicos del método. Rangos de referencia De 220 pacientes de Europa Central, con coeficientes de albúmina normales y sin indicaciones de un proceso inflamatorio, se obtuvo un límite superior de referencia (95. percentile) para IgM en el LCR de 1,3 mg/l (7, después de convertir a CRM 470). Este valor sirve solamente como orientación. Rangos de referencia, en el sentido exacto, hay solamente para los coeficientes LCR/suero dependientes del coeficiente albúmina LCR/suero 1,2. Por está razón, cada laboratorio deberá determinar su propio rango de referencia, ya que éste está influenciado por muchos factores, que pueden ser diferentes para cada colectivo estudiado. Características de la determinación Rango de medida y sensibilidad: El rango de referencia del N Látex IgM va de aproximadamente 0,13 hasta 4,2 mg/l para muestras sin diluir (LCR), o aproximadamente 0,27 hasta 8,6 g/l para una dilución de la muestra de 1:2.000 (suero). La sensibilidad de la determinación se fija con el límite inferior de la curva de referencia y depende de la concentración de proteína en el estándar IgM. Un límite típico de detección para IgM en LCR es 0,13 mg/l.

7 Linealidad Un estudio de linealidad de una serie de diluciones de un pool de LCR con concentraciones descendentes entre 3,64 y 0,15 mg/l dio una pendiente de 1,000 (r= 0,999) y una recuperación promedio del 94%. Un estudio de linealidad de una serie de diluciones de un pool de sueros con concentraciones descendentes entre 8,2 y 0,34 g/l dio una pendiente de 0,996 (r= 1,0) y una recuperación promedio del 103%. Especificidad No se conocen reacciones cruzadas de los anticuerpos utilizados. Precisión La precisión del N Látex IgM se encontró determinando muestras de LCR y de suero con diferentes concentraciones de IgM y calculando los coeficientes de variación (CV): Precisión (n=40) Tipo de muestra Valor promedio Intra assay Inter assay Total Ensayo con LCR (mg/l) CV (%) CV (%) CV (%) Control 2,5 2,1 1,5 2,4 LCR pool 1 0,56 5,5 2,3 5,3 LCR pool 2 3,0 2,0 1,9 2,6 Ensayo con Suero (g/l) CV (%) CV (%) CV (%) Suero muestra 1 0,81 4,9 2,7 5,0 Suero muestra 2 1,5 3,8 2,3 4,0 Suero muestra 3 7,7 2,4 2,0 3,0 Comparación de métodos El N Látex IgM (y) se comparó con un ensayo inmunonefelométrico para IgM existente en el comercio (x) determinando 50 pares de muestras LCR/suero en un rango de 0,19 hasta 5,5 mg/l (LCR) y de 0,13 hasta 2,4 g/l (suero). El análisis de regresión de los resultado dio la siguiente ecuación: Comparación de métodos Ensayo Tipo de muestra n Pendiente Corte de eje Coeficiente de correlación N Látex IgM LCR 24** 1,04-0,02 mg/l 0,995 Suero 50 0,91 + 0,02 g/l 0,979 Coeficiente LCR/suero 24** 1,03-0,01 0,989 ** Muestras dentro del rango de medida de ambos métodos Nota: Los valores dados para las características del test representan valores típicos y no se deben tomar como especificaciones para el kit N Látex IgM. Bibliografía Ver boletín informativo en ingles. BN ProSpec es una marca de fábrica registrada de en USA, Alemania y otros países. * BN es una marca de fábrica de en USA. N Latex IgM OQAC G11 E0541 (738) S/R 7 Edición Febrero 2004 Campo de aplicação Diagnósticos in vitro para a determinação quantitativa de IgM no liquor cerebrospinal humano, e em pares de amostras de liquor/soro, através da imunonefelometria de partículas reforçadas com os sistemas BN*. A determinação de IgM permite obter conclusões sobre o sistema imunitário do paciente. Significado diagnóstico A concentração de proteínas séricas no liquor cerebrospinal representa um equilíbrio de escoamento, cujos parâmetros mais importantes são a difusão entre o sangue e o liquor (permeabilidade) e a taxa de velocidade individual. As variações dependentes da idade também têm importância. Para além destas variáveis, os processos inflamatórios provocam um incremento de proteínas séricas no liquor de um indivíduo saudável. Além disso, as imunoglobulinas que foram sintetizadas localmente no sistema nervoso central (SNC) podem ser lançadas no liquor 1, 2. Para obter um diagnóstico fiável da proteína no liquor, é necessário utilizar métodos que permitam uma diferenciação das proteínas no liquor, em termos de porção proveniente do soro e porções provenientes da síntese intratecal, tomando em consideração as variáveis individuais. O recurso mais importante consiste no cálculo de quocientes de concentração adequados. Nestas avaliações, a albumina serve como proteína de referência para a função de barreira para o sangue/liquor, uma vez que só é sintetizada no fígado. Mesmo em condições patológicas, o teor de albumina no liquor provém, exclusivamente, do sangue, ou seja, o quociente de albumina no liquor/ soro é uma medida para a função de barreira individual nos casos normais e nos casos patológicos. Utilizando o esquema de quociente de Reiber e Felgenhauer para a IgG, a IgM e a IgA, é possível determinar as perturbações da função de barreira e/ou a presença de uma síntese da imunoglobulina local no SNC, em relação aos quocientes de liquor/soro para a albumina. A síntese de IgM local no SNC ocorre, sobretudo, em caso de neuroborreliose e encefalite por parotidite ou meningoencefalite 1, 2. Princípio do método As partículas de poliestireno revestidas com anticorpos específicos contra a IgM humana, ao serem misturadas com amostras que contêm IgM formam aglutinados que dispersam a luz radiada. A intensidade da luz difusa depende da concentração da respectiva proteína na amostra. A avaliação faz-se comparando com um padrão de concentração conhecida. Reagentes Conteúdo da embalagem comercial Latex IgM N, ref. OQAC Reagente IgM N, 3 frasco para 2 ml cada Standard IgM N (humana), 3 frascos para 1 ml cada Controlo IgM N (humana), 3 frascos para 1 ml cada Reagente suplementar IGM N A, 3 frascos para 1 ml cada Reagente suplementar IgM N B, 1 frasco com 0,5 ml Composição e estandardização O reagente IgM N é constituído por um liofilizado de partículas de poliestireno, revestidas com 0,03 g/l IgM anti-humana do coelho. O Standard IgM N (humana) é constituído por uma mistura de soros humanos. A concentração de IgM após a reconstituição do standard está indicada no rótulo do frasco. O controlo IgM N (humana) é constituído por uma mistura de soros humanos. A concentração de IgM após a reconstituição do controlo está indicada no rótulo do frasco. A concentração do Standard IgM N e do controlo IgM N foi calibrada tomando por referência o preparado de referência CRM 470 3, 4. O reagente suplementar IgM N A é constituído por uma solução aquosa de monolaureato de sorbitano glicolpropietileno (1 g/l). O reagente suplementar IgM N B é constituído por antisoro contra a IgG humana da ovelha (500 g/l) e gammaglobulina humana (50 g/l). Conservante Reagente IgM N, standard IgM N e controlo IgM N após a, reconstituição, bem como os reagentes suplementares IgM N: Azida de sódio < 1 g/l Advertências e medidas de precaução 1. Só para uso diagnóstico in vitro. 2. Precauções a observar ao lidar com reagentes para diagnóstico in vitro com teor de azida de sódio: Evitar ingerir e todo o contacto com a pele ou mucosas! Com metais pesados, como o cobre ou o chumbo, a azida de sódio pode formar azidas explosivas! 3. Cada dádiva individual de sangue destinada à preparação de reagente IgM N, standard IgM N (humana), controlo IgM N (humana) e reagente suplementar IgM N B, foi sujeita a testes de detecção de HBsAg, anti-hcv, anti-hiv1 e anti-hiv2. Na preparação foram utilizadas unicamente dádivas com resultado negativo. Independentemente disso, todos os materiais obtidos a partir de sangue humano devem ser tratados com as precauções devidas, seguindo as medidas de segurança recomendadas em caso de risco biológico, uma vez que nunca se pode excluir inteiramente o risco de contaminação por agentes patogénicos 5. Preparação dos reagentes Reagente IgM N: Reconstituir o conteúdo liofilizado de um frasco com 2,0 ml de água destilada. O reagente pode ser utilizado 15 minutos após a reconstituição. Antes de usar a primeira vez, misturar cuidadosamente. Standard IgM N (humana): Dissolver o conteúdo liofilizado de um frasco com 1,0 ml de água destilada. Misturar a solução cuidadosamente. O standard está pronto para uso 15 min. após a reconstituição. Controlo IgM N (humana): Dissolver o conteúdo liofilizado de um frasco com 1,0 ml de água destilada. Misturar a solução cuidadosamente. O controlo está pronto para uso 15 min. após a reconstituição. Reagentes suplementares IgM N: Pipetar 25 µl de reagente suplementar IgM N B para um frasco com reagente suplementar IgM N A e misturar agitando ligeiramente. Estabilidade e condições de conservação Conservação entre +2 e +8 C: a data de expiração está indicada no rótulo; Estabilidade após reconstituição: 4 Semanas (reagente IgM N reconstituído, standard IgM N reconstituído e controlo IgM N reconstituído, bem como a mistura dos reagentes suplementares IgM N), desde que sejam armazenados de novo, hermeticamente fechados, entre +2 e +8 C, imediatamente após o uso. Os reagentes não devem ser congelados. Os standards ou controlos turvos não devem ser utilizados. Estabilidade nos sistemas BN*: A estabilidade on-board do reagente IgM N e do reagente suplementar IgM N depende do sistema BN* utilizado e das condições laboratoriais. Os reagentes não devem permanecer abertos no sistema BN* 100 ou BN* II, e devem ser conservados novamente entre +2 e +8 C, hermeticamente fechados, imediatamente após o uso. Indicações mais pormenorizadas estão contidas no manual de utilização do sistema BN ProSpec. A estabilidade on-board do controlo IgM N no sistema BN ProSpec está indicada no manual de utilização do sistema. Outros materiais necessários Sistema BN* N/T Controlo de proteína LC (facultativo), ref. OQLW Diluente N, ref. OUMT BN* II Evaporation Stoppers (facultativo), ref. OVLE Material de consumo e equipamento descritos nos manuais de utilização dos sistemas BN*. Amostras Para a medição, deverão ser utilizadas amostras de liquor humano ou pares de liquor/soro, tão frescas quanto possível (conservadas 8 dias entre +2 e +8 C, no máx.) ou conservadas 6 meses a menos -20 C 6, sendo que as amostras de liquor e soro deverão ser recolhidas em simultâneo. Cada amostra de liquor deverá ser centrifugada antes da análise. As amostras de soro têm de estar integralmente coaguladas e não podem conter partículas ou vestígios de fibrina após a centrifugação. Antes da determinação, as amostras lipémicas têm de ser clarificadas por centrifugação (10 min. a aprox x g). Procedimento Notas 1. Os pormenores para a manipulação dos sistemas BN* deverão ser consultados no manual de utilização respectivo. 2. Só podem ser combinados componentes de kits de teste com lotes com a mesma designação. 3. É necessário respeitar o tempo de reconstituição indicado para os reagentes liofilizados (mín. de 15 minutos, após adição de água destilada). 4. Antes da medição no sistema BN* 100, é necessário que os reagentes e as amostras tenham atingido a temperatura ambiente (+15 a +25 C). Os reagentes e as amostras conservadas entre +2 e +8 C podem ser utilizados directamente nos sistemas BN* II e BN ProSpec. 5. No sistema BN* 100 a medição das amostras deverá ser efectuada à mesma temperatura ambiente, a que foi registada a curva de referência (desvio máx. de 2 C). Protocolo de ensaio nos sistemas BN* O protocolo de ensaio para o liquor e o soro está contido no manual de utilização e no software do respectivo instrumento. Para as amostras de soro, a diluição da amostra deverá ser seleccionada manualmente, todos os restantes passos são executados automaticamente pelo sistema. Estabelecimento da curva de referência AAs curvas de referência são obtidas por uma calibração de pontos múltiplos. São efectuadas, automaticamente, séries de diluição do Standard IgM N, usando o Diluente N. As diluições do padrão têm de ser utilizadas dentro de 4 horas. O valor nominal está indicado no rótulo do respectivo frasco. No sistema BN ProSpec este valor pode ser lido com a CD de indicação do lote (ref. OVLP). A curva de referência é válida durante uma semana. Pode ser utilizada para além desse período de tempo, desde que os controlos de exactidão como, p. ex., o controlo IgM N ou o N/T Controlo de proteína LC sejam achados de novo dentro do respectivo intervalo de confiança. A curva de referência pode ser utilizada tanto para a determinação de IgM no liquor, como no soro. Se for utilizado um novo frasco de reagente ou um outro lote de reagente, é necessário registar uma nova curva de referência. Os intervalos de medição exactos dependem da concentração de proteína de cada lote de Standard IgM N. Os intervalos de medição típicos estão indicados no manual de utilização do respectivo sistema BN*. Medição de amostras de pacientes As amostras de liquor são analisadas não diluídas. Para as amostras de soro, é necessário seleccionar uma diluição de 1:2000. As diluições têm de ser medidas num espaço de tempo de 4 horas. Para os valores medidos que se situem fora do intervalo de medição, a medição pode ser repetida a partir de uma diluição de amostra superior ou inferior (somente amostras de soro), sendo que para determinação de IgM no soro a diluição mínima permitida da amostra é de 1:400. As repetições de medição feitas a partir de outras diluições de amostras estão descritas no manual de utilização dos sistemas BN*. Para o cálculo dos quocientes de IgM no liquor/soro, é aconselhável proceder à determinação de IgM no soro também com N Latex IgM e analisar os soros na mesma operação de análise que as amostras de liquor.

8 Controlo de qualidade interno O Controlo IgM N ou o N/T Controlo de proteína LC devem ser empregues após o estabelecimento de cada curva de referência, quando um frasco de reagente é utilizado pela primeira vez e em cada série de amostras. Na preparação e na interpretação do teste, os controlos são tratados como as amostra do paciente. O valor nominal do Controlo IgM N está indicado no rótulo do frasco. Como intervalo de confiança é considerado o valor nominal de ± 20%. Se o resultado da medição do controlo se situar fora do intervalo de confiança, é necessário repetir a medição do controlo. Se o desvio for confirmado pela repetição da medição, deverá ser efectuada uma nova medição do controlo com um novo frasco de reagente. Os resultados do paciente só deverão ser aprovados novamente quando a causa do desvio for identificada e corrigida. O valor nominal e o intervalo de confiança do N/T Controlo de proteína LC deverá ser consultado na respectiva tabela de valores nominais. No sistema BN ProSpec os valores nominais podem ser lidos com a CD de indicação do lote (ref. OVLP). Os valores nominais indicados servem para o controlo de qualidade no laboratório, para avaliar a precisão e o desvio analítico. Em caso de utilização como controlo de precisão, o valor e os limites do controlo deverão ser apurados pelo utilizador, num período anterior. Se os resultados das medições de controlo se situarem fora do intervalo de referência, é necessário repetir a determinação de controlo. Se o desvio for confirmado pela repetição da medição, é necessário registar uma nova curva de referência. Os resultados dos pacientes só deverão ser novamente divulgados quando a causa do desvio for identificada e corrigida. Cálculo dos resultados da análise A interpretação é feita automaticamente mediante uma função logit-log. Limitações do procedimento As substâncias seguintes não provocam interferências no teste de N Látex IgM: triglicéridos até 20 g/l, bilirubina até 600 mg/l e hemoglobina livre até 10 g/l. As turvações e partículas nas amostras podem interferir na determinação. Por isso, as amostras que contêm partículas deverão ser centrifugadas antes da determinação. As amostras lipémicas que não se conseguem clarificar com a centrifugação (10 min. a aprox x g) deverão ser excluídas da determinação. N Latex IgM foi concebido de forma a minimizar o excedente de antigénio da diluição inicial. Não obstante, esse excedente não pode ser totalmente excluído e, em casos caros, as concentrações muito elevadas de IgM podem originar, eventualmente, resultados demasiado baixos. As imunoglobulinas monoclonais, sobretudo, podem reagir divergindo do standard policlonal, o que pode originar, nos casos isolados, resultados demasiado baixos falsos ou não lineares. A plausibilidade dos resultados de IgM no liquor deverá ser verificada com base na avaliação no diagrama de quocientes 1, 2. Em caso de não plausibilidade, a determinação de IgM no liquor deverá ser repetida a partir de uma diluição mais elevada da amostra. No caso de uma determinação prévia de amostras de soro ou plasma com forte aumento de IgM (p. ex., microglobulinemia de Waldenström), em condições desfavoráveis (p. ex., cuvetes usadas frequentemente), nos sistemas BN* 100 e BN* II podem ser medidas falsas concentrações de IgM no liquor, demasiadamente elevadas. Por isso as determinações de IgM no liquor deverão, na medida do possível, ser executadas antes das determinações do soro. Os resultados deste teste devem sempre ser interpretados em conjunto com o histórico médico do doente, estado clínico e outros dados de interesse. Devido aos efeitos matriciais, as amostras de controlo ou amostras de investigação interlaboratorial podem apresentar resultados diversos, em função dos métodos de determinação utilizados. Por isso, poderá ser necessário proceder à avaliação destes resultados com base em valores alvo específicos do método. Intervalos de referência Em 220 pacientes da Europa Central com quocientes normais de albumina e sem evidência de processo inflamatório, obteve-se um limite superior do intervalo de referência (95 percentil) de 1,3 mg/l para a IgM no liquor (7, após conversão com CRM 470). Esse valor só serve para orientação. Em sentido restrito, só existem intervalos de referência para os quocientes de liquor/soro, em função dos quocientes de liquor-soro da albumina 1, 2. Além disso, cada laboratório deverá determinar os seus escalões de referência próprios, já que estes dependem de muitos factores de influência que podem variar consoante a população examinada. Características de performance da determinação Intervalo de medição e sensibilidade O intervalo de medição do teste N Latex IgM abrange aprox. 0,13 a 4,2 mg/l com amostras não diluídas (liquor), ou aprox. 0,27 a 8,6 g/l com uma diluição de amostra de 1:2.000 (soro). A sensibilidade da determinação é definida pelo limite inferior da curva de referência e depende, assim, da concentração de proteína no padrão de IgM N. O limite de determinação típico para a IgM no liquor é de 0,13 mg/l. Linearidade Um estudo de linearidade com uma série de diluição de um pool de liquor com uma concentração decrescente entre 3,64 e 0,15 mg/l, resultou numa inclinação de 1,000 (r = 0,999) e uma recuperação média de 94%. Um estudo de linearidade com uma série de diluição de um pool de soro com uma concentração decrescente entre 8,2 e 0,34 g/l, resultou numa inclinação de 0,996 (r =1,0) e uma recuperação média de 103%. Especificidade Não se conhecem reacções cruzadas dos anticorpos utilizados. Precisão A precisão do N Latex IgM foi apurada, determinando as amostras de liquor e de soro com diversas concentrações de IgM e procedendo ao cálculo dos coeficientes de variação (CV): Precisão (n=40) Tipo de amostra Valor médio Intra-Ensaio Inter-Ensaio Total Ensaio de liquor (mg/l) CV (%) CV (%) CV (%) Controlo 2,5 2,1 1,5 2,4 Pool de liquor 1 0,56 5,5 2,3 5,3 Pool de liquor 2 3,0 2,0 1,9 2,6 Ensaio de soro (g/l) CV (%) CV (%) CV (%) Amostra de soro 1 0,81 4,9 2,7 5,0 Amostra de soro 2 1,5 3,8 2,3 4,0 Amostra de soro 3 7,7 2,4 2,0 3,0 Comparação de métodos N Latex IgM (y) foi comparado com um teste comercial de imunonefelometria para IgM (x) disponível no mercado, através da determinação de 50 pares de amostras de liquor/soro no intervalo de 0,19 a 5,5 mg/l (liquor) e 0,13 a 2,4 g/l (soro). A análise de regressão dos resultados produziu as seguintes equações: Comparação de métodos Ensaio Tipo de amostra n Inclinação Intersecção Coeficiente de axial correlação N Latex IgM liquor 24** 1,04-0,02 mg/l 0,995 soro 50 0,91 +0,02 g/l 0,979 quociente liquor/soro 24** 1,03-0,01 0,989 ** Amostras dentro do intervalo de medição dos dois métodos Nota: Os valores indicados para as características de performance da determinação representam resultados típicos e não devem ser considerados como especificação para o N Latex IgM. OQAC G11 E0541 (738) S/R 8 Bibliografia Veja o folheto da embalagem em inglês. BN ProSpec é uma marca registada da nos EUA, Alemanha e noutros países. * BN é uma marca registada da nos EUA. IVD LOT EXP CCYY-MM-DD REF Edição Fevereiro 2004 Symbols Key / Symbolschlüssel / Explication des Symboles / Interpretazione simboli / Clave de los Símbolos / Chave dos Símbolos Manufactured by / Hergestellt von / Fabriqué par / Prodotto da / Fabricado por In Vitro Diagnostic Medical Device / In Vitro Diagnosticum / Dispositif Médical Diagnostic In Vitro / Dispositivo Medico per Diagnostica In Vitro / Producto sanitario para Diagnóstico In Vitro Lot Number / Chargenbezeichnung / Numéro de Lot / Numero di Lotto / Número de Lote Expiration Date / Verfalldatum / Date de Péremtion / data di scadenza / Fecha de vencimiento / termo da validade Storage Temperature / Lagertemperatur / Température de Conservation / Temperatura di conservazione / Temperatura de almacenamiento / Temperatura de armazenagem CE Mark / CE-Zeichen / Marquage CE / Marchio CE / CE Marca / Marca CE Catalogue Number / Katalog Nummer / Référence / Codice Catalogo / Número de Catálogo Consult Instructions for Use / Gebrauchsanweisung beachten / Consulter la Notice d'utilisation / Istruzioni per l'uso / Consultar Instucciones para el Uso / Consulte as Instruções de Utilização

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