UNIVERSIDAD IBEROAMERICANA DEPARTAMENTO DE PSICOLOGÍA MANUAL DE PRÁCTICAS

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1 UNIVERSIDAD IBEROAMERICANA DEPARTAMENTO DE PSICOLOGÍA MANUAL DE PRÁCTICAS P S I C O L O G Í A JULIO 2014

2 Índice Presentación... 4 Reglamento general del Laboratorio de Neurociencias... 6 Guía para el trabajo con ratas de laboratorio Bases Biológicas del Comportamiento Práctica 1. Composición celular del Sistema Nervioso Práctica 2. Organización anatómica y funcional del sistema nervioso Práctica 3. Sistemas de comunicación neural Práctica 4. Umbral Auditivo Práctica 5. Evaluación de la función auditiva y propioceptiva (equilibrio) Práctica 6. Discriminación espacial táctil Neurofisiología Práctica 1. Atención Práctica 2. Privación de sueño Práctica 3. Examen breve del estado mental (Mini Mental State Examination) Práctica 4. Evaluación del nivel de consciencia: escala de Glasgow Procesos cognoscitivos I Práctica 1. Condicionamiento de aversión al sabor Práctica 2. Moldeamiento por aproximaciones sucesivas Práctica 3. Discriminación condicional olfativa/espacial Práctica 4. Memoria de procedimiento (Estrella de Milner) Práctica 5. Observaciones sobre la dinámica de la memoria Procesos cognoscitivos II Práctica 1. Cognición extendida Práctica 2. Buscando los correlatos electrofisiológicos del pensamiento Práctica 3. Solución de problemas Práctica 4. Creatividad Bases neurobiológicas de la conducta emotiva Práctica 1. Observación e identificación de la conducta sexual de la rata Práctica 2. Identificación de las fases del ciclo estral de la rata Práctica 3. Condicionamiento de miedo

3 Práctica 4. Contraste de Incentivo Práctica 5. Teoría del Nivel Óptimo Neuroquímica y Psicofarmacología Práctica 1. Metilfenidato Práctica 2. Antipsicóticos Práctica 3. Toxicidad: dosis letal Práctica 4. Canabinoides (marihuana)

4 Presentación La Psicología es una ciencia joven, que se ocupa del estudio de procesos y fenómenos que cualquier persona posee, ya sea en estado normal o alterado. Por lo mismo, la enseñanza de la Psicología cuenta con la gran ventaja de poderse abordar desde dos perspectivas complementarias: sesiones de clases teóricas, donde el conocimiento se aprende en el salón de clases, y la experiencia práctica, que pretende mostrar en los hechos aquellos conocimientos que se obtienen del profesor y de los libros. El presente manual es un esfuerzo hecho por el profesorado y la directiva del Departamento de Psicología de la Universidad por proporcionar a estudiantes y alumnos algunas actividades que refuercen e ilustren varios de los temas del programa de estudios de la licenciatura en Psicología. En la Universidad contamos con las ventajas de tener un Laboratorio donde realizar todas las actividades aquí propuestas, así como de disponer de una amplia variedad de materiales en el mismo Laboratorio para llevar a cabo dichas actividades, e incluso otras que los profesores o estudiantes puedan sugerir. Las prácticas aquí propuestas son sencillas. Sin embargo, varias de ellas requieren el uso de animales de laboratorio (ratas), sustancias químicas, o equipo especializado. Por lo mismo, es importante contar siempre con el apoyo, instrucción y orientación del profesor responsable, así como del responsable del Laboratorio de Neurociencias. Es por ello que se incluye en este manual el Reglamento del Laboratorio de Neurociencias, cuya observancia es obligatoria siempre que se trabaje en dicho espacio. También se incluye una breve guía para el manejo de las ratas de laboratorio, con el objetivo de reducir la ansiedad de los estudiantes al encontrarse por primera vez con estos animales. 4

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6 Reglamento general del Laboratorio de Neurociencias ARTÍCULO 1. La observación del presente Reglamento es obligatorio para el personal académico, alumnado y trabajadores administrativos durante su permanencia en el Laboratorio de Neurociencias. El presente reglamento no excluye la observación de ningún otro reglamento vigente en la Universidad. ARTÍCULO 2. Es obligación de los profesores del área de procesos básicos y de los alumnos del departamento de psicología el conocimiento y observación del presente reglamento. El desconocimiento del mismo no excluye la responsabilidad de la persona por alguna conducta que transgreda al mismo. ARTÍCULO 3. El uso del Laboratorio de Neurociencias queda restringido a los académicos y alumnos del departamento de Psicología, cualquier persona ajena a este departamento deberá contar al menos con la autorización del responsable del Área de Procesos Básicos o del Director del departamento de Psicología, quienes evaluaran la pertinencia de su permanencia en el área. Cualquier persona ajena al departamento o sin autorización no podrá contar con acceso al lugar. El acceso se hará a través de la solicitud de la llave en el departamento de psicología, la cual deberá ser entregada en cuanto se termine el trabajo experimental, cualquier retraso (más de dos hora) u olvido en su entrega será sancionada con una multa por 5 días o con ayuda en el laboratorio de ser necesaria y cuya naturaleza será precisada por el responsable del mismo. ARTÍCULO 4. Todas las actividades que se programen y realicen en los laboratorios de prácticas deberán ser del conocimiento del responsable del Área de Procesos Básicos y obedecer a los objetivos de los programas vigentes. Es 6

7 responsabilidad del profesor mantener informado al responsable del área sobre las actividades a realizar. ARTÍCULO 5. Todas las prácticas que se realicen con seres humanos en el Laboratorio de Neurociencias deberán ajustarse a los principios éticos que norman la práctica de la Psicología consignados en el Código Ético respectivo, la responsabilidad sobre la observación de la norma será responsabilidad del profesor o investigador a cargo del procedimiento. ARTÍCULO 6. Toda la investigación en el área de la psicología experimental y Neurociencias de la conducta que se realizan en el departamento de Psicología de la se llevan a cabo con estricto apego a las normas nacionales para dichos fines. Todos los proyectos que se realicen en las prácticas de laboratorio e investigación deberán cumplir con las disposiciones planteadas en las normas Oficiales Mexicanas (NOM-062-ZOO-1999, NOM-029-ZOO-1995) y en las Normas Internacionales para la Investigación Biomédica con Animales del Consejo de Organizaciones Internacionales de Ciencias Médicas vigentes en lo referente a la cría, manutención y manejo experimental. ARTÍCULO 7 En los casos que así lo requieran, el alumno deberá estar bajo supervisión directa del profesor a cargo del grupo o de la investigación, en el caso del trabajo cotidiano o de rutina, el alumno está obligado a mantener al profesor al tanto de sus actividades en el laboratorio. ARTÍCULO 8. El profesor es responsable de informar y entrenar a sus alumnos en el uso del equipo de laboratorio que se requiera para llevar a cabo la práctica o la investigación. Ningún procedimiento que implique la manipulación de reactivos o 7

8 sustancias potencialmente riesgosas será autorizado si no se encuentra directamente supervisado por un profesor responsable. ARTÍCULO 9. Durante el desarrollo de cualquier práctica en el laboratorio, incluyendo las que impliquen el uso de sustancias, reactivos o materiales con de riesgo potencial, así como la manipulación de tejido o especies animales, es obligatorio que los alumnos usen bata, guantes, cubre-boca y lentes de seguridad. El alumno que no tenga la protección descrita, no podrá realizar la práctica en el laboratorio, siendo su responsabilidad contar con el equipo mencionado. ARTÍCULO 10. Todas las sustancias, equipos, materiales, etc. de las prácticas, deberán ser manejadas con el máximo cuidado, atendiendo a las indicaciones de uso y/o de seguridad, según el caso. 1. Para el uso de material contaminado infeccioso o tóxico por contacto, se deberán observar las siguientes medidas: a) Usar guantes cuando se maneje material contaminado, infeccioso y/o tóxico por contacto. b) Desechar los guantes siempre que se considere que se han contaminado; lavarse las manos y ponerse un par de guantes nuevos. c) No tocar con las manos enguantadas los ojos, la nariz u otras mucosas, ni la piel descubierta (heridas, raspones). 8

9 d) No abandonar ni pasear por el laboratorio y/o los pasillos con guantes puestos, ni tocar con ellos objetos de uso común como teléfono, computadoras, cerraduras, etc. e) Lavarse las manos enguantadas con agua y jabón, cuando haya terminado su trabajo y al quitarse los guantes, lavar nuevamente las manos con agua y jabón. f) Mientras los alumnos permanezcan en el laboratorio, deben usar bata de algodón; antes de salir del laboratorio se deben quitar el equipo y ropa de protección. g) Mantener el laboratorio limpio y ordenado, así como, evitar la presencia de material y equipo que no tengan relación con el trabajo del mismo. h) Aplicar todos los procedimientos técnicos, en forma tal, que sea mínimo el riesgo de producir aerosoles, gotitas, salpicaduras o derrames de productos tóxicos o sustancias potencialmente infecciosas. i) En el laboratorio queda prohibido: fumar, consumir alimentos o bebidas, aplicarse cosméticos, así como el uso de ropa inconveniente o de riesgo (ropa holgada, huaraches, corbata, etc.) durante el trabajo experimental. 9

10 j) Informar acerca de la presencia de cualquier tipo de roedor o insecto que se encuentre en el laboratorio o eliminarlo. k) Informar al profesor responsable de cualquier desperfecto o anormalidad. ARTÍCULO 11. Queda absolutamente prohibido abandonar en los laboratorios sustancias químicas, reactivos, tejido animal o materiales diversos que se hayan utilizado durante el desarrollo de una práctica. Es de la total responsabilidad del profesor, recolectar, envolver y tirar en bolsas de plástico adecuadas, todo producto de desecho en los sitios designados para tal efecto observando en cada caso la norma adecuada para la eliminación del material (ampolletas, puntas de jeringa, reactivos) o tejidos. Los sitios de recolección serán asignados por el responsable del área de procesos básicos quien seguirá las indicaciones del responsable del programa de medio ambiente de la Universidad. Es responsabilidad del alumno hacer un uso racional de los bienes del laboratorio (tales como comida para rata, guantes, tapabocas etc.), asimismo constituye su responsabilidad mantener ordenada el área de trabajo y no dejar basura en estas áreas. ARTÍCULO 12. Las prácticas que requieran el manejo de material especializado, (como estereotáxicos, polígrafos, cajas de Skinner, laberintos, reactivos o material quirúrgico), cuyo uso requiere de personal capacitado ex profeso deberá ajustarse a las prescripciones de su uso. En el caso de que los alumnos tengan que usar 10

11 alguno de estos equipos, es responsabilidad del profesor de la materia verificar que sus alumnos conocen el uso adecuado del equipo, ningún alumno puede trabajar sólo si no es autorizado por su profesor, obedeciendo las siguientes disposiciones: a) Sólo podrán tener acceso al laboratorio aquellos alumnos que se encuentren realizando trabajo experimental. b) Se recomienda que en las sesiones de trabajo diario con los sujetos no participen más de 1 o 2 personas por equipo de trabajo. c) El alumno debe verificar que sus sujetos experimentales se encuentren identificados tanto por las marcas en la cola como por su tarjeta de identificación en el frente de su caja d) Los alumnos deben verificar que la tarjeta de identificación de los sujetos indique si los mismos se encuentran bajo algún régimen de control de alimento o agua. e) El profesor verificará que sus alumnos cumplan con las disposiciones de los dos puntos anteriores. f) Los alumnos deben hacerse responsables del cuidado y alimentación del sujeto experimental durante su trabajo de práctica. g) Los alumnos llevaran un registro diario (bitácora) del sujeto experimental, donde se especifique la fecha de trabajo, el peso del sujeto, el alimento 11

12 utilizado, alumno que trabajó con el sujeto etc. Ningún otro registro informal de los alumnos tiene validez, salvo el registro en la bitácora. La bitácora será revisada diariamente para verificar que todos los sujetos bajo control experimental están siendo supervisados en su control alimenticio. En el caso de que los alumnos no utilicen la bitácora o que en la misma no se registre durante dos días la información correspondiente, la rata será retirada de la responsabilidad de los alumnos y se aplicara la sanción correspondiente. h) Queda estrictamente prohibido para el alumno alimentar o dar de beber a otro sujeto experimental que no sea el propio. i) En el caso de que los sujetos se encuentren restringidos de agua o comida, el alumno debe considerar el dejar comida y agua suficiente para los fines de semana. j) El alumno debe reportar cualquier anormalidad en las instalaciones o en el estado físico de los sujetos de manera inmediata al auxiliar técnico o al responsable de área. k) Queda estrictamente prohibido el cambiar a las ratas de sus cajas o intercambiar los letreros de identificación de los sujetos, el o los alumnos sorprendidos en esta práctica serán acreedores a una sanción. 12

13 l) Una vez terminado el experimento los alumnos deben indicarlo en la tarjeta de identificación y avisar al auxiliar técnico y al profesor. m) El alumno debe enjuagar la canastilla de la báscula una vez que la halla ocupado. n) Se debe evitar el hablar en voz alta y hacer ruido dentro del Laboratorio. o) En el laboratorio queda prohibido: fumar, consumir alimentos o bebidas, aplicarse cosméticos, así como el uso de ropa inconveniente o de riesgo (ropa holgada, huaraches, corbata, etc.) durante el trabajo experimental. ARTÍCULO 13. El responsable del Área de Procesos Básicos designará los sitios, procesos y medios correspondientes para el manejo correcto de sustancias, reactivos, materiales, tejido, cadáveres o cualquier otro tipo de desecho, residuo de las prácticas realizadas en los laboratorios. ARTÍCULO 14. Las disecciones que se realicen en los laboratorios de prácticas deberán autorizarse por el Responsable del Área de Procesos Básicos, de acuerdo con el contenido del programa vigente y programarse con 4 semanas de anticipación, respetando las Normas Oficiales. ARTÍCULO 15. Queda estrictamente prohibido sacar el material y el equipo del área de laboratorios, sin la orden respectiva firmada por el responsable del Área de Procesos Básicos y la Dirección del departamento de Psicología. 13

14 ARTÍCULO 16. Las puertas del laboratorio deberán estar siempre libres de obstáculos, accesibles y en posibilidad de ser utilizadas ante cualquier eventualidad. ARTÍCULO 17. Cualquier alteración en las condiciones de seguridad, en la operación del laboratorio o en el cumplimiento del presente reglamento, deberá ser reportada al responsable del Área de Procesos Básicos y proceder de acuerdo a los siguientes incisos: a) Las personas a quienes se sorprenda haciendo mal uso de equipos, materiales, instalaciones, etc. Propios de los laboratorios o de las señalizaciones instaladas para protección civil, serán sancionadas según la gravedad de la falta cometida. b) En el caso de los alumnos, las sanciones a faltas específicas serán: 1. Mal uso de la bitácora o negligencia en el cuidado del sujeto experimental, las sanciones serán aplicadas por el profesor de la materia y pueden incluir desde reprobar la parte práctica de la materia (30%) hasta reprobar la materia. 2. Muerte del sujeto experimental. La sanción es aplicada por el profesor y corresponde a reprobar la materia. 3. Intercambiar el sujeto experimental. La sanción es aplicada por el profesor y corresponde a reprobar la materia. 14

15 c) Cualquier sanción no contemplada será el responsable del Área de procesos básicos quien decida la sanción o en su caso será turnada al H. Consejo Técnico, conforme a las disposiciones actuales. d) Tratándose de personal académico y administrativo, se levantarán las actas correspondientes y se dictarán las sanciones conforme a las disposiciones de la Ley Federal del Trabajo. ARTÍCULO 18. El presente reglamento podrá actualizarse, bajo la supervisión de los órganos académicos correspondientes. ARTÍCULO 19. Todas aquellas cuestiones que no estén específicamente señaladas en el presente Reglamento, deberán ser resueltas por la Dirección del Departamento de Psicología. 15

16 Guía para el trabajo con ratas de laboratorio La investigación con animales no humanos ha sido y es de importancia fundamental en las ciencias del comportamiento. Buena parte del conocimiento sobre el funcionamiento básico de la conducta se debe al uso de ratas, palomas, gatos, perros, primates no humanos como chimpancés y monos Rhesus, entre muchos otros modelos animales. Entre los modelos animales, las ratas tienen ciertas ventajas sobre otras especies. Se obtienen fácilmente, su mantenimiento es de bajo costo, y su alojamiento no requiere de condiciones demasiado especiales. Son animales inteligentes, y fáciles de manejar. Son pequeñas y menos agresivas que los ratones o los hámsters. Y su anatomía, fisiología, y hábitos conductuales están ampliamente descritos en la literatura. No está claro el origen del uso de ratas para la investigación, pero se sabe que para la primera década del s. XX ya se usaban ratas albinas para la investigación. Así, el Instituto Wistar de Philadelphia fue la primera institución en criar ratas albinas para usos científicos, creando la cepa Wistar. En la actualidad, la mayor parte de las ratas usadas con fines académicos son Wistar, o cepas derivadas de esta (como, por ejemplo, la cepa Sprague-Dawley, también muy usada). Las ratas usadas en Laboratorio de Neurociencias son de la cepa Wistar. Si bien el trabajo con ratas no es particularmente difícil, porque las ratas albinas suelen ser animales dóciles, sí es necesaria paciencia y práctica para dicho trabajo. Como reglas generales para lograr una buena manipulación de las ratas están: 1. Contar con el apoyo e instrucción iniciales de personal con experiencia en el manejo de ratas. Dicho personal debe orientar al alumno sobre las técnicas apropiadas de sujeción y manipulación de las ratas. 16

17 La manipulación de una rata puede hacerse de varias formas. Para cambiar de sitio a una rata (p. ej., moverla de su caja habitación a una caja de Skinner), simplemente se puede levantar al animal del tercio proximal de la cola. Cuando se levanta de esta forma al animal, se debe verificar que no haya algo cercano a lo cual pueda asirse, dado que al levantarlo puede lastimarse y perder las uñas de las patas. Para sujetar a la rata, se toma el tercio proximal de la cola con una mano. Se coloca la palma de la otra mano gentilmente sobre su lomo, a la altura del tórax, y se usan los dedos como una pinza, de forma que el dedo pulgar empuje una de las patas delanteras hacia adelante, y los dedos meñique, anular, medio e índice empujen la otra pata delantera en la misma dirección. Las patas deberán quedar cruzadas, una sobre la otra, hacia el frente. Así, la posición cruzada de las patas limita el movimiento de la cabeza, y la rata no puede morder al manipulador. Se puede utilizar un trozo de tela entre la mano que sujeta y el animal, para que este último sufra menos estrés. Una forma alterna de sujetar a una rata es repetir los pasos anteriores, pero en vez de usar la mano como pinza, se colocan el dedo índice y el dedo medio bajo la mandíbula de la rata, un dedo de cada lado. Los dedos anular y meñique se colocan debajo de las patas delanteras, sobre el abdomen, a la altura del diafragma. Se aconseja la restricción del animal en las formas antes mencionadas sólo en los casos en los que el protocolo de trabajo así lo requiera (p. ej., para inyecciones intraperitoneales). 2. Aproximarse al animal sin miedo, ya que una actitud temerosa causa casi siempre un manejo torpe y titubeante del animal. Esto propicia que la rata, a 17

18 su vez, se sienta amenazada, e intente defenderse (que muerda). Sin embargo, también es importante no subestimar la fuerza con la que se maneja a la rata. Un exceso de fuerza, o un trato rudo pueden ocasionar lesiones (en la rata o en el manipulador) y mucho estrés en el animal. 3. Es obligatorio estar pendiente del bienestar del animal con el que se trabaja. Esto implica Cambiar la cama sanitaria (aserrín) de cada rata con la frecuencia necesaria para mantener a los animales limpios, secos, sin malos olores (en la medida de lo razonable), y con niveles de amoníaco aceptables. Esa frecuencia de cambio de cama difícilmente excede tres veces por semana. Asegurarse que la rata tiene comida y agua suficientes y disponibles. En aquellos procedimientos en los que se debe restringir la ingesta de alimento o agua, es necesario monitorear diariamente tanto el agua o alimento ingerido y suministrado, como el peso del animal. Para los fines de semana, días feriados, o vacaciones, se le debe dejar a la rata comida y agua suficientes para que no carezca de ellos durante esos días. 4. Las ratas son mamíferos con los sentidos auditivo y olfativo muy desarrollados. Por lo mismo, son particularmente sensibles a olores y a ruidos fuertes. Cuando se trabaja con una rata, no se deben consumir alimentos ni bebidas. Además, se debe evitar hablar en voz alta, silbar, cantar o gritar. El uso de reproductores de música durante el trabajo con ratas debe ser igualmente evitado. 18

19 5. Es indispensable el uso de bata para el trabajo con la rata, para protección de los animales y del propio alumno. El contar con una bata con la cual trabajar es responsabilidad de cada alumno. 6. Es importante también observar atentamente la salud general de los animales. Estos son adquiridos a empresas que mantienen altos estándares de control de enfermedades. Sin embargo, en ocasiones las ratas enferman, principalmente por la presencia de parásitos. El alumno debe mantenerse pendiente de cambios en la coloración de pelaje y piel, aumento o pérdida de peso no atribuibles a la dieta, laceraciones, sangrado, cambio en la consistencia de la heces, sangre en orina, alteraciones en la conducta general de la rata (aumento significativo en la irritabilidad de la rata, por ejemplo), deformidades, o cualquier otra alteración notoria. Si se detectan cambios en la salud del animal, el alumno debe de comunicárselos de inmediato al responsable del laboratorio y a su profesor. 7. A menos que el procedimiento experimental lo requiera, no se recomienda que las ratas ingieran otro alimento que no sea el que se les proporciona en el laboratorio (rat chow). Esto debido a que el alimento del laboratorio está especialmente diseñado para cubrir todas las necesidades nutricionales de las ratas, por lo que no necesitan comer otra cosa. Además, el uso de alimentos externo constituye un factor de riesgo para la salud de los animales, por la posibilidad de que el alimento suministrado externamente esté contaminado. Este riesgo debe ser evaluado por el profesor cuando planee las actividades de sus alumnos. 8. Las ratas del laboratorio usadas en las prácticas no deben salir del mismo. Complementariamente, si una rata sale del laboratorio, no puede regresar a él. Esto último debido a que se incrementa significativamente el riesgo de 19

20 contaminación cruzada del animal que salió hacia los que se mantienen en el bioterio. La observancia de estas reglas como complemento al reglamento del laboratorio ayuda contribuye significativamente al éxito en el trabajo experimental con ratas. Es importante destacar que el alumno debe ser consciente que se pone bajo su cuidado una vida. Debe asumir esa responsabilidad, con seriedad y respeto. No sólo su calificación, sino su integridad como profesionista se benefician de un trato ético y responsable hacia los animales de trabajo. Referencias (1) Griffiths, H.J. (1972). Some common parasites of small laboratory animals. Laboratory Animals, 5: (2) Manual para el manejo de animales con fines de experimentación y enseñanza (2010). Villahermosa: Universidad Juárez Autónoma de Tabasco. (3) Manual sobre el cuidado y uso de los animales de experimentación (2ª ed.) (1998). Ontario: Consejo Canadiense de Protección a los Animales. (4) Muñoz Escobedo, J.J., Saldivar Elías, S., Maldonado Tapia, C., Muñoz Moreno, C. & Moreno García, M.A. (2010). La habilidad para sujetar y manejar animales de laboratorio no se adquiere fácilmente. Revista Electrónica de Veterinaria, 12 (5B): (5) Norma Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, Especificaciones técnicas para la producción, cuidado, y uso de los animales de laboratorio. Diario Oficial de la Federación, 6 de diciembre de

21 Bases Biológicas del Comportamiento Práctica 1. Composición celular del Sistema Nervioso Las neuronas son células excitables, especializadas en la propagación de variaciones eléctricas transitorias conocidas como potenciales de acción. Constituyen la segunda población celular más abundante en el sistema nervioso, por debajo de las células gliales. Sin embargo, son las neuronas las únicas que pueden comunicarse de forma sináptica entre sí, hecho que les da singular importancia dentro de los órganos y tejidos nerviosos. En el s. XIX Matthias Jakob Schleiden y Friedrich Theodor Schwann propusieron, con base en buena medida en las observaciones microscópicas de Robert Hooke, la teoría celular. Según esta teoría, todos los seres vivos estamos compuestos por unidades elementales, vivas por sí mismas, llamadas células. Como corolario a esta aseveración puede afirmarse que todos los órganos que constituyen a cualquier organismo multicelular, independientemente de su desarrollo evolutivo y nivel de complejidad, están constituidos también por células. Sin embargo, cuando surgió la teoría de Schleiden y Schwann la observación de tejido nervioso bajo el microscopio no lograba mostrar cuáles eran las células de los nervios. A pesar de que investigadores como Joseph von Gerlach, Johannes Purkinje u Otto Deiters crearon métodos para la tinción del sistema nervioso, ninguna de esas invenciones logró identificar a las células nerviosas de forma contundente. Dichas técnicas tenían éxito sólo en identificar procesos neuronales (dendritas y axones), pero ninguna de ellas mostraba claramente la relación morfológica de estos procesos entre sí, ni su relación con los somas neuronales. 21

22 Derivado de este panorama teórico, dos hipótesis surgieron. La primera de ellas sostenía que el tejido nervioso se componía de una red (retículo) de tejido continuo y que, por tanto, no había células individuales. La otra sostenía lo contrario; que el sistema nervioso, igual que cualquier otro tejido, estaba integrado por células individuales. Un avance fundamental en este debate fue la introducción por Camillo Golgi de lo que sería conocida como la tinción de Golgi, y que se basa en el uso de sales de plata. Esta técnica permite marcar clara y completamente sólo algunas neuronas, por lo que la identificación de estas se hizo mucho más fácil. Algunos años después, Santiago Ramón y Cajal mejoró la técnica de Golgi, e hizo observaciones detalladas de neuronas en diversas partes del sistema nervioso. Ramón y Cajal propuso la teoría neuronal, la cual asienta que existen células nerviosas, individuales, que se comunican unas con otras mediante contactos que establecen unas con otras (y que, años más tarde, Charles Sherrington bautizó como sinapsis ). Fue así que no sólo se demostró la existencia de las neuronas, sino que se entendió cuál es su estructura general, e incluso cómo se organizan en las diferentes partes del encéfalo. A grandes rasgos, las neuronas son células eucariotas con una parte central, conocida como soma, que aloja el núcleo celular. Cuenta con proyecciones, o prolongaciones, que se conocen colectivamente como procesos neuronales, y que se dividen en dendritas y axón. Las dendritas son las responsables de recibir las señales de otras neuronas, y pueden variar en número y longitud. Las neuronas suelen contar con una proyección llamada axón, distinta de las dendritas en que esta prolongación suele ser la única que comunica señales a otras neuronas, actuando como una especie de emisor de señales químicas o eléctricas. Las neuronas pueden contar con una sola proyección que funciona como dendrita y axón simultáneamente (neurona unipolar), pueden contar con sólo una dendrita y un axón (neurona bipolar), o contar con muchas dendritas y un axón (neurona multipolar). Los tamaños y formas de las neuronas varían grandemente; algunas estimaciones consideran que existen unas 1000 variedades de neuronas. 22

23 Desde la introducción de las tinciones argénticas de Golgi, se han desarrollado una gran cantidad de tinciones para el análisis microscópico del tejido nervioso. Existen, por ejemplo, las técnicas de marcaje químico tradicionales, como las tinciones de eosina/hematoxilina o la de Nissl. Existen las técnicas de inmunodetección (inmunohistoquímica), como las que detectan proteínas específicamente expresadas por neuronas (como NeuN), o las que detectan neuronas activas (gracias a la expresión de genes de expresión temprana, dependientes de actividad, como c-fos, c-jun, zif268, Arc, o -FosB). Cada una de esas técnicas ayudan a la observación del tejido nervioso y, consecuentemente, a la comprensión de su organización estructural. Objetivo Que el alumno observe y trate de identificar neuronas en tejido nervioso Que el alumno identifique neuronas, y trate de localizar sus dendritas y axones. Que el alumno identifique la organización de las neuronas en ciertas regiones del cerebro. Materiales Cortes coronales, sagitales y horizontales de encéfalo y de médula espinal de rata, de 40 µm de espesor, teñidos con violeta de cresilo (tinción de Nissl). Microscopio óptico de campo claro. Procedimiento Los alumnos observarán los cortes antes descritos, procurando identificar: a) El hipocampo. Prestar especial atención en la presencia de neuronas piramidales en las áreas CA1 y CA3, y la presencia de neuronas granulares en el giro dentado. 23